本發(fā)明涉及藥品或保健品技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及組合物、提取物及提取物的制備方法與在制備改善氣血兩虛的產(chǎn)品中的用途。

背景技術(shù)：

在勞動過程中人體各系統(tǒng)、器官或全身生理功能和作業(yè)能力出現(xiàn)明顯下降的狀態(tài)稱為疲勞。它是人體的正常生理反應(yīng)。疲勞的長期積蓄會造成過度疲勞，發(fā)展為病理狀態(tài)。疲勞是人們熟悉但又十分復(fù)雜的一種現(xiàn)象，不論從事何種作業(yè)，隨著勞動時間延長，均會出現(xiàn)疲勞，表現(xiàn)為作業(yè)能力下降，感覺疲倦，對任何用力都感到厭煩等?！端貑枴ば魑鍤馄吩唬骸耙騽谥绿摚站贸商搫凇?，疲勞過度，耗傷脾氣，脾虛化生氣血不足，則出現(xiàn)身倦乏力，脘悶納呆。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為氣的根本在腎而統(tǒng)于肺脾。在表則護(hù)衛(wèi)皮毛，充實腠理，使人有抗邪能力；在內(nèi)則導(dǎo)行血脈，升降陰陽，周流一身。氣虛是指由于元?dú)獠蛔阋鸬囊幌盗胁±碜兓白C候，癥見言語音低、呼吸短促微弱，神疲肢倦，懶于行動，自汗，胸悶，脫肛，滑泄不止，平時易于感冒及血失統(tǒng)攝。血，即血液，是循行于脈中的富有營養(yǎng)的紅色的液態(tài)物質(zhì)，是構(gòu)成人體和維持人體生命活動的基本物質(zhì)之一。血主于心，藏于肝，統(tǒng)于脾，布于肺，根于腎，有規(guī)律地循行脈管之中，在脈內(nèi)營運(yùn)不息，充分發(fā)揮灌溉一身的生理效應(yīng)。血虛多為失血過多，血液生化之源不足、或因淤血阻滯或因新血不生等，臨床表現(xiàn)為面色淡白或萎黃，口唇、眼瞼、指甲色淡，心悸多夢，手足發(fā)麻，頭暈眼花，婦女經(jīng)血量少色淡、延期甚或閉經(jīng)，舌淡脈細(xì)。因此，氣血兩虛則表現(xiàn)為“精神差、氣色差”，治法應(yīng)益氣補(bǔ)血。

隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，社會競爭的加劇，大部分人群面臨著工作、學(xué)習(xí)、生活帶來的巨大壓力，疲勞、氣血不足成為困擾很多人的健康問題。近年來隨著人民生活水平的提高，人們的消費(fèi)觀念、健康觀念發(fā)生了較大變化，越來越多的人群開始重視營養(yǎng)保健品的使用。目前市場上的抗疲勞產(chǎn)品種類繁多，組成也多種多樣。但是，疲勞發(fā)生往往是綜合因素導(dǎo)致的，而目前的抗疲勞保健品往往不能具有確切的效果，功能也大多十分不穩(wěn)定。因此，進(jìn)一步的開發(fā)功能顯著且穩(wěn)定的抗疲勞產(chǎn)品十分必要。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供組合物、提取物及提取物的制備方法與在制備改善氣血兩虛的產(chǎn)品中的用途，本發(fā)明提供的組合物能夠具有補(bǔ)血、抗疲勞和/或增強(qiáng)免疫力功能。

本發(fā)明提供的組合物由人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉組成。

本發(fā)明提供的組合物由以下質(zhì)量份的組分組成：人參10～30份，蛹蟲草10～30份，銀耳5～30份，鐵皮石斛1～10份，龍眼肉5～30份。

一些實施例中，本發(fā)明提供的組合物由以下質(zhì)量份的組分組成：人參10～30份，蛹蟲草10～30份，銀耳5～10份，鐵皮石斛1～10份，龍眼肉5～10份

一些實施例中，本發(fā)明提供的組合物由以下質(zhì)量份的組分組成：人參10～30份，蛹蟲草10～30份，銀耳10～30份，鐵皮石斛10份，龍眼肉10～30份。

一些具體實施例中，本發(fā)明提供的組合物由以下質(zhì)量份的組分組成：人參30份，蛹蟲草30份，銀耳10份，鐵皮石斛10份，龍眼肉10份。

一些具體實施例中，本發(fā)明提供的組合物由以下質(zhì)量份的組分組成：人參30份，蛹蟲草30份，銀耳5份，鐵皮石斛1份，龍眼肉5份。

一些具體實施例中，本發(fā)明提供的組合物由以下質(zhì)量份的組分組成：人參10份，蛹蟲草10份，銀耳10份，鐵皮石斛10份，龍眼肉10份。

一些具體實施例中，本發(fā)明提供的組合物由以下質(zhì)量份的組分組成：人參10份，蛹蟲草10份，銀耳30份，鐵皮石斛10份，龍眼肉30份。

人參為五加科植物人參panaxginsengc.a.mey.的干燥根。栽培者為園參，野生者為山參。是我國名貴的中草藥材，《神農(nóng)本草經(jīng)》記載，人參有“補(bǔ)五臟、安精神、定魂魄、止驚悸、除邪氣、明日開心益智”的功效，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，人參具有調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝、補(bǔ)血益氣等功效。

龍眼肉為無患子科龍眼屬植物龍眼dimocarpuslonganlour.的假種皮，又名，龍眼、桂圓或圓眼。《藥品化義》中記載“桂圓，大補(bǔ)陰血，凡上部失血之后，入歸脾湯同蓮肉、芡實以補(bǔ)脾陰，使脾旺統(tǒng)血?dú)w經(jīng)”，龍眼肉是滋補(bǔ)佳品。

蛹蟲草為子囊菌門，肉座目，蟲草菌科、蟲草屬的模式種。學(xué)名為cordycepsmilitaris，其中的蟲草酸、蟲草素和蟲草多糖是主要的藥效成分，具有提高免疫力，抗衰老，抑制腫瘤生長等作用，是珍貴的藥食同源藥材。

鐵皮石斛為蘭科植物鐵皮石斛dendrobiumofficinalekimuraetmigo的莖?！吨袊幍洹分杏涗涜F皮石斛“益胃生津，滋陰清熱，用于陰傷津虧”，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明其具有增強(qiáng)免疫力、抗疲勞、助消化和降血糖降血脂等功效。

銀耳為真菌類銀耳科銀耳屬植物銀耳tremellafuciformisberk.的子實體，有“菌中之冠”的美稱，是日常食用或中藥組方的佳品。具有補(bǔ)肺益氣，養(yǎng)陰潤燥。用于病后體虛，肺虛久咳，痰中帶血，崩漏，大便秘結(jié)，高血壓病，血管硬化的功效。

本發(fā)明以人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉進(jìn)行復(fù)配，所述人參為人參原藥或飲片，所述蛹蟲草為蛹蟲草原藥或飲片，所述銀耳為銀耳原藥或飲片，所述鐵皮石斛為鐵皮石斛原藥或飲片，所述龍眼肉為龍眼肉原藥或飲片。所獲得的組合物中各組分產(chǎn)生增效協(xié)同作用，對氣血兩虛導(dǎo)致的貧血、易疲勞、免疫力低下有著顯著的改善作用，其效果顯著優(yōu)于單獨(dú)使用各組分，也顯著優(yōu)于缺少一種或多種組分的處方。實驗表明，在本發(fā)明提供的比例范圍內(nèi)，組方有著更好的效果，說明適宜的配比是影響本發(fā)明組合物效果的重要因素之一。

本發(fā)明還提供了一種提取物，由本發(fā)明所述的組合物制得。

本發(fā)明所述提取物的制備方法為，將人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉以水提取，將提取液經(jīng)濃縮、干燥，獲得所述提取物。

所述以水提取中，水的質(zhì)量為組合物質(zhì)量的20倍，水的溫度為100℃，提取的壓強(qiáng)為常壓。所述常壓是指一個大氣壓。

所述以水提取的次數(shù)為2次，第一次提取2h，濾渣與20倍質(zhì)量水混合后，進(jìn)行第二次提取，提取時間為1h。

所述濃縮至每100ml上清液含有100g生藥量(即本發(fā)明組合物)。

所述干燥為冷凍干燥或者70℃烘干。

本發(fā)明所述提取物的制備方法中所述濃縮與干燥之間還包括醇沉的步驟；所述醇沉包括：提取液經(jīng)濃縮后，與乙醇水溶液混合，靜置后分離上清液與沉淀；所述上清液經(jīng)濃縮、干燥制得提取物；所述沉淀經(jīng)干燥制得提取物。

所述乙醇水溶液中，乙醇的體積分?jǐn)?shù)為40％～95％。

本發(fā)明所述組合物或提取物在制備增加紅細(xì)胞數(shù)量、提高血紅蛋白和/或血清鐵蛋白水平的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

給予大鼠本發(fā)明提供提取物30天，再以放血和環(huán)磷酰胺造模10天后，檢測對大鼠取血進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，給予本發(fā)明提供提取物的大鼠體內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白含量和血清鐵蛋白水平皆顯著高于模型組或?qū)φ战M。說明本發(fā)明提供的組合物或提取物能夠具有補(bǔ)血、改善貧血的作用。本發(fā)明提供的提取物用于補(bǔ)血的劑量為1ml/100g。

本發(fā)明所述組合物或提取物在制備補(bǔ)血產(chǎn)品中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述組合物或提取物在制備降低血液乳酸水平、降低血清尿素氮水平和/或降低血清磷酸肌酸激酶活力的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

所述血液乳酸水平、降低血清尿素氮水平和/或降低血清磷酸肌酸激酶活力為力竭游泳實驗后進(jìn)行檢測。

給予大鼠本發(fā)明提供提取物30天，再以放血和環(huán)磷酰胺造模10天后，檢測對大鼠取血進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，給予本發(fā)明提供提取物的大鼠血液內(nèi)乳酸含量、血清尿素氮含量、血清磷酸肌酸激酶活力(ck)皆顯著下降，另有試驗表明，本發(fā)明提供的組合物或提取物能夠顯著延長氣血兩虛模型大鼠的力竭游泳時間。說明本發(fā)明提供的組合物或提取物能夠具有良好的抗疲勞的作用。本發(fā)明提供的提取物用于抗疲勞的劑量為1ml/100g。

本發(fā)明所述組合物或提取物在制備提高白細(xì)胞數(shù)量、提高動物脾指數(shù)、提高胸腺指數(shù)和/或提高肝糖原水平的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

給予大鼠本發(fā)明提供提取物30天，再以放血和環(huán)磷酰胺造模10天后，檢測對大鼠取血進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，造模后大鼠脾指數(shù)升高、胸腺指數(shù)升高、肝臟中肝糖原儲備含量升高，且血液中白細(xì)胞數(shù)量也得到顯著提高。說明本發(fā)明提供的組合物具有提高免疫力的作用。本發(fā)明提供的提取物用于提高免疫力的劑量為1ml/100g。

本發(fā)明所述組合物或提取物在制備抗疲勞和/或提高免疫力的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述組合物或提取物在制備改善氣血兩虛的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

實驗表明，本發(fā)明提供的組合物或提取物，有助于氣血虛模型大鼠體重的增長，改善其外觀狀況及精神面貌；顯著增加大鼠的力竭游泳時間，提高其耐受力；增加大鼠的脾指數(shù)、胸腺指數(shù)和肝糖原，提高其免疫能力；降低大鼠的血乳酸、血清尿素氮和血清磷酸肌酸激酶活力，提高其抗疲勞能力。

一種改善氣血兩虛的產(chǎn)品，其特征在于，包括本發(fā)明所述組合物或提取物。

所述改善氣血兩虛的產(chǎn)品的劑型是膠囊劑、片劑、粉劑、顆粒劑或口服液。

本發(fā)明提供了一種由人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛、龍眼肉組成的組合物，并提供了其提取物及提取物的制備方法。實驗表明，本發(fā)明提供的組合物或提取能夠具有改善貧血、抗疲勞、提高免疫力的作用，能夠用于制備改善氣血兩虛的產(chǎn)品。本發(fā)明提供的組合物中各組分產(chǎn)生增效協(xié)同作用其效果顯著優(yōu)于單獨(dú)使用各組分，也顯著優(yōu)于缺少一種或多種組分的處方。

具體實施方式

本發(fā)明提供了組合物、提取物及提取物的制備方法與在制備改善氣血兩虛的產(chǎn)品中的用途，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。

本發(fā)明采用的試材皆為普通市售品，皆可于市場購得。

下面結(jié)合實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：

實施例1：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為30份、30份、10份、10份、10份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至每100ml含有100g生藥量，冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得中藥組合物提取物。

實施例2：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為30份、30份、5份、1份、5份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至每100ml含有100g生藥量，冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得中藥組合物提取物。

實施例3：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為10份、10份、10份、10份、10份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至每100ml含有100g生藥量，冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得中藥組合物提取物。

實施例4：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為10份、10份、30份、10份、30份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至每100ml含有100g生藥量，冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得中藥組合物提取物。

實施例5：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為10份、10份、30份、10份、30份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至適量，加入95％乙醇至40％乙醇體積，靜置過夜，離心獲得上清液和沉淀，上清液濃縮至每100ml含有100g生藥量，冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得40％中藥組合物提取物。

實施例6：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為10份、10份、30份、10份、30份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至適量，加入95％乙醇至40％乙醇體積，靜置過夜，離心獲得上清液和沉淀，沉淀冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得40％中藥組合物提取物。

實施例7：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為10份、10份、30份、10份、30份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至適量，加入95％乙醇至60％乙醇體積，靜置過夜，離心獲得上清液和沉淀，上清液濃縮至每100ml含有100g生藥量，冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得60％中藥組合物提取物。

實施例8：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為10份、10份、30份、10份、30份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至適量，加入95％乙醇至60％乙醇體積，靜置過夜，離心獲得上清液和沉淀，沉淀冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得60％中藥組合物提取物。

實施例9：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為10份、10份、30份、10份、30份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至適量，加入95％乙醇至80％乙醇體積，靜置過夜，離心獲得上清液和沉淀，上清液濃縮至每100ml含有100g生藥量，冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得80％中藥組合物提取物。

實施例10：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為10份、10份、30份、10份、30份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至適量，加入95％乙醇至80％乙醇體積，靜置過夜，離心獲得上清液和沉淀，沉淀冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得80％中藥組合物提取物。

實施例11：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為30份、30份、5份、1份、5份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至適量，加入95％乙醇至40％乙醇體積，靜置過夜，離心獲得上清液和沉淀，上清液濃縮至每100ml含有100g生藥量，冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得40％中藥組合物提取物。

實施例12：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為30份、30份、5份、1份、5份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至適量，加入95％乙醇至40％乙醇體積，靜置過夜，離心獲得上清液和沉淀，沉淀冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得40％中藥組合物提取物。

實施例13：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為30份、30份、5份、1份、5份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至適量，加入95％乙醇至60％乙醇體積，靜置過夜，離心獲得上清液和沉淀，上清液濃縮至每100ml含有100g生藥量，冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得60％中藥組合物提取物。

實施例14：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為30份、30份、5份、1份、5份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至適量，加入95％乙醇至60％乙醇體積，靜置過夜，離心獲得上清液和沉淀，沉淀冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得60％中藥組合物提取物。

實施例15：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為30份、30份、5份、1份、5份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至適量，加入95％乙醇至80％乙醇體積，靜置過夜，離心獲得上清液和沉淀，上清液濃縮至每100ml含有100g生藥量，冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得80％中藥組合物提取物。

實施例16：中藥提取物的制備方法

按照重量份分別為30份、30份、5份、1份、5份稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至適量，加入95％乙醇至80％乙醇體積，靜置過夜，離心獲得上清液和沉淀，沉淀冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得80％中藥組合物提取物。

對比例1～10

處方如表1：

按照重量份分別稱取人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛和龍眼肉，加入20倍水，煎煮2h，過濾，收集濾液，濾渣加入20倍水，煎煮1h，過濾，合并2次濾液；濃縮濾液至每100ml含有100g生藥量，冷凍干燥或者70℃烘干，粉碎即得中藥組合物提取物。

實施例17：中藥組合物對氣血兩虛大鼠模型的干預(yù)研究

1材料和方法

1.1材料

1.1.1實驗動物

spf大鼠，雄性，動物適應(yīng)性喂養(yǎng)5天后，將所有大鼠稱體重，按照體重由輕到重排列。剔除重量在150～160g以及240g以上的大鼠。將體重在180-230g的大鼠分為12個區(qū)間，每個區(qū)間4.2g，隨機(jī)分為每組12只。

本次實驗所需大鼠均從華中農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗動物中心訂購且均由本校實驗動物中心進(jìn)行飼養(yǎng)及管理。

1.1.2供試品

本次研究所需的配方藥物由公司提供，需在4攝氏度避光保存。

1.1.3主要試劑及儀器

鐵蛋白檢測試劑盒(南京建成；貨號:h129；48t)

電子天平bsa124s，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；

臺式高速離心機(jī)tg16-ⅱ，長沙平凡儀器儀表有限公司；

血細(xì)胞分析儀xfa6100，美國貝克曼庫爾特；

灌胃針，1ml注射器，1.5mlep管,移液槍，離心機(jī)，小剪刀鑷子等。

1.2方法

1.2.1動物分組

將spf級大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，分為正常對照組、模型組、陽性藥對照組、實施例1～16組，對比例1～15組；每組12只。其中陽性藥組(當(dāng)歸補(bǔ)血口服液)給藥量為1ml/100g。

1.2.2動物造模

大鼠分組后預(yù)給藥30d(給藥劑量為1ml/100g)后，除空白對照組外，其他各組開始造模10d。造模第一日每鼠尾部(眼眶)放血5ml/kg，隔日再放血1次，共放血5次，大鼠于造模的第2日，每鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺40mg/kg，隔日注射，(以后的劑量為20mg/kg)，共注射5次，造氣血兩虛模型共10d。

1.2.3動物外觀及行為學(xué)觀察

主要觀察造模后各組中大鼠的精神狀態(tài)、體重、眼、耳、皮毛色澤等外觀行為變化。

精神狀態(tài)：正常；自發(fā)活動減少；逃避、攻擊行為明顯減少。

外觀狀況：觀察大鼠毛發(fā)(光澤、稀疏脫落程度)、耳邊緣、眼部變化(眼球及眼周圍顏色)。

體重：稱量體重變化。

結(jié)果表明，造模后大鼠的耳邊緣明顯要比正常組大鼠顏色蒼白，鼻周圍明顯要比正常組血色暗淡，眼球顏色比正常組暗淡，無神。造模10天后，與空白組大鼠比較，模型組活動明顯減弱，逃避、攻擊行為明顯減少，通過對模型大鼠外觀及行為學(xué)的觀察，以上表明，造模后大鼠有明顯的氣虛血虛狀態(tài)，表明氣血兩虛模型大鼠造模成功。

表2造模后大鼠體重占初始體重百分比(％)(n＝12)

注：*示與空白對照組相比存在顯著性差異，p<0.05；

#示與模型組相比存在顯著性差異，p<0.05；

a示對比例與實施例1相比存在顯著性差異，p<0.05；

b示對比例與實施例2相比存在顯著性差異，p<0.05；

c示對比例與實施例3相比存在顯著性差異，p<0.05；

d示對比例與實施例4相比存在顯著性差異，p<0.05。

如表2所示，空白對照組大鼠體重未出現(xiàn)明顯波動；模型組大鼠體重呈下降趨勢，在第3天至第7天下降幅度明顯，第10天下降至初始體重的86％；陽性藥對照組大鼠體重呈先上升再下降趨勢，第5天達(dá)到最高值為初始體重的107％；各個實施例組大鼠體重均呈逐漸上升趨勢，其中實施例2和實施例4組大鼠體重上升較為顯著，且與模型組與空白組對比均有顯著性差異(p<0.05)，體重上升至最大時達(dá)到初始體重的113％左右，證明實施例2或?qū)嵤├?的中藥組合物對造模后大鼠體重有明顯的恢復(fù)效果。醇提取中藥組合物實施例中，60％醇提取中草藥組合物優(yōu)于40％醇提和80％醇提，且與模型組相比具有差異性(p<0.05)。

1.2.4外周血相的測定

大鼠氣血兩虛模型成功后，末次放血造模中，收集大鼠眼眶取血1.5ml，其中0.5ml全血(肝素抗凝450u·ml-1)，用動物血細(xì)胞分析儀測定血常規(guī)包括紅細(xì)胞計數(shù)(rbc)、白細(xì)胞計數(shù)(wbc)、血紅蛋白(hb)。

另取1ml于干燥ep管收集全血，充分靜置使得紅細(xì)胞充分自然凝固后，3000r/min離心10min，取上層血清(約200μl)。按鐵蛋白試劑盒(南京建成，貨號:h129；48t)操作說明測定。

大鼠立即腹主動脈取血3ml，充分靜置使得紅細(xì)胞充分自然凝固后，3000r/min離心10min，取上層血清備用，按試劑盒說明書操作檢測。

結(jié)果如表3：

表3造模后大鼠紅細(xì)胞和白細(xì)胞含量變化(n＝12)

注：*示與空白對照組相比存在顯著性差異，p<0.05；

#示與模型組相比存在顯著性差異，p<0.05；

a示對比例與實施例1相比存在顯著性差異，p<0.05；

b示對比例與實施例2相比存在顯著性差異，p<0.05；

c示對比例與實施例3相比存在顯著性差異，p<0.05；

d示對比例與實施例4相比存在顯著性差異，p<0.05。

如表3，大鼠經(jīng)預(yù)給藥30天，再放血和環(huán)磷酰胺造模10天后，測得紅細(xì)胞含量和白細(xì)胞含量。

其中，紅細(xì)胞含量，與空白對照組比較，模型組中紅細(xì)胞數(shù)量顯著降低(p<0.05)。與模型組比較，陽性藥對照組顯著提高造模后大鼠的紅細(xì)胞數(shù)量。實施例1～4組大鼠的紅細(xì)胞數(shù)量均高于模型組也高于各對比例組，且實施例1～4組與模型組或?qū)Ρ壤M相比均具有顯著性差異(p<0.05)，經(jīng)水提的實施例效果優(yōu)于經(jīng)醇沉的實施例。所有實施例中，實施例4組的中藥提取物對造模后大鼠的紅細(xì)胞數(shù)量恢復(fù)具有更好效果，與其他實施例相比存在顯著差異(p<0.05)。

白細(xì)胞含量，與空白對照組比較，模型組中白細(xì)胞數(shù)量顯著降低(p<0.05)。與模型組比較，陽性藥對照組沒有顯著提高造模后大鼠的白細(xì)胞數(shù)量。且實施例1～4組與模型組或?qū)Ρ壤M相比均具有顯著性差異(p<0.05)，經(jīng)水提的實施例效果優(yōu)于經(jīng)醇沉的實施例。所有實施例中，實施例4組的中藥提取物對造模后大鼠的白細(xì)胞數(shù)量恢復(fù)具有更好效果，與其他實施例相比存在顯著差異(p<0.05)。

表4造模后大鼠血紅蛋白和血清鐵蛋白含量變化

注：*示與空白對照組相比存在顯著性差異，p<0.05；

#示與模型組相比存在顯著性差異，p<0.05；

a示對比例與實施例1相比存在顯著性差異，p<0.05；

b示對比例與實施例2相比存在顯著性差異，p<0.05；

c示對比例與實施例3相比存在顯著性差異，p<0.05；

d示對比例與實施例4相比存在顯著性差異，p<0.05。

如表4，大鼠經(jīng)預(yù)給藥30天，再放血和環(huán)磷酰胺造模10天后，測得血紅蛋白含量和血清鐵蛋白含量。

其中，血紅蛋白含量，與空白對照組比較，模型組中血紅蛋白含量顯著降低(p<0.05)。與模型組比較，陽性藥對照組顯著提高造模后大鼠的血紅蛋白的含量(p<0.05)。且實施例1～4組與模型組或?qū)Ρ壤M相比均具有顯著性差異(p<0.05)，經(jīng)水提的實施例效果優(yōu)于經(jīng)醇沉的實施例。所有實施例中，實施例4組的中藥提取物對造模后大鼠的血紅蛋白含量恢復(fù)具有更好效果，與其他實施例相比存在顯著差異(p<0.05)。

血清鐵蛋白含量，與空白對照組比較，模型組大鼠的血清中鐵蛋白含量顯著降低(p<0.05)。與模型組比較，陽性藥對照組顯著提高造模后大鼠的血清中鐵蛋白含量(p<0.05)。且實施例1～4組與模型組或?qū)Ρ壤M相比均具有顯著性差異(p<0.05)，經(jīng)水提的實施例效果優(yōu)于經(jīng)醇沉的實施例。所有實施例中，實施例4組的中藥提取物對造模后大鼠的血清鐵蛋白含量恢復(fù)具有更好效果，與其他實施例相比存在顯著差異(p<0.05)。

1.2.5力竭游泳試驗

大鼠氣血兩虛模型成功后，末次給藥24小時后，各組大鼠尾部負(fù)重3％體重鉛皮置于游泳箱中游泳。水深不少于50cm，水溫31℃±1.0℃，當(dāng)大鼠游至沒入水底，超過10秒，視為力竭。記錄大鼠自游泳開始至力竭時間，力竭游泳后，大鼠立即腹主動脈取血3ml，充分靜置使得紅細(xì)胞充分自然凝固后，3000r/min離心10min，取上層血清備用，按試劑盒說明書操作檢測血乳酸(bla)(南京建成；貨號:a019-2；48t)、血清尿素氮(bun)(貨號:c013-2脲酶法；96t)和血清磷酸肌酸激酶活性(ck)(南京建成；貨號:a032；24t)。

表5造模后大鼠力竭游泳時間及血液生化指標(biāo)含量(n＝12)

注：*示與空白對照組相比存在顯著性差異，p<0.05；

#示與模型組相比存在顯著性差異，p<0.05；

a示對比例與實施例1相比存在顯著性差異，p<0.05；

b示對比例與實施例2相比存在顯著性差異，p<0.05；

c示對比例與實施例3相比存在顯著性差異，p<0.05；

d示對比例與實施例4相比存在顯著性差異，p<0.05。

如表5，大鼠經(jīng)預(yù)給藥30天，再放血和環(huán)磷酰胺造模10天后負(fù)重游泳時間結(jié)果表明，與空白對照組相比，模型組中大鼠的負(fù)重游泳時間大幅度降低(p<0.05)。與模型組相比，陽性藥對照組中大鼠的負(fù)重游泳時間顯著增加(p<0.05)。且實施例1～4組與模型組或?qū)Ρ壤M相比，負(fù)重游泳時間均顯著性提高(p<0.05)，經(jīng)水提的實施例效果優(yōu)于經(jīng)醇沉的實施例。所有實施例中，實施例2組的中藥提取物對造模后大鼠的血清鐵蛋白含量恢復(fù)具有更好效果，與其他實施例相比存在顯著差異(p<0.05)。

血液生化指標(biāo)檢測結(jié)果表明，與模型組比較，陽性藥對照組顯著降低造模后大鼠血乳酸含量、血清尿素氮含量及血清磷酸肌酸激酶活力(p<0.05)。與模型組相比，陽性藥對照組中大鼠的的血液生化指標(biāo)顯著降低(p<0.05)。且實施例1～4組與模型組或?qū)Ρ壤M相比，血液生化指標(biāo)也顯著降低(p<0.05)，經(jīng)水提的實施例效果優(yōu)于經(jīng)醇沉的實施例。所有實施例中，實施例2組的中藥提取物對造模后大鼠的血乳酸含量、血清尿素氮含量及血清磷酸肌酸激酶活力有著更顯著的減低作用，該效果與其他實施例相比存在顯著差異(p<0.05)。

1.2.6脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的測定

將試驗大鼠腹主動脈取血后，解剖取脾臟、胸腺，于生理鹽水中漂洗掉表面的血液，在用濾紙吸去水分，用電子天平稱重,計算胸腺和脾指數(shù),胸腺指數(shù)＝胸腺重(mg)/鼠重(g)；脾指數(shù)＝脾重(mg)/鼠重(g)。

1.2.7肝糖原測定

腹主動脈取血后的大鼠，取肝臟，肝臟經(jīng)生理鹽水漂洗后用濾紙吸干，稱重(樣本重量≤100mg為宜，不要＞100mg)。然后加入堿液破壞組織保留糖原，按樣本重量(9mg)：堿液體積(μl)＝1:3，一起加入試管中，用冰箱保鮮膜將管口扎起，以防水分蒸發(fā)，在膜上用針頭扎一小孔，以便氣體熱脹冷縮，沸水浴煮20min，流水冷卻。將糖原水解液進(jìn)一步制備成糖元檢測液，待測。按測試盒操作說明進(jìn)行檢測。

表6造模后大鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)和肝糖原指標(biāo)含量(n＝12)

注：*示與空白對照組相比存在顯著性差異，p<0.05；

#示與模型組相比存在顯著性差異，p<0.05；

a示對比例與實施例1相比存在顯著性差異，p<0.05；

b示對比例與實施例2相比存在顯著性差異，p<0.05；

c示對比例與實施例3相比存在顯著性差異，p<0.05；

d示對比例與實施例4相比存在顯著性差異，p<0.05。

如表6所示，大鼠經(jīng)預(yù)給藥30天，再放血和環(huán)磷酰胺造模10天后，測得其脾指數(shù)、胸腺指數(shù)和肝糖原數(shù)值。

與空白組比較，模型組大鼠脾指數(shù)或胸腺指數(shù)顯著降低(p<0.05)。與模型組比較，陽性藥對照組顯著提高造模后大鼠脾指數(shù)或胸腺指數(shù)(p<0.05)。實施例1～4組大鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)均高于模型組或各對比例組；經(jīng)水提的實施例效果優(yōu)于經(jīng)醇沉的實施例。所有實施例中，實施例2組的中藥提取物對造模后大鼠的脾指數(shù)、胸腺指數(shù)的提高具有更好效果，與其他實施例相比存在顯著差異(p<0.05)。

與空白組比較，模型組大鼠肝臟中肝糖原儲備顯著降低(p<0.05)。與模型組比較，陽性藥對照組顯著降低造模后大鼠肝臟中肝糖原儲備，實施例1～4組均可以升高大鼠肝臟中肝糖原儲備。實施例1～4組大鼠肝糖原儲備均高于模型組或各對比例組；經(jīng)水提的實施例效果優(yōu)于經(jīng)醇沉的實施例。所有實施例中，實施例2組的中藥提取物對造模后大鼠的肝糖原儲備的提高具有更好效果，與其他實施例相比存在顯著差異(p<0.05)。

由以上結(jié)果可以看出，這種含有人參、蛹蟲草、銀耳、鐵皮石斛、龍眼肉提取物的中藥組合物有助于氣血虛模型大鼠體重的增長，改善其外觀狀況及精神面貌；顯著增加大鼠的力竭游泳時間，提高其耐受力；增加大鼠的脾指數(shù)、胸腺指數(shù)和肝糖原，提高其免疫能力；降低大鼠的血乳酸、血清尿素氮和血清磷酸肌酸激酶活力，提高其抗疲勞能力。有助于氣血兩虛模型大鼠體重的增長，改善其外觀狀況及精神面貌；顯著提高模型大鼠的紅細(xì)胞數(shù)量、白細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白含量及血清鐵蛋白含量，具有補(bǔ)血或改善貧血的作用。綜合以上結(jié)果，說明本發(fā)明組合物能夠改善大鼠氣血兩虛的狀態(tài)，具有補(bǔ)血、提高機(jī)體免疫力及抗疲勞的作用。

以上僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。