本發(fā)明屬于獸藥領(lǐng)域，特別涉及一種防治豬圓環(huán)病毒病的中藥成分方劑及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前我國養(yǎng)豬生產(chǎn)面臨著日趨嚴(yán)峻的疫病威脅，發(fā)病情況復(fù)雜多變，生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)與日俱增，控制成本顯著提高，經(jīng)濟(jì)損失無法估量。其重要原因在于豬群中普遍存在免疫抑制性疾病。豬的免疫系統(tǒng)是機(jī)體保護(hù)自身的防御性結(jié)構(gòu)，不僅能抵御外來細(xì)菌、病毒和其他有害物質(zhì)的侵襲，還能清除體內(nèi)衰老、突變、惡化或死亡的細(xì)胞，增進(jìn)健康。豬免疫抑制性疾病直接導(dǎo)致在疾病診治過程中使用大量藥物，造成病原微生物的耐藥性日新月異。同時(shí)動(dòng)物機(jī)體的特異性和非特異性免疫力下降，對(duì)各種疫苗無法免疫應(yīng)答，或產(chǎn)生的抗體效價(jià)低下。造成低致病力的病原體或弱毒疫苗也可能感染豬體發(fā)病，更為嚴(yán)重的是由免疫抑制所帶來的混合感染，使疾病更為復(fù)雜，有時(shí)會(huì)造成新的綜合征，甚至達(dá)到難以控制的程度。給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)帶來公共衛(wèi)生安全隱患。由于這些免疫抑制性疾病常以亞臨床感染的形式出現(xiàn)，易被忽視，因此，必須加強(qiáng)對(duì)免疫抑制性疾病的重視，并做好防控工作。
豬群中最為普遍存在的免疫抑制性疾病即為豬圓環(huán)病毒2型感染?，F(xiàn)已知pcv有兩個(gè)血清型，pcv1為非致病性的病毒。pcv2為致病性的病毒，它是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(postweaningmultisystemicwastingsyndrome，pmws)的主要病原。本病最早發(fā)現(xiàn)于加拿大(1991)，除pmws外，pdns(豬皮炎與腎病綜合征)、pnp(增生性壞死性肺炎)、prdc(豬呼吸道疾病綜合征)、繁殖障礙、先天性顫抖、腸炎等疾病亦與pcv2感染有重要關(guān)聯(lián)。
pvc2組織學(xué)上的顯著病變是淋巴濾泡區(qū)減小或缺失，淋巴細(xì)胞耗竭，大量組織細(xì)胞浸潤髓樣組織。pcv2既不在樹突狀細(xì)胞(dc)中復(fù)制，也不誘導(dǎo)dc的凋亡，dc吞噬pvc2后，不對(duì)其進(jìn)行抗原加工和遞呈，所以dc是pcv2的良好避難所。又因?yàn)閐c可以在機(jī)體到處移行，所以它成為pcv2散播到機(jī)體各處的良好載體。參與免疫調(diào)節(jié)的細(xì)胞因子表達(dá)數(shù)量的改變，導(dǎo)致抗原遞呈細(xì)胞表面抗原mhci類分子和mhcii類分子表達(dá)下降，繼而使得pcv2感染后，淋巴細(xì)胞不能有效地激活和增殖，最終破壞免疫功能。pcv2可以感染t淋巴細(xì)胞和b淋巴細(xì)胞，并可以復(fù)制，但卻引起t淋巴細(xì)胞亞群和b淋巴細(xì)胞亞群都明顯減少。原因可能是：其一，pcv2可以誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡；其二，可能直接導(dǎo)致淋巴細(xì)胞的增殖減少。
應(yīng)用中藥調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能和防治傳染病在我國已有數(shù)千年的歷史，并以確切的療效和較低的毒副殘留及抗藥性而廣受歡迎。我國擁有豐富的中草藥資源，應(yīng)加速對(duì)其的研究與開發(fā)，打造具有中國特色的品牌。這對(duì)解決長期困擾養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的抗生素殘留問題，發(fā)展綠色畜牧業(yè)，滿足人們對(duì)食品安全的需求，增強(qiáng)我國動(dòng)物性產(chǎn)品在國際市場(chǎng)的競爭力，都具有重要的經(jīng)濟(jì)意義和社會(huì)效益。但傳統(tǒng)中藥材在加工、使用、存貯、運(yùn)輸?shù)戎T多環(huán)節(jié)存有不便。中藥現(xiàn)代化便是把中藥中的活性成分一一分離出來進(jìn)行研究。
現(xiàn)有的疫苗、抗生素、化藥等不足以明顯降低豬圓環(huán)病毒病的發(fā)病率，導(dǎo)致養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)巨大的經(jīng)濟(jì)損失?？股亍⒓に?、化學(xué)類合成藥物可以促進(jìn)動(dòng)物生長、減少疾病發(fā)生，但這些藥物長期使用會(huì)使病原微生物產(chǎn)生耐藥性、產(chǎn)品藥物殘留及環(huán)境污染等，嚴(yán)重威脅人類健康。同時(shí)影響到我國農(nóng)副產(chǎn)品的出口。然而，本發(fā)明作者通過大量試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，黃芪甲苷等中藥成分聯(lián)用具有防治豬圓環(huán)病毒病和提高機(jī)體免疫功能的作用，現(xiàn)有技術(shù)中沒有公開過該中藥成分復(fù)方具有防治豬圓環(huán)病毒病和提高機(jī)體免疫功能的作用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種防治豬圓環(huán)病毒病的中藥成分方劑及其應(yīng)用，同時(shí)本發(fā)明還提供一種所述防治豬圓環(huán)病毒病的中藥成分方劑的制備方法，該中藥成分方劑能有效提高動(dòng)物免疫抗體效價(jià)，降低發(fā)病率，促進(jìn)動(dòng)物的生長發(fā)育，全面增強(qiáng)動(dòng)物免疫功能和防御疾病的能力，克服了疫苗、化藥、抗生素的毒副作用與食品安全隱患，研發(fā)前景樂觀，臨床應(yīng)用廣闊，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
本發(fā)明中一種防治豬圓環(huán)病毒病的中藥成分方劑，所述中藥成分方劑由黃芪甲苷、紅景天苷、石吊蘭素、芝麻素組成，所述黃芪甲苷、紅景天苷、石吊蘭素和芝麻素的質(zhì)量配比比例為1-4:1-4:1-4:1-4。
本發(fā)明中一種防治豬圓環(huán)病毒病的中藥成分方劑的制備方法，所述中藥成分方劑為藥液，其工藝步驟為：將黃芪甲苷、紅景天苷、石吊蘭素和芝麻素按質(zhì)量比1-4:1-4:1-4:1-4，加生理鹽水制成總濃度為2mg/ml的藥液。
本發(fā)明中一種防治豬圓環(huán)病毒病的中藥成分方劑作為注射劑的應(yīng)用，具體步驟為：將所述中藥成分方劑藥液對(duì)豬進(jìn)行頸部肌肉注射，每天1次，每次2ml，持續(xù)3天即可。
相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提出一種中藥成分方劑作為獸藥防治豬圓環(huán)病毒病的應(yīng)用，能有效提高動(dòng)物免疫抗體效價(jià)，降低發(fā)病率，促進(jìn)動(dòng)物的生長發(fā)育，全面增強(qiáng)動(dòng)物免疫功能和防御疾病的能力，克服了疫苗、化藥、抗生素的毒副作用與食品安全隱患，研發(fā)前景樂觀，臨床應(yīng)用廣闊。
具體實(shí)施方式
結(jié)合以下具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1
中國藥品生物制品鑒定所購得的黃芪甲苷、紅景天苷、石吊蘭素和芝麻素按質(zhì)量比1:1:1:1，加生理鹽水制成總濃度為2mg/ml的藥液，進(jìn)行仔豬體內(nèi)試驗(yàn)。
40頭健康普通級(jí)“杜×大×長”三元雜交斷奶仔豬，50日齡，購自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江浦試驗(yàn)豬場(chǎng)。適應(yīng)環(huán)境后隨機(jī)分為4組，每組10頭，公母各半。pcv2組和治療組以107tcid50/ml的pcv2ah株攻毒，每頭頸部肌肉注射2.0ml，1次，同時(shí)滴鼻2.0ml，1次。空白組和藥物對(duì)照組不進(jìn)行攻毒。各組隔離飼養(yǎng)。于試驗(yàn)的第三周第1d治療組和藥物對(duì)照組對(duì)側(cè)頸部肌肉注射該中藥成分復(fù)方液每天1次，每次2.0ml，持續(xù)3天?？瞻捉M和pcv2組不進(jìn)行頸部肌肉注射該中藥成分方劑。試驗(yàn)總周期為4周。
試驗(yàn)最后1d仔豬清晨空腹前腔靜脈采血，實(shí)時(shí)熒光定量pt-pcr法檢測(cè)血清中pcv2的抗原含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，pcv2組的抗原含量為7.31(lg)/μl，治療組的抗原含量為3.56(lg)/μl，兩者差異極顯著，空白組和藥物對(duì)照組均未檢測(cè)到pcv2抗原。試驗(yàn)表明，該中藥成分方劑能顯著降低機(jī)體內(nèi)的病毒含量，抑制病毒血癥的產(chǎn)生，具有明顯的抗pcv2病毒作用。
試驗(yàn)最后1d動(dòng)物前腔靜脈采血1ml，3000rpmin離心10min取血清。全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)機(jī)體中igg、igm、白蛋白(alb)和球蛋白(glo)的水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)pcv2組的igg水平為1.40mg/ml，治療組的igg水平為1.83mg/ml，兩者差異極顯著，空白組的igg水平為1.51mg/ml，藥物對(duì)照組的igg水平為1.62mg/ml。pcv2組的igm水平為0.68mg/ml，治療組的igm水平為0.87mg/ml，兩者差異顯著，空白組的igm水平為0.65mg/ml，藥物對(duì)照組的igm水平為0.72mg/ml。pcv2組的血清alb含量為27.6g/l，治療組的alb含量為38.1g/l，兩者差異極顯著，空白組的alb含量為35.0g/l，藥物對(duì)照組的alb含量為36.7g/l。pcv2組的血清glo含量為28.8g/l，治療組的glo含量為38.0g/l，兩者差異極顯著，空白組的glo含量為37.3g/l，藥物對(duì)照組的glo含量為36.9g/l。試驗(yàn)表明，該中藥成分方劑能大幅上調(diào)仔豬血清中igg的水平，從而提高防病抗病能力。同時(shí)還能顯著提高igm水平，影響體液免疫反應(yīng)。白蛋白作為一種貯存蛋白質(zhì)，可隨時(shí)修補(bǔ)組織和提供能量。該中藥成分方劑能顯著上調(diào)alb水平，增加機(jī)體肝臟代謝功能。同時(shí)還能顯著提高glo水平，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。
試驗(yàn)最后1d動(dòng)物前腔靜脈采血1ml，3000rpmin離心10min取血清。酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中il-4、il-10、il-2和ifn-γ的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，pcv2組的il-4含量為112.3pg/ml，治療組的il-4含量為84.5pg/ml，兩者差異極顯著，空白組的il-4含量為72.6pg/ml，藥物對(duì)照組的il-4含量為74.0pg/ml。pcv2組的il-10含量為177.5pg/ml，治療組的il-10含量為102.9pg/ml，兩者差異極顯著，空白組的il-10含量為98.6pg/ml，藥物對(duì)照組的il-10含量為103.7pg/ml。pcv2組的il-2含量為288.4pg/ml，治療組的il-2含量為314.7pg/ml，兩者差異顯著，空白組的il-2含量為258.6pg/ml，藥物對(duì)照組的il-2含量為262.9pg/ml。pcv2組的ifn-γ含量為187.1pg/ml，治療組的ifn-γ含量為254.9pg/ml，兩者差異極顯著，空白組的ifn-γ含量為160.8pg/ml，藥物對(duì)照組的ifn-γ含量為158.3pg/ml。試驗(yàn)表明，該中藥成分方劑能顯著下調(diào)il-4和il-10水平，減弱靜止性th0細(xì)胞向th2方向分化，抑制th2效應(yīng)，從而解除機(jī)體免疫耐受情況；同時(shí)該中藥成分方劑能顯著上調(diào)il-2和ifn-γ水平，促進(jìn)靜止性th0細(xì)胞向th1方向分化，增強(qiáng)th1效應(yīng)，從而改善機(jī)體免疫抑制狀態(tài)。
實(shí)施例2
中國藥品生物制品鑒定所購得的黃芪甲苷、紅景天苷、石吊蘭素和芝麻素按質(zhì)量比2:1:3:4，加生理鹽水制成總濃度為2mg/ml的藥液，進(jìn)行仔豬體內(nèi)試驗(yàn)。
40頭健康普通級(jí)“杜×大×長”三元雜交斷奶仔豬，50日齡，購自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江浦試驗(yàn)豬場(chǎng)。適應(yīng)環(huán)境后隨機(jī)分為4組，每組10頭，公母各半。預(yù)防組和藥物對(duì)照組頸部肌肉注射該中藥成分復(fù)方液每天1次，每次2.0ml，持續(xù)3天?？瞻捉M和pcv2組不進(jìn)行頸部肌肉注射該中藥成分方劑。于試驗(yàn)的第4天，pcv2組和預(yù)防組以107tcid50/ml的pcv2ah株攻毒，每頭對(duì)側(cè)頸部肌肉注射2.0ml，1次，同時(shí)滴鼻2.0ml，1次?？瞻捉M和藥物對(duì)照組不進(jìn)行攻毒。各組隔離飼養(yǎng)。試驗(yàn)總周期為4周。
分別于試驗(yàn)的第1d和最后1d早上8：00空腹稱重，根據(jù)初重和末重計(jì)算平均日增重。平均日增重＝頭均凈增重/試驗(yàn)天數(shù)。記錄仔豬的采食量，計(jì)算日均采食量，試驗(yàn)結(jié)束后計(jì)算料重比。料重比＝日均采食量/平均日增重。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，pcv2組的平均日增重為421.7g，預(yù)防組的平均日增重為519.3g，兩者差異極顯著，空白組的平均日增重為526.4g，藥物對(duì)照組的平均日增重為548.9g。pcv2組的日均采食量為795.2g，預(yù)防組的日均采食量為907.6g，兩者差異極顯著，空白組的日均采食量為945.1g，藥物對(duì)照組的日均采食量為987.0g。pcv2組的料重比為1.89，預(yù)防組的料重比為1.75，空白組的料重比為1.80，藥物對(duì)照組的料重比1.80。試驗(yàn)表明，該中藥成分方劑可以大幅提升仔豬的日增重，采食量的增加與仔豬消化能力的提高有關(guān)。同時(shí)料重比下降，說明動(dòng)物生長性能明顯改善，營養(yǎng)狀態(tài)良好。
試驗(yàn)最后1d動(dòng)物前腔靜脈采血1ml，3000rpmin離心10min取血清。酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中pcv2的抗體水平及超氧化物歧化酶(sod)活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，pcv2組的pcv2抗體水平od值為0.198，預(yù)防組的pcv2抗體水平od值為0.406，兩者差異極顯著，空白組的pcv2抗體水平od值為0.087，藥物對(duì)照組的pcv2抗體水平od值為0.075。pcv2組的血清sod含量為7.9ng/ml，預(yù)防組的sod含量為12.0ng/ml，兩者差異極顯著，空白組的sod含量為10.6ng/ml，藥物對(duì)照組的sod含量為11.3ng/ml。試驗(yàn)表明，該中藥成分方劑可以大幅上調(diào)仔豬pcv2的抗體水平，特異性的中和、消滅pcv2病原，從而增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，預(yù)防疫病的發(fā)生。sod水平可反映出機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度和機(jī)體清除自由基的能力，該中藥成分方劑可以減少過氧化作用的發(fā)生，通過抑制肌肉的脂質(zhì)氧化，參與調(diào)控胴體品質(zhì)和肉質(zhì)風(fēng)味。
試驗(yàn)最后1d動(dòng)物前腔靜脈采血1ml，血液分析儀測(cè)定機(jī)體紅細(xì)胞(rbc)和血紅蛋白(hgb)含量，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血液尿素(urea)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，pcv2組的rbc含量為4.81012/l，預(yù)防組的rbc含量為5.61012/l，兩者差異極顯著，空白組的rbc含量為5.41012/l，藥物對(duì)照組的rbc含量為5.81012/l。pcv2組的血清hgb含量為89g/l，預(yù)防組的hgb含量為107g/l，兩者差異極顯著，空白組的hgb含量為105g/l，藥物對(duì)照組的hgb含量為109g/l。pcv2組的血清尿素水平為3.8mmol/l，預(yù)防組的尿素水平為2.9mmol/l，兩者差異極顯著，空白組的尿素水平為3.1mmol/l，藥物對(duì)照組的尿素水平為3.0mmol/l。試驗(yàn)表明，該中藥成分方劑能顯著上調(diào)仔豬紅細(xì)胞數(shù)量，提高血紅蛋白含量，改善機(jī)體貧血狀態(tài)，增強(qiáng)動(dòng)物體質(zhì)。同時(shí)降低機(jī)體的尿素水平，這意味著蛋白質(zhì)沉積增加，氨基酸平衡理想，加快了新陳代謝的速度，促進(jìn)生長發(fā)育。
盡管本發(fā)明是參照具體實(shí)施例來描述，但這種描述并不意味著對(duì)本發(fā)明構(gòu)成限制。參照本發(fā)明的描述，所公開的實(shí)施例的其他變化，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員都是可以預(yù)料的，這種的變化應(yīng)屬于所屬權(quán)利要求所限定的范圍內(nèi)。