本發(fā)明涉及一種靈芝提取物的提取方法及其應(yīng)用，屬于食品醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：靈芝為多孔菌科(polyporaceae)真菌赤芝(leyss.exfr.)karst.或紫芝g.sinensezhao，xuetzhang的干燥子實(shí)體。靈芝是祖國(guó)中醫(yī)藥寶庫(kù)中的珍品，素有“仙草”之譽(yù)。靈芝的子實(shí)體具有強(qiáng)烈的藥理學(xué)活性，有止痛、鎮(zhèn)靜、解毒的作用，可以抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫力、降低血糖，具有滋補(bǔ)強(qiáng)身、延年益壽的功效。靈芝的藥理成分非常豐富，其中有效成分包括靈芝多糖、三萜類化合物、氨基酸、蛋白質(zhì)、生物堿以及微量元素等，各有效成分之間具有協(xié)同作用。在靈芝發(fā)育的不同階段，如孢子體、菌絲體、子實(shí)體，其所含的化學(xué)成分也有差異。靈芝多糖是一種大分子化合物，分子量從數(shù)千到數(shù)十萬，不溶于高濃度的乙醇，可在熱水中溶解。多糖的藥理活性與單糖間糖苷鍵的結(jié)合形式及立體構(gòu)形有關(guān)。靈芝多糖是靈芝的最有效成分之一，具有多方面的藥理活性：能提高機(jī)體免疫力，加速血液微循環(huán)，提高血液供血能力，降低機(jī)體靜止?fàn)顟B(tài)下的無效耗氧量，消除體內(nèi)自由基，提高機(jī)體細(xì)胞膜的封閉度，抗放射，提高肝臟、骨髓、血液合成dna、rna、蛋白質(zhì)的能力，延長(zhǎng)壽命等。靈芝的多種藥理活性和靈芝多糖息息相關(guān)。目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)靈芝子實(shí)體中有效成分的分離鑒定，開展了大量的研究工作。研究表明，靈芝不同部位中靈芝多糖和三萜的含量存在差異。丁平等人采用rp-hplc法測(cè)定靈芝菌蓋的表皮層、木栓層、菌柄、孢子粉、菌蓋子實(shí)體等部位靈芝酸b的含量，發(fā)現(xiàn)靈芝藥材中靈芝酸b主要集中在靈芝的表皮部位，其它部位則較少(丁平，張丹雁，徐鴻華.中草藥,2001,32(4):310-312)。馬林等人運(yùn)用hplc測(cè)定了靈芝子實(shí)體、孢子粉、菌絲體中赤芝孢子酸a、赤芝酸a、靈芝酸b和靈芝酸c的含量，發(fā)現(xiàn)靈芝子實(shí)體中4種三萜酸含量均高于靈芝孢子粉(馬林，吳豐，陳若蕓.藥學(xué)學(xué)報(bào),2003,38(1):50-52)。因此，針對(duì)靈芝子實(shí)體中有效成分的提取顯得更為重要。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的，是提供一種靈芝提取物的提取方法及其應(yīng)用。本發(fā)明顯著地提高了靈芝有效成分的提取率，普遍優(yōu)于國(guó)內(nèi)現(xiàn)有的提取方法；而且采用本發(fā)明的組合物還具有增強(qiáng)免疫力的特點(diǎn)，為保健藥品提供了更多品種，便于消費(fèi)者選用。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下:一種靈芝提取物的提取方法，該方法是通過對(duì)靈芝子實(shí)體的炮制、提取及濃縮制備而成。前述的靈芝提取物的提取方法中，將靈芝子實(shí)體置于提取罐中，先加一定量乙醇加熱至煮沸后2小時(shí)得煎煮液，煎煮液經(jīng)篩網(wǎng)過濾得濾液和濾渣，濾液泵入藥液貯罐中，將濾渣再加相同體積的乙醇重復(fù)以上操作一次；然后再將濾渣用一定量的水重復(fù)以上操作2次，合并4次濾液得提取液；將提取液吸入雙效節(jié)能濃縮器中濃縮得到濃縮液，濃縮溫度控制在50℃～80℃，濃縮至相對(duì)密度1.04±0.1；將濃縮液經(jīng)篩網(wǎng)過濾得到的濾液置于球形濃縮罐中，濃縮溫度控制在50℃～80℃，減壓濃縮至0.5-1.5密度的清膏，即靈芝提取物。前述的靈芝提取物的提取方法中，將靈芝子實(shí)體置于提取罐中，先加15～50倍量乙醇加熱至煮沸后2小時(shí)得煎煮液，煎煮液經(jīng)100目篩網(wǎng)過濾得濾液a和濾渣a，濾液a泵入藥液貯罐中，將濾渣a再加相同體積的乙醇重復(fù)以上操作一次得到濾液b和濾渣b；然后再將濾渣b用15～50倍的水加熱至煮沸后2小時(shí)、經(jīng)100目篩網(wǎng)過濾得濾液c和濾渣c(diǎn)，將濾渣c(diǎn)再加15～50倍的水重復(fù)以上操作一次得濾液d和濾渣d；合并4次濾液(即濾液a、濾液b、濾液c和濾液d)得提取液；將提取液吸入雙效節(jié)能濃縮器中濃縮得到濃縮液，濃縮溫度控制在65℃，濃縮至相對(duì)密度1.04±0.02；將濃縮液經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾得到的濾液置于球形濃縮罐中，濃縮溫度控制在80℃，減壓濃縮至相對(duì)密度1.15的清膏，即靈芝提取物。前述的靈芝提取物的組合物，由靈芝提取物，及藥學(xué)或食品學(xué)上可接受的輔料組成；所述的輔料包括溶劑、增溶劑、著色劑、填充劑、矯味劑、防腐劑、包衣材料、芳香劑、稀釋劑。前述的組合物中，所述的輔料選自淀粉、乳糖、環(huán)糊精、三氯蔗糖中的一種或多種。前述的靈芝提取物的組合物的靈芝提取物制劑，其特征在于：所述制劑的劑型為片劑、膠囊劑、微乳劑、脂質(zhì)體劑、口服液、糖漿劑、顆粒劑、丸劑、微丸劑、散劑、膏劑、丹劑、注射劑、栓劑、霜?jiǎng)婌F劑、滴丸劑、貼劑或緩釋制劑。前述的制劑中，所述的顆粒劑的制備方法是，將乳糖粉碎后過100目篩；將過篩后的乳糖加靈芝提取物制得軟材，切刀轉(zhuǎn)速:750轉(zhuǎn)/分鐘；攪拌轉(zhuǎn)速:75轉(zhuǎn)/分鐘，混5分鐘；軟材置搖擺式顆粒機(jī)中16目篩制粒；制粒后將濕顆粒置熱風(fēng)循環(huán)烘箱烘干，控制溫度在65±5℃，干燥1.5小時(shí)得干顆粒；干顆粒置振蕩篩中，先用14目、再用50目篩整粒；將整粒后合格顆粒置多向運(yùn)動(dòng)混合機(jī)中混合10分鐘，得顆粒劑。前述的制劑中，所述的膠囊劑的制備方法是，在槽形混合機(jī)中加入一定配比的濃縮的靈芝提取物和淀粉，混合20分鐘后送烘箱75±5℃烘3小時(shí)，20目粉碎,過40目篩，再75±5℃烘3小時(shí)得細(xì)粉；將細(xì)粉置于多向運(yùn)動(dòng)混合機(jī)中混合30分鐘，將混合后的細(xì)粉按照常規(guī)手段制成膠囊劑。前述的制劑中，所述的口服液的制備方法是，將靈芝提取物倒入烊糖鍋內(nèi)，加入適量純化水，加熱使其處于微沸并保溫一小時(shí)，按質(zhì)量計(jì)加入3％的環(huán)糊精和0.05％三氯蔗糖，加純化水，定容，得到相對(duì)密度為1.16-1.18、ph值3.9-4.9的溶液，100℃保溫0.5h，放出，降溫，過濾，按質(zhì)量計(jì)加0.1％桔子香精和0.1％對(duì)羥基苯甲酸乙酯，攪拌均勻，置冷庫(kù)中-2℃-5℃冷藏24h；將藥液用板框過濾機(jī)過濾至澄清，得口服液。前述的制劑中，所述的片劑的制備方法是，稱取pvpk30(聚維酮k30)，溶于純化水中配成5％的溶液，過80目篩后作為粘合劑待用；將mcc(微晶纖維素)、l-hpc(羥丙纖維素)、pvpp(交聯(lián)聚維酮)分別過100目篩，與50目～100目的靈芝提取物稱取pvpk30(聚維酮k30)，溶于純化水中配成5％的溶液，過80目篩后作為粘合劑待用；將mcc(微晶纖維素)、l-hpc(羥丙纖維素)、pvpp(交聯(lián)聚維酮)分別過100目篩，與50目～100目的靈芝提取物一起，置濕法混合顆粒機(jī)中混合10分鐘；緩慢加入粘合劑進(jìn)行制軟材，混5分鐘，可在加完5％聚維酮k30溶液后加適量純化水進(jìn)行制軟材，純化水量為可利用物料量的80％；將軟材置搖擺式顆粒機(jī)中30目篩制粒，濕顆粒置熱風(fēng)循環(huán)烘箱內(nèi)60～65℃烘6小時(shí)；干燥后顆粒用20目篩整粒，顆粒除鐵，十二烷基硫酸鈉過100目篩，先手工將其與一部分顆粒于不銹鋼盆中混合4次，每次混合1分鐘左右，與剩余的顆粒一起置于多向運(yùn)動(dòng)混合機(jī)中混合10分鐘，放出顆粒；將顆粒置于壓片機(jī)中，壓片得片劑。本發(fā)明還提供了一種針對(duì)前述的靈芝提取物的靈芝有效成分的檢測(cè)方法，包括對(duì)靈芝多糖的含量測(cè)定；所述對(duì)靈芝多糖含量測(cè)定，按下述步驟制備；a、對(duì)照品溶液的制備，精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品適量，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，得對(duì)照品溶液；b、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，分別精密吸取對(duì)照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，置10ml具塞試管中,加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液6ml，得混合溶液，硫酸蒽酮溶液通過精密稱取蒽酮0.1g，加80％的硫酸溶液100ml溶解、搖勻制成；將混合溶液搖勻、置水浴中加熱15分鐘后取出，放入冰浴中冷卻15分鐘；以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在625nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；c、供試品溶液的制備，取本品粉末約2g，精密稱定，置索氏提取器中，加水90ml，電加熱器加熱回流提取至提取液無色，提取液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，加入乙醇150ml，搖勻，4℃放置12小時(shí)，取出，離心，傾去上清液，沉淀加水溶解并轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液；d、測(cè)定法，精密量取供試品溶液2ml，置于10ml具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自精密加入硫酸蒽酮溶液6ml起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含葡萄糖的重量，重量以mg為單位，計(jì)算，得靈芝多糖含量；本品按干燥品計(jì)算，含靈芝多糖以無水葡萄糖計(jì)。針對(duì)前述的靈芝提取物的靈芝有效成分的檢測(cè)方法，其特征在于：還包括對(duì)三萜及甾醇的含量測(cè)定；所述三萜及甾醇的含量測(cè)定，按下述步驟制備；e、對(duì)照品溶液的制備，取齊墩果酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，得對(duì)照品溶液；f、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密量取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，分別置15ml具塞試管中，揮干，放冷，精密加入新配置的香草醛冰醋酸溶液0.2ml，香草醛冰醋酸溶液通過精密稱取香草醛0.5g，加冰醋酸溶解成10ml制成，高氯酸0.8ml，搖勻，得混合溶液；將混合溶液在70℃水浴中加熱15分鐘，立即置冰浴中冷去5分鐘，取出，精密加入乙酸乙酯4ml，搖勻，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在256nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；g、供試品溶液的制備，取本品粉末約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醇50ml，通過功率140w，頻率42khz的超聲處理45分鐘，濾過，濾液置100ml量瓶中，用適量乙醇，分次洗滌濾器和濾渣，將洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，得供試品溶液；h、測(cè)定法，精密量取供試品溶液0.2ml，置15ml具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自揮干起，同法操作，測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中齊墩果酸的含量，計(jì)算，即得三萜及甾醇的含量；本品按干燥品計(jì)算，含三萜及甾醇以齊墩果酸c30h48o3計(jì)。前述的針對(duì)靈芝有效成分的檢測(cè)方法中，將原料和經(jīng)過提取后得到的清膏分別進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果如下：名稱質(zhì)量(g)多糖含量(％)三萜及甾醇含量(％)靈芝子實(shí)體15000.950.77提取物9015.169.01檢測(cè)結(jié)果表明，通過本發(fā)明所述的方法提取得到的靈芝提取物，其多糖含量提高16倍，三萜含量提高11.7倍，多糖提取率高達(dá)95.7％。與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明對(duì)靈芝提取物的提取方法作了研究和深入分析后，改進(jìn)了提取方法和參數(shù)，顯著地提高了靈芝提取物的提取率，普遍優(yōu)于國(guó)內(nèi)現(xiàn)有的提取方法；而且采用本發(fā)明的組合物還具有增強(qiáng)免疫力的特點(diǎn)，為保健藥品提供了更多品種，便于消費(fèi)者選用。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但應(yīng)注意本發(fā)明的范圍并不受這些實(shí)例的任何限制。實(shí)施例1：靈芝的提取方法1.藥材的整理炮制根據(jù)《浙江省中藥炮制規(guī)范》2015年版炮制的藥材：靈芝：取原藥，除去雜質(zhì)，洗凈，潤(rùn)軟，切厚片，干燥。2.提取靈芝子實(shí)體置于多能提取罐中，加30倍量乙醇加熱至煮沸后2小時(shí)得煎煮液，煎煮液經(jīng)100目篩網(wǎng)過濾得濾液和濾渣，濾液泵入藥液貯罐中；濾渣再加30倍量(以凈藥材重量計(jì)算)乙醇加熱至煮沸后2小時(shí)，煎煮液經(jīng)100目篩網(wǎng)過濾，濾液泵入藥液貯罐中。然后用30倍的水重復(fù)以上操作2次，合并4次濾液得提取液。3.濃縮提取液吸入雙效節(jié)能濃縮器中，濃縮溫度控制在50℃～80℃，濃縮至相對(duì)密度1.04±0.02(65℃)，濃縮液200目過濾，濾液于球形濃縮罐中，濃縮溫度控制在50℃～80℃，減壓濃縮至相對(duì)密度1.15(80℃)的清膏。檢驗(yàn)合格后備用。實(shí)施例2：靈芝顆粒劑的制備方法1.處方靈芝提取物1500g乳糖適量制成500袋生產(chǎn)處方中，每一處方乳糖用量為950g。1.粉碎、過篩乳糖粉碎后過100目篩。2.配料混合、制軟材、制粒將乳糖加靈芝提取物制軟材，切刀轉(zhuǎn)速:750轉(zhuǎn)/分鐘；攪拌轉(zhuǎn)速:75轉(zhuǎn)/分鐘，混5分鐘。軟材置搖擺式顆粒機(jī)中16目篩制粒。3.干燥、整粒、總混制粒后將濕顆粒置熱風(fēng)循環(huán)烘箱烘干，控制溫度在65±5℃，干燥1.5小時(shí)得干顆粒。干顆粒置振蕩篩中，先用14目、再用50目篩整粒。將整粒后合格顆粒置多向運(yùn)動(dòng)混合機(jī)中混合10分鐘，顆粒半成品檢驗(yàn)。4.內(nèi)包裝確認(rèn)批號(hào)、產(chǎn)品有效期后，裝好印模，將檢驗(yàn)合格顆粒置自動(dòng)包裝機(jī)中，理論裝量為2g，控制裝量差異在內(nèi)控范圍±6％(1.88g～2.12g)內(nèi)，每15分鐘檢測(cè)一次裝量，并記錄。自動(dòng)包裝機(jī)橫封溫度為170℃～200℃、縱封溫度為160℃～190℃。實(shí)施例3：靈芝膠囊的制備方法1.處方靈芝提取物1500g淀粉適量共制成1000粒膠囊,每粒裝0.2g2.混合、干燥、粉碎在槽形混合機(jī)中加入濃縮的靈芝提取物和淀粉，混合20分鐘后送烘箱75±5℃烘3小時(shí)，20目粉碎,過40目篩，再75±5℃烘3小時(shí)。3.總混將烘干后的細(xì)粉于多向運(yùn)動(dòng)混合機(jī)中混合30分鐘，半成品檢驗(yàn)。4.填充、燈檢、拋光半成品檢驗(yàn)合格的細(xì)粉，采用1號(hào)膠囊填充，裝量為0.3g/粒，控制參數(shù)：溫度18～26℃，濕度45～55％，每10分鐘測(cè)1次裝量并做記錄，使裝量穩(wěn)定在內(nèi)控±8％(0.276-0.324)之間。將填充好的膠囊送到燈檢室燈檢，注意濕度≤55％。燈檢完畢送到拋光室拋光。5.鋁塑泡罩包裝(每板12粒)取合格膠囊鋁塑泡罩包裝，控制參數(shù)：綜合溫度150℃，上封溫度100℃，下封溫度100℃。6.外包裝將鋁塑泡罩包裝好的膠囊從傳遞窗送到外包，置封口機(jī)鋁塑包裝、裝盒、噴碼、套熱收縮膜、裝箱、放裝箱單、封箱、打包。實(shí)施例4：靈芝口服液的制備方法1.前處理、配液將提取后的靈芝提取物倒入烊糖鍋內(nèi)，加入適量純化水。加熱使其處于微沸并保溫一小時(shí)。按溶液計(jì)加入3％的環(huán)糊精和0.05％三氯蔗糖，加純化水，定容，相對(duì)密度為1.16～1.18，ph值3.9～4.9，保溫(100℃，0.5h)，放出，降溫，過濾。加0.1％桔子香精和0.1％對(duì)羥基苯甲酸乙酯，攪拌均勻，置冷庫(kù)中冷藏(-2℃～5℃，24h)。2.過濾將藥液用板框過濾機(jī)過濾至澄清，半成品檢驗(yàn)。3.洗瓶將10ml的管制口服液瓶放入盤中，將盤插入洗瓶機(jī)的料斗中，拔去盤的一邊，使瓶輕滑入料斗中，即可開機(jī)洗瓶。瓶洗干凈后，自動(dòng)進(jìn)入隧道烘料箱中，在250℃烘干后進(jìn)入灌裝線。4.灌封取干凈瓶蓋，挑選合格后裝入下蓋斗中，再將檢驗(yàn)合格的藥液倒入灌封機(jī)的貯液筒內(nèi)，然后調(diào)節(jié)裝量至符合規(guī)定后，開機(jī)灌封。灌封開始時(shí)每十五分鐘檢查一次裝量，穩(wěn)定后每三十分鐘檢查一次裝量，檢查瓶蓋的緊密度，灌封時(shí)要及時(shí)將灌封好的瓶用方盤接取和換上空盤，操作完成后作記錄。5.滅菌將已灌封的瓶用盤裝滿后，移至滅菌室的煮瓶機(jī)的進(jìn)料口，由滅菌機(jī)傳送帶緩慢移至沸水中，進(jìn)行滅菌。沸水溫度應(yīng)控制在95～100℃，傳送帶行速為全程75～90分鐘，以確保藥液瓶能在沸水中30～40min內(nèi)，滅菌完成后，接取已滅菌的方盤，檢查漏封后送燈檢室，操作完成后作記錄。6.燈檢完成滅菌后，連盤送入燈檢室，將瓶整齊推入燈檢機(jī)進(jìn)料斗中，先調(diào)整視鏡清晰度后，開機(jī)進(jìn)行燈檢。并剔除破損和不合格品，完成后作記錄。7.外包裝將燈檢合格品送至包裝室，由包裝工印字(或貼簽)、打批號(hào)、盒子貼標(biāo)簽、裝盒、封盒、裝箱、發(fā)放裝箱單、封箱、打包裝帶。實(shí)施例5：靈芝片劑的制備方法1.處方2.配料混合、制軟材稱取pvpk30(聚維酮k30)，溶于純化水中配成5％的溶液，過80目篩后作為粘合劑待用。將mcc(微晶纖維素)、l-hpc(羥丙纖維素)、pvpp(交聯(lián)聚維酮)分別過100目篩，與50目～100目的靈芝提取物稱取pvpk30(聚維酮k30)，溶于純化水中配成5％的溶液，過80目篩后作為粘合劑待用。將mcc(微晶纖維素)、l-hpc(羥丙纖維素)、pvpp(交聯(lián)聚維酮)分別過100目篩，與50目～100目的靈芝提取物一起，置濕法混合顆粒機(jī)中混合10分鐘。緩慢加入粘合劑進(jìn)行制軟材，混5分鐘，可在加完5％聚維酮k30溶液后加適量純化水進(jìn)行制軟材，純化水量為可利用物料量的80％。3.制粒、烘干將軟材置搖擺式顆粒機(jī)中30目篩制粒，濕顆粒置熱風(fēng)循環(huán)烘箱內(nèi)60～65℃烘6小時(shí)。4.整粒、總混干燥后顆粒用20目篩整粒，顆粒除鐵，十二烷基硫酸鈉過100目篩，先手工將其與一部分顆粒于不銹鋼盆中混合4次，每次混合1分鐘左右，與剩余的顆粒一起置于多向運(yùn)動(dòng)混合機(jī)中混合10分鐘，放出顆粒。顆粒半成品檢驗(yàn)。5.壓片、挑片顆粒半成品檢驗(yàn)合格后，置于壓片機(jī)中，使用淺凹￠9mm上沖、下沖，控制片重差異在±4.5％范圍內(nèi)，硬度在7.0～10.0kg/cm2范圍內(nèi)。壓片時(shí)每10分鐘檢查一次片重、硬度并記錄。6.包衣、挑片將30g歐巴代-93018359和167ml純化水配置成包衣粉混懸液。包衣液用80目篩過濾，包衣過程中應(yīng)對(duì)包衣液進(jìn)行攪拌。將檢驗(yàn)合格后的素片置于包衣鍋中，旋轉(zhuǎn)素片，將包衣液噴射到素片上，噴完后晾片30分鐘后取出包衣片。整個(gè)過程應(yīng)保證包衣均勻，避免粘片。當(dāng)前第1頁12