本發(fā)明涉及醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種植物提取物及其制備方法和用途。

背景技術(shù)：

葵花盤為脫去葵花籽的向日葵(helianthusannuusl.)，向日葵屬于菊科向日葵屬，為一年生草本植物，別名葵花，我國古籍上又叫西番蓮、丈菊、迎陽花等。我國栽培向日葵至少已有近四百年的歷史，過往人們會將脫去葵花籽的葵花盤當作廢棄物燃燒掉，近年來葵花盤由于含有多種營養(yǎng)成分多被制作為飼料或用來提取果膠?？ūP其實也是一味中藥材，葵花盤，味甘、性寒、無毒，歸肝經(jīng)。功能祛風(fēng)，平肝，清濕熱，散滯氣，益氣補腎。《中華本草》中記載其有治療高血壓、頭痛、頭暈、耳鳴等癥狀的作用。

向日葵作為我國重要的油料作物，種植面積廣泛，其種子用作榨油，而花盤尚未開發(fā)利用，只是在民間驗方中用作藥物。研究表明，葵花盤具有降低血壓的作用，然而目前對于其舒張血管的作用并無相關(guān)報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的旨在提供一種葵花盤提取物及其制備方法和舒張血管效果。

具體而言，本發(fā)明的第一方面是提供了一種葵花盤提取物，所述葵花盤提取物含總黃酮16.9～17.3wt％、綠原酸6.6～6.8wt％。

在一優(yōu)選例中，所述葵花盤提取物由如下方法制得：將葵花盤粉碎，通過回流裝置以75％乙醇提取；將提取物旋蒸、離心去沉淀；石油醚—乙酸乙酯—正丁醇依次萃取，所述石油醚與乙酸乙酯萃取步驟保留下層液體，最后加入正丁醇，靜置后分層，保留其上層提取液；將所得上層提取液旋蒸、離心去沉淀，得到正丁醇相提取物。

本發(fā)明的第二方面是提供了一種上述的葵花盤提取物的制備方法，所述方法包括：將葵花盤粉碎，通過回流裝置以75％乙醇提取；將提取物旋蒸、離心去沉淀；石油醚—乙酸乙酯—正丁醇依次萃取，所述石油醚與乙酸乙酯萃取步驟保留下層液體，最后加入正丁醇，靜置后分層，保留其上層提取液；將所得上層提取液旋蒸、離心去沉淀，得到正丁醇相提取物。

本發(fā)明還提供了上述葵花盤提取物在制備擴血管藥物中的用途。

本發(fā)明各個方面的細節(jié)將在隨后的章節(jié)中得以詳盡描述。通過下文以及權(quán)利要求的描述，本發(fā)明的特點、目的和優(yōu)勢將更為明顯。

附圖說明

圖1本發(fā)明的葵花盤正丁醇相提取物的蘆丁標準曲線，說明蘆丁濃度在0～640ug/ml范圍內(nèi)與吸光度線性良好；

圖2本發(fā)明的葵花盤正丁醇相提取物的綠原酸標準曲線，說明綠原酸濃度在0～128ug/ml范圍內(nèi)與吸光度線性良好；

圖3本發(fā)明的葵花盤正丁醇相提取物對大鼠胸主動脈具有舒張作用，并且其舒張血管作用呈現(xiàn)濃度依賴性，舒張作用效果較蘆丁和綠原酸強；

圖4本發(fā)明的葵花盤正丁醇相提取物的舒張血管主要通過no途徑。

具體實施方式

實施例一葵花盤正丁醇相的提取和定量分析

1.材料與方法

1.1材料

葵花盤，購買產(chǎn)地為河北國安的栽培品種，經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)教學(xué)實驗中心可燕教授鑒定為菊科向日葵屬向日葵(helianthusannuusl.)；蘆丁、綠原酸標準品(上海源葉生物科技有限公司)；75％乙醇、正丁醇(國藥集團化學(xué)試劑有限公司)；722可見光分光光度計(上海精密儀器有限公司)；鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)。

1.2方法

1.2.1葵花盤正丁醇相的提取

采集來的新鮮葵花盤至鼓風(fēng)干燥箱中60℃烘干，直接粉碎機粉碎；取1kg葵花盤粉末，將葵花盤粉碎，通過回流裝置以75％乙醇提取；將提取物旋蒸、離心去沉淀；石油醚—乙酸乙酯—正丁醇依次萃取，石油醚與乙酸乙酯萃取保留的是下層液體,最后加入正丁醇，靜置后分層，保留其上層提取液；將所得上層提取液旋蒸、離心去沉淀，得到其正丁醇相提取物1.024克，配制成1mg/ml，用于葵花盤正丁醇相提取物中總黃酮和綠原酸的定量分析。

1.2.2葵花盤正丁醇相提取物中的總黃酮定量分析

1.2.2.1蘆丁標準曲線的制作

準確稱取蘆丁標準品10mg，用90％乙醇溶解并定容至10ml，置于棕色瓶中4℃保存?zhèn)溆?1000μg/ml)。分別吸取標準品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、0.16、0.32、0.64ml于10ml容量瓶中，加入0.3ml5％nano2溶液，混合均勻，6min后加0.3ml10％al(no3)3，混合均勻后靜置6min，然后加入4ml4％naoh溶液，靜置15min后用90％乙醇溶液定容至10ml，混勻，15min后于510nm處測定吸光值。以蘆丁濃度(x)對吸光度(y)進行線性回歸分析，繪制蘆丁標準曲線。

1.2.2.2葵花盤正丁醇相提取物中的總黃酮定量分析

上述1.2.1中提取液稀釋后，參照標準曲線的制作方法，分別按比加入5％nano2溶液、10％al(no3)3和4％naoh溶液，定容制成樣品液，在510nm處測其吸光度。提取率計算公式為：

w＝c×v×n/m

其中：c－樣品的濃度，根據(jù)標準曲線算出；v－樣品稀釋后的體積；

n－稀釋的倍數(shù)；m－樣品的質(zhì)量。

1.2.3葵花盤正丁醇相提取物中的綠原酸定量分析

1.2.3.1綠原酸標準曲線的制作

精密稱取綠原酸對照品5.12mg置于10ml棕色容量瓶中，加入50％甲醇溶液定容至刻度，制成濃度為512μg/ml的綠原酸對照品溶液(10℃以下保存)。分別取綠原酸標準品溶液0.039ml、0.078ml、0.156ml、0.313ml、0.625ml、1.25ml、2.5m、l5ml于10ml棕色容量瓶中，加50％甲醇定容，配成濃度為2、4、8、16、32、64、128、256μg/ml的綠原酸標準品溶液，50％甲醇為空白對照。327nm波長下測不同濃度標準品溶液的吸光度值，以綠原酸濃度(x)對吸光度(y)進行線性回歸分析，繪制綠原酸標準曲線。

1.2.3.2葵花盤正丁醇相提取物中的綠原酸定量分析

上述1.2.1中提取液稀釋后，精密稱取葵花盤正丁醇相提取物樣品5mg置于10ml棕色容量瓶中，加入50％甲醇溶液定容至刻度，制成濃度為500μg/ml的樣品溶液。在327nm處測其吸光度。提取率計算公式為：

w＝c×v×n/m

其中：c－樣品的濃度，根據(jù)標準曲線算出；v－樣品稀釋后的體積；

n－稀釋的倍數(shù)；m－樣品的質(zhì)量。

2.結(jié)果

2.1蘆丁濃度在0～640ug/ml范圍內(nèi)與吸光度線性良好。標準曲線為y＝0.0013x+0.0429。見表1和圖1。

表1蘆丁標準曲線

2.2根據(jù)2.1中標準曲線，代入得葵花盤正丁醇相提取物中的總黃酮含量＝17.1±0.2wt％。

2.3綠原酸濃度在0～128ug/ml范圍內(nèi)與吸光度線性良好。標準曲線為y＝0.0177x+0.1827。見表2和圖2。

表2綠原酸標準曲線

2.4根據(jù)2.3中標準曲線，代入得葵花盤正丁醇相提取物中的綠原酸含量＝6.7±0.1wt％。

實施例二葵花盤正丁醇相提取物的舒張血管作用研究

1.材料與方法

1.1材料

乙酰膽堿(acetylcholine，ach)、苯腎上腺素(phenylephrine，pe)、硝普鈉(sodiumnitroprusside，snp)等均購于sigma公司，nacl等無機試劑為國產(chǎn)分析純。kreb-henseleit(k-h)液(mmol·l-1)：nacl118,kcl4.7,kh2po41.2,mgcl21.2,nahco325,cacl22.5,glucose11,ph＝7.4)。動物：200±20g，大鼠30只，購買于上海斯萊克實驗動物有限公司，飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心。分液漏斗、解剖板、大頭釘、解剖剪、鑷子、棉球(脫脂棉)、培養(yǎng)皿等。powerlab八通道多功能生理記錄儀(adinstruments公司，澳大利亞)。

1.2方法

1.2.1胸主動脈環(huán)的制備

大鼠麻醉處死，迅速取出胸主動脈置于4℃k-h液中，剝除周圍結(jié)締組織后制成2-3mm的血管環(huán)。將血管環(huán)懸掛于4mlk-h液的浴槽內(nèi)，37℃恒溫，并持續(xù)通入95％o2+5％co2的混合氣體。

每個血管環(huán)給予2.0g拉力，每15min更換k-h液一次，平衡60min。以60mmol·l^-1的kcl預(yù)收縮兩次，以誘發(fā)最大收縮度,用k-h液洗脫拉力穩(wěn)定后，加入10^-6mol·l^-1的pe收縮，待拉力達坪值后，加入10^-5mol/lach，若血管舒張達80％以上，可認為內(nèi)皮完整，可用于下一步實驗。

1.2.2葵花盤正丁醇相提取物對大鼠胸主動脈內(nèi)皮依賴舒張的作用

制成內(nèi)皮完整的大鼠胸主動脈血管環(huán)，等劑量的pe收縮，加入不同濃度葵花盤正丁醇相提取物(按實施例一制備)，觀察不同濃度梯度組對胸主動脈內(nèi)皮依賴舒張的作用。根據(jù)以上實驗步驟進行重復(fù)實驗3次以上。

1.2.3葵花盤正丁醇相提取物對大鼠胸主動脈內(nèi)皮依賴舒張的機制

制成內(nèi)皮完整的大鼠胸主動脈血管環(huán)，分別用l-name(0.1mmol·l^-1)、吲哚美辛(0.1mmol·l^-1)、tea(5mmol·l^-1)預(yù)處理20min，以pe預(yù)收縮，加入葵花盤正丁醇相提取物(按實施例一制備)觀察其作用，對照組加入相同劑量k-h液。

2結(jié)果

2.1本發(fā)明的葵花盤正丁醇相提取物對大鼠胸主動脈具有舒張作用，并且其舒張血管作用呈現(xiàn)濃度依賴性，作用效果優(yōu)于其含有的蘆丁和綠原酸(見表3和圖3)。

表3不同濃度葵花盤正丁醇相提取物對血管舒張的作用

與0.1mg/μl葵花盤正丁醇相比較，^**p<0.01

2.2葵花盤正丁醇提取相對大鼠胸主動脈的舒張作用主要通過no途徑(見表4和圖4)。

表4不同濃度葵花盤正丁醇相提取物對血管舒張的作用

與0.1mg/μl葵花盤正丁醇相比較，^**p<0.01

本發(fā)明所涉及的多個方面已做如上闡述。然而，應(yīng)理解的是，在不偏離本發(fā)明精神之前提下，本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員可對其進行等同改變和修飾，所述改變和修飾同樣落入本申請所附權(quán)利要求的覆蓋范圍。