本發(fā)明涉及中醫(yī)藥領(lǐng)域，具體是涉及一種利用動物腎臟的補腎藥及其制備方法。
背景技術(shù)：
面對我國老年人口急劇增加的現(xiàn)狀，如何提高老年人生活質(zhì)量、防治老年病是目前我國要解決的一大問題。中醫(yī)基礎(chǔ)理論指出：腎位于腰部，脊柱兩側(cè)，左右各一，其主要功能是藏精，主人體生長、發(fā)育與生殖。人的一生隨腎精氣的盛衰而出現(xiàn)生、長、壯、老的變化過程。腎虛癥的老年患者，重點表現(xiàn)為對原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥、卵巢早衰、圍絕經(jīng)期綜合征等這些情況。
雖然現(xiàn)有很多補腎藥，但不是療效不明顯，就是調(diào)理效果不全面。即使生活中也有以臟補臟的飲食措施，可其大多效果甚微。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
為了解決上述問題，本發(fā)明的目的是：一種利用動物腎臟的補腎藥及其制備方法，主要針對中醫(yī)腎虛癥，該補腎藥能對老年性骨質(zhì)疏松癥、生殖功能低下、卵巢早衰及延緩衰老起到不可替代的作用。特別動物腎臟采用胎腎，其制備出的補腎藥療效顯著。
本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種利用動物腎臟的補腎藥，其特征是：該補腎藥以動物腎臟為原料藥材或主藥材。
所述的動物腎臟為胎腎。
所述的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：動物腎臟30-50份、五味子10-20份、西洋參5-20份、生地10-20份、肉蓯蓉10-20份、鹿茸5-15份、海馬5-15份、當(dāng)歸10-20份、紅景天10-15份、山芋肉10-25份、山藥6-12份、玉竹6-10份、覆盆子6-10份、枸杞子5-6份、胡桃5-9份、金櫻子2-3份。
所述的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：胎腎45份、五味子15份、西洋參10份、生地15份、肉蓯蓉15份、鹿茸10份、海馬10份、當(dāng)歸15份、紅景天12份、山芋肉20份、山藥10份、玉竹8份、覆盆子8份、枸杞子5.5份、胡桃7份、金櫻子1.5份。
所述的一種利用動物腎臟的補腎藥的制備方法，其特征是：包括如下步驟：
1)將動物腎臟去除結(jié)締組織后，搗碎；
2)從搗碎后的動物腎臟中進(jìn)行細(xì)胞分離；
3)將分離出的腎源細(xì)胞采用細(xì)胞破壁技術(shù)進(jìn)行破壁；
4)將步驟3)破壁后腎源細(xì)胞制作成口服制劑。
所述的一種利用動物腎臟的補腎藥的制備方法，其特征是：包括如下步驟：
步驟1)將動物腎臟30-50份去除結(jié)締組織后，搗碎；
步驟2)從搗碎后的動物腎臟中進(jìn)行細(xì)胞分離；
步驟3)將分離出的腎源細(xì)胞采用細(xì)胞破壁技術(shù)進(jìn)行破壁；備用；
步驟4)將五味子10-20份、西洋參5-20份、生地10-20份、肉蓯蓉10-20份、鹿茸5-15份、海馬5-15份、當(dāng)歸10-20份、紅景天10-15份、山芋肉10-25份、山藥6-12份、玉竹6-10份、覆盆子6-10份、枸杞子5-6份、胡桃5-9份、金櫻子2-3份按上述的重量份之總重量加4-5倍量的水煎煮2小時，取渣再加3倍量的水煎煮1.5小時，分次過濾，合并濾液，加熱至50-70℃濃縮至相對密度1.10-1.30稠膏；
步驟5)當(dāng)步驟4)的稠膏的溫度在40℃時，加入步驟3)破壁后的腎源細(xì)胞攪拌均勻；
步驟6)將步驟5)混合物制作成口服制劑。
所述的口服制劑為混懸液或膠囊；其中，混懸液中含腎源細(xì)胞的含量為20-150毫克/毫升。
所述的細(xì)胞分離是采用納米技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分離。
所述的納米技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分離的過程是：第一步制備納米sio2包覆粒子，納米sio2粒子尺寸控制在15～20nm，包覆后的納米sio2包覆粒子的尺寸為30nm；第二步是制備含有腎源細(xì)胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液：將搗碎后動物腎臟與聚乙烯吡咯烷酮按質(zhì)量比1：2混合形成膠體溶液；第三步是將納米sio2包覆粒子均勻分散到含有腎源細(xì)胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液中，再通過離心技術(shù)，利用密度梯度原理，使腎源細(xì)胞分離出來。
本發(fā)明的優(yōu)點是：本發(fā)明的補腎藥能夠用于防治因增齡腎虛而引起的原發(fā)性骨質(zhì)疏松、卵巢早衰、更年期綜合征等病，其容易吸收，效果顯著。同時配以輔助的中藥藥材使其效果更為全面。本發(fā)明采用的胎腎，其腎源細(xì)胞中含有生物活性的蛋白成分能夠提高血鈣、降鈣素水平、降低了尿hop和甲狀旁腺素含量；對骨質(zhì)疏松有一定的改善作用。本發(fā)明細(xì)胞分離是采用納米技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分離易形成密度梯度；特別是納米包覆體尺寸在30nm，因而膠體溶液在離心作用下很容易產(chǎn)生密度梯度，并易實現(xiàn)納米sio2粒子與細(xì)胞的分離。這是因為納米sio2微粒是屬于無機玻璃的范疇性能穩(wěn)定，一般不與膠體溶液和生物溶液反應(yīng)，既不會沾污生物細(xì)胞，也容易把它們分開。本發(fā)明同時還采用了細(xì)胞破壁技術(shù)，使的本發(fā)明的藥物更容易人體吸收。
下面通過具體實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不作為對本發(fā)明的限定。
具體實施方式
實施例1
一種利用動物腎臟的補腎藥是以動物腎臟為原料藥材；
該利用動物腎臟的補腎藥的制備方法，包括如下步驟：
1)將動物腎臟去除結(jié)締組織后，搗碎；
2)從搗碎后的動物腎臟中進(jìn)行細(xì)胞分離；
3)將分離出的腎源細(xì)胞采用細(xì)胞破壁技術(shù)進(jìn)行破壁；
4)將步驟3)破壁后腎源細(xì)胞制作成口服制劑。
實施例2
一種利用動物腎臟的補腎藥是以動物腎臟為原料藥材；
該利用動物腎臟的補腎藥的制備方法，包括如下步驟：
1)將動物腎臟去除結(jié)締組織后，搗碎；
2)從搗碎后的動物腎臟中進(jìn)行細(xì)胞分離；所述的細(xì)胞分離是采用納米技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分離；
3)將分離出的腎源細(xì)胞采用細(xì)胞破壁技術(shù)進(jìn)行破壁；
4)將步驟3)破壁后腎源細(xì)胞制作成口服制劑。
上述納米技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分離和采用細(xì)胞破壁技術(shù)進(jìn)行破壁均采用現(xiàn)有技術(shù)這里不做一一表述。
所述的口服制劑為混懸液或膠囊；其中，混懸液中含腎源細(xì)胞的含量為20-150毫克/毫升。
實施例3
同實施例2基本相同，不同之處是，所述的納米技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分離的過程是：第一步制備納米sio2包覆粒子，納米sio2粒子尺寸控制在15～20nm，包覆后的納米sio2包覆粒子的尺寸為30nm；第二步是制備含有腎源細(xì)胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液：將搗碎后動物腎臟與聚乙烯吡咯烷酮按質(zhì)量比1：2混合形成膠體溶液；第三步是將納米sio2包覆粒子均勻分散到含有腎源細(xì)胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液中，再通過離心技術(shù)，利用密度梯度原理，使腎源細(xì)胞分離出來。
所述動物腎臟為幼齡狗腎或幼齡羊腎。
實施例4
一種利用動物腎臟的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：動物腎臟30份、五味子10份、西洋參5份、生地10份、肉蓯蓉10份、鹿茸5份、海馬5份、當(dāng)歸10份、紅景天10份、山芋肉10份、山藥6份、玉竹6份、覆盆子6份、枸杞子5份、胡桃5份、金櫻子2份；
所述的一種利用動物腎臟的補腎藥的制備方法，包括如下步驟：
步驟1)將動物腎臟30份去除結(jié)締組織后，搗碎；
步驟2)從搗碎后的動物腎臟中進(jìn)行細(xì)胞分離；
步驟3)將分離出的腎源細(xì)胞采用細(xì)胞破壁技術(shù)進(jìn)行破壁；備用；
步驟4)將五味子10份、西洋參5份、生地10份、肉蓯蓉10份、鹿茸5份、海馬5份、當(dāng)歸10份、紅景天10份、山芋肉10份、山藥6份、玉竹6份、覆盆子6份、枸杞子5份、胡桃5份、金櫻子2份按上述的重量份之總重量加4-5倍量的水煎煮2小時，取渣再加3倍量的水煎煮1.5小時，分次過濾，合并濾液，加熱至50-70℃濃縮至相對密度1.10-1.30稠膏；
步驟5)當(dāng)步驟4)的稠膏的溫度在40℃時，加入步驟3)破壁后的腎源細(xì)胞攪拌均勻；
步驟6)將步驟5)混合物制作成口服制劑。
實施例5
所述的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：動物腎臟50份、五味子20份、西洋參20份、生地20份、肉蓯蓉20份、鹿茸15份、海馬15份、當(dāng)歸20份、紅景天15份、山芋肉25份、山藥12份、玉竹10份、覆盆子10份、枸杞子6份、胡桃9份、金櫻子3份。
制備方法同實施例4。細(xì)胞分離是采用納米技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分離，該納米技術(shù)和采用細(xì)胞破壁技術(shù)進(jìn)行破壁均采用現(xiàn)有技術(shù)這里不做一一表述。所述的口服制劑為混懸液或膠囊。
實施例6
所述的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：動物腎臟45份、五味子15份、西洋參10份、生地15份、肉蓯蓉15份、鹿茸10份、海馬10份、當(dāng)歸15份、紅景天12份、山芋肉20份、山藥10份、玉竹8份、覆盆子8份、枸杞子5.5份、胡桃7份、金櫻子1.5份。
制備方法同實施例5。所述的納米技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分離的過程是：第一步制備納米sio2包覆粒子，納米sio2粒子尺寸控制在15～20nm，包覆后的納米sio2包覆粒子的尺寸為30nm；第二步是制備含有腎源細(xì)胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液：將搗碎后動物腎臟與聚乙烯吡咯烷酮按質(zhì)量比1：2混合形成膠體溶液；第三步是將納米sio2包覆粒子均勻分散到含有腎源細(xì)胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液中，再通過離心技術(shù)，利用密度梯度原理，使腎源細(xì)胞分離出來。
采用細(xì)胞破壁技術(shù)進(jìn)行破壁為現(xiàn)有技術(shù)這里不做一一表述。所述動物腎臟為幼齡狗胎腎或幼齡羊胎腎。
所述的口服制劑為混懸液或膠囊。
實施例7
一種利用動物腎臟的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：胎腎30份、五味子10份、西洋參5份、生地10份、肉蓯蓉10份、鹿茸5份、海馬5份、當(dāng)歸10份、紅景天10份、山芋肉10份、山藥6份、玉竹6份、覆盆子6份、枸杞子5份、胡桃5份、金櫻子2份；
所述的一種利用動物腎臟的補腎藥的制備方法，包括如下步驟：
步驟1)將胎腎30份去除結(jié)締組織后，搗碎；
步驟2)從搗碎后的胎腎中進(jìn)行細(xì)胞分離；
步驟3)將分離出的腎源細(xì)胞采用細(xì)胞破壁技術(shù)進(jìn)行破壁；備用；
步驟4)將五味子10份、西洋參5份、生地10份、肉蓯蓉10份、鹿茸5份、海馬5份、當(dāng)歸10份、紅景天10份、山芋肉10份、山藥6份、玉竹6份、覆盆子6份、枸杞子5份、胡桃5份、金櫻子2份按上述的重量份之總重量加4-5倍量的水煎煮2小時，取渣再加3倍量的水煎煮1.5小時，分次過濾，合并濾液，加熱至50-70℃濃縮至相對密度1.10-1.30稠膏；
步驟5)當(dāng)步驟4)的稠膏的溫度在40℃時，加入步驟3)破壁后的腎源細(xì)胞攪拌均勻；
步驟6)將步驟5)混合物制作成口服制劑。
實施例8
所述的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：胎腎50份、五味子20份、西洋參20份、生地20份、肉蓯蓉20份、鹿茸15份、海馬15份、當(dāng)歸20份、紅景天15份、山芋肉25份、山藥12份、玉竹10份、覆盆子10份、枸杞子6份、胡桃9份、金櫻子3份。
制備方法同實施例7。細(xì)胞分離是采用納米技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分離，該納米技術(shù)和采用細(xì)胞破壁技術(shù)進(jìn)行破壁均采用現(xiàn)有技術(shù)這里不做一一表述。所述的口服制劑為混懸液或膠囊。
實施例9
所述的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：胎腎45份、五味子15份、西洋參10份、生地15份、肉蓯蓉15份、鹿茸10份、海馬10份、當(dāng)歸15份、紅景天12份、山芋肉20份、山藥10份、玉竹8份、覆盆子8份、枸杞子5.5份、胡桃7份、金櫻子1.5份。
制備方法同實施例7。所述的納米技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分離的過程是：第一步制備納米sio2包覆粒子，納米sio2粒子尺寸控制在15～20nm，包覆后的納米sio2包覆粒子的尺寸為30nm；第二步是制備含有腎源細(xì)胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液：將搗碎后胎腎與聚乙烯吡咯烷酮按質(zhì)量比1：2混合形成膠體溶液；第三步是將納米sio2包覆粒子均勻分散到含有腎源細(xì)胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液中，再通過離心技術(shù)，利用密度梯度原理，使腎源細(xì)胞分離出來。
采用細(xì)胞破壁技術(shù)進(jìn)行破壁為現(xiàn)有技術(shù)這里不做一一表述。所述動物腎臟為狗胎腎或羊胎腎。
所述的口服制劑為混懸液或膠囊。
藥理研究
1.胎腎對老齡大鼠性激素及骨密度的影響
以20月齡sd雌性老齡大鼠為實驗動物，將40只大鼠隨機分為實驗組和對照組，給實驗組從尾靜脈注入孕19-21天的胎鼠腎臟細(xì)胞懸液，每周2次，共2周，對照組注入等量生理鹽水，分別在注射后1個月、2個月分批處死大鼠，留取標(biāo)本，用放免法檢測血清雌二醇(e2)含量，卵巢稱重，用多功能真彩色病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行骨病理形態(tài)學(xué)測量及形態(tài)觀察。其結(jié)果顯示：與對照組比較胎腎細(xì)胞組雌激素水平(表1.1)和卵巢指數(shù)(表1.2)顯著提高，卵巢萎縮程度明顯減輕；骨小梁寬度明顯增寬、骨小梁間距明顯變小、骨小梁面密度顯著升高、骨皮質(zhì)厚度明顯增寬(表1.3)。提示：胎腎細(xì)胞對于延緩卵巢衰老、改善老齡骨質(zhì)疏松有明顯的作用。
腎主藏精，主人體生長、發(fā)育與生殖，雌激素水平、卵巢指數(shù)能夠反映生殖功能，骨密度是骨強度的標(biāo)志，其改變是腎精氣盛衰的表現(xiàn)，胎腎細(xì)胞對其的改善提示以腎能夠補腎。
表1.1細(xì)胞移植后血清雌二醇水平對照
*p＜0.01
表1.2細(xì)胞移植后卵巢指數(shù)對照
*p＜0.01
表1.3細(xì)胞移植后骨形態(tài)測量對照
*p＜0.001**p＜0.01***p＞0.05****p＜0.05
2.胎腎對骨質(zhì)疏松模型大鼠鈣調(diào)節(jié)激素的影響
為了探討胎腎防治骨質(zhì)疏松的作用機理，選用3-4月齡sd雌性大鼠為實驗動物，將24只大鼠隨機分為3組，即正常對照組、模型組、胎腎細(xì)胞組，除正常對照組外，其余2組采用維甲酸進(jìn)行造模。造模后，給胎腎細(xì)胞組從尾靜脈注入孕19-21天的胎鼠腎臟細(xì)胞懸液，每周2次，正常對照組、模型組輸入等量生理鹽水，第30天，將所有動物放置代謝籠中，收集24小時尿液，眼眶采血，斷頭處死，取左側(cè)脛骨。采用放免法測定雌二醇(e2)、降鈣素(ct)、甲狀旁腺素(pth)、骨鈣素(bgp)含量，用多功能真彩色病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行骨病理形態(tài)學(xué)測量及形態(tài)觀察。其結(jié)果顯示：與正常對照組比較，模型組e2、ct、bgp水平明顯降低，pth明顯升高(p<0.05)；與模型組比較，胎腎細(xì)胞組ct、e2、bgp顯著增高，血清pth明顯下降(p<0.05)(表2.1)。與正常對照組比較，模型組骨小梁面積、厚度明顯降低，骨小梁間距增大(p<0.05)；與模型組比較，胎腎細(xì)胞組骨小梁面積、厚度、均顯著增加，骨小梁間距縮小(p<0.05)(表2.2)。其結(jié)果提示：胎腎能有效改善骨質(zhì)疏松，其治療機理與升高血鈣、降鈣素含量，提高e2水平；降低甲狀旁腺素有關(guān)。說明胎腎能有效抑制破骨細(xì)胞的骨吸收；促進(jìn)鈣在骨的沉積，有利于骨的礦化；降低膠原蛋白的分解。
表2.1各組大鼠部分鈣調(diào)節(jié)激素的測定結(jié)果
注：與正常對照組比較*p＜0.05，″p＜0.01；與模型組比較δp＜0.05，
表2.2各組大鼠松質(zhì)骨形態(tài)計量結(jié)果
注：與正常對照組比較*p＜0.05，″p＜0.01；與模型組比較δp＜0.05，
3.胎腎防治骨質(zhì)疏松的有效物質(zhì)研究
為了探討胎腎防治骨質(zhì)疏松的有效物質(zhì)，課題組通過給雌性sd大鼠去卵巢造成骨質(zhì)疏松模型，將造模大鼠隨機分為模型對照組(b組)，雌激素陽性對照組(c組)，胎腎活細(xì)胞組(d組)和胎腎死細(xì)胞組(e組)，并設(shè)假手術(shù)對照組(a組)。實驗組分別給從尾靜脈注射胎腎活細(xì)胞和死細(xì)胞懸液，雌激素陽性對照組給尼爾雌醇灌胃，假手術(shù)組和模型對照組尾靜脈注射等量生理鹽水，每周2次，共4周。用藥結(jié)束后，禁食24小時，采血，留取骨標(biāo)本，觀察其對造模大鼠骨病理形態(tài)、干重、灰重、骨代謝指標(biāo)及雌激素水平的影響，探討胎腎防治骨質(zhì)疏松的有效物質(zhì)，其結(jié)果顯示：胎腎細(xì)胞各組均明顯改變了去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松病理形態(tài)，使其骨小梁的密度、厚度增加，骨小梁的間隙縮小，對骨小梁形態(tài)計量學(xué)靜態(tài)參數(shù)指標(biāo)有顯著的改善作用；使去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨干重、骨灰重、和骨長度均有所升高，對脛骨物理量指標(biāo)有一定的改善作用。胎腎細(xì)胞各組顯著提高了去卵巢大鼠血清e2、bgp水平升高，使血清ntx含量降低；顯著升高血清鈣、磷水平；使骨鈣、骨磷含量增高。其作用與雌激素陽性對照組無顯著性差異。
胎腎細(xì)胞各組間比較，胎腎死細(xì)胞組在提高去卵巢大鼠血清磷、鈣、e2、bgp水平、增加其骨小梁密度、縮小骨小梁間隙、增加骨干重、骨灰重、骨長度及骨基質(zhì)含量及降低血清ntx水平的作用均優(yōu)于胎腎活細(xì)胞組，但兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)；胎腎活細(xì)胞組對去卵巢大鼠骨小梁面積百分比、骨鈣及骨磷含量的增加，優(yōu)于胎腎死細(xì)胞組，且兩者差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。說明胎腎防治骨質(zhì)疏松的有效物質(zhì)與胎腎細(xì)胞活、死性關(guān)系不大，可能與其中的某種蛋白成分有關(guān)。
臨床試驗
本發(fā)明所述的利用動物腎臟的補腎藥的臨床試驗如下：
表3：分別采用本發(fā)明實施例4-實施例9的補腎藥，年齡40-50歲患者均為50例，年齡60-70歲患者均50例，每組男女各25名(依次稱為治療組1-6)。病程3月-8月，平均病程5.5個月。患者在服用本發(fā)明補腎藥前都沒有接受過其他治療。十日為一療程，20天后進(jìn)行癥狀評分。
采用龜鹿補腎片：國藥準(zhǔn)字z20080217，年齡40-50歲患者50例，年齡60-70歲患者50例，每組男女各25名(稱為對照a組)。病程3月-8月，平均病程5.5個月。患者在服用該藥前都沒有接受過其他治療。十日為一療程，20天后進(jìn)行癥狀評分。
采用六味地黃丸，年齡40-50歲患者50例，年齡60-70歲患者50例，每組男女各25名(稱為對照b組)。病程3月-8月，平均病程5.5個月。患者在服用該藥前都沒有接受過其他治療。十日為一療程，20天后進(jìn)行癥狀評分。
上述患者的癥狀為：老年性骨質(zhì)疏松癥或卵巢早衰。
老年性骨質(zhì)疏松癥以骨密度作為骨強度的標(biāo)志來判定，卵巢早衰以雌激素水平或卵巢指數(shù)來判定。
觀察結(jié)果：
服用20天后，效果比較見表3。
表3本發(fā)明補腎藥服用20天后效果比較
由表3可見，采用本發(fā)明所制的補腎藥的有效率明顯高于對照a組和對照b組的有效率，本發(fā)明所制補腎藥的副作用例數(shù)則為1例，明顯低于對照a組和對照b組，結(jié)果表明本發(fā)明所制補腎藥療效顯著。特別是本發(fā)明采用胎腎為主藥的補腎藥效果更為顯著。
本發(fā)明在不添加輔助中藥藥材時，給藥途徑簡便，具有藥源充足，安全無副作用的特點，同時再添加一些輔助中藥藥材，其療效更為顯著，有廣闊的應(yīng)用前景。
實施例沒有詳細(xì)敘述工藝步驟屬本行業(yè)的公知部件和常用手段，這里不一一敘述。