本發(fā)明涉及藥學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種海通葉揮發(fā)油在制備抗炎抗氧化藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

炎癥(inflammation)：具有血管系統(tǒng)的活體組織對損傷因子所發(fā)生的防御反應(yīng)為炎癥。血管反應(yīng)是炎癥過程的中心環(huán)節(jié)。非甾體類抗炎藥(nsaids)在臨床上仍為首選用于炎癥，在我國其消耗量僅次于抗感染藥。但是，nsaids有諸多的不良反應(yīng)，尤其對消化系統(tǒng)的影響最大。

臨床及實驗證實很多中藥具有很好的抗炎作用，毒副作用少。近年來，植物揮發(fā)油抗炎及抗氧化作用逐漸成研究熱點，目前對植物揮發(fā)油的抗炎及抗氧化的作用機制不太明確，需要進一步的研究。本論文初步研究海通葉揮發(fā)油的抗炎及抗氧化作用，以為后期開發(fā)海通藥用資源提供理論基礎(chǔ)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供海通葉揮發(fā)油在制備抗炎抗氧化藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：海通葉揮發(fā)油在制備抗炎抗氧化藥物中的應(yīng)用。

為了驗證本發(fā)明的技術(shù)效果，進行了如下實驗。

1.1實驗材料

1.1.1藥材來源

海通葉采自貴州大學(xué)南區(qū)，經(jīng)貴州大學(xué)林學(xué)院鑒定為馬鞭草科大青屬植物clerodendrummandarinorumdiels的葉。

1.1.2實驗試劑及儀器

耳原打孔器，醋酸地塞米松乳膏(舒爾邁康藥業(yè))，丙酮、正己烷、水楊酸、硫酸亞鐵銨、三氯乙酸、鐵氰化鉀均為分析純；自制雙蒸水，揮發(fā)油測定儀等。

1.1.4實驗動物

sp級昆明小鼠

1.2實驗方法

1.2.1海通葉揮發(fā)油的制備

稱取海通葉干燥粗粉100g，按《中華人民共和國藥典》2010版i部附錄xd揮發(fā)油測定甲法操作。采用水蒸氣蒸餾法最佳提取工藝加12倍量水浸泡12h，蒸餾提取10h，超聲80min提取海通葉揮發(fā)油，油水先在提取器中粗分離，將蒸出的油水混合物迅速冷卻加入過量氯化鈉至溶液達到飽和，靜置2h，然后用正己烷萃取，無水硫酸鈉脫水過夜，低于35℃自然風(fēng)干，得到淡黃色油狀物，精密稱重，計算得油率，陰涼避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2抗炎實驗

取昆明種雄性小鼠50只隨機分為空白對照組(生理鹽水組)、醋酸地塞米松組、給藥高、中、低劑量組，每組10只。各組小鼠連續(xù)涂擦給藥7d，每天一次，末次給藥前禁食不禁水12h，末次給藥0.5h后，每只小鼠右耳廓前后兩面均勻涂二甲苯0.3ml致炎，左耳作對照，1h后脫頸椎處死小鼠，沿耳廓基線剪下雙側(cè)耳廓，用直徑6mm打孔器于耳同一部位沖下兩耳耳片，隨即用電子天平分別稱重，以左右兩耳片重量之差表示耳部炎癥的腫脹度，并計算腫脹抑制率(％)。

腫脹抑制率(％)＝(空白對照組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度)/空白組平均腫脹度×100％。

1.2.4不同濃度揮發(fā)油溶液的配制

取5支10ml的容量瓶分別加入2.2、4.1、6.4、8.2、10.5mg海通葉揮發(fā)油，用無水乙醇溶解，配制成濃度依次為0.22、0.41、0.64、0.82、1.05mg·ml^-1，避光，低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.5鐵氰化鉀還原法測定抗氧化性

取配置好不同質(zhì)量濃度的揮發(fā)油1.2ml，加入2.5mlpbs溶液(ph7.5)，2.5mlk3fe(cn)6。混合物于50℃的恒溫反應(yīng)30min后，加入2.5ml10％三氯乙酸溶液，離心15min(3000raw·min^-1)，靜置20min取上清液2.5ml，加入2.5ml的水，再加入0.5mlfecl3(1％)混勻。以蒸餾水為參比，在波長700nm條件下測定a，a越大，測樣品的還原能力就越強。

1.2.6水楊酸法測定抗氧化性

采用fenton反應(yīng)法取配置好不同質(zhì)量濃度的揮發(fā)油各1ml于試管中，加入0.0075mol·ml^-1硫酸亞鐵銨溶液1ml，0.0075mol·ml^-1水楊酸-乙醇溶液1.0ml和0.3％和h2o21ml，于水浴30℃反應(yīng)30min。靜置10分鐘后于510nm處測定吸光度a1，同時測量空白對照吸光度a0，則自由基清除率為：sc＝[(a0－a1)/a0]×100％式中a0為未加提取液時溶液的吸光度；a1為加提取液后的吸光度。

1.3實驗結(jié)果

1.3.1抗炎實驗

給藥組3個劑量組對二甲苯所致小鼠耳腫脹度的抑制率計算結(jié)果見表5-1。

表5-1海通葉揮發(fā)油對二甲苯所致小鼠耳腫脹度的影響(x±s.n＝10)

注：經(jīng)t檢驗，與對照組比較p

醋酸地塞米松組、受試高、中、低劑組與生理鹽水對照組比較，均能顯著抑制小鼠耳腫脹，但受試品高、中、低劑組的抑制強度均不如醋酸地塞米松組。該實驗表明海通葉揮發(fā)油有一定的抑制模型動物滲出性急性炎癥的作用。

1.3.2鐵氰化鉀還原法海通葉揮發(fā)油抗氧化性測定結(jié)果

濃度依次為0.22、0.41、0.64、0.82、1.05mg.ml^-1的海通葉揮發(fā)油溶液的吸光度值分別為：0.214、0.381、0.462、0.482、0.568，且表明海通葉揮發(fā)油抗氧化作用與海通葉揮發(fā)油的濃度存在明顯的量-效相關(guān)性。

1.3.3對oh·自由基的清除能力

加入不質(zhì)量濃度的海通葉揮發(fā)油溶液，濃度依次為0.22、0.41、0.64、0.82、1.05mg.ml^-1時的oh·自由基清除率分別為11.2％、15.8％、22.2％、25.6％、30.5％，表明海通葉揮發(fā)油對oh·自由基清除能力與海通葉揮發(fā)油的用量呈明顯量-效相關(guān)性。

1.4結(jié)論

(1)海通葉揮發(fā)油的濃度增加抗炎活性葉隨之增強，其濃度與抗炎活性呈一定的量效關(guān)系。目前對揮發(fā)油抗炎機制尚不明確，中藥的抗炎作用機制表現(xiàn)為多種途徑，主要有丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸的調(diào)節(jié)功能、干擾花生四烯酸代謝、抑制炎性介質(zhì)、抗血栓生成等^[15]。深入研究揮發(fā)油的抗炎作用機制，有助于進一步解釋明確中藥及其有效成分的藥理作用，為揮發(fā)油更廣泛、更準(zhǔn)確地應(yīng)用于臨床提供了一條新思路。

(2)海通葉揮發(fā)油的濃度增加抗氧化能力及對oh·自由基的清除能力隨之增強，與其濃度也呈一定的量效關(guān)系?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究已經(jīng)證實，活性氧自由基與衰老、惡性腫瘤、動脈粥樣硬化、糖尿病、老年癡呆癥以及帕金森綜合征等疾病都有關(guān)?；瘜W(xué)合成的抗氧化劑如bht和bha等雖然能夠抑制人體的呼吸酶活性，但是使用過量可致畸、致癌等嚴(yán)重副作用。與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了海通葉揮發(fā)油具有抗炎及抗氧化作用，能作為新的抗炎抗氧化藥物，為海通資源的綜合開發(fā)利用提供一些有益的參考依據(jù)。本發(fā)明材料來源廣泛，成本低廉，使用效果好。

具體實施方式

本發(fā)明的實施例1：將海通葉揮發(fā)油作為唯一活性成分加入藥學(xué)上可接受的輔劑，制成各種劑型的抑炎抗氧化藥物。

本發(fā)明的實施例2：將海通葉揮發(fā)油作為按照化妝品總質(zhì)量的5％作為原料加入化妝品的生產(chǎn)中，制備獲得具有抑炎抗氧化的化妝品。