本發(fā)明屬于多酚的純化和應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及橄欖果實(shí)多酚的富集純化及其貼布式面膜制備方法。

背景技術(shù)：

植物多酚因其具有天然無毒的特點(diǎn)常被用作天然的食品添加劑。在藥品保健品領(lǐng)域，經(jīng)過多年的藥理學(xué)研究和臨床應(yīng)用，證明多酚在抑菌、抗病毒、抗腫瘤、治療心腦血管疾病、抗老化、免疫調(diào)節(jié)等方面具有療效。因此，酚類物質(zhì)已開始應(yīng)用于保健品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。以葡萄籽、銀杏等富含酚類物質(zhì)的植物資源為原料，己研發(fā)出多種相關(guān)藥品、保健品。在日用化妝品領(lǐng)域，植物多酚因其分子中所含的苯環(huán)結(jié)構(gòu)和活性酚羥基，對(duì)紫外光有強(qiáng)吸收作用以及抗氧化能力強(qiáng)，能促進(jìn)細(xì)胞質(zhì)膜的新陳代謝，與基礎(chǔ)脂肪酸結(jié)合使皮膚變得具有彈性，改進(jìn)體內(nèi)組織細(xì)胞微循環(huán)等作用，是很好的美白護(hù)膚生理活性物質(zhì)，故一直成為日化護(hù)膚行業(yè)新產(chǎn)品的研發(fā)熱點(diǎn)。目前，已從葡萄籽、茶葉等植物中提取植物多酚，作為化妝品的活性成分。

植物多酚的分離純化主要有粗有機(jī)溶劑萃取、柱層析分離、膜分離、沉淀法等方法。然而傳統(tǒng)方法具有低效、耗能、溶劑殘留等缺點(diǎn)。大孔吸附樹脂具有操作成本低、溶劑消耗少、處理量大、預(yù)處理和再生簡(jiǎn)單，效率高，適合于規(guī)?；a(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，近年來已廣泛應(yīng)用于不同材料的生物活性物質(zhì)分離和純化。

橄欖[cauariumalbum(lour.)raeusch]是我國(guó)特色的亞熱帶水果，在我國(guó)有著2000多年的悠久栽培歷史。橄欖自古為我國(guó)傳統(tǒng)中藥材，《三輔黃圖》、《南州異物志》和《圖經(jīng)本草》等多部史書皆有記載，屬藥食同源植物，其皮、根、莖、葉、果、花、核均可入藥，適用于治咽喉腫痛、咳嗽吐血、菌痢、癲癇、暑熱煩渴、腸炎腹瀉、手腳酸麻、魚蟹中毒、醉酒等病癥；現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其具有抑菌、抗氧化、消炎和抗病毒等功能。橄欖果實(shí)中的總酚含量為1291mggae/100gfw(鮮重)，遠(yuǎn)高于蘋果、梨、桃、香蕉等同類普通水果(he等)；liu等(liuhaiying等)對(duì)紅景天、地榆等68種中藥材中多酚含量以及抗氧化活性研究表明橄欖多酚含量28％(干重)，在68種中藥材中含量最高。

橄欖果實(shí)主要多酚化合物有酚酸類化合物(沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、芥子酸)、黃酮類(山萘酚-3-o-β-d-葡萄糖苷、金絲桃苷、穗花衫雙黃酮、木犀草素、槲皮素)、鞣花單寧類化合物(異柯里拉京、hhdp的衍生物)。我們研究發(fā)現(xiàn)橄欖果實(shí)中具有高含量的鞣花單寧組分，其含量可達(dá)823.8mg/100gfw。與被公認(rèn)為具有高含量鞣花單寧的草莓、云莓、黑莓等漿果類相比，橄欖果實(shí)含量遠(yuǎn)高于這些漿果(2.3-13倍)。據(jù)報(bào)道，鞣花單寧因其結(jié)構(gòu)多樣性而具有廣泛的生理活性，如抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗血栓、抗炎、抗血管新生、抗癌、抗糖尿病、抗輻射誘變劑、抑菌等。

面膜主要分為剝離式面膜、粉末面膜、膏狀面膜和面貼式(貼布式)面膜。面貼式面膜是近年來出現(xiàn)的新型面膜，由于使用方便而備受消費(fèi)者的喜愛。它是將調(diào)配好的高濃度保養(yǎng)精華液吸附在棉布(紙)上，使用時(shí)撕開包裝敷到臉上，經(jīng)15-20min后，面膜液逐漸被吸收干燥，將布撕下即可。一般均采用單片式獨(dú)立包裝，方便衛(wèi)生。近年來研究者利用植物天然活性成分，開發(fā)了多種類型的面膜。橄欖因含有大量植物多酚，尤其是含有多羥基的鞣花單寧組分，具有很強(qiáng)的抗氧化活性，同時(shí)具有美白防曬、收斂抗皺、抗衰老等作用。但是，目前，與橄欖果實(shí)相關(guān)的面膜產(chǎn)品在市場(chǎng)上還較為少見。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種橄欖果實(shí)多酚的富集純化制備方法，進(jìn)而以高純度多酚為主要功效成分制備一種貼布式面膜。

橄欖果實(shí)多酚的提取純化方法，包括以下步驟：

(1)橄欖果實(shí)前處理：選用橄欖果實(shí)(新鮮果實(shí)，優(yōu)選為我國(guó)福建省橄欖[cauariumalbum(lour.)raeusch]果實(shí)為原料，用自來水沖洗干凈。將清洗干凈的果實(shí)放入75-85℃熱水中熱燙2-3min后，迅速取出置于冷水(20-30℃，優(yōu)選25℃)中冷卻，然后破碎去除果核。將去核橄欖果實(shí)切碎。干燥后粉碎樣品，過40目篩得橄欖果肉粉末。

(2)提?。洪蠙旃鈨龈蓸影凑罩亓矿w積比1:10-1:20的比例加入重量濃度為60％-80％的食用級(jí)無水乙醇溶液。超聲波輔助提取后過濾，超聲波提取溫度為25-35℃，功率為320-380w，重復(fù)提取兩次，每次提取時(shí)間為25-35min，然后在30-45℃下真空濃縮除去酒精得到橄欖果實(shí)多酚粗提液。

(3)純化：將步驟(2)中制備的橄欖果實(shí)粗提物配制成水溶液，加入預(yù)處理的大孔樹脂常壓層析柱中，所述的大孔樹脂為hpd-750型大孔樹脂，大孔樹脂柱高徑比為11-13，將層析柱置于恒溫層析柜中，4℃過夜。吸附達(dá)到平衡后，在20-30℃(優(yōu)選25℃)下，首先用2-4個(gè)柱床體積的蒸餾水去除樣品中雜質(zhì)(糖類和蛋白質(zhì)等)。經(jīng)蒸餾水平衡后，用食用級(jí)酒精溶液作為洗脫劑將多酚類物質(zhì)洗脫，上樣的橄欖果實(shí)多酚粗提物水溶液濃度為10-25mg/ml；上樣流速為1-2ml/min，上樣體積為1-3bv；洗脫用的食用級(jí)酒精濃度為70-90％溶液；洗脫流速為0.5-1ml/min，洗脫體積為1-3bv；然后將洗脫液濃縮凍干得到純化的多酚。

優(yōu)選地，步驟(1)中熱水熱燙溫度為80℃，時(shí)間為2-3min。

優(yōu)選地，步驟(1)中干燥方式：置于超低溫冰箱預(yù)凍24h后，取出置于冷凍干燥機(jī)冷凍干燥40h，干燥后含水量為1.2％。

優(yōu)選地，步驟(2)中超聲波提取溫度為30℃，功率為350w，提取時(shí)間為30min，重復(fù)提取兩次。

優(yōu)選地，步驟(3)中大孔樹脂柱高徑比優(yōu)選為12。

本發(fā)明將從橄欖果實(shí)粗提物中純化制備的高純度多酚應(yīng)用于化妝品中。

橄欖果實(shí)多酚面膜的制備方案(以質(zhì)量分?jǐn)?shù)100％計(jì))：橄欖果實(shí)高純度多酚提取物1-3％，1,3-丙二醇1-3％，甘油聚醚-262-5％，1,2-己二醇0.2-0.8％，對(duì)羥基苯乙酮0.1-0.5％，漢生膠0.1-0.35％,精氨酸0.1-0.35％，肌肽0.1-1％，透明質(zhì)酸鈉0.02-1％，香精0.003-0.1％，余量以去離子水補(bǔ)齊。

本發(fā)明還提供了一種橄欖果實(shí)多酚面膜的制備方法，包括以下步驟：

(1)稱取各成分原料

a相：1,3-丙二醇，透明質(zhì)酸鈉、漢生膠、甘油聚醚-26、edta二鈉

b相：純化水和精氨酸、對(duì)羥基苯乙酮、肌肽、peg-40氫化蓖麻油和香精

c相：橄欖提取液、1,2-己二醇、糖類同分異構(gòu)體

(2)a相混合液制備：將透明質(zhì)酸鈉和漢生膠加適量去離子水溶脹，再加入其余a相原料一起混合，加熱攪拌至完全分散均勻，得a相混合液。

(3)b相和c相混合液制備：分別將b相和c相各原料混合，加熱攪拌均勻。

(4)a相、b相、c相混合：將a相和b相混合，加熱攪拌均勻、冷卻后，加入c相，再次攪拌勻質(zhì)，冷卻，得面膜液。

(5)將無紡布面貼浸透面膜液，進(jìn)行單片式無菌處理包裝。

步驟(2)中所述的加熱溫度為80±5℃，在1000±10r/min下攪拌10min。

步驟(3)中所述溫度為60±5℃，在1000±10r/min下攪拌10min。

步驟(4)具體為：將a相和b相緩慢混合，在60±5℃下500±5r/min勻質(zhì)30min后，冷卻至35℃；加入c相，再次攪拌勻質(zhì)，冷卻，得面膜液。

本發(fā)明主要具有以下特點(diǎn)：

(1)本發(fā)明從橄欖果實(shí)中提取高純度多酚組分，提取效率高，達(dá)到135.84mg/g-172.78mg/g，純化后，純度達(dá)到74.45％-89.67％。

(2)首次以橄欖果實(shí)高純度多酚組分為主要功效成分制備一種貼布式面膜。本發(fā)明生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單高效、成本低、適合于規(guī)?；a(chǎn)。

(3)有效挖掘了我國(guó)藥食同源的橄欖果實(shí)特色資源，將天然多酚與輔料有效締合制備面膜，使其具有優(yōu)良的保濕、美白、防曬、抗衰老的構(gòu)效。

(4)本發(fā)明包含藥食同源橄欖果實(shí)高純度多酚屬天然產(chǎn)物、安全無毒副作用。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例一：

(1)提?。簩⑶逑锤蓛舻拈蠙旃麑?shí)(我國(guó)福建省橄欖[cauariumalbum(lour.)raeusch]果實(shí)，實(shí)施例二、三相同)放入80℃的熱水中熱燙2-3min，冷卻后破碎去除果核。將去核橄欖果實(shí)切碎后進(jìn)行真空冷凍干燥，粉碎，過40目篩得橄欖果肉粉末。按照重量體積比1:10的比例加入濃度為60％的食用級(jí)無水乙醇溶液。在30℃，功率為350w，超聲波提取30min，果渣重復(fù)提取兩次。然后在45℃下真空濃縮除去酒精得到橄欖果實(shí)多酚粗提液。其多酚含量為135.84mg/g(以粗提液凍干后重量記，即每g凍干粉中的多酚含量，實(shí)施例二、三相同)。

(2)純化：用去離子水將橄欖果實(shí)多酚粗提液濃度調(diào)整為10mg/ml，以1ml/min的上樣流速，上樣體積為1bv，裝載于hpd-750大孔樹脂層析柱內(nèi)進(jìn)行吸附，吸附達(dá)到平衡后，先用2個(gè)柱床體積的蒸餾水洗脫去除樣品中雜質(zhì)(糖類和蛋白質(zhì))。再用1bv、濃度為70％的食用級(jí)酒精溶液作為洗脫劑，以洗脫流速為0.5ml/min，洗脫體積為1bv將柱中吸附的多酚類物質(zhì)洗脫，收集橄欖果實(shí)多酚洗脫液。洗脫液在30℃下真空濃縮除去酒精溶液，然后經(jīng)真空冷凍干燥制備得到粉末狀橄欖果實(shí)多酚，其含量達(dá)74.45％。

實(shí)施例二：

(1)提?。簩⑶逑锤蓛舻拈蠙旃麑?shí)放入80℃的熱水中熱燙2-3min，冷卻后破碎去除果核。將去核橄欖果實(shí)切碎后進(jìn)行真空冷凍干燥，粉碎，過40目篩得橄欖果肉粉末。按照重量體積比1:20的比例加入濃度為70％的食用級(jí)無水乙醇溶液。在30℃，功率為350w，超聲波提取30min，果渣重復(fù)提取兩次。然后在45℃下真空濃縮除去酒精得到橄欖果實(shí)多酚粗提液。其多酚含量為158.73mg/g。

(2)純化：用去離子水將橄欖果實(shí)多酚粗提液濃度調(diào)整為15mg/ml，以1.5ml/min的上樣流速，上樣體積為2bv，裝載于hpd-750大孔樹脂層析柱進(jìn)行吸附，吸附達(dá)到平衡后，先用2個(gè)柱床體積的蒸餾水洗脫去除樣品中雜質(zhì)(糖類和蛋白質(zhì)等)。再用2個(gè)柱床體積、濃度為80％的食用級(jí)酒精溶液作為洗脫劑，以洗脫流速為0.8ml/min，洗脫體積為2bv將柱中吸附的多酚類物質(zhì)洗脫，收集橄欖果實(shí)多酚洗脫液。洗脫液在30℃下真空濃縮除去酒精溶液，然后經(jīng)真空冷凍干燥制備得到粉末狀橄欖果實(shí)多酚，其含量達(dá)81.45％。

實(shí)施例三：

(1)提取：將清洗干凈的果實(shí)放入80℃的熱水中熱燙2-3min，冷卻后破碎去除果核。將去核橄欖果實(shí)切碎后進(jìn)行真空冷凍干燥，粉碎，過40目篩得橄欖果肉粉末。按照重量體積比1:20的比例加入濃度為80％的食用級(jí)無水乙醇溶液。在30℃，功率為350w，超聲波提取30min，果渣重復(fù)提取兩次。然后在45℃下真空濃縮除去酒精得到橄欖果實(shí)多酚粗提液。其多酚含量為172.78mg/g。

(2)純化：用去離子水將橄欖果實(shí)多酚粗提液濃度調(diào)整為25mg/ml，以2ml/min的上樣流速，上樣體積為3bv，裝載于hpd-750大孔樹脂層析柱進(jìn)行吸附，吸附達(dá)到平衡后，先用2個(gè)柱床體積的蒸餾水洗脫去除樣品中雜質(zhì)(糖類和蛋白質(zhì))。再用3個(gè)柱床體積、濃度為90％的食用級(jí)酒精溶液作為洗脫劑，以洗脫流速為1ml/min，洗脫體積為3bv將柱中吸附的多酚類物質(zhì)洗脫，收集橄欖果實(shí)多酚洗脫液。洗脫液在30℃下真空濃縮除去酒精溶液，然后經(jīng)真空冷凍干燥制備得到粉末狀橄欖果實(shí)多酚，純化后多酚含量為89.67％。

本發(fā)明采用folin-ciocalteu法測(cè)定多酚含量；采用清除dpph自由基和總還原力frap實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)抗氧化活性。取實(shí)施例三橄欖果實(shí)粗提物中多酚(含量為172.78mg/g)。純化后多酚含量為89.67％，純化后多酚含量提高了5.18倍。同時(shí)純化后多酚的dpph清除能力以及farp分別是純化前的3.5倍和3倍，且呈方差顯著。

表1橄欖果實(shí)粗提物純化前后多酚含量以及抗氧化活性。

實(shí)施例四：橄欖果實(shí)高純度多酚面膜的制備

本實(shí)施例提供了一種橄欖果實(shí)多酚面膜，包括：

a相：1,3-丙二醇，透明質(zhì)酸鈉、漢生膠、甘油聚醚-26、edta二鈉

b相：純化水和精氨酸、對(duì)羥基苯乙酮、肌肽、peg-40氫化蓖麻油和香精

c相：橄欖提取液、1,2-己二醇、糖類同分異構(gòu)體

以上各相組分的重量份數(shù)如下：

以質(zhì)量分?jǐn)?shù)100％計(jì)，橄欖果實(shí)高純度多酚提取物3％，1,3-丙二醇3％，甘油聚醚-262％，1,2-己二醇0.2％，對(duì)羥基苯乙酮0.1％，漢生膠0.1％，精氨酸0.1％，肌肽1％，透明質(zhì)酸鈉1％，香精0.003％，余量以去離子水補(bǔ)齊。

前述的橄欖果實(shí)多酚面膜的制備方法，包括以下步驟：

將a相中透明質(zhì)酸鈉和漢生膠加適量去離子水溶脹，再將其余原料一起混合，在80±5℃下加熱攪拌至完全分散均勻，得a相混合液。然后分別將b相和c相各原料混合，在60±5℃下加熱攪拌均勻。最后將a相和b相混合，在60±5℃下加熱攪拌均勻、冷卻后，加入c相，再次攪拌勻質(zhì)，冷卻，得面膜液。將無紡布面貼浸透面膜液，進(jìn)行單片式無菌處理包裝。即得橄欖果實(shí)高純度多酚貼布式面膜。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明專利申請(qǐng)專利范圍所做均等變化或修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。