本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體為一種穩(wěn)定的卡泊芬凈凍干組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：卡泊芬凈為一種半人工合成的棘白菌素類抗真菌化合物，可作為葡聚糖合成的抑制劑，非競爭性抑制真菌細胞壁的β(1，3)-d-葡聚糖的合成而發(fā)揮殺菌作用。2001年，獲得fda的批準上市，具有如下結(jié)構(gòu)：卡泊芬凈結(jié)構(gòu)中存在多個肽鍵，同時還含有多個羥基、氨基及酚羥基結(jié)構(gòu)，天然地，其化學穩(wěn)定性極差，易于因氧化、水解而降解產(chǎn)生雜質(zhì)，為此，在長期存儲過程中，卡泊芬凈需要置于-70℃條件下方可維持6月左右相對穩(wěn)定。為了解決卡泊芬凈制劑放置穩(wěn)定性的問題，現(xiàn)有技術(shù)多采用添加額外穩(wěn)定劑或填充劑的方法。譬如，us2010/0137197公開了一種含卡泊芬凈和玻璃化轉(zhuǎn)變溫度為90℃以上的非還原性糖的凍干干組合物，其穩(wěn)定性要明顯好于科賽斯(cancidas)，能夠在5℃下保存更長的時間，甚至是在室溫下進行保存。cn1132624c則公開了一種含有蔗糖、甘露醇的卡泊芬凈注射液組合物，cn10216648a公開了含有卡泊芬凈、山梨醇和甘露醇的卡泊芬凈凍干組合物，cn102614493a公開了一種含有穩(wěn)定劑如海藻糖或蔗糖的卡泊芬凈組合物，以及cn103386117a中的含有糖類保護和氨基酸的卡泊芬凈凍干組合物，等等。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物含有卡泊芬凈或其可藥用鹽，緩沖鹽和叔丁醇/c1-c3醇溶液組成，該藥物組合物中水分含量不高于1％(質(zhì)量百分含量，w/w％)，具體實施方案中，含水量可以小于或等于0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0％或更低。在實施方案中，前述藥物組合物中卡泊芬凈或其可藥用鹽的濃度為3mg/ml～200mg/ml，可以為3mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、45mg/ml、50mg/ml、55mg/ml、60mg/ml、65mg/ml、70mg/ml、75mg/ml、80mg/ml、90mg/ml、100mg/ml、120mg/ml、150mg/ml、200mg/ml，進一步地，為了避免藥物組合物中卡泊芬凈或其可藥用鹽在放置過程中自然析出現(xiàn)象，卡泊芬凈或其可藥用鹽的濃度為10mg/ml～80mg/ml。進一步地，所述c1-c3醇為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，選自甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇或正丁醇中的至少一種，優(yōu)選為甲醇、乙醇或其組合。本發(fā)明所述c1-c3醇為無水溶劑，其含水量不高于0.05％。在一些實施方案中，所述c1-c3醇與叔丁醇的體積比(v/v)為95:5～60:40，保證卡泊芬凈或其可藥用鹽的最大溶解度，其體積比可以為95:5、90:10、85:15、80:20、75:25，70:30、65:35、60:40，進一步地，所述溶劑體積比為90:10～80:20。在一些實施方案中，所述藥物組合物含有25mg/ml的卡泊芬凈或其可藥用鹽、2mg/ml緩沖鹽和甲醇/乙醇/叔丁醇＝70:20:10的溶液。在一些實施方案中，所述藥物組合物含有40mg/ml的卡泊芬凈或其可藥用鹽、2mg/ml緩沖鹽和甲醇/乙醇/叔丁醇＝75:5:20的溶液。在一些實施方案中，所述藥物組合物含有25mg/ml的卡泊芬凈或其可藥用鹽、4mg/ml緩沖鹽和甲醇/乙醇/叔丁醇＝60:20:20的溶液。在一些實施方案中，所述藥物組合物含有60mg/ml的卡泊芬凈或其可藥用鹽、6mg/ml緩沖鹽和甲醇/乙醇/叔丁醇＝80:10:10的溶液。在一些實施方案中，所述藥物組合物含有100mg/ml的卡泊芬凈或其可藥用鹽、10mg/ml緩沖鹽和甲醇/乙醇/叔丁醇＝85:5:10的溶液。在一些實施方案中，所述藥物組合物含有150mg/ml的卡泊芬凈或其可藥用鹽、10mg/ml緩沖鹽和甲醇/叔丁醇＝80:20的溶液。在一些實施方案中，所述藥物組合物含有50mg/ml的卡泊芬凈或其可藥用鹽、5mg/ml緩沖鹽和乙醇/叔丁醇＝80:20的溶液。進一步地，本發(fā)明所述緩沖鹽為醋酸鈉，藥物組合物中醋酸鈉的濃度為0.5～20mg/ml，在實施方案中醋酸鈉的濃度可以為0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10mg/ml，更進一步為1～10mg/ml。在實施方案中，本發(fā)明所述藥物組合物ph＝5～7，可以為5.0、5.2、5.4、5.6、5.8、6.0、6.2、6.4、6.6、6.8、7.0。在一些實施方案中，所述藥物組合物含有40mg/ml的醋酸卡泊芬凈、2mg/ml醋酸鈉和甲醇/乙醇/叔丁醇＝75:5:20的溶液。在一些實施方案中，所述藥物組合物含有25mg/ml的醋酸卡泊芬凈、4mg/ml醋酸鈉和甲醇/乙醇/叔丁醇＝60:20:20的溶液。在一些實施方案中，所述藥物組合物含有60mg/ml的醋酸卡泊芬凈、6mg/ml醋酸鈉和甲醇/乙醇/叔丁醇＝80:10:10的溶液。在一些實施方案中，所述藥物組合物含有100mg/ml的醋酸卡泊芬凈、10mg/ml醋酸鈉和甲醇/乙醇/叔丁醇＝85:5:10的溶液。在一些實施方案中，所述藥物組合物含有150mg/ml的醋酸卡泊芬凈、10mg/ml醋酸鈉和甲醇/叔丁醇＝80:20的溶液。在一些實施方案中，所述藥物組合物含有50mg/ml的醋酸卡泊芬凈、5mg/ml醋酸鈉和乙醇/叔丁醇＝80:20的溶液。進一步地，本發(fā)明所述藥物組合物中還含有凍干保護劑或凍干支撐劑，譬如，蔗糖、海藻糖、甘露醇、乳糖、葡萄糖、麥芽糖等糖類/多元醇；葡聚糖、白蛋白等聚合物；甘氨酸、肌氨酸、丙氨酸、谷氨酸鈉、l-絲氨酸等氨基酸。醋酸卡泊芬凈結(jié)構(gòu)中存在多種羥基、氨基和苯酚基團，其對熱和潮濕具有高度不穩(wěn)定性。通過放置穩(wěn)定性實驗，利用lc-mc、nmr等檢測手段，大體可以確認雜質(zhì)3-7為卡泊芬凈在高濕或高溫條件下降解產(chǎn)物，雜質(zhì)5和6我們推測為兩分子卡泊芬凈之間通過氫鍵形成的二聚體化合物，雜質(zhì)3、4和7化學結(jié)構(gòu)如下：取前述藥物組合物作為供試品，于2～8℃放置72小時(h)，取樣測定。所述藥物組合物展現(xiàn)優(yōu)異的穩(wěn)定性，便于醋酸卡泊芬凈于2～8℃放置的長期儲存。在一些實施方案中，藥物組合物于2～8℃放置72h(相對于3天)，其中雜質(zhì)3的含量小于0.1％，可以為0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；雜質(zhì)4的含量小于0.40％，可以為0.40、0.39、0.38、0.37、0.36、0.35、0.34、0.33、0.32、0.31、0.30、0.29、0.25、0.22、0.21、0.18、0.16、0.14、0.12、0.10、0.08、0.06、0.04、0.02或更低；雜質(zhì)5的含量小于0.2％，可以為0.20、0.19、0.18、0.17、0.16、0.15、0.14、0.13、0.12、0.11、0.10、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02或更低；雜質(zhì)6的含量小于0.1％，可以為0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；雜質(zhì)7的含量小于0.1％，可以為0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低。本發(fā)明還提供了一種凍干組合物，該凍干組合物由前述藥物組合物經(jīng)冷凍干燥獲得。制備凍干組合物步驟包括：a)將卡泊芬凈或其可藥用鹽溶于叔丁醇溶液中，逐漸加入緩沖鹽，調(diào)節(jié)ph＝5～7；b)用0.22um微孔濾膜過濾,以形成凍干前溶液；c)隨后將步驟a)所得組合物(或稱為凍干前溶液)冷凍干燥。進一步地，所述步驟c)冷凍干燥分為如下三個階段：i)預凍期：將凍干前溶液保持在-20℃～-10℃至少1h，凍結(jié)的樣品的冰晶在垂直方向呈現(xiàn)煙囪狀，在藥品表面沒有凍結(jié)濃縮層，而且整個藥品的結(jié)構(gòu)均一性很好；ii)升華期：開啟真空泵，將冷凍溶液緩慢調(diào)節(jié)溫度值-50℃～-40℃的第一冷凍干燥溫度，保持溫度至少10-50h，期間維持真空為150～200μbar(毫巴)；iii)干燥期：將冷凍干燥溫度緩慢調(diào)節(jié)至-30℃～-10℃，保持溫度約5-20h，至冰線消失，保持真空度為150～200μbar(毫巴)，以形成凍干組合物。進一步地，前述所得凍干組合物中含有雜質(zhì)3的含量小于0.1％，可以為0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；雜質(zhì)4的含量小于0.40％，可以為0.40、0.39、0.38、0.37、0.36、0.35、0.34、0.33、0.32、0.31、0.30、0.29、0.25、0.22、0.21、0.18、0.16、0.14、0.12、0.10、0.08、0.06、0.04、0.02或更低；雜質(zhì)5的含量小于0.2％，可以為0.2、0.19、0.18、0.17、0.16、0.15、0.14、0.13、0.12、0.11、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；雜質(zhì)6的含量小于0.2％，可以為0.2、0.19、0.18、0.17、0.16、0.15、0.14、0.13、0.12、0.11、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；雜質(zhì)7的含量小于0.1％，可以為0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低。更進一步地，所述凍干組合物中總雜含量小于1.5％，可以為1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1或更小。同時，本發(fā)明所述凍干組合物中殘留溶劑叔丁醇含量小于0.05％，可以為0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％，完全符合ichq3c殘留溶劑指導原則。本發(fā)明所述凍干組合物中水分含量不高于1％，可以小于或等于0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0％或更低，凍干組合物中水分含量低有利于放置過程中穩(wěn)定性，減少降解雜質(zhì)的產(chǎn)生。取凍干組合物適量，精密稱定；于-20℃放置6月后，取樣測定考察凍干組合物穩(wěn)定性情況，結(jié)果表明：凍干組合物展現(xiàn)優(yōu)異的穩(wěn)定性，便于長期儲存。在一些實施方案中，藥物組合物于-20℃放置6月，其中雜質(zhì)3的含量小于0.1％，可以為0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；雜質(zhì)4的含量小于0.40％，可以為0.40、0.39、0.38、0.37、0.36、0.35、0.34、0.33、0.32、0.31、0.30、0.29、0.25、0.22、0.21、0.18、0.16、0.14、0.12、0.10、0.08、0.06、0.04、0.02或更低；雜質(zhì)5的含量小于0.3％，可以為0.3、0.28、0.26、0.24、0.22、0.20、0.18、0.16、0.14、0.12、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；雜質(zhì)6的含量小于0.2％，可以為0.2、0.19、0.18、0.17、0.16、0.15、0.14、0.13、0.12、0.11、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；雜質(zhì)7的含量小于0.2％，可以為0.2、0.19、0.18、0.17、0.16、0.15、0.14、0.13、0.12、0.11、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低。本文所用的術(shù)語“卡泊芬凈”意指卡泊芬凈游離堿。“卡泊芬凈可藥用鹽”為卡泊芬凈與有機酸的酸加成鹽，進一步地，卡泊芬凈可藥用鹽為醋酸卡泊芬凈，又稱為卡泊芬凈二乙酸鹽。本發(fā)明所述醋酸卡泊芬凈通過wo2012146099所述方法獲得，所用其他試劑均可通過外購方式獲得。本發(fā)明所用醋酸卡泊芬凈原料藥質(zhì)量如下：本發(fā)明所述“純度或有關(guān)物質(zhì)”通過hplc方法測定，其檢測方法參照高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄vd)：色譜柱waterssymmetry-c18柱；以高氯酸與氯化鈉混合溶液/乙腈為流動相，梯度洗脫。本發(fā)明水分測定方法：中國藥典2010年版二部附錄ⅷm第一法a操作方法：注入適量無水甲醇于滴定瓶中，用卡爾費休氏試液滴定至終點。迅速稱取約0.1g的供試品，將樣品注入滴定瓶，使樣品在甲醇中充分溶解后，開始測定，需做平行樣。按以下公式計算本品水分：式中：v為供試品消耗費休氏試液的體積，ml；f為每1ml費休氏試液相當于水的質(zhì)量，mg/ml；w為供試品的質(zhì)量，mg。本發(fā)明殘留溶劑檢測方法：中國藥典2010年版二部附錄ⅷp第二法測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：色譜柱：以6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷為固定液升溫程序：起始柱溫為40℃，維持5分鐘，以每分鐘20℃的速率升溫至100℃，維持2分鐘，以每分鐘80℃的速率升溫至180℃，維持2分鐘載氣：載氣為氮氣；流速：4.0ml/min；分流比：10:1；進樣口溫度：160℃按以下公式以外標法計算殘留溶劑的量：式中：ai—供試溶液中待測溶劑峰面積mi—供試品稱重as—對照溶液中待測溶劑峰面積ms—待測溶劑對照品稱重具體實施方式以下將結(jié)合實施例更詳細地解釋本發(fā)明，本發(fā)明的實施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)方案，并非限定本發(fā)明的實質(zhì)。實施例1：制備醋酸卡泊芬凈組合物處方制備工藝：1)取2g蔗糖，1.3g甘露醇，2.5g醋酸卡泊芬凈(批號；801)加入甲醇/乙醇(70ml/20ml)的混合溶液中，攪拌溶解后；2)加入適量醋酸鈉調(diào)節(jié)溶液ph＝6.1，再加入叔丁醇10ml。實施例2：制備醋酸卡泊芬凈組合物處方制備工藝：1)取3.1g蔗糖，2g甘露醇，4.0g醋酸卡泊芬凈(批號；801)加入甲醇/乙醇(75ml/5ml)的混合溶液中，攪拌溶解后；2)加入適量醋酸鈉調(diào)節(jié)溶液ph＝5.9，再加入叔丁醇20ml。實施例3：制備醋酸卡泊芬凈組合物處方制備工藝：1)取4.7g蔗糖，3.1g甘露醇，6.0g醋酸卡泊芬凈(批號；801)加入甲醇/乙醇(80ml/20ml)的混合溶液中，攪拌溶解后；2)加入適量醋酸鈉調(diào)節(jié)溶液ph＝6.5。實施例4：制備醋酸卡泊芬凈組合物處方制備工藝：1)取7.8g蔗糖，5.2g甘露醇，10.0g醋酸卡泊芬凈(批號；801)加入甲醇/乙醇(55ml/45ml)的混合溶液中，攪拌溶解后；2)加入適量醋酸鈉調(diào)節(jié)溶液ph＝6.2。實施例5：制備醋酸卡泊芬凈組合物處方制備工藝：1)取11.6g蔗糖，7.7g甘露醇，15.0g醋酸卡泊芬凈(批號；901)加入甲醇(80ml)中，攪拌溶解后；2)加入適量醋酸鈉調(diào)節(jié)溶液ph＝5～7，再加入叔丁醇20ml。實施例6：制備醋酸卡泊芬凈組合物處方制備工藝：1)取3.9g蔗糖，2.6g甘露醇，5.0g醋酸卡泊芬凈(批號；901)加入乙醇(80ml)中，攪拌溶解后；2)加入適量醋酸鈉調(diào)節(jié)溶液ph＝6.0，再加入叔丁醇20ml。實施例7：制備醋酸卡泊芬凈組合物處方醋酸卡泊芬凈(按卡泊芬凈堿計，下同)50mg/ml醋酸鈉10mg/ml制備工藝：1)取5.0g醋酸卡泊芬凈(批號；901)加入水(80ml)中，攪拌溶解后；2)加入適量醋酸鈉調(diào)節(jié)溶液ph＝6.0。實施例8：按照cn103315969的對比例3制備組合物處方醋酸卡泊芬凈(按卡泊芬凈堿計，下同)50mg/ml蔗糖40mg/ml甘露醇26mg/ml制備工藝：取甘露醇0.5g，蔗糖0.75g溶于20ml水中，之后加入1.17g醋酸卡泊芬凈(批號；901)，用1m的氫氧化鈉、鹽酸調(diào)節(jié)ph6.2。實施例9：按照cn103315969的對比例2制備組合物處方制備工藝：海藻糖1.20g溶于3ml水中，之后加入7.5μl的冰醋酸，用1m的氫氧化鈉調(diào)至ph5.1，再加入0.223g醋酸卡泊芬凈(批號；901)，輕輕攪拌溶解，并用1m的氫氧化鈉、鹽酸調(diào)至ph6.0，加水定容到5ml，0.22μm膜過濾即得。實施例10：2～8℃放置穩(wěn)定性試驗將前述實施例1-9藥物組合物作為供試品，于2～8℃放置3天穩(wěn)定性數(shù)據(jù)如下：表1于2～8℃放置3天穩(wěn)定性結(jié)論：在叔丁醇/c1-3醇溶液體系中，各個處方在2～8℃條件下都非常穩(wěn)定，放置3d后卡泊芬凈含量沒有明顯的降低，而含水溶液體系中的處方在2～8℃條件下穩(wěn)定性差，組合物中水會促使卡泊芬凈的降解產(chǎn)生雜質(zhì)3,4，會影響后續(xù)凍干組合物的質(zhì)量。實施例11：將實施例1-9所得藥物組合物制備成凍干組合物制備工藝：i)分別將實施例1-9的藥物組合物(凍干前溶劑)保持在-20℃～-10℃至少1h，凍結(jié)的樣品的冰晶在垂直方向呈現(xiàn)煙囪狀，在表面沒有形成凍結(jié)濃縮層，而且整個藥品的結(jié)構(gòu)均一性很好；ii)開啟真空泵，將冷凍溶液緩慢調(diào)節(jié)溫度值-50℃～-40℃的第一冷凍干燥溫度，保持溫度至少10-50h，期間維持真空為150～200μbar(毫巴)；iii)將冷凍干燥溫度緩慢調(diào)節(jié)至-30℃～-10℃，保持溫度約5-20h，至冰線消失，保持真空度為150～200μbar(毫巴)，以形成凍干組合物。表2實施例1-9凍干組合物有關(guān)物質(zhì)實施例12：將實施例1-9凍干組合物放置于-20℃、2～8℃考察穩(wěn)定性，具體穩(wěn)定性數(shù)據(jù)如下：表3于-20℃條件放置穩(wěn)定性數(shù)據(jù)表4于2-8℃條件放置穩(wěn)定性數(shù)據(jù)結(jié)論：叔丁醇凍干體系利于各處方在2～8℃條件下比較穩(wěn)定，放置6月后卡泊芬凈含量沒有明顯的降低，仍然可接受范圍內(nèi)。進一步地，叔丁醇凍干體系中乙醇或甲醇比例較高時，在本發(fā)明所述凍干步驟i)中較難固化，在藥品表面會出現(xiàn)凍結(jié)濃縮層，均一性不好，影響后續(xù)凍干步驟，且所得凍干組合物結(jié)構(gòu)不均一，會出現(xiàn)稍許結(jié)塊，如實施例3或4樣品結(jié)構(gòu)不均一、有結(jié)塊現(xiàn)象，穩(wěn)定性數(shù)值差于比其它樣品。實施例13：實施例1-9凍干組合物的復溶時間分別將實施例1-9凍干組合物用0.9％生理鹽水勾兌稀釋，考察凍干組合物的復溶時間。表5結(jié)論：在制備醋酸卡泊芬凈凍干組合物過程中，用含有10％以下叔丁醇溶液進行凍干，所得樣品中易于出現(xiàn)塌陷或結(jié)塊現(xiàn)象，直接影響所得凍干組合物復溶時間。在沒有凍干保護劑或填充劑情況下，利用水進行凍干所得凍干組合物多呈餅狀，其復溶時間較長，且所得凍干組合物中含水量較高，長期穩(wěn)定性會較差。另外，凍干組合物中含水高時，即便含甘露醇，復溶時間也較長。實施例14：凍干工藝考察將實施例2所述處方進行凍干實驗，考察最優(yōu)凍干參數(shù)表6預凍期升華期干燥期實驗例1-20℃-50℃，180μbar-30℃，150μbar實驗例2-10℃-40℃，200μbar-20℃，150μbar實驗例3-40℃-50℃，180μbar-30℃，180μbar實驗例4-60℃-50℃，180μbar-20℃，150μbar表7注：通常凍干粉針的疏松狀優(yōu)于結(jié)塊狀，結(jié)塊狀優(yōu)于皺縮狀。結(jié)論：凍干過程中壓力和溫度對凍干組合物的外觀和質(zhì)量有較大的影響，當預凍期穩(wěn)定過低，凍干前溶劑就會因快速凍干而在藥品表面形成凍結(jié)濃縮層，且內(nèi)部結(jié)構(gòu)冰晶尺寸不一，均一性不好，影響凍干組合物的成型效果，凍干粉結(jié)構(gòu)不均一、表面不平整。當前第1頁12