本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種活性細胞修復(fù)劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

皮膚是人體的重要器官，起著控制體溫、防止感染及體液流失、免疫及傳感的作用。由于創(chuàng)傷、擦傷、皮膚潰爛和燒傷等原因，可能導(dǎo)致皮膚的大范圍傷害。皮膚的損傷很容易造成細菌感染和體液流失，并引起各種臨床并發(fā)癥?，F(xiàn)有技術(shù)中對于醫(yī)治創(chuàng)傷所采用的敷料按照材質(zhì)和用途可劃為傳統(tǒng)敷料、動物類敷料、合成敷料、藥物敷料和固定用敷料，現(xiàn)有技術(shù)中的敷料存在以下缺點：不能很好的吸收創(chuàng)面滲液，維護創(chuàng)面溫度，為創(chuàng)面愈合提供良好的局部環(huán)境；不能維護傷口適量的血液流通和養(yǎng)分，一致血管內(nèi)皮腫脹而阻礙了血管生長。

中國專利cn100502953c公開了一種創(chuàng)面活性修復(fù)材料，主要由以下成分組成：透明質(zhì)酸、二氧化硅、氧化鈉、氧化鈣和五氧化二磷，所述創(chuàng)面修復(fù)材料可以刺激表皮細胞和形成纖維細胞的移行、降低新生修復(fù)血管的循環(huán)阻力，阻礙粒細胞的沉積、抑制血管內(nèi)皮腫脹，減少細胞碎片在血管內(nèi)的堆積，該專利采用物理混合技術(shù)制備的多物質(zhì)混合粉料，其晶體結(jié)構(gòu)依舊是獨立單晶混合料，但在創(chuàng)面滲液吸收、促血管生長、改善微循環(huán)、促進創(chuàng)面愈合、減少瘢痕形成等方面效果有待改進。

中國專利申請cn101879307a公開了一種活性細胞修復(fù)制劑，所述制劑由殼聚糖、殼寡糖、膠原蛋白為活性成分與藥用輔料組成，該發(fā)明雖然在術(shù)后/外傷傷口愈合、減少瘢痕形成有很好的的效果，但其藥用輔料涉及亞硫酸鈉，而亞硫酸鈉對眼睛、皮膚、粘膜有刺激作用，因而人體存在潛在的威脅性。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決現(xiàn)有技術(shù)中活性細胞修復(fù)劑修復(fù)效果不佳以及某些產(chǎn)品含有對人體刺激性組分等問題，本發(fā)明提供一種活性細胞修復(fù)劑及其制備方法。

本發(fā)明一種活性細胞修復(fù)劑，包含以下組分及其質(zhì)量百分比：

蘆薈多糖8-13％、殼寡糖6-8％、殼聚糖4-6％、透明質(zhì)酸4-5％、維生素b53-5％、膠原蛋白2.5-5％、谷胱甘肽2-3％、蘋果多酚1-3％、十八醇4-8％、白凡士林2-5％、單硬脂酸甘油酯3-5％、甘油6-10％、苯氧乙醇0.2-0.7％和水23.3-54.3％。

優(yōu)選的所述的活性細胞修復(fù)劑，由以下組分及其質(zhì)量百分比組成：

蘆薈多糖10.5％、殼寡糖7％、殼聚糖5％、透明質(zhì)酸4.5％、維生素b54％、膠原蛋白3.75％、谷胱甘肽2.5％、蘋果多酚2％、十八醇6％、白凡士林3.5％、單硬脂酸甘油酯4％、甘油8％、苯氧乙醇0.45％和水38.8％。

再優(yōu)選的，所述的蘆薈多糖的提取方法包括以下步驟：

s1、取蘆薈鮮葉2-5kg和水5-10l，將蘆薈鮮葉在水中浸泡20-40min，然后切去表皮，將內(nèi)層凝膠置于水中浸洗6-10h，1000-1200r/min轉(zhuǎn)速、15-20℃溫度下離心10-20min，抽濾并將所得的蘆薈提取液減壓濃縮即得蘆薈凝膠濃縮汁，向蘆薈凝膠濃縮汁中加入乙酸調(diào)節(jié)ph至5-6；

s2、取s1得到的蘆薈凝膠濃縮汁20-100g和無水乙醇500-1000ml，將蘆薈凝膠濃縮汁加入無水乙醇中超聲萃取處理15-30min，然后于800-1000r/min、15-20℃下離心5-10min過濾即得。

另外，本發(fā)明還提供了一種活性細胞修復(fù)劑的制備方法，包括以下步驟：

s1、備料：按質(zhì)量比稱取相應(yīng)原料；

s2、取白凡士林和十八醇置于燒杯中，水浴溫度70-80℃，使其熔化得到油液；將蘆薈多糖、殼寡糖、殼聚糖、透明質(zhì)酸、維生素b5、蘋果多酚和水置于另一燒杯中水浴溫度70-80℃，使其溶解得到水液；將水液加入油液中，在混合液中加入膠原蛋白、谷胱甘肽、單硬脂酸甘油酯、甘油和苯氧乙醇，攪拌均勻；

s3、用紫外線燈進行殺菌處理，降至室溫即得。

優(yōu)選的，所述的活性細胞修復(fù)劑的制備方法步驟s2中制備水液和油液的水浴溫度為75℃。

殼寡糖cas號：148411-57-8；殼聚糖cas號：9012-76-4；透明質(zhì)酸cas號：9004-61-9；維生素b5cas號：137-08-6；膠原蛋白cas號：9064-67-9；谷胱甘肽cas號：70-18-8；蘋果多酚cas號：85251-63-4；十八醇cas號：112-92-5；白凡士林cas號：8009-03-8；單硬脂酸甘油酯cas號：123-94-4；苯氧乙醇cas號：122-99-6。

蘆薈多糖主要存在于蘆薈葉的凝膠部位，即由葉皮所包圍的透明黏狀部分，目前已被檢出的有乙?；暇厶?、葡甘聚糖、阿拉伯-半乳聚糖等，作為蘆薈凝膠中的主要活性成分之一，具有免疫、促進細胞分裂和傷口愈合的功能，對多種由于免疫力下降引起的疾病都有顯著的療效。

殼寡糖具有保濕、活化機體細胞、阻止皮膚粗糙和老化，抑制皮膚表面有害菌滋生、抑菌抗皮膚病和吸收紫外線功能等功效，且有促進傷口愈合的功能，可用于動物外商或骨折的輔助治療，可以促進皮膚修復(fù)，提高機體免疫力和抑菌藥理作用。

殼聚糖具有止痛、止血、促進傷口愈合、減小疤痕的作用，且有良好的生物相溶性、生物降解性以及良好的成膜性、抗凝血性等功能。

透明質(zhì)酸是人皮膚表皮及真皮的主要基質(zhì)成分之一，其生理功能是能使水分進入細胞間隙，并與蛋白質(zhì)結(jié)合而形成蛋白凝膠，將細胞粘在一起，發(fā)揮正常的細胞代謝作用，起到保持細胞水分，保護細胞不受病原菌的侵害，加快恢復(fù)皮膚組織，提高創(chuàng)口愈合再生能力，減少疤痕，增強免疫力等作用。在醫(yī)藥方面，透明質(zhì)酸用于非甾體消炎藥，關(guān)節(jié)治療、眼科，心外科手術(shù)的輔助藥品，在治療燙傷、燒傷、凍傷、人造皮膚方面有著獨到作用。

維生素b5是一種優(yōu)異的皮膚保護劑，能刺激細胞的分裂增殖，增進纖維芽細胞的增生，有協(xié)助修復(fù)皮膚組織的功能，具消炎及愈合表皮創(chuàng)傷之作用，并能減輕配方中其他組分對皮膚的刺激與損傷，有助于傷口痊愈可制造抗體抗傳染病，治療手術(shù)后休克，防止疲勞，緩解多種抗生素的毒副作用。

膠原蛋白參與細胞的遷移、分化和增殖，使骨、腱、軟骨和皮膚具有一定的機械強度。膠原蛋白因具有弱的抗原性和良好的生物相溶性目前在燒傷、創(chuàng)傷、眼角膜疾病、美容矯形、硬組織修復(fù)、創(chuàng)面止血等領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。

谷胱甘肽是一種含γ-酰胺鍵和疏基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸組成。谷胱甘肽存在于幾乎身體的每一個細胞。能幫助保持正常的免疫系統(tǒng)的功能，并具有抗氧化作用和整合解毒作用。

蘋果多酚是蘋果中所含多元酚類物質(zhì)的通稱，是一類具有獨特生理活性和化學(xué)活性的天然產(chǎn)物，它能夠維護膠原的合成，具有極強的抗氧化能力，能夠有效清除人體內(nèi)多余的自由基，延緩衰老，并具有防止維生素損失、抗過敏、抗腫瘤、抗突變、抗輻射、防齲齒、增強肌力，改善皮膚彈性、減少皺紋產(chǎn)生、保持皮膚細膩的作用。

白凡士林具防水性，是一種非常好的保濕用品，用于配制醫(yī)藥的藥膏及皮膚保護油膏用的原料，白凡士林的化學(xué)惰性使得它對任何類型的皮膚都沒有刺激性；單硬脂酸甘油酯具有優(yōu)良的乳化性能，且對皮膚刺激性小、生物降解性好。

本發(fā)明各組分相互配合、協(xié)同作用，對皮膚術(shù)后/外傷傷口愈合、減少瘢痕形成、術(shù)后粘連等皮膚修復(fù)方面有很好的效果。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的技術(shù)優(yōu)勢在于：采用水提醇沉方法對蘆薈葉中的蘆薈多糖進行提取分離；制備得到的活性細胞修復(fù)劑安全無毒、無刺激，在皮膚外傷傷口愈合、減少瘢痕形成、術(shù)后粘連等皮膚修復(fù)方面有很好的效果，并且無毒副作用，有較大的臨床應(yīng)用價值。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發(fā)明做進一步詳細說明，這些實施例僅用于例證的目的，絕不限制本發(fā)明的保護范圍。

實施例1-3，對比例1-6

表1列出了本發(fā)明所提供的實施例1-3和對比例1-6的活性細胞修復(fù)劑的組成及原料配比。

表1實施例和對比例活性細胞修復(fù)劑的組成及原料配比

對比例1與實施例2的區(qū)別在于：不含維生素b5，增加殼寡糖的含量。

對比例2與實施例2的區(qū)別在于：不含蘋果多酚，增加膠原蛋白的含量。

對比例3與實施例2的區(qū)別在于：不含殼聚糖，增加蘆薈多糖的含量。

對比例4與實施例2的區(qū)別在于：不含透明質(zhì)酸，增加膠原蛋白的含量。

對比例5與實施例2的區(qū)別在于：不含谷胱甘肽，增加蘋果多酚的含量。

對比例6與實施例2的區(qū)別在于：不含殼寡糖，增加殼聚糖的含量。

實施例1活性細胞修復(fù)劑的制備方法為：

s1、備料：按質(zhì)量比稱取相應(yīng)原料；

s2、取白凡士林和十八醇置于燒杯中，水浴溫度70℃，使其熔化得到油液；將蘆薈多糖、殼寡糖、殼聚糖、透明質(zhì)酸、維生素b5、蘋果多酚和水置于另一燒杯中水浴溫度70℃，使其溶解得到水液；將水液加入油液中，在混合液中加入膠原蛋白、谷胱甘肽、單硬脂酸甘油酯、甘油和苯氧乙醇，攪拌均勻；

s3、用紫外線燈進行殺菌處理，降至室溫即得。

實施例2活性細胞修復(fù)劑的制備方法為：

s1、備料：按質(zhì)量比稱取相應(yīng)原料；

s2、取白凡士林和十八醇置于燒杯中，水浴溫度75℃，使其熔化得到油液；將蘆薈多糖、殼寡糖、殼聚糖、透明質(zhì)酸、維生素b5、蘋果多酚和水置于另一燒杯中水浴溫度75℃，使其溶解得到水液；將水液加入油液中，在混合液中加入膠原蛋白、谷胱甘肽、單硬脂酸甘油酯、甘油和苯氧乙醇，攪拌均勻；

s3、用紫外線燈進行殺菌處理，降至室溫即得。

實施例3活性細胞修復(fù)劑的制備方法為：

s1、備料：按質(zhì)量比稱取相應(yīng)原料；

s2、取白凡士林和十八醇置于燒杯中，水浴溫度80℃，使其熔化得到油液；將蘆薈多糖、殼寡糖、殼聚糖、透明質(zhì)酸、維生素b5、蘋果多酚和水置于另一燒杯中水浴溫度80℃，使其溶解得到水液；將水液加入油液中，在混合液中加入膠原蛋白、谷胱甘肽、單硬脂酸甘油酯、甘油和苯氧乙醇，攪拌均勻；

s3、用紫外線燈進行殺菌處理，降至室溫即得。

對比例1-6的制備方法與實施例2類似。

產(chǎn)品性能評價測試

試驗例1：急性毒理評價

試驗材料：體重18-22g的昆明種小鼠200只雌雄各半、實施例1-3和對比例1-6活性細胞修復(fù)劑。

用藥方法：采用雌雄分別隨機均衡分組法，共分為20組，每組10只雌雄各半，其中2組為空白對照組，其他組分別對應(yīng)實施例1-3和對比例1-6的細胞修復(fù)劑的進行一次性灌胃給藥(按10.0g/kg的劑量給藥)組和尾靜脈注射試驗(按2.0g/kg的劑量給藥)組。

評價方法：給藥連續(xù)觀察7個小時以上，隨后每天上、下午各觀察一次，連續(xù)觀察14天，詳細記錄各項觀察指標。

急性毒理評價：未出現(xiàn)中毒和死亡，小鼠的外觀、行為行動，精神狀態(tài)正常，體重增長與對照組無差別。

受試物在本試驗中灌胃給藥劑量達10.0g/kg，注射給藥劑量達2.0g/kg，而且沒有死亡，因此本受試物可視為實際無毒。

試驗例2：療效評價

試驗材料：采用新西蘭大白兔20只，體重2.25-2.50kg，距脊柱兩側(cè)2.0cm處切割直徑為2.0cm的對稱創(chuàng)傷口10個(每側(cè)5個)，深度從皮膚到肌層，傷口的厚度為0.3cm，用生理鹽水沖洗傷口，20只大白兔處于同一位置的傷口作為同一組，備用。

用藥方法：第1組傷口不作處理，用凡士林醫(yī)用紗布覆蓋，處理后的傷口用無菌紗布包扎好(空白對照組)；第2組傷口用實施例1配比制備的活性細胞修復(fù)劑涂抹于傷口表面(實驗組1)，隔日換藥；第3組傷口用實施例2制備的活性細胞修復(fù)劑涂抹于傷口表面(實驗組2)，隔日換藥；第4組傷口按本發(fā)明實施例3配比制備的活性細胞修復(fù)劑涂抹于傷口表面(實驗組3)，隔日換藥；第5組傷口按本發(fā)明對比例1配比制備的活性細胞修復(fù)劑涂抹于傷口表面(實驗組4)，隔日換藥；第6組傷口按本發(fā)明對比例2配比制備的活性細胞修復(fù)劑涂抹于傷口表面(實驗組5)，隔日換藥；第7組傷口按本發(fā)明對比例3配比制備的活性細胞修復(fù)劑涂抹于傷口表面(實驗組6)，隔日換藥；第8組傷口按本發(fā)明對比例4配比制備的活性細胞修復(fù)劑涂抹于傷口表面(實驗組7)；第9組傷口按本發(fā)明對比例5配比制備的活性細胞修復(fù)劑涂抹于傷口表面(實驗組8)；第10組傷口按本發(fā)明對比例6配比制備的活性細胞修復(fù)劑涂抹于傷口表面(實驗組9)。

評價方法：分別于上藥后3、5、7、10天，肉眼觀察表皮、肉芽組織的生長情況，此外考察各實驗組分泌物、創(chuàng)緣皮下有無積液、創(chuàng)面皮緣有無壞死。同時測量創(chuàng)面面積：傷后即刻及3、5、7、10和14天，用透明膜覆蓋創(chuàng)面畫膜，剪膜，稱重換算成面積。數(shù)據(jù)以均數(shù)計算，療效評價結(jié)果如表2所示。

表2實施例和對比例細胞修復(fù)劑療效評價

從表2可以看出，各組采用不同方法處理傷口在上皮組織和傷口收縮作用上有明顯的差別。傷后3天：空白組情況較差，但實驗組1-3創(chuàng)面收縮明顯，優(yōu)于實驗組4-9及空白對照組；傷后14天：實驗組1-3創(chuàng)面已基本愈合、無明顯疤痕，而實驗組4-9雖基本愈合但是形成疤痕明顯，空白組大部分傷口仍濕潤，仍有滲出物，傷口收縮不明顯。結(jié)果表明本發(fā)明各組分相互配合協(xié)同作用，對皮膚術(shù)后/外傷傷口愈合、減少瘢痕形成、術(shù)后粘連等皮膚修復(fù)方面有很好的效果。

以上僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當指出的是，上述優(yōu)選的實施方式不應(yīng)視為對本發(fā)明的限制，本發(fā)明的保護范圍應(yīng)當以權(quán)利要求所限定的范圍為準。對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。