本發(fā)明涉及美白化合物，尤其涉及3-(5-噁唑基)苯酚在美白方面的應(yīng)用及其制備方法。

背景技術(shù)：

噁唑環(huán)是一種重要的含氮氧唑類的五元雜環(huán)，容易形成氫鍵、與金屬離子配位以及發(fā)生疏水、靜電作用、π-π堆積等，因此噁唑類化合物可發(fā)生多種非共價(jià)鍵相互作用，表現(xiàn)出一些特殊的性能，在醫(yī)藥、農(nóng)藥、材料科學(xué)、化學(xué)、物理等眾多領(lǐng)域均顯示出廣泛的應(yīng)用前景和巨大的開發(fā)價(jià)值尤其是噁唑類化合物與某些生物體內(nèi)的多種酶和受體作用而表現(xiàn)出特殊的生物活性，如抗真菌、抗病毒、抗菌、抗癌、抗驚厥、抗結(jié)核、降血糖等，是新藥研發(fā)的重要領(lǐng)域之一。目前，已有很多含噁唑環(huán)的化合物作為藥物被廣泛地應(yīng)用于臨床研究，如化合物2-(n,n'-二甲基)-4-乙基-5-苯基噁唑和2-(4,5-二甲基)噁唑乙酸具有抗炎和止痛的作用，另外4-甲基-5-(2'-氯乙基)噁唑化合物具有抗驚厥和催眠的作用。在藥物中還有很多利用噁唑類化合物和其他雜環(huán)化合物進(jìn)行鍵聯(lián)，如利奈唑胺、維吉霉素日等，在治療感染性疾病、克服臨床耐藥性方面具有不可替代的功效。目前尚未發(fā)現(xiàn)3-(5-噁唑基)苯酚在美白方面的應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供了3-(5-噁唑基)苯酚在美白方面的應(yīng)用及其制備方法，該化合物對黑色素具有較好的抑制作用，具有優(yōu)良的美白效果。

本發(fā)明采用的技術(shù)手段如下：一種式(1)所示化合物作為有效成分在黑色素抑制劑中的應(yīng)用

一種式(1)所示化合物在制備美白劑中的應(yīng)用

3-(5-噁唑基)苯酚的制備方法：對甲苯磺酰甲基異腈與間羥基苯甲醛作為反應(yīng)物，碳酸鉀作為催化劑，常溫反應(yīng)1.5h～4.5h后，提純。

進(jìn)一步的，所述制備方法具體包括以下步驟：

s1、按摩爾份稱取1份對甲苯磺酰甲基異腈與1.2份間羥基苯甲醛加入甲醇無水處理后的燒杯中，冰浴條件下加入無水甲醇，并在攪拌狀態(tài)下緩慢加入3份碳酸鉀，5min后撤去冰浴裝置，加蓋膠塞；

s2、待反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，經(jīng)柱色譜分離，純化后收集產(chǎn)物。

本發(fā)明的3-(5-噁唑基)苯酚對斑馬魚胚胎黑色素合成具有強(qiáng)烈的抑制作用；且具有很好的皮膚滲透性，安全無毒；制成的美白霜?jiǎng)谏厣L具有較強(qiáng)的抑制作用，美白效果優(yōu)良。本發(fā)明的3-(5-噁唑基)苯酚可作為黑色素抑制劑或美白劑的活性成分在醫(yī)學(xué)或化妝品等領(lǐng)域應(yīng)用。

附圖說明

圖1為3-(5-噁唑基)苯酚(溶劑為氘代二甲亞砜)的核磁h譜；

圖2為3-(5-噁唑基)苯酚(溶劑為氘代二甲亞砜)的核磁c譜；

圖3為加入hn10和未加藥品的空白組的對照圖；

圖4為分別加入hn10、ptu和未加藥品的空白組的斑馬魚胚胎發(fā)育情況對比，圖中的箭頭表示斑馬魚胚胎與給定小分子的處理時(shí)間；

圖5為斑馬魚胚胎在32hpf時(shí)分別加入兩種藥品后，生長至48hpf時(shí)的斑馬魚胚胎發(fā)育情況。

具體實(shí)施方式

以下對本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)施例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。

3-(oxazol-5-yl)phenol即3-(5-噁唑基)苯酚，其化學(xué)式為式(1)

實(shí)施例1(噁唑雜環(huán)類化合物的合成)

對甲苯磺酰甲基異腈(tosmic)與間羥基苯甲醛作為反應(yīng)物，碳酸鉀作為催化劑，常溫反應(yīng)1.5h～4.5h后，提純，檢測。具體實(shí)驗(yàn)過程如下：

a.實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：10ml圓底燒瓶，磁力攪拌子置于烘干箱烘干半小時(shí)，甲醇進(jìn)行無水處理，冷凍冰袋，未拆封1ml，5ml注射器備用，50ml干凈分液漏斗備用，干凈小藥匙備用，調(diào)校分析天平。

b.實(shí)驗(yàn)搭建：取1mmol(195.24mg)tosmic與1.2mmol間羥基苯甲醛加入10ml干燥好的燒杯中(已加入攪拌子)，架在磁力攪拌器上，并將反應(yīng)燒瓶置于冰浴裝置，加入3～4mmol預(yù)先處理好的無水甲醇，打開磁力攪拌器，稱取3mmol碳酸鉀，緩慢加入反應(yīng)燒杯，5min后撤去冰浴裝置，加蓋膠塞。根據(jù)反應(yīng)情況，搭建反應(yīng)10min后使用薄層色譜法檢測反應(yīng)進(jìn)程，之后每隔30min檢測一次反應(yīng)進(jìn)程，直至反應(yīng)徹底。

c.反應(yīng)后處理：待反應(yīng)結(jié)束后，撤出反應(yīng)燒瓶，旋蒸掉反應(yīng)燒瓶中的甲醇，將產(chǎn)物用乙酸乙酯和水轉(zhuǎn)入預(yù)先備好的50ml分液漏斗中萃取，分液后取油層，并加入干燥劑(無水硫酸鈉)，干燥2h。此時(shí)再次使用薄層色譜法再次檢測，并算出rf值。將干燥好的油層置于50ml的干凈燒瓶中旋干，使用柱色譜分離。使用200-300目正相硅膠進(jìn)行裝柱，用石油醚壓柱，待壓好后再上樣。根據(jù)之前算好的rf值配洗脫劑，進(jìn)行洗脫。根據(jù)薄層色譜法選出具有產(chǎn)物的樣管，將選出的產(chǎn)物樣管進(jìn)行選干，收集產(chǎn)物。

d.產(chǎn)物結(jié)構(gòu)檢測：將所得產(chǎn)物進(jìn)行裝樣，溶劑為氘代二甲亞砜，使用核磁共振儀:brukerav-400mhz(瑞士bruker公司)，打1h譜、13c譜。分析所得產(chǎn)物的¹h譜、¹³c譜，確定產(chǎn)物結(jié)構(gòu)，如圖1～2所示，核磁經(jīng)確證得到高純度的3-(5-噁唑基)苯酚，如下表所示:

實(shí)施例2(抑制斑馬魚胚胎黑色素合成實(shí)驗(yàn))

a.實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備

斑馬魚品系：轉(zhuǎn)基因斑馬魚tg(kdrl:egfp):血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)綠色熒光蛋白。

工作液配置：將3-(5-噁唑基)苯酚，用20微升dmso(二甲基亞砜)溶解，4℃儲存。配置200umptu(1-苯基-2-硫脲)，通過阻斷酪氨酸酶活性來抑制黑色素的形成)用作陽性對照。

b.實(shí)驗(yàn)具體方法

利用斑馬魚胚胎進(jìn)行生物活性測試：收集斑馬魚胚胎，在6hpf時(shí)將斑馬魚胚胎放入96孔板中，每孔4枚胚胎，加入不同濃度的工作液(500微升holtbuffer中分別加入0.5，1，2，3微升的小分子儲液)，各小時(shí)段觀察斑馬魚胚胎的生長狀況以及色素抑制情況。

c.實(shí)驗(yàn)結(jié)果具體如下：

hn10代表3-(5-噁唑基)苯酚，ptu代表1-苯基-2-硫脲。使用200um的作為陽性對照，使用1％的dmso作為空白對照組進(jìn)行探究hn10對斑馬魚胚胎黑色素合成的影響。

圖3是加入hn10和未加藥品的空白組的對照圖。觀察兩組斑馬魚的發(fā)育狀況，發(fā)現(xiàn)在31hpf時(shí)，未加藥品的空白組斑馬魚和加入hn10的實(shí)驗(yàn)組斑馬魚背部均有黑色素沉淀，空白組色素沉淀較多，hn10實(shí)驗(yàn)組色素沉淀相對較少，但差距不大；將斑馬魚繼續(xù)培育至51hpf時(shí)，兩組斑馬魚色素沉淀差異較大，加入hn10的實(shí)驗(yàn)組斑馬魚色素沉淀較空白組少很多。

從圖4左側(cè)部分可以看出，在6hpf-24hpf間和6hpf-72hpf間hn10明顯可以抑制斑馬魚胚胎黑色素的形成，并且持續(xù)時(shí)間較長，但時(shí)間較長后胚胎變黃，透明度不高；未進(jìn)行藥物處理的對照組色素沉著很明顯，胚胎身上黑色斑點(diǎn)較多；ptu處理過的陽性對照組胚胎呈現(xiàn)出透明狀態(tài)，處理時(shí)間較長后依然透明度高。

從圖5可以看出斑馬魚胚胎在32hpf時(shí)分別加入兩種藥品后，生長至48hpf時(shí)觀察斑馬魚胚胎發(fā)育情況；仔細(xì)觀察斑馬魚背部的色素細(xì)胞可以發(fā)現(xiàn)未加任何藥品的對照組的斑馬魚背部沉淀了很多黑色素，加入ptu藥品的斑馬魚背部沉淀的色素較少，且顏色較淺呈連續(xù)狀，加入hn10的斑馬魚背部沉淀的色素也較少，且顏色較淺呈現(xiàn)出點(diǎn)狀。

綜上分析ptu和3-(5-噁唑基)苯酚對斑馬魚胚胎黑色素合成的影響，可知化合物3-(5-噁唑基)苯酚對斑馬魚胚胎黑色素合成具有較好的抑制作用。

實(shí)施例3(小鼠實(shí)驗(yàn))

本發(fā)明中3-(5-噁唑基)苯酚的對于km小鼠皮膚滲透性及毒理試驗(yàn)方法如下：

(1)3-(5-噁唑基)苯酚對km小鼠皮膚滲透率的影響

選取5周齡體重15g左右km小鼠作為實(shí)驗(yàn)對象，正常喂養(yǎng)，試驗(yàn)前1天對小鼠背部皮膚進(jìn)行脫毛備皮，24h后頸椎脫臼法處死小鼠，取背面皮膚大小為3cm²左右大小，平行去三只老鼠同一部位皮膚，安裝到sck-1智能透皮儀上，使用生理鹽水配置本發(fā)明的3-(5-噁唑基)苯酚1mm溶液，加入外表皮一側(cè)，0、2、4、6、8、10h分別從下部取樣，10h后統(tǒng)一使用自動(dòng)純化系統(tǒng)對樣本中所含3-(5-噁唑基)苯酚含量，結(jié)果如下表所示：

(2)3-(5-噁唑基)苯酚對km小鼠急性毒理學(xué)的影響

選取5周齡體重15g左右km小鼠作為實(shí)驗(yàn)對象，第一周按照3g/kg灌胃處理，連續(xù)灌胃3天，觀察小鼠2周，詳細(xì)記錄小鼠的行動(dòng)力、活躍程度等各項(xiàng)生理指標(biāo)。2周后未看到任何異常。

由上述實(shí)驗(yàn)可知，3-(5-噁唑基)苯酚能夠良好的透過小鼠皮膚，并且對于km小鼠基本沒有毒性。表明，本發(fā)明的3-(5-噁唑基)苯酚具有很好的皮膚滲透性，安全無毒，可以作為化妝品的美白添加劑。

實(shí)施例4(在美白產(chǎn)品上的應(yīng)用)

將本發(fā)明的3-(5-噁唑基)苯酚應(yīng)用于美白霜?jiǎng)┲谱?，制成的美白霜?jiǎng)┡c對照樣品美白霜?jiǎng)┻M(jìn)行美白測試，對照樣品美白霜?jiǎng)┲泄飧什荻ň哂泻谏匾种谱饔?，本發(fā)明的美白霜?jiǎng)┮约皩φ諛悠访腊姿獎(jiǎng)┑呐浞揭娤卤恚?/p>

將上述含有本發(fā)明的3-(5-噁唑基)苯酚的美白霜?jiǎng)┮约皩φ諛悠访腊姿獎(jiǎng)?，進(jìn)行美白測試實(shí)驗(yàn)。選擇女性志愿者，20～25歲，測量人體皮膚中黑色素含量，對美白霜?jiǎng)┊a(chǎn)品的美白功效進(jìn)行評價(jià)。

采用mexametermx18皮膚色素儀在使用美白霜?jiǎng)┣?天和連續(xù)使用美白霜?jiǎng)?5天后測定其手部皮膚的黑色素含量。

測定環(huán)境：測試環(huán)境溫度(22±1)℃，濕度(50±5)％，取平均值。受試對象每天使用一次美白霜?jiǎng)┊a(chǎn)品，使用方法為：清潔手部皮膚后，擦干，用手將美白霜?jiǎng)┩磕ㄔ谑植科つw上。受試對象在測試期間不使用其他美白產(chǎn)品。測量數(shù)值越高，說明皮膚中黑色素含量越高。

黑色素降低率＝(使用美白霜?jiǎng)┣?天的黑色素含量-連續(xù)使用美白霜?jiǎng)?5天后黑色素含量)÷使用美白霜?jiǎng)┣?天的黑色素含量×100％。黑色素降低率越高，說明美白效果越明顯。測試結(jié)果見下表：

由上表表明，本發(fā)明的3-(5-噁唑基)苯酚的美白霜?jiǎng)┮约皩φ諛悠访腊姿獎(jiǎng)┒加芯哂幸种坪谏厣L的作用，而本發(fā)明的3-(5-噁唑基)苯酚的美白霜?jiǎng)┑暮谏亟档吐曙@著高于對照樣品美白霜?jiǎng)┑慕档吐?，表明本發(fā)明的3-(5-噁唑基)苯酚的美白霜?jiǎng)谏厣L具有更強(qiáng)烈的抑制作用，美白效果更加優(yōu)良。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明保護(hù)的范圍之內(nèi)。