技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及含有雜環(huán)的化合物的醫(yī)藥配制品，具體涉及來自蕓香科植物生物堿類成分的抗瘤藥物制劑。

背景技術(shù)：
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肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，全球肺癌的發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢，尤其在中國等經(jīng)濟發(fā)展中國家。肺癌的病因通常認為與吸煙、職業(yè)因素、空氣污染、電離輻射、飲食和營養(yǎng)、慢性肺部疾病等有關(guān)。目前，肺癌的控制已成為全世界廣泛關(guān)注的問題。最近幾年中醫(yī)藥以其獨特的優(yōu)勢，廣泛用于治療肺癌，并取得了肯定的療效。中醫(yī)藥在改善臨床癥狀、提高生存質(zhì)量和延長生存期方面的優(yōu)勢得到了廣泛的認同。

吳茱萸為蕓香科(rutaceae)植物吳茱萸euodiarutaecarpa(juss)benth.或石虎e.rutaecarpa(juss)benth.var.officinalis(dode)huang或疏毛吳茱萸e.rutaecarpabenth.(juss)var.bodinieri(dode)huang的干燥近成熟果實，是一種常用中藥，在《神農(nóng)本草經(jīng)》中列為中品

吳茱萸堿是來自吳茱萸的黃色片狀結(jié)晶，其分子式為c19h17n3o，分子量為303.36，溶于丙酮，微溶于乙醇、乙醚、氯仿，幾乎不溶于水、石油醚、苯。吳茱萸堿有健胃、鎮(zhèn)痛、止干嘔和止噯酸等功效；有利尿作用；對大腸桿菌有強力的抑制作用；對豬蛔蟲有顯著殺蟲作用；還有收縮子宮及升壓作用。治療早老性癡呆癥及中風(fēng)有一定療效。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供吳茱萸堿的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。

上述在制藥中的新應(yīng)用即為，吳茱萸堿在制備抗肺癌藥物中的應(yīng)用。

上述應(yīng)用中，所述的藥物由吳茱萸堿和醫(yī)學(xué)上可接受的輔料組成。

上述應(yīng)用中，所述的藥物為納米乳劑或硬膠囊劑。

本發(fā)明所述應(yīng)用中的吳茱萸堿可促進肺癌細胞的衰老和細胞周期阻滯，抑制肺癌的發(fā)生和發(fā)展，對肺癌細胞和動物移植瘤的生長具有良好的抑制作用。

附圖說明：

圖1肺癌細胞活力與吳茱萸堿的濃度關(guān)系曲線。

圖2為不同濃度吳茱萸堿對肺癌細胞增殖影響的效果圖，其中，a圖為肺癌細胞增殖的顯微照片，b圖為不同濃度茱萸堿對肺癌細胞增殖影響的條形圖。

圖3為不同濃度吳茱萸堿對肺癌細胞周期的阻滯的效果圖，其中，a～d圖為不同濃度吳茱萸堿對肺癌細胞周期阻滯效果的曲線圖，e圖為不同濃度比較的條形圖。

具體實施方式:

實驗例1：吳茱萸堿對體外肺癌細胞活力的抑制作用

取對數(shù)生長期的腫瘤細胞，以5000/孔接種于96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)過夜，細胞生長狀態(tài)良好后，棄去原有的培養(yǎng)基，然后按照設(shè)計的藥物濃度：吳茱萸堿0，7.5，15，30，45，60，70，80，90，100μm作用于a549肺癌細胞48h后停止培養(yǎng)；然后加入0.5mg/ml的mtt溶液，處理4h后，棄上清，最后加入150μldmso震蕩混勻，置于酶標儀中測定其吸光度值(測定波長為570nm)。結(jié)果如圖1所示，吳茱萸堿可明顯抑制肺癌細胞a549的生長。

實驗例2：edu檢測吳茱萸堿對肺癌細胞的增殖影響

取對數(shù)生長期a549細胞，以5000/孔接種于96孔板中，培養(yǎng)過夜，棄去培養(yǎng)基，分別加入?yún)擒镙菈A0，4，8，16μm處理48h后，棄培養(yǎng)基，用細胞培養(yǎng)基按1000:1的比例稀釋edu溶液，制備適量50μmedu培養(yǎng)基，每孔加入100μl50μmedu培養(yǎng)基孵育2小時，棄培養(yǎng)基；pbs清洗細胞1-2次，每次5分鐘；每孔加入50μl細胞固定液(即含4％多聚甲醛的pbs)室溫孵育30分鐘，棄固定液；每孔加入50μl2mg/ml甘氨酸，脫色搖床孵育5分鐘后，棄甘氨酸溶液；每孔加入100μlpbs，脫色搖床清洗5分鐘，棄pbs；每孔加入100μl的1×apollo^@染色反應(yīng)液，避光、室溫、脫色搖床孵育30分鐘后，棄染色反應(yīng)液；加入100μl滲透劑(0.5％tritonx-100的pbs)脫色搖床清洗2-3次，每次10分鐘，棄滲透劑；用去離子水按100:1的比例稀釋試劑f，制備適量1×hoechst33342反應(yīng)液，避光保存；每孔加入100μl1×hoechst33342反應(yīng)液，避光、室溫、脫色搖床孵育30分鐘后，棄染色反應(yīng)液；每孔每次加入100μlpbs清洗1-3次；染色完后立即在進行觀測。結(jié)果如圖2所示，吳茱萸堿作用肺癌細胞后，明顯抑制了肺癌細胞的增殖。

實驗例3：流式細胞儀分析吳茱萸堿對肺癌細胞周期的影響情況

取對數(shù)生長期a549細胞，以2.5×10⁵/孔接種于六孔板中，培養(yǎng)過夜，棄去培養(yǎng)基，加入?yún)擒镙菈A0，4，6，8μm(微摩爾/升)處理48h后，用胰酶消化、收集細胞、離心、pbs清洗2次，再用預(yù)冷的體積分數(shù)為75％乙醇溶液混懸細胞，密封保存后置于4℃冰箱過夜。次日，離心，pbs洗1次，接著每管細胞中加入500μlpbs溶液[含有25μlpi(1mg/ml)和0.5μlrna酶(10mg/ml)]，渦旋混勻，然后將細胞置于37℃避光孵育30分鐘，充分混勻后，采用流式細胞儀檢測細胞周期的分布情況，樣品于1h內(nèi)檢測完畢。結(jié)果如圖3所示，肺癌細胞經(jīng)吳茱萸堿作用后，細胞的dna的分布表現(xiàn)為g2/m期細胞比率增加。

實驗例4：藥物制劑的制備例

例1(納米乳劑)

稱取吳茱萸堿25mg，以油酸乙酯：聚氧乙烯蓖麻油el-35：peg-400的質(zhì)量比為5:3：1.3稱取總質(zhì)量為35mg，恒溫水浴磁力攪拌6h，得均勻透明的溶液。冷卻到室溫后邊攪拌邊滴加蒸餾水100ml，攪拌30min，形成形成澄清透明的吳茱萸堿納米乳。

例2(硬膠囊劑)

稱取吳茱萸堿30g，加入淀粉35g、糖粉18g和適量的65％乙醇制軟材，過篩網(wǎng)，干燥得到顆粒，過篩整粒后，加入空膠囊中，共制備成硬膠囊。

技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及吳茱萸堿在制備抗肺癌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述應(yīng)用中的吳茱萸堿可促進肺癌細胞的衰老和細胞周期阻滯，抑制肺癌的發(fā)生和發(fā)展，對肺癌細胞和動物移植瘤的生長具有良好的抑制作用。

技術(shù)研發(fā)人員：盧琳琳;劉中秋;陽霞;姬利延;馮潛;王瑩;戚笑笑;吳鵬;朱麗君
受保護的技術(shù)使用者：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：2017.06.02
技術(shù)公布日：2017.08.18