本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一種ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

腫瘤已成為人類生命和健康的主要威脅之一，且發(fā)生率逐年上升?；熥鳛閻盒阅[瘤治療的主要手段之一，由于抗腫瘤藥物對(duì)腫瘤組織缺乏選擇性，在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，損傷正常細(xì)胞，產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用，因而不能達(dá)到良好的抑瘤效果。光熱治療是通過光熱試劑將光能轉(zhuǎn)換為熱能，高溫（大于42℃）直接殺死腫瘤細(xì)胞。近紅外光可有效穿透正常組織到達(dá)腫瘤部位，并減少對(duì)正常組織的傷害。將近紅外光熱療聯(lián)合化療，可顯著提高化療藥物的細(xì)胞毒作用，實(shí)現(xiàn)光熱化療的協(xié)同抗腫瘤作用，提高療效。

針對(duì)腫瘤組織微環(huán)境ph響應(yīng)（ph6.5-7.0）的脂質(zhì)體在血液循環(huán)中帶負(fù)電荷，利于長(zhǎng)循環(huán)；經(jīng)腫瘤酸度活化，發(fā)生ph響應(yīng)性化學(xué)鍵斷裂或電荷解離等，發(fā)生電荷翻轉(zhuǎn)變?yōu)檎姾?，可增?qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的攝取，提高療效、降低毒性。此外，nh4hco3脂質(zhì)體在局部加熱的條件下，可促進(jìn)nh4hco3分解，產(chǎn)生co2氣體，使脂質(zhì)體膜通透性增加，達(dá)到快速釋放藥物的目的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體的應(yīng)用，該脂質(zhì)體應(yīng)用于抗乳腺癌、抗肝癌或抗宮頸癌藥物載體的制備，可實(shí)現(xiàn)光熱療與化療的協(xié)同抗腫瘤作用，提高療效。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體的應(yīng)用，所述ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體應(yīng)用于抗乳腺癌、抗肝癌或抗宮頸癌藥物載體的制備。

所述脂質(zhì)體包括磷脂層和內(nèi)水相，其中磷脂層包含膽固醇（chol）、二棕櫚酰磷脂酰膽堿（dppc）、1,2-二硬脂酸-3-磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（dspe-peg2000）、(2,3-二油?；?丙基)-三甲胺（dotap）和疏水性光熱劑，內(nèi)水相包含nh4hco3和親水性抗腫瘤藥物，并通過靜電吸附將ph敏感性聚合物聚磺胺二甲氧嘧啶（psd）修飾于脂質(zhì)體表面。

所述dppc、chol、dspe-peg2000、dotap和疏水性光熱劑的摩爾比為12:8:1:(1~10):(0.2~1)，脂質(zhì)體磷脂與親水性抗腫瘤藥物的質(zhì)量比為2:1~20:1，脂質(zhì)體磷脂與psd的質(zhì)量比為1:(0.2~5)；所述的脂質(zhì)體磷脂為dppc和dspe-peg2000。

所述疏水性光熱劑為cypate、ir780、au中的任意一種。

所述的親水性抗腫瘤藥物為阿霉素、表阿霉素、柔紅霉素、5-氟尿嘧啶中的任意一種。

所述的ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟：

（1）將脂類混合物（dppc、chol、dspe-peg2000、dotap）和疏水性光熱劑溶解于氯仿和甲醇的混合溶液中；

（2）通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法除去混合溶液，得到膜狀材料，經(jīng)nh4hco3溶液（1~5m）洗脫后，利用細(xì)胞破碎儀超聲，超聲功率為50~400w，超聲時(shí)間為3~20min；

（3）上述溶液用含2~10mmnacl的5~15wt%蔗糖溶液透析后，再加入親水性抗腫瘤藥物，室溫下孵育12~48h，蒸餾水透析6~24h；

（4）加入psd，室溫?cái)嚢?min~8h，即得ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體。

本發(fā)明結(jié)合腫瘤微環(huán)境ph敏感的聚合物psd、光熱試劑的光熱效應(yīng)與nh4hco3脂質(zhì)體的特點(diǎn)，構(gòu)建ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體具有腫瘤組織ph敏感性和近紅外光響應(yīng)性快速釋藥特性，應(yīng)用于抗乳腺癌、抗肝癌或抗宮頸癌藥物載體的制備，可實(shí)現(xiàn)光熱療與化療的協(xié)同作用，提高療效。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：制備的ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體應(yīng)用于抗乳腺癌、抗肝癌或抗宮頸癌藥物載體的制備，可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的攝取，并具有近紅外光響應(yīng)性快速釋藥的特點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)光熱療與化療的協(xié)同抗腫瘤作用，提高抑瘤效果。

附圖說明

圖1是ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體對(duì)荷瘤裸鼠腫瘤生長(zhǎng)(a)和體重(b)的影響。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：一種ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體的制備方法

（1）將脂類混合物（chol15.465mg、dppc44mg、dspe-peg200013.75mg、dotap10.47mg）和cypate2.5mg溶解于30ml氯仿/甲醇（v:v=1:1）的混合溶液；

（2）通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀室溫下旋蒸3h，70rpm/s，得到膜狀材料，經(jīng)nh4hco3溶液（2.7m）洗脫后，利用細(xì)胞破碎儀超聲10min，超聲功率為300w；

（3）上述溶液用含5mmnacl的10wt%蔗糖溶液透析后，以阿霉素和磷脂的質(zhì)量比為0.1加入阿霉素，室溫下孵育24h，蒸餾水透析9h；

（4）以磷脂和psd的質(zhì)量比為1:0.3加入psd，室溫?cái)嚢?0min，即得ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體。

實(shí)施例2：一種ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體的制備方法

（1）將脂類混合物（chol15.465mg、dppc44mg、dspe-peg200013.75mg、dotap20.94mg）和cypate2.5mg溶解于30ml氯仿/甲醇（v:v=1:1）的混合溶液；

（2）通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀室溫下旋蒸3h，100rpm/s，得到膜狀材料，經(jīng)nh4hco3溶液（2.7m）洗脫后，利用細(xì)胞破碎儀超聲10min，超聲功率為300w；

（3）上述溶液用含5mmnacl的10wt%蔗糖溶液透析后，以阿霉素和磷脂的質(zhì)量比為0.1加入阿霉素，室溫下孵育24h，蒸餾水透析9h；

（4）以磷脂和psd的質(zhì)量比為1:2加入psd，室溫?cái)嚢?0min，即得ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體。

實(shí)施例3：一種ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體的細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)

（1）取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的4t1細(xì)胞，用0.25%胰蛋白酶消化、離心（1000r/min，5min）后，用含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基稀釋成1×10⁵/ml的細(xì)胞懸液，每孔2×10⁵個(gè)細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中，每孔2ml，37℃培養(yǎng)24h，棄去培養(yǎng)基，pbs洗滌，分別加入ph為7.4和6.5的含脂質(zhì)體的培養(yǎng)基2ml（阿霉素濃度為20μg/ml），培養(yǎng)4h后實(shí)驗(yàn)組用785nm近紅外光照射5min，繼續(xù)培養(yǎng)2h后棄去培養(yǎng)基，pbs洗滌2次，胰酶消化，pbs重懸離心，去上清，加入300μlpbs重懸，流式細(xì)胞儀測(cè)dox（488nm）攝取。

（2）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與ph=7.4相比，在ph=6.5時(shí)腫瘤細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的攝取量明顯增加；與未經(jīng)激光照射組相比，近紅外光照射組對(duì)阿霉素的攝取量增強(qiáng)明顯。表明脂質(zhì)體的ph敏感性和近紅外光響應(yīng)性快速釋藥明顯增加了腫瘤細(xì)胞對(duì)阿霉素的攝取。

實(shí)施例4：一種ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體對(duì)4t1荷瘤裸鼠的抑瘤實(shí)驗(yàn)，具體步驟如下：

（1）4t1乳腺癌細(xì)胞荷瘤裸鼠模型的建立：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的4t1細(xì)胞用pbs洗滌、0.25%胰酶消化離心（1000r/min，5min），0.9%nacl注射液稀釋后制成1×10⁸/ml的細(xì)胞懸液，用一次性無(wú)菌注射器抽取細(xì)胞懸液，每只裸鼠右腋皮下注射100μl細(xì)胞懸液（1×10⁷個(gè)細(xì)胞/只）。

（2）實(shí)驗(yàn)操作：待接種部位腫瘤長(zhǎng)到80-100mm³，取腫瘤生長(zhǎng)狀態(tài)良好的荷瘤裸鼠分組，按阿霉素10mg/kg的給藥劑量，每組裸鼠右腋皮下注射50μl脂質(zhì)體溶液，激光照射組用785nm近紅外光照射5min（1.6w/cm²），對(duì)照組不進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)中每天觀察并記錄腫瘤的體積及裸鼠的體重，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死裸鼠，取腫瘤剝離干凈后拍照。按下式計(jì)算腫瘤體積：腫瘤體積＝a*b²/2，a（長(zhǎng)徑），b（短徑）。

（3）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：由圖1可知，在14d時(shí)，脂質(zhì)體激光照射組腫瘤體積減小明顯；無(wú)論是否經(jīng)過激光照射，脂質(zhì)體組裸鼠體重變化不大，而游離阿霉素組裸鼠體重減小明顯。說明脂質(zhì)體組在近紅外光照下具有良好的抑瘤效果，可以明顯減少阿霉素的毒副作用。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施方式，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。