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一種促骨骼細胞發(fā)育型螯合鈣的制備方法與流程

文檔序號:11268971閱讀:289來源:國知局
本發(fā)明涉及一種促骨骼細胞發(fā)育型螯合鈣的制備方法,屬于有機鈣領(lǐng)域。
背景技術(shù)
:鈣是人體的重要組成物質(zhì),是人體中所含各種有機和無機元素排行第五大元素,鈣在人體內(nèi)幾乎參與了所有的生命活動。最新的科學(xué)研究表明,人體之所以衰老或者發(fā)生疾病,與鈣的代謝發(fā)生紊亂,使細胞內(nèi)外的鈣濃度發(fā)生變化密切相關(guān)。近年來,越來越多人注意補鈣的問題。理想的鈣劑應(yīng)具備鈣含量高、吸收效率高、無副作用、服用方便、口感好等特點,若含有人體所需要的多種氨基酸、維生素及微量元素等物質(zhì)則更為理想。近年來,國內(nèi)外對補鈣制劑的研究集中在有機鈣方面,但有機鈣鹽也存在不同的毒副作用,如乳酸鈣長期服用容易產(chǎn)生疲勞;葡萄糖酸鈣能引起糖尿病患者血糖升高;醋酸鈣能引起腹瀉等。雖然作為第三代補鈣產(chǎn)品的氨基酸鰲合鈣吸收率高,對人體無害,但是其吸收的鈣質(zhì)并不能有效的促進骨骼細胞的生長和發(fā)育,僅僅吸收鈣質(zhì)已不能達到現(xiàn)有人體補鈣的需求,所以制備一種促進骨骼發(fā)育,使骨骼迅速生長的螯合鈣很有必要。技術(shù)實現(xiàn)要素:本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題:針對現(xiàn)有補鈣用螯合鈣吸收效率雖高,但其利用率較低,無法促進骨骼細胞生長發(fā)育的問題,提供了一種促骨骼細胞發(fā)育型螯合鈣的制備方法。為解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明采用如下所述的技術(shù)方案是:(1)按質(zhì)量比1:5,將三七葉片與杜仲葉片混合并研磨過150目,得混合球磨顆粒,按質(zhì)量比1:10,將混合球磨顆粒與去離子水混合,水浴加熱并離心分離,收集上層清液并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得濃縮液,按體積比1:8,將濃縮液與無水乙醇混合,攪拌并靜置陳化,過濾得濾液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干得干燥提取物,取1~2g干燥提取物、0.1~0.2ml吐溫-80、85~100mldmem細胞培養(yǎng)液攪拌混合并滅菌處理,得改性混合液;(2)取新鮮牛骨并研磨過20目篩,得牛骨顆粒并洗滌干燥,煅燒后碾磨并過200目篩,得煅燒牛骨粉末,按質(zhì)量比1:10,將煅燒牛骨粉末與質(zhì)量分數(shù)1%磷酸氫二銨溶液混合,超聲分散后靜置,過濾得濾餅,得活化煅燒顆粒;(3)按質(zhì)量比1:5,將膠原蛋白與質(zhì)量分數(shù)1%磷酸氫二銨溶液混合,攪拌得膠原蛋白混合液,按質(zhì)量比1:25,將胰蛋白酶添加至膠原蛋白混合液中,攪拌混合并調(diào)節(jié)ph至8.0,水浴加熱制備得酶解混合液;(4)按重量份數(shù)計,分別稱量45~50份酶解混合液、25~30份活化煅燒顆粒和15~20份改性混合液置于燒杯中,攪拌混合并加熱至沸騰,保溫加熱后,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,碾磨并過80目篩,即可制備得一種促骨骼細胞發(fā)育型螯合鈣。步驟(2)所述的牛骨顆粒煅燒溫度為550~600℃。步驟(3)所述的調(diào)節(jié)ph采用的是質(zhì)量分數(shù)5%碳酸氫鈉溶液。步驟(4)所述的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為75~80℃。本發(fā)明與其他方法相比,有益技術(shù)效果是:本發(fā)明將杜仲葉與三七葉混合提取并收集提取物,由于提取物中的杜仲葉提取物具有抑制骨髓間充質(zhì)干細胞向脂肪細胞分化的作用,同時補充骨骼發(fā)育所需要的微量元素,有效提高成骨細胞的活性,促進骨細胞的分化和增殖,三七提取物有效促進毛細血管再生,改善局部微循環(huán),兩者協(xié)同作用,改善成骨細胞增殖環(huán)境后,與牛骨中煅燒制備的羥基磷酸鈣和膠原蛋白復(fù)合,經(jīng)酶解形成多肽,為成骨細胞分化增殖提供鈣源和膠原多肽,從原料和根本上為成骨細胞的發(fā)育進行改良,使成骨細胞生長發(fā)育時對鈣質(zhì)的吸收率大幅提高,有效促進成骨細胞的增殖和生長。具體實施方式首先選取新鮮杜仲葉片和三七葉片,洗凈后自然晾干,按質(zhì)量比1:5,將三七葉片與杜仲葉片混合并研磨,過150目篩得混合球磨顆粒,按質(zhì)量比1:10,將混合球磨顆粒與去離子水混合,在55~60℃下水浴加熱2~3h;待水浴加熱完成后,在2500~3000r/min下離心分離10~15min,收集上層清液并置于45~50℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/5,得濃縮液,按體積比1:8,將濃縮液與無水乙醇混合,在室溫下攪拌混合1~2h后,靜置陳化6~8h,過濾得濾液,將濾液置于45~50℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,得干燥提取物;選取1~2g干燥提取物、0.1~0.2ml吐溫-80、85~100mldmem細胞培養(yǎng)液置于燒杯中,在室溫下攪拌混合25~30min,待攪拌混合完成后,將燒杯置于紫外滅菌裝置下滅菌處理10~15min,制備得改性混合液;選取新鮮牛骨并研磨過20目篩,得牛骨顆粒并用無水乙醇沖洗3~5次,待沖洗完成后,真空冷凍干燥并置于馬弗爐中,在550~600℃下煅燒6~8h后,自然冷卻至室溫,碾磨并過200目篩,得煅燒牛骨粉末;按質(zhì)量比1:10,將煅燒牛骨粉末與質(zhì)量分數(shù)1%磷酸氫二銨溶液混合,在200~300w下超聲分散10~15min,隨后在室溫下靜置6~8h后,過濾得濾餅,制備得活化煅燒顆粒;按質(zhì)量比1:5,將膠原蛋白與質(zhì)量分數(shù)1%磷酸氫二銨溶液混合,在室溫下攪拌25~30min后,制備得膠原蛋白混合液,隨后按質(zhì)量比1:25,將胰蛋白酶添加至膠原蛋白混合液中,攪拌混合并滴加質(zhì)量分數(shù)5%碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)ph至8.0,在35~38℃下水浴加熱10~15min后,制備得酶解混合液;按重量份數(shù)計,分別稱量45~50份酶解混合液、25~30份活化煅燒顆粒和15~20份改性混合液置于燒杯中,攪拌混合并加熱至沸騰,保溫加熱10~15min后,再在75~80℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,碾磨并過80目篩,即可制備得一種促骨骼細胞發(fā)育型螯合鈣。實例1首先選取新鮮杜仲葉片和三七葉片,洗凈后自然晾干,按質(zhì)量比1:5,將三七葉片與杜仲葉片混合并研磨,過150目篩得混合球磨顆粒,按質(zhì)量比1:10,將混合球磨顆粒與去離子水混合,在55℃下水浴加熱2h;待水浴加熱完成后,在2500r/min下離心分離10min,收集上層清液并置于45℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/5,得濃縮液,按體積比1:8,將濃縮液與無水乙醇混合,在室溫下攪拌混合1h后,靜置陳化6h,過濾得濾液,將濾液置于45℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,得干燥提取物;選取1g干燥提取物、0.1ml吐溫-80、85mldmem細胞培養(yǎng)液置于燒杯中,在室溫下攪拌混合25min,待攪拌混合完成后,將燒杯置于紫外滅菌裝置下滅菌處理10min,制備得改性混合液;選取新鮮牛骨并研磨過20目篩,得牛骨顆粒并用無水乙醇沖洗3次,待沖洗完成后,真空冷凍干燥并置于馬弗爐中,在550℃下煅燒6h后,自然冷卻至室溫,碾磨并過200目篩,得煅燒牛骨粉末;按質(zhì)量比1:10,將煅燒牛骨粉末與質(zhì)量分數(shù)1%磷酸氫二銨溶液混合,在200w下超聲分散10min,隨后在室溫下靜置6h后,過濾得濾餅,制備得活化煅燒顆粒;按質(zhì)量比1:5,將膠原蛋白與質(zhì)量分數(shù)1%磷酸氫二銨溶液混合,在室溫下攪拌25min后,制備得膠原蛋白混合液,隨后按質(zhì)量比1:25,將胰蛋白酶添加至膠原蛋白混合液中,攪拌混合并滴加質(zhì)量分數(shù)5%碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)ph至8.0,在35℃下水浴加熱10min后,制備得酶解混合液;按重量份數(shù)計,分別稱量45份酶解混合液、25份活化煅燒顆粒和15份改性混合液置于燒杯中,攪拌混合并加熱至沸騰,保溫加熱10min后,再在75℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,碾磨并過80目篩,即可制備得一種促骨骼細胞發(fā)育型螯合鈣。選取30mg本發(fā)明制備的促骨骼細胞發(fā)育型螯合鈣、180mg米粉、130mg大豆粉和8mg麥芽糖糊精攪拌混合并壓制成片,制備得螯合鈣片劑,隨后選取骨質(zhì)疏松患者,使其服用本發(fā)明制備的螯合鈣片劑,控制攝入量為1片/天即可。實例2首先選取新鮮杜仲葉片和三七葉片,洗凈后自然晾干,按質(zhì)量比1:5,將三七葉片與杜仲葉片混合并研磨,過150目篩得混合球磨顆粒,按質(zhì)量比1:10,將混合球磨顆粒與去離子水混合,在58℃下水浴加熱3h;待水浴加熱完成后,在2800r/min下離心分離13min,收集上層清液并置于48℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/5,得濃縮液,按體積比1:8,將濃縮液與無水乙醇混合,在室溫下攪拌混合2h后,靜置陳化7h,過濾得濾液,將濾液置于48℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,得干燥提取物;選取2g干燥提取物、0.2ml吐溫-80、93mldmem細胞培養(yǎng)液置于燒杯中,在室溫下攪拌混合28min,待攪拌混合完成后,將燒杯置于紫外滅菌裝置下滅菌處理13min,制備得改性混合液;選取新鮮牛骨并研磨過20目篩,得牛骨顆粒并用無水乙醇沖洗4次,待沖洗完成后,真空冷凍干燥并置于馬弗爐中,在580℃下煅燒7h后,自然冷卻至室溫,碾磨并過200目篩,得煅燒牛骨粉末;按質(zhì)量比1:10,將煅燒牛骨粉末與質(zhì)量分數(shù)1%磷酸氫二銨溶液混合,在250w下超聲分散13min,隨后在室溫下靜置7h后,過濾得濾餅,制備得活化煅燒顆粒;按質(zhì)量比1:5,將膠原蛋白與質(zhì)量分數(shù)1%磷酸氫二銨溶液混合,在室溫下攪拌28min后,制備得膠原蛋白混合液,隨后按質(zhì)量比1:25,將胰蛋白酶添加至膠原蛋白混合液中,攪拌混合并滴加質(zhì)量分數(shù)5%碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)ph至8.0,在37℃下水浴加熱13min后,制備得酶解混合液;按重量份數(shù)計,分別稱量48份酶解混合液、28份活化煅燒顆粒和18份改性混合液置于燒杯中,攪拌混合并加熱至沸騰,保溫加熱13min后,再在78℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,碾磨并過80目篩,即可制備得一種促骨骼細胞發(fā)育型螯合鈣。選取40mg本發(fā)明制備的促骨骼細胞發(fā)育型螯合鈣、190mg米粉、140mg大豆粉和9mg麥芽糖糊精攪拌混合并壓制成片,制備得螯合鈣片劑,隨后選取骨質(zhì)疏松患者,使其服用本發(fā)明制備的螯合鈣片劑,控制攝入量為2片/天即可。實例3首先選取新鮮杜仲葉片和三七葉片,洗凈后自然晾干,按質(zhì)量比1:5,將三七葉片與杜仲葉片混合并研磨,過150目篩得混合球磨顆粒,按質(zhì)量比1:10,將混合球磨顆粒與去離子水混合,在60℃下水浴加熱3h;待水浴加熱完成后,在3000r/min下離心分離15min,收集上層清液并置于50℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/5,得濃縮液,按體積比1:8,將濃縮液與無水乙醇混合,在室溫下攪拌混合2h后,靜置陳化8h,過濾得濾液,將濾液置于50℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,得干燥提取物;選取2g干燥提取物、0.2ml吐溫-80、100mldmem細胞培養(yǎng)液置于燒杯中,在室溫下攪拌混合30min,待攪拌混合完成后,將燒杯置于紫外滅菌裝置下滅菌處理15min,制備得改性混合液;選取新鮮牛骨并研磨過20目篩,得牛骨顆粒并用無水乙醇沖洗5次,待沖洗完成后,真空冷凍干燥并置于馬弗爐中,在600℃下煅燒8h后,自然冷卻至室溫,碾磨并過200目篩,得煅燒牛骨粉末;按質(zhì)量比1:10,將煅燒牛骨粉末與質(zhì)量分數(shù)1%磷酸氫二銨溶液混合,在300w下超聲分散15min,隨后在室溫下靜置8h后,過濾得濾餅,制備得活化煅燒顆粒;按質(zhì)量比1:5,將膠原蛋白與質(zhì)量分數(shù)1%磷酸氫二銨溶液混合,在室溫下攪拌30min后,制備得膠原蛋白混合液,隨后按質(zhì)量比1:25,將胰蛋白酶添加至膠原蛋白混合液中,攪拌混合并滴加質(zhì)量分數(shù)5%碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)ph至8.0,在38℃下水浴加熱15min后,制備得酶解混合液;按重量份數(shù)計,分別稱量50份酶解混合液、30份活化煅燒顆粒和20份改性混合液置于燒杯中,攪拌混合并加熱至沸騰,保溫加熱15min后,再在80℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,碾磨并過80目篩,即可制備得一種促骨骼細胞發(fā)育型螯合鈣。選取50mg本發(fā)明制備的促骨骼細胞發(fā)育型螯合鈣、200mg米粉、150mg大豆粉和10mg麥芽糖糊精攪拌混合并壓制成片,制備得螯合鈣片劑,隨后選取骨質(zhì)疏松患者,使其服用本發(fā)明制備的螯合鈣片劑,控制攝入量為2片/天即可。將上述實施例所得促骨骼細胞發(fā)育型螯合鈣與傳統(tǒng)l-天冬氨酸螯合鈣進行檢測,并進行對比,結(jié)果如表一所示。表一:例子血藥達峰濃度(mg/l)血藥體內(nèi)停留時間(h)使用后的骨密度(g/cm2)1#2h,2171.166.4729天,956實例12h,2215.366.7228天,1099實例22h,2248.196.8629天,1118實例32h,2274.587.0945天,1156備注:1#為傳統(tǒng)l-天冬氨酸螯合鈣。由上表可知,本發(fā)明促骨骼細胞發(fā)育型螯合鈣血藥達峰時間短,血藥達峰濃度高,血藥體內(nèi)停留時間長,具有較高的吸收效率和利用度,可有效促進骨骼細胞生長發(fā)育。當(dāng)前第1頁12
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