本發(fā)明涉及藥學領(lǐng)域，特別是涉及一種五味子總木脂素及其制備方法，并進一步涉及所述五味子總木脂素在制備用于治療骨質(zhì)疏松癥的藥物中的用途。

背景技術(shù)：

骨質(zhì)疏松癥(osteoprosis，op)是以骨質(zhì)量減少，骨組織纖維結(jié)構(gòu)退行性改變?yōu)樘卣鳎谴嘈栽黾?，易于發(fā)生骨折的一種全身代謝性骨病。主要表現(xiàn)為腰背疼痛，骨密度降低，易發(fā)生骨折。隨著老齡化社會的到來，骨質(zhì)疏松的發(fā)病率也隨著增高，女性絕經(jīng)后，身體內(nèi)雌激素水平顯著降低，骨丟失加快，骨吸收大于骨形成，造成絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(postmenopausalosteoprosis，pmop)，成為絕經(jīng)后婦女的一種常見病。

《素問·上古天真論》曰：“女子七歲，腎氣盛，齒更發(fā)長；二七，天癸至，任脈通，太沖脈盛……五七，陽明脈衰，面始焦，發(fā)始墮；六七，三陽脈衰于上，面皆焦，發(fā)始白；七七……”“腎藏精主骨生髓”，腎精在骨骼生長發(fā)育過程中的重要性。腎精少，不能生髓，骨失所養(yǎng)，可致骨質(zhì)疏松。在“腎主骨”理論指導(dǎo)下，補腎成為治療骨質(zhì)疏松癥的基本大法。

當雌激素缺乏時，不僅會減弱對骨吸收的抑制，進而影響白細胞介素-6(il-6)、白細胞介素-111(il-11)、腫瘤壞死因子(tnf)等細胞因子在骨代謝中的作用，骨代謝平衡遭到破壞，造成骨質(zhì)疏松。絕經(jīng)后卵巢水平能力下降，雌激素分泌減少，對骨吸收的抑制作用大幅度減低，骨吸收與骨形成保持平衡的狀態(tài)被打破，骨質(zhì)疏松的病理癥狀在微觀結(jié)構(gòu)上表現(xiàn)出來，如骨密度降低、骨小梁排列結(jié)構(gòu)紊亂、連接度降低等。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點，本發(fā)明的目的在于提供五味子總木脂素在制備用于治療骨質(zhì)疏松癥的藥物中的用途，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題。

為實現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明第一方面提供一種五味子總木脂素，所述五味子總木脂素包括五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素。

在本發(fā)明一些實施方式中，所述五味子總木脂素中五味子醇甲的含量為8.09wt％-19.27wt％、五味子醇乙的含量為2.78wt％-5.82wt％、五味子酯甲的含量為2.25wt％-4.14wt％、五味子甲素的含量為1.55wt％-2.51wt％、五味子乙素的含量為1.73wt％-5.99wt％、五味子丙素的含量為0.11wt％-0.51wt％。

本發(fā)明第二方面提供所述的五味子總木脂素的制備方法，包括如下步驟：

1)獲取五味子的提取液；

2)將提取液濃縮、吸附、洗脫后得流出液，即得所述五味子總木脂素。

在本發(fā)明一些實施方式中，所述五味子的提取液為五味子的醇提提取液。

在本發(fā)明一些實施方式中，五味子的提取液的制備方法包括如下步驟：使用提取溶劑對五味子進行一次以上的提取，合并各次提取的提取液。

在本發(fā)明一些實施方式中，各次提取的提取溫度室溫至溶劑回流的溫度。

在本發(fā)明一些實施方式中，各次提取的提取時間為0.5-2小時。

在本發(fā)明一些實施方式中，各次提取時的固液比為每1kg待提取物使用3.2-3.6l溶劑。

在本發(fā)明一些實施方式中，提取溶劑選自乙醇和/或甲醇。

在本發(fā)明一些實施方式中，還對提取液進行過濾，過濾優(yōu)選使用孔徑為0.3-0.5μm的濾膜。

在本發(fā)明一些實施方式中，所述五味子為五味子的果實，優(yōu)選為干燥和/或成熟果實。

在本發(fā)明一些實施方式中，所述五味子為五味子粉末，優(yōu)選目數(shù)為14-20目。

在本發(fā)明一些實施方式中，吸附時所使用的吸附劑選自硅藻土、硅膠中的一種或多種的組合。

在本發(fā)明一些實施方式中，使用硅藻土進行吸附，五味子與硅藻土的優(yōu)選質(zhì)量比為2.5：1-1.5。

在本發(fā)明一些實施方式中，洗脫時所使用的洗脫劑選自石油醚、正己烷、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一種或多種的組合。

在本發(fā)明一些實施方式中，使用石油醚和/或三氯甲烷作為洗脫劑進行洗脫，石油醚的沸程優(yōu)選為60-90℃。

在本發(fā)明一些實施方式中，優(yōu)選先使用石油醚和/或正己烷進行洗脫，再使用三氯甲烷和/或二氯甲烷和/或乙酸乙酯進行洗脫。

在本發(fā)明一些實施方式中，流出液還進行濃縮和/或脫溶，即得所述五味子總木脂素。

本發(fā)明第三方面提供五味子總木脂素在制備用于治療骨質(zhì)疏松癥的藥物中的用途。

在本發(fā)明一些實施方式中，所述骨質(zhì)疏松癥為原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。

在本發(fā)明一些實施方式中，所述骨質(zhì)疏松癥為雌激素缺乏所導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松癥，更具體的，所述骨質(zhì)疏松癥為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥。

在本發(fā)明一些實施方式中，所述骨質(zhì)疏松癥為il-6和/或il-11表達上升所導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松癥。

本發(fā)明第四方面提供五味子總木脂素在制備il-6和/或il-11抑制劑中的用途。

在本發(fā)明一些實施方式中，所述五味子總木脂素包括五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素。

在本發(fā)明一些實施方式中，所述五味子總木脂素包括如下組分：五味子醇甲的含量為8.09wt％-19.27wt％、五味子醇乙的含量為2.78wt％-5.82wt％、五味子酯甲的含量為2.25wt％-4.14wt％、五味子甲素的含量為1.55wt％-2.51wt％、五味子乙素的含量為1.73wt％-5.99wt％、五味子丙素的含量為0.11wt％-0.51wt％。

本發(fā)明第五方面提供一種藥物組合物，所述藥物組合物包括如權(quán)利要求1-2任一權(quán)利要求所述的五味子總木脂素。

在本發(fā)明一些實施方式中，所述藥物組合物還包括藥學上可接受的載體。

附圖說明

圖1為各組大鼠股骨bv/tv的變化示意圖；

圖2為各組大鼠股骨tb.n的變化示意圖；

圖3為各組大鼠股骨tb.th的變化示意圖；

圖4為各組大鼠股骨tb.sp的變化示意圖；

圖5為各組大鼠股骨smi的變化示意圖；

圖6為各組大鼠脛骨骨髓中il-6蛋白表達的變化示意圖；

圖7為各組大鼠脛骨骨髓中il-6mrna表達的變化示意圖；

圖8為各組大鼠脛骨骨髓中il-11蛋白表達的變化示意圖；

圖9為各組大鼠脛骨骨髓中il-11mpna的變化示意圖；

圖10為空白對照組大鼠骨小梁三維重建圖像；

圖11為假手術(shù)組大鼠骨小梁三維重建圖像；

圖12為模型組大鼠骨小梁三維重建圖像；

圖13為陽性對照組大鼠骨小梁三維重建圖像；

圖14為五味子總木脂素小劑量組大鼠骨小梁三維重建圖像；

圖15為五味子總木脂素中劑量組大鼠骨小梁三維重建圖像；

圖16為五味子總木脂素大劑量組大鼠骨小梁三維重建圖像；

圖17為空白對照組大鼠脛骨骨髓中il-6蛋白表達示意圖(免疫組化法，×40)；

圖18為假手術(shù)組大鼠脛骨骨髓中il-6蛋白表達示意圖(免疫組化法，×40)；

圖19為模型組大鼠脛骨骨髓中il-6蛋白表達示意圖(免疫組化法，×40)；

圖20為陽性對照組大鼠脛骨骨髓中il-6蛋白表達示意圖(免疫組化法，×40)；

圖21為五味子總木脂素小劑量組大鼠脛骨骨髓中il-6蛋白表達示意圖(免疫組化法，×40)；

圖22為五味子總木脂素中劑量組大鼠脛骨骨髓中il-6蛋白表達示意圖(免疫組化法，×40)；

圖23為五味子總木脂素大劑量組大鼠脛骨骨髓中il-6蛋白表達示意圖(免疫組化法，×40)；

圖24為空白對照組大鼠脛骨骨髓中il-6mrna表達示意圖(原位雜交法，×40)；

圖25為假手術(shù)組大鼠脛骨骨髓中il-6mrna表達示意圖(原位雜交法，×40)；

圖26為模型組大鼠脛骨骨髓中il-6mrna表達示意圖(原位雜交法，×40)；

圖27為陽性對照組大鼠脛骨骨髓中il-6mrna表達示意圖(原位雜交法，×40)；

圖28為五味子總木脂素小劑量組大鼠脛骨骨髓中il-6mrna表達示意圖(原位雜交法，×40)；

圖29為五味子總木脂素中劑量組大鼠脛骨骨髓中il-6mrna表達示意圖(原位雜交法，×40)；

圖30為五味子總木脂素大劑量組大鼠脛骨骨髓中il-6mrna表達示意圖(原位雜交法，×40)；

圖31為空白對照組大鼠脛骨骨髓中il-11蛋白表達示意圖(免疫組化法，×40)；

圖32為假手術(shù)組大鼠脛骨骨髓中il-11蛋白表達示意圖(免疫組化法，×40)；

圖33為模型組大鼠脛骨骨髓中il-11蛋白表達示意圖(免疫組化法，×40)；

圖34為陽性對照組大鼠脛骨骨髓中il-11蛋白表達示意圖(免疫組化法，×40)；

圖35為五味子總木脂素小劑量組大鼠脛骨骨髓中il-11蛋白表達示意圖(免疫組化法，×40)；

圖36為五味子總木脂素中劑量組大鼠脛骨骨髓中il-11蛋白表達示意圖(免疫組化法，×40)；

圖37為五味子總木脂素大劑量組大鼠脛骨骨髓中il-11蛋白表達示意圖(免疫組化法，×40)；

圖38為空白對照組大鼠脛骨骨髓中il-11mrna表達示意圖(原位雜交法，×40)；

圖39為假手術(shù)組大鼠脛骨骨髓中il-11mrna表達示意圖(原位雜交法，×40)；

圖40為模型組大鼠脛骨骨髓中il-11mrna表達示意圖(原位雜交法，×40)；

圖41為陽性對照組大鼠脛骨骨髓中il-11mrna表達示意圖(原位雜交法，×40)；

圖42為五味子總木脂素小劑量組大鼠脛骨骨髓中il-11mrna表達示意圖(原位雜交法，×40)；

圖43為五味子總木脂素中劑量組大鼠脛骨骨髓中il-11mrna表達示意圖(原位雜交法，×40)；

圖44為五味子總木脂素大劑量組大鼠脛骨骨髓中il-11mrna表達示意圖(原位雜交法，×40)。

具體實施方式

本發(fā)明發(fā)明人經(jīng)過大量探索實驗發(fā)現(xiàn)，五味子總木脂素能夠有效抑制il-6和/或il-11蛋白及其mrna的表達，從而可以用于治療骨質(zhì)疏松癥，在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。

本發(fā)明一方面提供一種五味子總木脂素，所述五味子總木脂素通?？梢园ㄎ逦蹲哟技?schisandrin，7432-28-2)、五味子醇乙(schisandrolb，58546-54-6)、五味子酯甲(schisantherina，58546-56-8)、五味子甲素(schisandrina，61281-38-7)、五味子乙素(schisandrinb，61281-37-6)、五味子丙素(schisandrinc，61301-33-5)等組分。所述五味子總木脂素通?？梢詮哪咎m科植物五味子中提取獲得，所述五味子可以是北五味子(schisandrachinernsis(turcz.)baill.)。

本發(fā)明所提供的五味子總木脂素中，五味子醇甲的含量通常不低于0.4wt％，具體可以為8.09wt％-19.27wt％，在本發(fā)明一具體實施方式中，所述五味子醇甲的含量可以約為15.58wt％。本發(fā)明中的“約”通常是指在指定數(shù)值以上或以下0.5％-10％的范圍內(nèi)變動，例如在指定數(shù)值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范圍內(nèi)變動。

本發(fā)明所提供的五味子總木脂素中，五味子醇乙的含量可以為2.78wt％-5.82wt％，在本發(fā)明一具體實施方式中，所述五味子醇乙的含量可以約為4.01wt％。

本發(fā)明所提供的五味子總木脂素中，五味子酯甲的含量可以為2.25wt％-4.14wt％，在本發(fā)明一具體實施方式中，所述五味子酯甲的含量可以約為3.54wt％。

本發(fā)明所提供的五味子總木脂素中，五味子甲素的含量可以為1.55wt％-2.51wt％，在本發(fā)明一具體實施方式中，所述五味子甲素的含量可以約為2.04wt％。

本發(fā)明所提供的五味子總木脂素中，五味子乙素的含量可以為1.73wt％-5.99wt％，在本發(fā)明一具體實施方式中，所述五味子乙素的含量可以約為2.90wt％。

本發(fā)明所提供的五味子總木脂素中，五味子丙素的含量可以為0.11wt％-0.51wt％，在本發(fā)明一具體實施方式中，所述五味子丙素的含量可以約為0.20wt％。

本發(fā)明所提供的五味子總木脂素中，五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素之間的比例可以是例如8.09-19.27：2.78-5.82：2.25-4.14：1.55-2.51：1.73-5.99：0.11-0.51。

本發(fā)明另一方面提供所述五味子總木脂素的制備方法，所述制備方法可以包括：獲取五味子的提取液。所述五味子的提取液通常可以為五味子的醇提提取液，所述醇提通常指利用醇類溶劑的溶解性，將醇類溶劑作為溶劑對物質(zhì)進行分離提純的方法，所述醇類溶劑通常可以是例如甲醇、乙醇等，優(yōu)選為無水乙醇。獲取五味子的提取液時，通?？梢詫⑦m量的溶劑與待提取物(五味子)進行混合，利用溶劑的溶解性將待提取物(五味子)中的可溶性物質(zhì)(可被溶劑溶解的物質(zhì))溶出，從而獲得提取液。所述待提取物(五味子)可以是五味子的果實，通常為干燥和/或成熟的五味子的果實。待提取物(五味子)通?？梢允欠勰畹模瑥亩梢蕴嵘崛⌒?，例如，待提取物可以為目數(shù)為14-20目的粉末。對待提取物(五味子)進行提取的提取溫度可以是室溫至溶劑回流的溫度，具體例如可以是溶劑回流的溫度。提取過程中，可以對待提取物(五味子)進行一次以上的提取，提取之后合并各次提取的提取液，以保證待提取物(五味子)中的可溶性物質(zhì)被充分地溶出。本領(lǐng)域技術(shù)人員可對提取時間和提取時的固液比進行適當調(diào)整，以使得待提取物中的可溶性物質(zhì)被充分溶出，例如，每次提取的時間可以是0.5至2小時，再例如，每次提取時待提取物與溶劑的比例可以是每1kg待提取物使用3.2-3.6l溶劑。獲得提取液以后，還可以對提取液進行過濾，以除去提取液中的一些難容和/或不溶的物質(zhì)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)提取液的情況選擇合適的過濾條件，例如可以使用孔徑為0.3-0.5μm的濾膜進行過濾。

本發(fā)明所提供的五味子總木脂素的制備方法還可以包括：將提取液濃縮、吸附、洗脫后得流出液，即得所述五味子總木脂素。本領(lǐng)域技術(shù)人員可選擇合適的吸附劑和/或洗脫劑的種類和使用量用于對提取液進行吸附和/或脫附，例如，吸附劑可以是硅藻土、硅膠等，優(yōu)選為硅藻土。再例如，待提取物(五味子)與硅藻土的質(zhì)量比可以是2.5：1-1.5，再例如，脫附時可以使用石油醚、正己烷、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯等作為洗脫劑進行洗脫，優(yōu)選的脫附劑為石油醚和/或三氯甲烷，再例如，洗脫時可以先使用石油醚和/或正己烷進行洗脫，再使用三氯甲烷和/或二氯甲烷和/或乙酸乙酯進行洗脫。石油醚的沸程可以為60-90℃，待提取物(五味子)與石油醚的用量比可以為每2.5kg待提取物使用5.0l-10.0l石油醚，待提取物(五味子)與三氯甲烷的用量比可以為每2.5kg待提取物使用5.0l-10.0l三氯甲烷，洗脫過程中，柱溫可以為15-30℃，例如可以為室溫，通?？梢韵仁褂檬兔堰M行洗脫、再使用三氯甲烷進行洗脫。所得流出液通常還可以進行濃縮和/或脫溶，以獲得合適形態(tài)的五味子總木脂素。

本發(fā)明另一方面提供五味子總木脂素在制備用于治療骨質(zhì)疏松癥的藥物中的用途。在本申請中，“治療”包括藥學和/或生理效果的預(yù)防性、治愈性或緩和性處置，該效果可以是指減少適應(yīng)癥的一種或多種癥狀或者完全消除適應(yīng)癥，或阻滯、延遲適應(yīng)癥的發(fā)生和/或降低適應(yīng)癥發(fā)展或惡化的風險。

在本申請中，骨質(zhì)疏松癥通常指由于骨量減少和/或骨微結(jié)構(gòu)破壞所導(dǎo)致的骨脆性增加和/或骨折風險上升的適應(yīng)癥，通常為全身性適應(yīng)癥。骨質(zhì)疏松癥通?？梢园ㄔl(fā)性骨質(zhì)疏松癥、繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥和特發(fā)性骨質(zhì)疏松等。原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥通常指由于絕經(jīng)和/或年齡上升所引起的骨量減少和/或骨微結(jié)構(gòu)破壞，從而導(dǎo)致骨的脆性增加和/或骨折風險上升的的適應(yīng)癥，原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥通常可以包括絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥和老年性骨質(zhì)疏松癥。繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥通常指由于疾病和/或藥物等原因所致的骨量減少和/或骨微結(jié)構(gòu)破壞，從而導(dǎo)致骨的脆性增加和/或骨折風險上升的適應(yīng)癥。特發(fā)性骨質(zhì)疏松癥通常指男性發(fā)病年齡小于50歲、女性發(fā)病年齡小于40歲的無潛在疾病、發(fā)病原因不明的骨質(zhì)疏松癥。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥通常指由于雌激素缺乏導(dǎo)致骨量減少和/或骨微結(jié)構(gòu)破壞，從而導(dǎo)致骨的脆性增加和/或骨折風險上升的適應(yīng)癥。老年性骨質(zhì)疏松癥通常指由于年齡上升所引起的骨質(zhì)量減少和/或骨的微觀結(jié)構(gòu)退化，從而導(dǎo)致骨的脆性增加和/或骨折風險上升的適應(yīng)癥。

本發(fā)明所提供的五味子總木脂素經(jīng)藥效試驗驗證可以使得切除大鼠卵巢所導(dǎo)致的生理現(xiàn)象(例如，股骨bv/tv的減少、股骨tb.th的減少、股骨tb.n的減少，股骨tb.sp的增加、股骨smi的增加等)在一定程度上發(fā)生逆轉(zhuǎn)，還可以使得切除大鼠卵巢所導(dǎo)致的il-6和/或il-11蛋白和/或它們的mrna表達升高發(fā)生逆轉(zhuǎn)，從而表明本發(fā)明所提供的五味子總木脂素對雌激素缺乏所導(dǎo)致的骨缺陷(例如，骨質(zhì)量減少和/或骨的微觀結(jié)構(gòu)退化等)具有治療作用，也可以表明本發(fā)明所提供的五味子總木脂素對il-6和/或il-11蛋白和/或它們的mrna的表達具有抑制作用，從而表明本發(fā)明所提供的五味子總木脂素對il-6和/或il-11表達上升(相對于正常水平)所導(dǎo)致的骨缺陷(例如，可以是骨質(zhì)量減少和/或骨的微觀結(jié)構(gòu)退化等)具有治療作用?？梢?，本發(fā)明所提供的五味子總木脂素對于骨質(zhì)疏松癥具有治療作用，更具體可以是原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥，進一步具體可以是絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥。

本發(fā)明另一方面提供五味子總木脂素在制備il-6和/或il-11抑制劑中的用途。本發(fā)明所提供的五味子總木脂素經(jīng)藥效試驗驗證可以使得切除大鼠卵巢所導(dǎo)致的il-6和/或il-11蛋白和/或它們的mrna表達升高發(fā)生逆轉(zhuǎn)，從而可以表明本發(fā)明所提供的五味子總木脂素對il-6和/或il-11蛋白和/或它們的mrna的表達具有抑制作用，可以作為或者用于制備il-6和/或il-11的抑制劑。

本發(fā)明另一方面提供一種藥物組合物，所述藥物組合物包括所述五味子總木脂素，更具體可以包括治療有效量的所述五味子總木脂素，所述治療有效量通常指一用量在經(jīng)過適當?shù)慕o藥期間后，能夠達到治療的效果。

本發(fā)明的藥物組合物還可以包括至少一種藥學上可接受的載體，所述藥學上可接受的載體通常指用于給藥的載體，這些物質(zhì)本身通常并不是活性成分，且施用后沒有過分的毒性。合適的載體是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的，例如，可參見remington'spharmaceuticalsciences(mackpub.co.，n.j.1991)中關(guān)于藥學上可接受的載體的相關(guān)內(nèi)容。

本發(fā)明的藥物組合物可以適于任何形式的給藥，例如可以是通過肺、鼻、直腸和/或靜脈內(nèi)給藥，更具體可以是通過靜脈內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、皮下給藥、鞘內(nèi)給藥、直腸給藥、經(jīng)皮給藥、經(jīng)粘膜給藥或經(jīng)鼻給藥等。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)藥物的給藥途徑，將本發(fā)明的藥物組合物可以被配制成不同藥物形式的藥物(藥劑)，例如可以是溶液、懸浮液、可復(fù)溶的干制品、粉劑、片劑、顆粒劑、軟膏、凝膠、霜劑、洗劑、乳劑、栓劑、貼劑或噴霧劑等。

以下通過特定的具體實例說明本發(fā)明的實施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可由本說明書所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點與功效。本發(fā)明還可以通過另外不同的具體實施方式加以實施或應(yīng)用，本說明書中的各項細節(jié)也可以基于不同觀點與應(yīng)用，在沒有背離本發(fā)明的精神下進行各種修飾或改變。

在進一步描述本發(fā)明具體實施方式之前，應(yīng)理解，本發(fā)明的保護范圍不局限于下述特定的具體實施方案；還應(yīng)當理解，本發(fā)明實施例中使用的術(shù)語是為了描述特定的具體實施方案，而不是為了限制本發(fā)明的保護范圍；在本發(fā)明說明書和權(quán)利要求書中，除非文中另外明確指出，單數(shù)形式“一個”、“一”和“這個”包括復(fù)數(shù)形式。

當實施例給出數(shù)值范圍時，應(yīng)理解，除非本發(fā)明另有說明，每個數(shù)值范圍的兩個端點以及兩個端點之間任何一個數(shù)值均可選用。除非另外定義，本發(fā)明中使用的所有技術(shù)和科學術(shù)語與本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的意義相同。除實施例中使用的具體方法、設(shè)備、材料外，根據(jù)本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員對現(xiàn)有技術(shù)的掌握及本發(fā)明的記載，還可以使用與本發(fā)明實施例中所述的方法、設(shè)備、材料相似或等同的現(xiàn)有技術(shù)的任何方法、設(shè)備和材料來實現(xiàn)本發(fā)明。

除非另外說明，本發(fā)明中所公開的實驗方法、檢測方法、制備方法均采用本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)的分子生物學、生物化學、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和分析、分析化學、細胞培養(yǎng)、重組dna技術(shù)及相關(guān)領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)。這些技術(shù)在現(xiàn)有文獻中已有完善說明，具體可參見sambrook等molecularcloning：alaboratorymanual，secondedition，coldspringharborlaboratorypress，1989andthirdedition，2001；ausubel等，currentprotocolsinmolecularbiology，johnwiley&sons，newyork，1987andperiodicupdates；theseriesmethodsinenzymology，academicpress，sandiego；wolffe，chromatinstructureandfunction，thirdedition，academicpress，sandiego，1998；methodsinenzymology，vol.304，chromatin(p.m.wassarmananda.p.wolffe，eds.)，academicpress，sandiego，1999；和methodsinmolecularbiology，vol.119，chromatinprotocols(p.b.becker，ed.)humanapress，totowa，1999等。

實施例中所使用的材料和儀器的具體信息如下：

sd大鼠，spf級，雌性，體重210±20g，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心提供，許可證號：scxk-(軍)2012-0004，在中國中醫(yī)科學院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所清潔級實驗動物室內(nèi)飼養(yǎng)，實驗動物室許可證號：syxk(京)2010-0032。

戊酸雌二醇片：拜耳醫(yī)藥保健有限公司廣州分公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號：101a，規(guī)格：1mg/片。臨用前，碾碎，用1.07wt％吐溫80水溶液配制成濃度為0.015mg/ml的混懸液。

戊巴比妥鈉：德國merck公司生產(chǎn)，批號：20131206。

吐溫80：西隴化工股份有限公司生產(chǎn)，批號：1304121，化學純。

多聚甲醛：國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)，批號：20140604。

多聚賴氨酸：武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)，批號：09f09a03。

大鼠il-6抗體：美國圣克魯斯生物技術(shù)公司生產(chǎn)，批號：h2214。

大鼠il-11抗體：武漢博特歐生物科技有限公司生產(chǎn)，批號：k10210。

goatabcstainingsystem：美國圣魯科斯生物技術(shù)公司生產(chǎn)，批號：c2014。

rabbitabcstainingsystem：美國圣魯科斯生物技術(shù)公司生產(chǎn)，批號：c2014。

il-6原位雜交檢測試劑盒：武漢博士德生物公司工程有限公司產(chǎn)品，批號：003620512-136040hl。采用il-6的寡核苷酸探針，經(jīng)地高辛標記，針對大鼠、小鼠的il-6靶基因的mrna序列為：

(1)5’-ctccgcaagagacttccagccagttgcctt—3’；

(2)5’-cttccaaactggatataaccaggaaatttg—3’；

(3)5’-atttctaaaggtcactatgaggtctactcg—3’。

il-11原位雜交檢測試劑盒：武漢博士德生物公司工程有限公司產(chǎn)品，批號：01579tw2082325040uk。采用針對il-11的寡核苷酸探針，經(jīng)地高辛標記，其中針對大鼠il-11靶基因mrna的序列為：

(1)5’-agagacaaattcccagctgatggagaccacaatct-3’；

(2)5’-tcctacttccgacatgtacagtggttgcgccgggc-3’；

(3)5’-caagcccgactggaacggctacttcgtcgcttaca-3’。

skyscan1174x-raymicrotomograph(micro-ct)：比利時，bruker公司；

qwinprov3.5.0圖像分析系統(tǒng)：德國，leica公司；

leicadm6000b正置顯微鏡：德國，leica公司；

cryotomefse冷凍切片機：美國，thermo公司。

統(tǒng)計學分析：實施例中的實驗結(jié)果皆以均數(shù)±標準差(x±s)表示，采用spss20.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理。若數(shù)據(jù)為正態(tài)分布，則采用單因素方差分析進行處理：方差齊性的，組間兩兩比較采用lsd檢驗；方差不齊的則采用dunnett，st3檢驗。非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，采用kruskal-wallis1-wayanova(ksamples)進行檢驗：組間兩兩比較，采用stepwisestep-down法。

實施例1

五味子總木脂素的制備：

將目數(shù)為14-20目的五味子藥材粉末2.5kg加入無水乙醇8.5l，浸泡過夜后，加熱回流提取2h，同法重復(fù)回流提取3次后，合并濾液，減壓蒸餾回收溶劑，加熱濃縮至粘稠態(tài)后，得到五味子粉末的浸膏；將該五味子粉末的浸膏加入硅藻士1.2kg攪拌，減壓干燥(60℃)揮干溶劑后，用粉碎機研磨成目數(shù)為20-30目的浸膏粉末后，放入玻璃柱中，先用沸程為60‐90℃的石油醚6.0l于室溫進行一次洗脫，至6.0l石油醚全部洗脫完畢后，再用6.0l三氯甲烷于室溫進行二次洗脫，至6.0l三氯甲烷全部洗脫完畢后，收集二次洗脫所得流出液，即得五味子總木脂素。對所得五味子總木脂素中的主要組分含量進行測定，結(jié)果如下：五味子醇甲15.58wt％，五味子醇乙4.01wt％，五味子酯甲3.54wt％，五味子甲素2.04wt％，五味子乙素2.90wt％，五味子丙素0.20wt％。

臨用前，按五味子總木脂素的總重量計，用1.07wt％吐溫80水溶液分別配制成濃度為8.05mg/ml、16.10mg/ml和32.20mg/ml的混懸液。

實施例2

動物分組及處理：

將92只大鼠按體重隨機分為3組：空白對照組12只，假手術(shù)組12只，造模組68只。對造模組大鼠進行卵巢切除手術(shù)：用戊巴比妥鈉45mg/kg體重對大鼠進行腹腔注射麻醉。側(cè)臥位固定，于最末肋骨下端，脊柱外側(cè)約1cm處與腋中線交叉處，進行剃毛，暴露術(shù)野。碘酊、75％酒精消毒后，作縱行切口，約1cm-1.5cm。切開皮膚、腹部肌肉和肌膜，將卵巢及周圍脂肪團輕輕拉出切口外，手術(shù)縫合線結(jié)扎卵巢下端輸卵管，切除卵巢。然后，縫合切口，并敷以消炎粉以防感染。同法切除另一側(cè)卵巢。假手術(shù)組的手術(shù)過程同上，只是切除卵巢周圍小塊的脂肪組織，但不摘除卵巢。手術(shù)過程中造模組有1只大鼠死亡。術(shù)后3周，待大鼠傷口愈合后，再將造模組67大鼠按體重隨機分為5組：模型組12只；陽性對照組14只；五味子總木脂素小劑量組13只，中劑量組14只，大劑量組14只。分組后，開始對各給藥組大鼠灌胃給藥：五味子總木脂素小、中、大劑量組分別給予濃度為8.05mg/ml、16.10mg/ml和32.20mg/ml的五味子總木脂素混懸液(實施例1中配置)，給藥體積為12ml/kg體重，給藥劑量分別為96.6mg/kg體重、193.2mg/kg體重和386.4mg/kg體重。陽性對照組灌胃給予濃度為0.015mg/ml的戊酸雌二醇溶液，給藥體積為12ml/kg體重，給藥劑量為0.18mg/kg體重。以上各組大鼠給藥，每天1次，連續(xù)6天，休息1天后，再給藥6天，如此給藥13周。每周稱體重一次，據(jù)此調(diào)整給藥劑量?？瞻讓φ战M、假手術(shù)組、模型組按上法灌胃給予等體積的1.07wt％吐溫80水溶液。

給藥結(jié)束后，給各組大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉45mg/kg體重進行麻醉，然后處死。取左側(cè)股骨，福爾馬林固定。取右側(cè)脛骨近端1/3，剔除骨組織周圍的軟組織，用4wt％多聚甲醛(用0.01mpbs配制，ph7.2，含1‰depc)固定，置于4℃冰箱48h，用于制作脫鈣冰凍切片。

實施例3

骨組織形態(tài)指標檢測：

檢測前，將左側(cè)股骨取出，在生理鹽水中浸泡24h后，采用micro-ct對其進行組織形態(tài)指標檢測：將股骨放置于micro-ct的標本管內(nèi)，并用濕紙巾纏繞固定，防止掃描過程中標本的脫水及移位。采用skyscan1174型micro-ct的scanner軟件進行掃描，參數(shù)設(shè)定為：電壓50kv，電流800μa，斷層圖像分辨率1304pixel×1024pixel，掃描空間分辨率12μm，旋轉(zhuǎn)角度0.8度，曝光時間5300ms。

掃描完成后，用n-recon軟件進行三維重構(gòu)，各組的大鼠骨小梁三維重建圖像參見圖10-圖16，最后用ct-an軟件進行三維分析(以上兩款軟件均為skyscan1174型micro-ct自帶軟件)。

感興趣區(qū)域選擇在距生長板1mm以下，厚度為1.5mm的骨髓腔區(qū)域。分析得到以下參數(shù)：

骨體積分數(shù)(bv/tv)：骨小梁的總體積與感興趣區(qū)域的骨髓腔體積；

骨小梁數(shù)量(tb.n)：表示每1mm內(nèi)的骨小梁數(shù)量；

骨小梁厚度(tb.th)：骨小梁的平均厚度；

骨小梁分離度(tb.sp)：骨小梁之間的平均距離；

結(jié)構(gòu)模型指數(shù)(smi)：反應(yīng)骨小梁呈“棒狀”還是“板狀”的指標，越接近3表示骨小梁越呈棒狀。

1)各組大鼠股骨bv/tv的變化如表1和圖1所示：

表1

注：表1中，與假手術(shù)組比較：*p<0.05，**p<0.01；與模型組比較：△p<0.05，△△p<0.01；三個劑量組之間比較：與小劑量組比較：▲p<0.05，▲▲p<0.01；與中劑量組比較：#p<0.05，##p<0.01。

從表1、圖1可以看出，與假手術(shù)組比較，模型組、陽性對照組以及五味子總木脂素小、中、大劑量組大鼠股骨bv/tv均顯著減少。與模型組比較，中劑量組、大劑量組和陽性對照組的bv/tv均顯著增加；而小劑量組則無顯著性變化。三個劑量組之間比較，中劑量組、大劑量組的bv/tv明顯高于小劑量組；大劑量組與中劑量組比較，無顯著性差異。

2)各組大鼠股骨tb.n的變化如表2和圖2所示：

表2

注：表2中，與假手術(shù)組比較：*p<0.05，**p<0.01；與模型組比較：△p<0.05，△△p<0.01；三個劑量組之間比較：與小劑量組比較：▲p<0.05，▲▲p<0.01；與中劑量組比較：#p<0.05，##p<0.01。

從表2、圖2可以看出，模型組、陽性對照組以及五味子總木脂素小、中、大劑量組大鼠股骨tb.n顯著少于假手術(shù)組。中劑量組、大劑量組和陽性對照組與模型組比較，tb.n均顯著增多；小劑量組與之比較，無顯著性變化。三個劑量組之間比較，中劑量組、大劑量組與小劑量組比較，tb.n顯著增多；大劑量組與中劑量組比較，無顯著性差異。

3)各組大鼠股骨tb.th的變化如表3和圖3所示：

表3

注：表3中，與假手術(shù)組比較：*p<0.05，**p<0.01；與模型組比較：△p<0.05，△△p<0.01；三個劑量組之間比較：與小劑量組比較：▲p<0.05，▲▲p<0.01；與中劑量組比較：#p<0.05，##p<0.01。

從表3、圖3可以看出，模型組、陽性對照組以及五味子總木脂素小、中、大劑量組與假手術(shù)組比較，大鼠股骨tb.th均顯著減少。與模型組比較，中劑量組、大劑量組以及陽性對照組的tb.th顯著增加；而小劑量組無顯著性變化。三個劑量組之間比較，中劑量組、大劑量組的tb.th較小劑量組顯著增加；大劑量組與中劑量組比較，無顯著性差異。

4)各組大鼠股骨tb.sp的變化如表4和圖4所示：

表4

注：表4中，與假手術(shù)組比較：*p<0.05，**p<0.01；與模型組比較：△p<0.05，△△p<0.01；三個劑量組之間比較：與小劑量組比較：▲p<0.05，▲▲p<0.01；與中劑量組比較：#p<0.05，##p<0.01。

從表4、圖4可以看出，與假手術(shù)組比較，模型組、陽性對照組以及五味子總木脂素小、中、大劑量組大鼠股骨tb.sp均顯著增加。中劑量組、大劑量組以及陽性對照組與模型組比較，tb.sp顯著減少；小劑量組與之比較，無顯著性變化。三個劑量組之間比較，中劑量組、大劑量組的tb.sp均明顯少于小劑量組；大劑量組與中劑量組比較，無顯著性差異。

5)各組大鼠股骨smi的變化如表5和圖5所示：

表5

從表5、圖5可以看出，模型組、陽性對照組以及五味子總木脂素小、中、大劑量組大鼠股骨smi較假手術(shù)組明顯增加。與模型組比較，中劑量組、大劑量組和陽性對照組的smi明顯減少；而小劑量組無顯著性差異。三個劑量組之間比較，中劑量組、大劑量組與小劑量組比較，smi均明顯減少；大劑量組與中劑量組比較，無顯著性差異。

可見，通過對去卵巢大鼠灌服五味子水煎劑3個月，發(fā)現(xiàn)中藥組大鼠脛骨骨小梁體積百分比明顯高于模型組，骨小梁礦化率、骨小梁形成表面百分比、骨小梁吸收表面百分比均低于模型組，產(chǎn)生有效的治療機制是通過促進骨髓基質(zhì)細胞和成骨細胞中護骨素表達，提高其與rankl的結(jié)合率，減少破骨細胞的吸收，使骨形成大于骨吸收，阻止骨量減低。相關(guān)實驗結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠股骨bv/tv、tb.th和tb.n顯著減少，而tb.sp和smi顯著增加。smi增加，表明骨小梁成棒狀結(jié)構(gòu)，這與在光學顯微鏡下在去卵巢所致骨質(zhì)疏松癥大鼠骨切片上所見到的紐扣狀骨小梁相一致(因microct檢測到的是立體結(jié)構(gòu)，而切片是平面的，所以在切片上呈現(xiàn)的是紐扣狀結(jié)構(gòu))，這是絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的一個典型病理特征，這一結(jié)果表明，切除大鼠卵巢可使其股骨bv/tv、tb.th和tb.n顯著減少，使tb.sp和smi顯著增加，從而導(dǎo)致大鼠發(fā)生骨質(zhì)疏松癥。相關(guān)實驗結(jié)果進一步顯示，五味子總木脂素可使以上指標在一定程度上發(fā)生逆轉(zhuǎn)，五味子總木脂素中劑量組和大劑量組與模型組比較，大鼠股骨bv/tv、tb.th和tb.n顯著增加，而tb.sp和smi明顯減少，這一結(jié)果表明，五味子總木脂素對去卵巢所致的大鼠骨質(zhì)疏松癥具有治療作用。

實施例4

脛骨骨髓中il-6和il-11蛋白及其mrna表達的檢測：

脫鈣骨冰凍切片的制作：右側(cè)脛骨固定48h后，用0.01mpbs(ph7.2，含1wt‰depc)充分漂洗骨組織，然后，放入10wt％edta·na20.01mpbs(ph7.2，含1wt‰depc)溶液中，置于4℃冰箱中進行脫鈣，每天換液一次。6周脫鈣結(jié)束后，用0.01mpbs(ph7.2，含1wt‰depc)充分漂洗，再放入15wt％蔗糖(用0.01mpbs配制，ph7.2，含1wt‰depc)中進行脫水，4℃冰箱中保存。用冰凍切片機切片，每塊骨組織切取5μm厚的縱向脫鈣骨切片，貼于經(jīng)1wt％多聚賴氨酸涂片的載玻片上。室溫下?lián)]發(fā)水分，待載玻片干透之后，利用4℃冰箱預(yù)冷的丙酮溶液固定30s，取出，在室溫晾干后，收入載玻片盒，-20℃冰箱保存待測。

1)脛骨骨髓中il-6和il-11蛋白表達的檢測方法：

采用免疫組織化學染色方法，檢測脛骨骨髓中il-6和il-11的蛋白表達。按照試劑盒所附說明進行操作，il-6蛋白表達的檢測方法如下：

(1)取出冰凍切片，室溫平衡10min。

(2)純凈水洗5min×2次。

(3)0.3wt％h2o2室溫孵育30min，目的是消除內(nèi)源性過氧化物酶對實驗結(jié)果的干擾，0.01mpbs(ph7.2)洗5min×3次。

(4)滴加正常山羊血清封閉液，室溫30min。甩去多余液體。

(5)滴加il-6一抗，用0.01mpbs(ph7.2)1:100的稀釋，以0.01mpbs代替一抗作為陰性對照，4℃過夜。

(6)0.01mpbs(ph7.2)洗5min×3次。

(7)滴加二抗，37℃孵育10min。

(8)0.01mpbs(ph7.2)洗2min×3次。

(9)滴加二抗試劑ab混合物，37℃孵育10min。

(10)0.01mpbs(ph7.2)洗2min×3次。

(11)dab顯色：1600μl超純水加入1滴濃縮dab液及5滴緩沖液，另外再加1滴dab過氧化物酶底物，混勻后滴至切片。顯微鏡下觀察，反應(yīng)5min后，用純凈水洗滌終止反應(yīng)。

(12)脫水透明，中性樹膠封片，顯微鏡觀察。

il-11蛋白表達的檢測方法同上，只是在第5步，滴加il-11一抗。

結(jié)果判斷：大鼠脛骨骨髓中細胞陽性反應(yīng)為細胞胞漿有棕黃色著色。采用qwinprov3.5.0圖像分析系統(tǒng)進行檢測。隨機檢測骺板以下髓腔內(nèi)5個高倍視野(40×10)，計算每個視野內(nèi)的積分光密度(iod)，求其平均值，以其作為表達強度。

2)脛骨骨髓中il-6和il-11mrna表達的檢測方法：

采用原位雜交法，檢測脛骨骨髓中il-6和il-11的mrna表達。按照試劑盒所附說明進行操作，il-6mrna表達的檢測方法如下：

(1)取出冰凍切片，室溫平衡30min。

(2)純凈水洗5min×2次；

(3)0.3％h2o2室溫孵育10min，用來消除內(nèi)源性過氧化物酶對實驗結(jié)果的干擾，純凈水洗3次。

(4)暴露mrna核酸片斷：滴加3％檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶在切片上，37℃消化5min。pbs洗5min×3次，純凈水洗1次。

(5)后固定：1％多聚甲醛/0.01mpbs(ph7.2)固定液，含有1‰depc。室溫固定10min，純凈水洗3次。

(6)預(yù)雜交：每張片子滴加20μl預(yù)雜交液，41℃恒溫箱孵育4小時。吸取多余液體，不洗。

(7)雜交：每張片子滴加20μlil-6寡核苷酸探針雜交液，蓋上原位雜交專用蓋玻片，41℃恒溫箱雜交過夜。

(8)雜交后洗滌：揭掉蓋玻片后，37℃左右水溫，2×ssc洗滌5min×2次；37℃左右水溫0.5×ssc洗滌15min×1次；37℃左右水溫0.2×ssc洗滌15min×1次。

(9)滴加封閉液：37℃孵育30min，甩去多余液體，不洗。

(10)滴加生物素化鼠抗地高辛：37℃孵育60min。原位雜交用pbs洗5min×4次。

(11)滴加sabc：37℃孵育20min。原位雜交用pbs洗5min×3次。

(12)滴加生物素化過氧化物酶：37℃孵育20min。原位雜交用pbs洗5min×4次。

(13)dab顯色：使用dab顯色試劑盒，1ml純凈水加顯色劑a，b，c各一滴，混勻，加至標本上。室溫顯色，顯微鏡下觀察，反應(yīng)5min后，用純凈水洗滌終止反應(yīng)。

(14)脫水透明，中性樹膠封片。顯微鏡觀察。

大鼠脛骨骨髓中il-11mrna表達的檢測方法同上，只是在第7步滴加的寡核苷酸酸探針雜交液為20μlil-11。

結(jié)果判斷：大鼠脛骨骨髓中細胞陽性反應(yīng)為細胞胞漿有棕黃色著色。采用qwinprov3.5.0圖像分析系統(tǒng)進行檢測。隨機檢測骺板以下髓腔內(nèi)5個高倍視野(40×10)，計算每個視野內(nèi)的積分光密度(iod)，求其平均值，以其作為表達強度。

3)大鼠脛骨骨髓中il-6蛋白表達的顯微鏡觀測圖如圖17-圖23所示，大鼠脛骨骨髓中il-6mrna表達的顯微鏡觀測圖如圖24-圖30所示，五味子總木脂素對去卵巢大鼠脛骨骨髓中il-6蛋白及其mrna表達的影響具體如表6、圖6和圖7所示：

表6

從表6、圖6、圖7可以看出，與假手術(shù)組比較，模型組、五味子總木脂素小劑量組大鼠脛骨骨髓中il-6蛋白及其mrna表達iod均顯著增高；而中劑量組、大劑量組和陽性對照組的il-6蛋白表達iod無顯著差異；中劑量組的il-6mrna表達iod顯著增高，但大劑量組和陽性對照組的il-6mrna表達iod無顯著性差異。與模型組比較，中劑量組、大劑量組和陽性對照組的il-6蛋白及其mrna表達iod均明顯降低；小劑量組的則均無顯著性差異。三個劑量組之間比較，中劑量組、大劑量組的il-6蛋白及其mrna表達iod均明顯低于小劑量組；大劑量組與中劑量組比較，無顯著性變化。

3)大鼠脛骨骨髓中il-11蛋白表達的顯微鏡觀測圖如圖31-圖37所示，大鼠脛骨骨髓中il-11mrna表達的顯微鏡觀測圖如圖38-圖44所示，五味子總木脂素對去卵巢大鼠脛骨骨髓中il-11蛋白及其mrna表達的影響具體如表7、圖8和圖9所示：

表7

從表7、圖8、圖9可以看出，與假手術(shù)組比較，模型組、五味子總木脂素小、中劑量組大鼠脛骨骨髓中il-11蛋白及其mrna表達iod均明顯增高；大劑量組的il-11蛋白表達iod明顯增高，而其mrna表達iod無顯著性差異；陽性對照組的il-11蛋白及其mrna表達iod均無顯著性差異。中劑量組、大劑量組以及陽性對照組的il-11蛋白及其mrna表達iod均低于模型組；小劑量組與之比較均無顯著性差異。三個劑量組之間比較，中劑量組、大劑量組的il-11蛋白及其mrna表達iod均較小劑量組顯著降低；大劑量組與中劑量組比較，均無顯著性變化。

此外，假手術(shù)組的以上指標與空白對照組的比較，均無顯著性差異，從而排除了手術(shù)因素對實驗的影響。

相關(guān)實驗結(jié)果表明，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠脛骨骨髓中的il-6和il-11蛋白及其mrna表達均顯著增強，說明卵巢切除，雌激素水平大幅度降低，可導(dǎo)致il-6和il-11合成與分泌增多。相關(guān)實驗結(jié)果表明還表明，五味子總木脂素大劑量組和中劑量組大鼠脛骨骨髓中的il-6和il-11蛋白及其mrna表達均明顯低于模型組，這一結(jié)果說明五味子總木脂素可使去卵巢所致的大鼠骨髓中增強的il-6和il-11蛋白及其mrna表達減弱，五味子總木脂素可通過抑制骨髓中il-6和il-11的合成和分泌而達到治療骨質(zhì)疏松癥的作用。

綜上所述，本發(fā)明有效克服了現(xiàn)有技術(shù)中的種種缺點而具高度產(chǎn)業(yè)利用價值。

上述實施例僅例示性說明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對上述實施例進行修飾或改變。因此，舉凡所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。