本發(fā)明涉及中醫(yī)藥領(lǐng)域，具體而言涉及一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：潰瘍性結(jié)腸炎屬于炎癥性腸病的一種，是主要發(fā)生在結(jié)腸黏膜層的非特異性炎性病變，以潰瘍糜爛為主，多累及遠(yuǎn)端結(jié)腸，也可遍及全結(jié)腸，其主要癥狀為腹痛、腹瀉和黏液膿血便等，病程較長，多遷延反復(fù)。近年來，隨著生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)、生活習(xí)慣的改變，環(huán)境的變化以及診斷技術(shù)的不斷進(jìn)步，潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病率逐年增高。潰瘍性結(jié)腸炎特異性的致病因素和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，可能是多種因素共同作用的結(jié)果，研究認(rèn)為，遺傳易感性、免疫調(diào)節(jié)紊亂、感染、環(huán)境以及飲食等因素與潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病有著密切的關(guān)系。目前，潰瘍性結(jié)腸炎的治療常用藥物主要有水楊酸類、激素類、免疫抑制劑、生物制劑、益生菌及抗生素等，但以上藥物治療手段存在療程長、易復(fù)發(fā)、不良反應(yīng)大等不同程度的局限性，臨床療效尚不夠理想。以目前通常使用的治療藥物柳氮磺吡啶為例，其具有療效好見效快副作用小的特點，但是該藥物存在有極大的局限性，如磺胺過敏者無法使用柳氮磺吡啶，而且存在很多的藥物相互作用具體而言有以下幾種：對氨基苯甲酸可代替磺胺被細(xì)菌攝取，對柳氮磺吡啶的抑菌作用發(fā)生拮抗；口服抗凝藥、口服降血糖藥、甲氨蝶呤、苯妥英鈉和硫噴妥鈉與柳氮磺吡啶合用時，后者可取代這些藥物的蛋白結(jié)合部位，或抑制其代謝，以致藥物作用時間延長或毒性發(fā)生；骨髓抑制藥與柳氮磺吡啶合用時可能增強(qiáng)此類藥物對造血系統(tǒng)的不良反應(yīng)；避孕藥(雌激素類)，長時間與柳氮磺吡啶合用可導(dǎo)致避孕的可靠性減少，并增加經(jīng)期外出血的機(jī)會；溶栓藥物與柳氮磺吡啶合用時，可能增大其潛在的毒性作用；肝毒性藥物與柳氮磺吡啶合用，可能引起肝毒性發(fā)生率的增高；光敏藥物與柳氮磺吡啶合用可能發(fā)生光敏的相加作用；烏洛托品在酸性尿中可分解產(chǎn)生甲醛，后者可與該藥品中的磺胺形成不溶性沉淀物，使發(fā)生結(jié)晶尿的危險性增加，因此不宜兩藥合用；磺吡酮與柳氮磺吡啶藥物同用時可減少后者自腎小管的分泌，其血藥濃度升高且持久，從而產(chǎn)生毒性；與洋地黃類或葉酸合用時，后者吸收減少，血藥濃度降低；與丙磺舒合用，會降低腎小管磺胺排泌量，致磺胺的血藥濃度上升，作用延長，容易中毒；與新霉素合用，新霉素抑制腸道菌群，使柳氮磺吡啶作用降低。因此需要一種治療效果好、有效率高、無毒副作用的治療潰瘍性結(jié)腸炎的一種中藥組合物及其制備方法。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種治療效果好、效率高、適用性強(qiáng)、無毒副作用的治療潰瘍性結(jié)腸炎的一種中藥組合物及其制備方法。經(jīng)過發(fā)明人長期的臨床實踐，通過多年臨證積累經(jīng)驗，形成本發(fā)明的方案，并取得了較好的臨床療效。為實現(xiàn)上述發(fā)明目的本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物，其特征在于，包括以下重量份的原料：炒山藥14～16份，炒米仁25～35份，地錦草12～16份，仙鶴草25～32份。本發(fā)明各個組分的藥性如下：炒山藥:味甘，平。歸脾、肺、腎經(jīng)。補(bǔ)脾養(yǎng)胃，生津益肺，補(bǔ)腎澀精。用于脾虛食少，久瀉不止，肺虛喘咳，腎虛遺精，帶下，尿頻，虛熱消渴。麩炒山藥補(bǔ)脾健胃。用于脾虛食少，泄瀉便溏，白帶過多。炒米仁:可以清熱排膿。用于水腫，腳氣，小便不利，濕痹拘攣，脾虛泄瀉，肺癰，腸癰。地錦草:味辛；性平。歸肺經(jīng)；肝經(jīng)；胃經(jīng)；大腸經(jīng)；膀胱經(jīng)。清熱解毒；利濕退黃；活血止血。主治痢疾；泄瀉；黃疸；咳血；吐血；尿血；便血；崩漏；乳汁不下；跌打腫痛及熱毒瘡瘍。仙鶴草:味苦、澀，性平。歸肺經(jīng)；肝經(jīng)；脾經(jīng)?？梢允諗恐寡?，止痢，殺蟲。主治咯血；吐血；尿血；便血；赤白痢疾；崩漏帶下；勞傷脫力；癰腫；跌打；創(chuàng)傷出血。另外本發(fā)明采用的中藥成分簡單，減少了治療成本，本發(fā)明人認(rèn)為潰瘍性結(jié)腸炎病位在大腸，涉及脾、肝、腎、肺諸臟。因此本病的病位雖在大腸，主病之臟屬脾，潰瘍性結(jié)腸炎與脾胃的密切關(guān)系，外感、飲食、情志、勞倦等因素皆可導(dǎo)致脾胃之氣受損，脾胃虛弱則運(yùn)化失司，濕濁內(nèi)生，清濁不分混雜而下。脾之運(yùn)化有賴于肝之疏泄。根據(jù)《血證論》：“木之性主于疏泄，食氣入胃，全賴肝木之氣疏泄之，而水谷及化”，肝旺可橫逆乘脾，脾虛亦可致土虛木賊，則發(fā)為泄瀉。《景岳全書·泄瀉》云：“腎為胃關(guān)，開竅于二陰，所以二便之開閉，皆腎臟之所主。今腎中陽氣不足，則命門火衰……陰氣極盛之時，則令人洞泄不止?！蹦I為先天，脾為后天，腎陽助脾陽腐熟水谷，促進(jìn)腸胃之消化吸收，如因年老體衰、久病勞倦損傷腎陽，則脾陽失煦，運(yùn)化失司而成潰瘍性結(jié)腸炎。而在《靈樞·本輸》上也記載：“肺合大腸，大腸者，傳道之府。”肺與大腸相表里，生理上密切相關(guān)，病理上互為影響，大腸的傳導(dǎo)功能依賴于肺氣的宣發(fā)肅降，肺病可及腸，腸病亦可及肺，肺氣不調(diào)可影響大腸的氣機(jī)，肺中痰濕之邪，可下注大腸，導(dǎo)致“痰泄”的發(fā)生。《醫(yī)學(xué)入門》云：“痰泄，或瀉不瀉，或多或少，此因痰留肺中，以至大腸不固”。因此本發(fā)明采用了炒山藥補(bǔ)脾養(yǎng)胃，益肺補(bǔ)腎的作用，調(diào)節(jié)人體運(yùn)化，然后以地錦草和仙鶴草共同作用收斂止瀉，同時起到清熱去毒的作用，解決濕熱蘊(yùn)腸而導(dǎo)致的運(yùn)化失司，而且地錦草和仙鶴草還可以治療由于潰瘍性結(jié)腸炎所引起的腸道出血，防止由于感染所造成的癥狀加重，而且同時依靠炒米仁的作用，清熱排膿，同時炒米仁和炒山藥共同作用可以加強(qiáng)本發(fā)明的補(bǔ)脾養(yǎng)胃的作用，加強(qiáng)本發(fā)明的治療效果。綜上所述本發(fā)明使用的藥物多不具有毒性，且藥物多性平，溫和，在治療的過程中所產(chǎn)生的副作用小，且通過實踐得知該藥物治療效果好，起效快。中醫(yī)學(xué)沒有潰瘍性結(jié)腸炎這個病名，本發(fā)明人根據(jù)其臨床癥狀和特征，將其歸屬于“腸澼”“痢疾”“赤白痢”等范疇，多由感受外邪、飲食所傷、情志失調(diào)、脾胃虛弱等因素所致，病位在大腸，涉及脾、肝、腎、肺諸臟，脾虛失運(yùn)，濕熱蘊(yùn)腸，氣滯絡(luò)瘀為基本病機(jī)，病理因素包括濕熱、氣滯、血瘀等，病理性質(zhì)有寒熱虛實之不同，常兼夾轉(zhuǎn)化。因此采用了所述的治療方法。而針對潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病原因，發(fā)明人得出以下結(jié)論：信號通路及細(xì)胞因子調(diào)節(jié)在免疫異常介導(dǎo)中扮演著重要角色。本發(fā)明人認(rèn)為人細(xì)胞表面toll樣受體4(tlr4)受體及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制、發(fā)展過程的重要環(huán)節(jié)。tlr4主要通過識別脂多糖(lps)，引起信號級聯(lián)最終導(dǎo)致核轉(zhuǎn)錄因子κb(nf-κb)依賴性信號通路的活化，在nf-κb的作用下，聚集在潰瘍性結(jié)腸炎腸黏膜中的大量漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞迅速合成和分泌細(xì)胞因子，首先釋放出tnf-a和il-iβ，進(jìn)一步激活th細(xì)胞，釋放il-2、il-3、il-4、il-6和il-8等，而細(xì)胞因子又進(jìn)一步活化nf-κb形成正反饋調(diào)節(jié)，使炎癥放大，造成機(jī)體免疫失衡，最終引起潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生。人細(xì)胞表面toll樣受體(tlrs)是細(xì)胞跨膜受體，是參與非特異性免疫(天然免疫)的一類重要蛋白質(zhì)分子，也是連接非特異性免疫和特異性免疫的橋梁，tlrs能夠特異性地識別病原微生物，與病原識別模式分子結(jié)合后，激活相應(yīng)的信號傳導(dǎo)通路，引起炎性介質(zhì)的表達(dá)，從而對不同的病原微生物產(chǎn)生特定的生物學(xué)功能，直接影響機(jī)體的免疫反應(yīng)強(qiáng)度。tlr4在正常的結(jié)腸黏膜組織中呈低表達(dá)，在潰瘍性結(jié)腸炎的結(jié)腸黏膜中呈高表達(dá)。nf-κb是一種分布廣泛的真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，具有重要的生理和病理作用。nf-κb作為信號傳導(dǎo)途徑中的樞紐參與調(diào)控病毒復(fù)制、自身免疫性疾病、炎癥反應(yīng)、腫瘤形成和細(xì)胞凋亡過程。nf-κb能調(diào)控潰瘍性結(jié)腸炎患者炎性細(xì)胞因子的釋放，參與潰瘍性結(jié)腸炎腸道的炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)，同時nf-κb在潰瘍性結(jié)腸炎患者的結(jié)腸黏膜中呈高表達(dá)。所以，nf-κb的功能失調(diào)就會導(dǎo)致潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生。tlr4的活化需要髓樣分化蛋白88(myd88)、myd88接頭蛋白(mal)、toll樣受體相關(guān)的干擾素活化子(trif)和trif相關(guān)的接頭分子(tram)等四種接頭蛋白的調(diào)節(jié)。四種接頭蛋白都可以將信號傳遞給tlr結(jié)構(gòu)域，進(jìn)而激活nf-κb。tlr4/nf-κb信號通路主要有myd88依賴性和myd88非依賴性2條胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑。其中myd88是其主要接頭蛋白。myd88屬于toll/il-1r家族和死亡結(jié)構(gòu)域家族成員。因myd88具有tir結(jié)構(gòu)域，可以與tir家族胞內(nèi)的tir結(jié)構(gòu)域相互作用，介導(dǎo)下游信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)，導(dǎo)致下游nf-κb、干擾素調(diào)節(jié)因子3(irf3)等多種轉(zhuǎn)錄因子的激活。這些轉(zhuǎn)錄因子可上調(diào)促炎細(xì)胞因子和多種機(jī)體防御蛋白的轉(zhuǎn)錄，如il-1β、tnf-α、il-6、il-12及干擾素β(inf-β)。因此，myd88通過介導(dǎo)trl信號通路在免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)及腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中均發(fā)揮重要作用。在腸道細(xì)胞中，myd88依賴通路與腸道穩(wěn)態(tài)的維持、甚至整個機(jī)體的穩(wěn)態(tài)維持都有很密切的關(guān)系。由于其應(yīng)激反應(yīng)的誘導(dǎo)了腸道細(xì)胞內(nèi)myd88、nf-κb和促炎細(xì)胞因子的快速和持續(xù)表達(dá)可以引起潰瘍性結(jié)腸炎。而細(xì)胞因子(cytokine，ck)是一類具有廣泛生物活性的小分子多肽物質(zhì)，由機(jī)體免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞合成分泌。作為細(xì)胞間的信號傳遞分子，細(xì)胞因子在人體免疫應(yīng)答和炎性過程中起著重要作用，在包括感染和自身免疫等多種疾病中扮演著重要角色。根據(jù)其在炎癥反應(yīng)中的作用可分為兩大類：促炎癥性胞因子(il-1、tnf-a、il-6、il-8等)和抗炎癥性細(xì)胞因子(il-4、il-10、il-13、tgf-β等)。正常生理情況下，兩者能保持動態(tài)平衡，當(dāng)平衡狀態(tài)被打破，促炎因子一方占優(yōu)勢時，就會導(dǎo)致炎癥的發(fā)生。綜上所述本發(fā)明人認(rèn)為腸道黏膜免疫異常是潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病的主要因素。而針對以上的潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生原因，本發(fā)明可以通過藥物的相互作用使得人體tlr4、myd88和nf-κb呈現(xiàn)低表達(dá)，同時使得血清il-1β、tnf-α含量顯著降低，從而有效降低這些基因的表達(dá)和促炎因子的含量，阻斷tlr4、nf-κb通路，降低促炎因子的分泌，從而達(dá)到治療的效果，且由于是針對于人體的細(xì)胞因子作用，因此本發(fā)明具有副作用小，見效快治療效果好的優(yōu)勢。作為優(yōu)選，一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物，其特征在于，包括以下重量份的原料：黨參5～15份、苦參1～10份、木香1～10份、訶子肉3～9份、鹽澤瀉1～8份、炒山藥14～16份，炒米仁25～35份，地錦草12～16份，仙鶴草25～32份。在原來方案的基礎(chǔ)上加入了其他幾味藥材，其中：黨參：黨參味甘，性平。有補(bǔ)中益氣、止渴、健脾益肺，養(yǎng)血生津。用于脾肺氣虛，食少倦怠，咳嗽虛喘，氣血不足，面色萎黃，心悸氣短，津傷口渴，內(nèi)熱消渴。懶言短氣、四肢無力、食欲不佳、氣虛、氣津兩虛、氣血雙虧以及血虛萎黃等癥?？鄥ⅲ何犊?，性寒，有清熱燥濕，殺蟲，利尿之功，可用于熱痢，便血，黃疸尿閉。木香：味辛，苦，性溫，可以行氣止痛；調(diào)中導(dǎo)滯。主胞脅脹滿足；脘腹脹痛；噯吐泄瀉；痢疾后重。用于胸脘脹痛、瀉痢后重、食積不消、不思飲食；中氣不?。煌话l(fā)耳聾；蛇蟲咬傷；牙痛。訶子肉：味苦、酸、澀，性平。歸肺、大腸經(jīng)。可以澀腸斂肺，降火利咽。用于久瀉久痢，便血脫肛，肺虛喘咳，久嗽不止，咽痛音啞。鹽澤瀉：性寒,味甘、淡,歸腎、膀胱經(jīng),具有利水滲濕、泄熱之功效。主治腎炎水腫、腎盂腎炎、腸炎泄瀉、小便不利等癥，而本發(fā)明中特別使用了鹽澤瀉，即取澤瀉，用鹽水噴灑拌勻，稍悶潤，置鍋內(nèi)用文火微炒至表面略現(xiàn)黃色取出，晾干。鹽澤瀉入腎，在本發(fā)明中較生澤瀉作用更強(qiáng)。在本發(fā)明中利用鹽澤瀉起到補(bǔ)腎的作用，加強(qiáng)人體的運(yùn)化能力，提高疾病的治療效果，此外通過黨參補(bǔ)中益氣，與炒山藥和炒米仁配合實驗加強(qiáng)本發(fā)明補(bǔ)脾健胃的作用，加強(qiáng)治療效果。同時利用苦參和木香來行氣導(dǎo)滯，去除濕熱，以鹽澤瀉進(jìn)行收斂，配合上述藥材的補(bǔ)氣養(yǎng)氣的作用，起到止瀉的作用。通過上述藥材的相互作用在止瀉止血的同時調(diào)理人體內(nèi)的運(yùn)化，調(diào)節(jié)人體內(nèi)的平衡來起到治療潰瘍性結(jié)腸炎的作用。作為優(yōu)選，所述的中藥組合物的劑型為膠囊劑、丸劑、片劑、湯劑、浸膏劑和/或流浸膏劑。一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟：(1)將上述原料混合后加入水，浸泡得到混合物；(2)將步驟(1)中的混合物進(jìn)行頭煎，然后過濾，得到頭煎煎液，然后藥渣再加水，進(jìn)行二煎，過濾，得到二煎煎液，然后將頭煎煎液和二煎煎液混勻，得到煎液；(3)將所述的煎液進(jìn)行加熱蒸發(fā)，得到產(chǎn)物。作為優(yōu)選，在步驟(1)中加入水的量以重量份計為800～1000份，浸泡時間為18～24小時。作為優(yōu)選，在步驟(2)所述的頭煎過程中煎煮時間為30～40分鐘。作為優(yōu)選，在步驟(2)所述的加水過程中加水量以重量份計為700～750份。作為優(yōu)選，在步驟(2)所述的二煎過程中煎煮時間為15～25分鐘。作為優(yōu)選，在步驟(3)所述的加熱蒸發(fā)過程中將所述的煎液蒸發(fā)至煎液濃度為1.5～2.5g/ml。本發(fā)明的有益效果在于：(1)本發(fā)明的中藥組合物治療效果好、效率高、適用性強(qiáng)、無毒副作用(2)本發(fā)明提供的制備方法方便簡單，實用性強(qiáng)。附圖說明圖1為空白對照組的大鼠結(jié)腸組織病理切片；圖2為模型組的大鼠結(jié)腸組織病理切片；圖3為sasp組的大鼠結(jié)腸組織病理切片；圖4為低劑量組的大鼠結(jié)腸組織病理切片；圖5為中劑量組的大鼠結(jié)腸組織病理切片；圖6為高劑量組的大鼠結(jié)腸組織病理切片。具體實施方式下面結(jié)合具體實施案例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明：實施例1一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物，包括以下重量份的原料：炒山藥15g，炒米仁30g，地錦草15g，仙鶴草30g。一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟：將上述原料混合后加入900ml水，浸泡24h得到混合物；(2)將步驟(1)中的混合物進(jìn)行頭煎，煎煮30～40分鐘，然后過濾，得到頭煎煎液，然后藥渣再加水720ml，進(jìn)行二煎，煎煮時間為15～25分鐘，過濾，得到二煎煎液，然后將頭煎煎液和二煎煎液混勻，得到煎液；(3)將所述的煎液進(jìn)行加熱蒸發(fā)至煎液體積為45毫升，此時煎液濃度為2.5g/ml，得到產(chǎn)物。實施例2一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物，包括以下重量g的原料：炒山藥14g，炒米仁25g，地錦草12g，仙鶴草25g。一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟：將上述原料混合后加入900ml水，浸泡24h得到混合物；(2)將步驟(1)中的混合物進(jìn)行頭煎，煎煮30～40分鐘，然后過濾，得到頭煎煎液，然后藥渣再加水720ml，進(jìn)行二煎，煎煮時間為15～25分鐘，過濾，得到二煎煎液，然后將頭煎煎液和二煎煎液混勻，得到煎液；(3)將所述的煎液進(jìn)行加熱蒸發(fā)至煎液體積為45毫升，此時煎液濃度為2.5g/ml，得到產(chǎn)物。實施例3一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物，包括以下重量g的原料：炒山藥16g，炒米仁35g，地錦草16g，仙鶴草32g。一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟：將上述原料混合后加入900ml水，浸泡24h得到混合物；(2)將步驟(1)中的混合物進(jìn)行頭煎，煎煮30～40分鐘，然后過濾，得到頭煎煎液，然后藥渣再加水720ml，進(jìn)行二煎，煎煮時間為15～25分鐘，過濾，得到二煎煎液，然后將頭煎煎液和二煎煎液混勻，得到煎液；(3)將所述的煎液進(jìn)行加熱蒸發(fā)至煎液體積為45毫升，此時煎液濃度為2.5g/ml，得到產(chǎn)物。實施例4一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物，包括以下重量份的原料：黨參7g、苦參5g、木香5g、訶子肉4g、鹽澤瀉5g、炒山藥15g，炒米仁30g，地錦草15g，仙鶴草30g。一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟：將上述原料混合后加入900ml水，浸泡24h得到混合物；(2)將步驟(1)中的混合物進(jìn)行頭煎，煎煮30～40分鐘，然后過濾，得到頭煎煎液，然后藥渣再加水720ml，進(jìn)行二煎，煎煮時間為15～25分鐘，過濾，得到二煎煎液，然后將頭煎煎液和二煎煎液混勻，得到煎液；(3)將所述的煎液進(jìn)行加熱蒸發(fā)至煎液體積為45毫升，此時煎液濃度為2.5g/ml，得到產(chǎn)物。實施例5一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物，包括以下重量份的原料：黨參5份、苦參1份、木香1份、訶子肉3份、鹽澤瀉1份、炒山藥14份，炒米仁25份，地錦草12份，仙鶴草25份。一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟：將上述原料混合后加入900ml水，浸泡24h得到混合物；(2)將步驟(1)中的混合物進(jìn)行頭煎，煎煮30～40分鐘，然后過濾，得到頭煎煎液，然后藥渣再加水720ml，進(jìn)行二煎，煎煮時間為15～25分鐘，過濾，得到二煎煎液，然后將頭煎煎液和二煎煎液混勻，得到煎液；(3)將所述的煎液進(jìn)行加熱蒸發(fā)至煎液體積為45毫升，此時煎液濃度為2.5g/ml，得到產(chǎn)物。實施例6一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物，包括以下重量份的原料：黨參15份、苦參10份、木香10份、訶子肉9份、鹽澤瀉8份、炒山藥16份，炒米仁35份，地錦草16份，仙鶴草32份。一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟：將上述原料混合后加入900ml水，浸泡24h得到混合物；(2)將步驟(1)中的混合物進(jìn)行頭煎，煎煮30～40分鐘，然后過濾，得到頭煎煎液，然后藥渣再加水720ml，進(jìn)行二煎，煎煮時間為15～25分鐘，過濾，得到二煎煎液，然后將頭煎煎液和二煎煎液混勻，得到煎液；(3)將所述的煎液進(jìn)行加熱蒸發(fā)至煎液體積為45毫升，此時煎液濃度為2.5g/ml，得到產(chǎn)物。下面本發(fā)明通過采用優(yōu)選實施例1進(jìn)行實驗來對本發(fā)明的藥效進(jìn)行鑒定：鑒定用實驗材料如下：1.動物清潔級健康雄性sd大鼠60只，體重250±10g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物條件合格證syxk(浙)2008-0115。2.藥物將實施例1所制備的中藥組合物用蒸餾水配置成濃度分別為0.5g/ml、1g/ml和2g/ml的灌胃液。柳氮磺吡啶((sasp)片劑臨用前研細(xì)，以蒸餾水調(diào)制成濃度為20mg/ml的灌胃液。3.試劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％的2，4，6一三硝基苯磺酸(tnbs)；大鼠白細(xì)胞介素1β(il-1β)elisa檢測試劑鑒定方法步驟如下：1.造模與分組將上述的健康雄性sd大鼠60只，隨機(jī)分為空白對照組、模型組、sasp組、低劑量組、中劑量組和高劑量組6組，每組10只，同籠飼養(yǎng)。造模前，各組大鼠禁食不禁水24h，然后用水合氯醛腹腔麻醉大鼠后后經(jīng)肛門插入直徑約2mm的硅膠管至腸道內(nèi)約8cm。模型組、sasp組、低劑量組、中劑量組和高劑量組大鼠一次性結(jié)腸灌注濃度為100mg/kg溶劑為50％乙醇的總體積為1ml的tnbs，空白組不灌注tnbs，然后提起尾部倒立約1min后放回代謝籠內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)。2.給藥自造模第二天起，開始灌胃給藥?？瞻讓φ战M和模型組灌服0.9％氯化鈉溶液2ml，其余各組分別給予相同體積的柳氮磺吡啶(sasp)溶液、本發(fā)明的中藥組合物的低(0.5g/ml)、中(1.0g/ml)、高(2.0g/ml)劑量藥液，每天1次，連續(xù)給藥10天。給藥期間，大鼠正常進(jìn)食和飲水。3.標(biāo)本采集連續(xù)給藥10天后，處死全部大鼠，沿著腹部中線迅速剖開腹部，自肛門2cm處向上剪取結(jié)腸組織8cm，沿腸系膜縱軸剪開腸腔，用冷生理鹽水將結(jié)腸沖洗干凈，分為2g，一g樣品予l0％甲醛溶液內(nèi)固定，石蠟包埋進(jìn)行常規(guī)病理切片及he染色，另一g樣品保存于-80℃冰箱中備用。腹主動脈取血2-4ml，4℃3000rpm離心10min，分離血清，-20℃保存。4.檢測實驗標(biāo)本固定：新鮮腸粘膜組織，10％中性甲醛固定，24小時。脫水、包埋、切片：取結(jié)腸組織，乙醇逐級脫水，二甲苯透明、浸蠟，石蠟包埋，常規(guī)切片4μm，45℃水浴中撈片，75℃烤箱烤片。染色：二甲苯浸泡切片，2-5min/次，3次；不同濃度乙醇浸泡7min，自來水漂洗4-5次；蘇木素染色(染細(xì)胞核)5min，自來水漂洗3次；浸于1％鹽酸，染色5s，自來水沖洗返藍(lán)；1％的伊紅染色(染細(xì)胞漿)30s；乙醇脫水7min；二甲苯脫水透明，1min/次，3次；中性樹膠封片、鏡檢。實驗結(jié)果如下：日常觀察結(jié)果如下：空白對照組大鼠體重增加明顯，未見稀便與便血，體毛光澤，精神狀態(tài)好，活動能力強(qiáng)，飲食正常，未見死亡。模型組大鼠在造模第二天均表現(xiàn)懶動、拱背、毛色枯槁、厭食、活動減少，出現(xiàn)稀便、半稀便，部分大鼠出現(xiàn)肉眼可見的血便，其中中劑量組死亡1只。各劑量組、sasp組造模后，經(jīng)給藥后約7天左右稀便、半稀便明顯減少，無血便，體重逐漸回升，精神好轉(zhuǎn)，活動度和體毛光澤度增加，飲食量增多。預(yù)實驗中，在對造模后的大鼠進(jìn)行解剖時，造模各組出現(xiàn)不同程度腸黏連，部分大鼠出現(xiàn)巨型結(jié)腸，腸黏膜均見充血、水腫、糜爛及潰瘍形成，后光鏡下觀察見有充血、水腫、炎細(xì)胞浸潤，杯狀細(xì)胞減少及典型潰瘍形成等變化。結(jié)腸組織學(xué)損傷結(jié)果如下所示：如圖1所示，空白對照組大鼠結(jié)腸黏膜組織結(jié)構(gòu)完整，未見黏膜糜爛潰瘍形成，間質(zhì)偶見散在少量炎性細(xì)胞浸潤；如圖2所示，模型組大鼠可見較大面積潰瘍形成，部分深達(dá)肌層；腺體破壞，結(jié)構(gòu)不完整，杯狀細(xì)胞減少，炎性細(xì)胞大量浸潤，以中性粒細(xì)胞為主。如圖3-6所示各劑量組及sasp組表現(xiàn)為中、輕度慢性炎癥，黏膜及黏膜下層仍有中等量炎細(xì)胞浸潤，局部黏膜糜爛，潰瘍愈合，較模型組好轉(zhuǎn)明顯。組織學(xué)損傷評分標(biāo)準(zhǔn)如下所示：病變深度病變范圍炎癥程度評分無病變0無炎癥0病變侵及黏膜層0-25％輕度1病變侵及黏膜下層26-50％中度2病變侵及肌層51-75％重度3病變侵及漿膜層>75％4大鼠結(jié)腸組織病理組織學(xué)損傷評分如下表所示：組別n分?jǐn)?shù)空白對照組103.10±0.31模型組108.90±1.85▲▲sasp組106.20±2.25**低劑量組107.30±2.00*中劑量組94.89±1.83**##高劑量組106.10±1.20**注：*表示與模型組相比p<0.05，**表示與模型組相比p<0.01；##表示與本發(fā)明低劑量組相比p<0.01；▲▲表示與空白對照組相比p<0.01。評分結(jié)果顯示，與空白對照組相比，模型組炎癥明顯，差異有非常顯著性意義(p<0.01)；與模型組大鼠相比，sasp組、本發(fā)明中、高劑量組炎癥明顯好轉(zhuǎn)，差異有非常顯著性意義(p<0.01)，本發(fā)明低劑量組炎癥好轉(zhuǎn)，差異有顯著性意義(p<0.05)；與本發(fā)明低劑量組相比，本發(fā)明中劑量組炎癥好轉(zhuǎn)更為明顯，差異有顯著性意義(p<0.01)，本發(fā)明各劑量與sasp組相比，炎癥好轉(zhuǎn)程度的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。造模后各組大鼠的一般情況表現(xiàn)和結(jié)腸組織學(xué)損傷評分兩個指標(biāo)，分別從臨床癥狀和病理組織兩個方面對藥物治療潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠的療效進(jìn)行評價，較為全面和客觀。同時，選用目前臨床治療潰瘍性結(jié)腸炎常用的柳氮磺吡啶作為陽性對照西藥，對評價本發(fā)明的療效具有較好代表性。為了減少藥物副作用的影響，本實驗選用該藥腸溶制劑。本研究模型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠經(jīng)過治療后，稀便、半稀便明顯減少，無血便，體重逐漸回升，精神好轉(zhuǎn)，活動度和體毛光澤度增加，飲食量增多，一般情況顯著改善。組織學(xué)損傷評分顯示，與模型組大鼠相比，sasp組、本發(fā)明中、高劑量組炎癥明顯好轉(zhuǎn)，差異有非常顯著性意義(p<0.01)，本發(fā)明低劑量組炎癥好轉(zhuǎn)，差異有顯著性意義(p<0.05)，說明本發(fā)明各劑量組具有較好的改善潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜炎癥的作用，其中，尤以本發(fā)明中劑量組作用更為明顯，顯著優(yōu)于本發(fā)明低劑量組。另外，本發(fā)明各劑量組大鼠組織學(xué)損傷評分與sasp組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，說明本發(fā)明的各劑量組治療潰瘍性結(jié)腸炎的療效與sasp并無顯著差異，其療效得到進(jìn)一步肯定。因此，本發(fā)明是治療潰瘍性結(jié)腸炎的有效方劑，其治療作用得到了進(jìn)一步的肯定，同時，也為評價本發(fā)明的臨床療效提供了客觀現(xiàn)實依據(jù)。另外本發(fā)明還應(yīng)用實施例1的藥物進(jìn)行了以下檢測：(1)elisa檢測，檢測步驟如下：il-1β檢測：往預(yù)先包被il-1β抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、hrp標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物tmb顯色，tmb在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(od值)，計算樣品濃度。tnf-α檢測：往預(yù)先包被tnf-a抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、hrp標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物tmb顯色，tmb在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(od值)，計算樣品濃度。(2)real-timepcr試驗，步驟如下所示：取實驗樣本，每管取0.2g結(jié)腸組織，共36管。結(jié)腸組織rna提?。杭尤?00微升trizol，用勻漿器研磨至無明顯顆粒，再加入500微升trizol混勻，靜置5min；加入200微升氯仿，劇烈混勻30s(trizol比氯仿為5:1)；室溫放置5min，并提前預(yù)冷4℃離心機(jī)，12000rpm離心15min；吸取水相轉(zhuǎn)移至新的ep管內(nèi)(約500微升)，取上清液于新的ep管內(nèi)；加入等體積的異丙醇，輕輕顛倒混勻，在-20℃放置20min；然后以12000rpm的轉(zhuǎn)速進(jìn)行攪拌,攪拌溫度4℃,攪拌10min；棄上清得白色沉淀，加入75％預(yù)冷的乙醇100微升，輕輕洗滌，棄液體，室溫烘干，倒扣于吸水紙上，靜置約15min，用槍吸取液體；加入水(4℃)25微升；利用超微量紫外分光光度計測定rna濃度。逆轉(zhuǎn)錄：實驗樣本rna體積根據(jù)測定結(jié)果濃度確定總量小于1ug，加樣取0.5ug樣本根據(jù)試劑盒說明配制成20微升體積；加樣；于mycyclerbiorao基因擴(kuò)增儀上進(jìn)行擴(kuò)增；real-timepcr：取sybpgreen，ddh2o，上下游引物進(jìn)行冰上解凍，上下輕緩顛倒混勻，配制前適當(dāng)離心；配制預(yù)混液20微升；加樣；于bioraoopticon2real-timepcrdetector上進(jìn)行real-timepcr。pcr擴(kuò)增反應(yīng)體系20微升。取pcr產(chǎn)物用1％瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)成像，目標(biāo)mrna的表達(dá)使用內(nèi)參β-action進(jìn)行校正。檢測結(jié)果如下所示：各組大鼠血清il-1β、tnf-α含量：組別nil-1β含量(pg/ml)tnf-α含量(pg/ml)空白對照組1024.26±2.50306.94±31.96模型組1040.43±2.15▲▲504.94±34.61▲▲sasp組1032.33±4.02**#388.08±54.96**低劑量組1035.76±3.69**421.33±51.84**中劑量組932.67±2.89**#391.07±36.35**高劑量組1031.94±2.69**##384.88±37.69**注：**表示與模型組相比p<0.01；#表示與低劑量組相比p<0.05，##表示與低劑量組相比p<0.01；▲▲表示與空白對照組相比p<0.01。從上述結(jié)果可以看出與空白對照組大鼠相比，模型組tlr4表達(dá)顯著升高，差異有非常顯著性意義(p<0.01)；與模型組大鼠相比，sasp組、各劑量組tlr4表達(dá)均顯著降低，差異有非常顯著性意義(p<0.01)；各劑量組tlr4表達(dá)均低于sasp組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，各劑量組之間tlr4表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。各組大鼠結(jié)腸組織tlr4、myd88、nf-κb(p65)表達(dá)結(jié)果：組別ntlr4myd88nf-κb(p65)空白對照組61.19±0.230.76±0.400.88±0.30模型組62.55±1.23▲▲0.99±0.202.58±1.11▲▲sasp組61.16±0.17**0.12±0.02**0.44±0.05**低劑量組60.26±0.42**0.17±0.05**0.29±0.05**中劑量組60.76±0.12**0.14±0.04**0.34±0.05**高劑量組60.79±0.25**0.14±0.03**0.22±0.07**注：**表示與模型組相比p<0.01；▲▲表示與空白對照組相比p<0.01。由此得出與空白對照組大鼠相比，模型組nf-κb(p65)表達(dá)顯著升高，差異有非常顯著性意義(p<0.01)，與模型組大鼠相比，sasp組、各劑量組nf-κb(p65)均呈現(xiàn)低表達(dá)，差異有非常顯著性意義(p<0.01)；各劑量組nf-κb(p65)表達(dá)均低于sasp組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，各劑量組之間nf-κb(p65)表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。綜上所述，對各組大鼠血清il-1β、tnf-α含量以及結(jié)腸組織tlr4、myd88和nf-κb表達(dá)的測定，發(fā)現(xiàn)與空白對照組相比，模型組大鼠tlr4、nf-κb(p65)表達(dá)顯著升高，il-1β、tnf-α含量顯著升高，差異有非常顯著性意義(p<0.01)，各劑量組大鼠結(jié)腸組織較模型組tlr4、myd88和nf-κb呈現(xiàn)低表達(dá)，血清il-1β、tnf-α含量顯著降低，差異有非常顯著性意義(p<0.01)，由此可以說明本發(fā)明可有效降低這些基因的表達(dá)和促炎因子的含量，說明阻斷tlr4、nf-κb通路，降低促炎因子的分泌，是有效治療潰瘍性結(jié)腸炎的方法之一。當(dāng)前第1頁12