本發(fā)明涉及一種心肌仿生支架的制備方法，屬于醫(yī)用材料制備技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
如肌組織工程的目的是在可模擬體內(nèi)屯、肌姐織、由細(xì)胞和生物材料組成的支架的引導(dǎo)作用下實現(xiàn)受損，心肌的修復(fù)或者在體外進行藥物篩選，排除可能會引起心臟毒性副作用的藥物。仿生支架設(shè)計的重要因素包括了生物材料的選擇和支架的制備工藝。近些年來，多種天然聚合物（如膠原、殼聚糖、纖維蛋白、明膠等）和合成聚合物（如聚己內(nèi)醋、聚二甲基珪氧燒）應(yīng)用于心肌組織工程中。支架的物理性能（如空間結(jié)構(gòu)、力學(xué)性能、孔隙率等）和化學(xué)性能（如親疏水性、表面粘附蛋白等）不僅影響支架本身的穩(wěn)定性，同時也會影響培養(yǎng)在支架上的細(xì)胞的錯定、粘附、生長、増殖和分化等一系列細(xì)胞行為。心肌組織的軟硬度分布在1kpa～300kpa之間，因此在體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞、模擬體內(nèi)必肌組織時，仿生支架應(yīng)當(dāng)為必肌細(xì)胞提供適宜的軟硬度。此外，在心肌組織工程中，支架的電學(xué)性能對具有電生理活動的心肌組織而言也會產(chǎn)生重要的影響。
生物可降解性聚合物支架能夠在一定時間內(nèi)保持支架的支撐性能，隨后可降解為無毒物質(zhì)，被組織完全吸收，不良反應(yīng)較少，較金屬支架更具優(yōu)勢，但是心肌細(xì)胞在正常條件下會劇烈跳動，心肌細(xì)胞能夠帶動組織工程支架材料的運動。所以會出現(xiàn)移植體內(nèi)后發(fā)生嚴(yán)重的必律失常的問題，所以制備一種具有優(yōu)異彈性性能，且負(fù)載牢固，可被人體吸收的心肌仿生支架很有必要。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題：針對現(xiàn)有真絲織物抗皺處理后易降低織物力學(xué)強度，且有化學(xué)物質(zhì)殘留釋放甲醛的問題，提供了一種真絲織物的抗皺處理方法。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下所述的技術(shù)方案是：
（1）取鹿茸球磨并過200目篩，得鹿茸粉末，按質(zhì)量比1:10，將鹿茸粉末與磷酸鹽緩沖液混合，勻漿處理后靜置、離心分離并收集上層清液、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得濃縮凝膠液；
（2）取扇貝閉殼肌，按質(zhì)量比1:5，將扇貝閉殼肌與緩沖液混合，均質(zhì)處理后靜置，離心分離并收集下層沉淀，真空冷凍干燥得閉殼肌肌原纖維；
（3）按體積比1:10，將氯化鈉溶液與磷酸鹽緩沖液混合得混合液，按質(zhì)量比1:8，將閉殼肌肌原纖維添加至混合液中，均質(zhì)處理后靜置，離心分離收集上層清液，透析脫鹽得肌原纖維蛋白凝膠液；
（4）按質(zhì)量比1:5，將濃縮凝膠液與肌原纖維蛋白凝膠液混合，超聲分散得分散混合液，澆注后冷凍保得冷凍物料，收集冷凍物料經(jīng)液氮冷凍后，再紫外滅菌處理，即可制備得一種心肌仿生支架。
步驟1和3中其中一項所述的磷酸鹽緩沖液為0.05mol/l、ph7.0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉溶液。
步驟3中所述的均質(zhì)處理溫度為0～5℃。
步驟4所述的紫外滅菌處理條件為采用紫外線發(fā)生器以500μw/m2劑量輻照處理45～60min。
本發(fā)明與其他方法相比，有益技術(shù)效果是：
（1）本發(fā)明通過對鹿茸進行提取，收集蛋白聚糖，與提取的肌原蛋白結(jié)合制備并澆注冷凍成型，成型制備的心肌支架具有與心肌纖維相似的孔道結(jié)構(gòu)，有利于心肌細(xì)胞的恢復(fù)再生，提高心肌細(xì)胞復(fù)原的速率，增強支架移植后心肌細(xì)胞的功能恢復(fù)；
（2）本發(fā)明通過對扇貝閉合肌進行提取，收集閉合肌肌原蛋白，由于肌原蛋白分子中的酚羥基既能提供h生成氫鍵，同時分子本身存在的孤對電子也能接受h形成氫鍵，肌原蛋白分子之間形成的氫鍵較強，有效增加制備的心肌支架與心肌纖維間的粘附性，當(dāng)心肌支架移植到后，不會因心臟高速和高強度的跳動而脫離心肌梗死部位，同時本發(fā)明制備的支架材料具有良好的彈性、可延展性、穩(wěn)定性、可塑性和有一定的機械強度，不會因心肌細(xì)胞的跳動損壞支架，且本發(fā)明制備的心肌支架具有良好的生物相容性，在體內(nèi)不引起炎癥反應(yīng)、毒性反應(yīng)和免疫排斥反應(yīng)，可自行降解，對人體無損害。
具體實施方式
取鹿茸并球磨并過200目篩，得鹿茸粉末，按質(zhì)量比1:10，將鹿茸粉末與0.05mol/l、ph7.0的磷酸氫二鉀-磷酸二氫鉀緩沖液混合，在室溫下以800～1100r/min勻漿處理2～3h，靜置后再在3500～4000r/min下離心分離10～15min，收集上層清液并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/5，制備得濃縮凝膠液；取扇貝閉殼肌，按質(zhì)量比1:5，將扇貝閉殼肌與0.05mol/l、ph7.0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉溶液混合，在0～5℃冰水浴下均質(zhì)處理3～5h后，靜置1～2h后，在3500～4000r/min下離心分離10～15min，收集下層沉淀并真空冷凍干燥，得閉殼肌肌原纖維；按體積比1:10，將0.05mol/l氯化鈉溶液與0.05mol/l、ph7.0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉溶液混合得混合液，隨后按質(zhì)量比1:8，將閉殼肌肌原纖維添加至混合液中，在0～5℃冰水浴下均質(zhì)處理3～5h后，靜置1～2h后，在3500～4000r/min下離心分離10～15min，收集上層清液并置于透析袋中透析脫鹽20～24h，得肌原纖維蛋白凝膠液；按質(zhì)量比1:5，將濃縮凝膠液與肌原纖維蛋白凝膠液混合并置于200～300w下超聲分散處理10～15min，得分散混合液，將分散混合液澆注至模具中，待澆注完成后，將模具置于-20～-15℃下冷凍保存1～2h，得冷凍物料，收集冷凍物料并浸入液氮中，靜置處理25～30s后，將物料取出，在0～5℃下，用紫外線發(fā)生器以500μw/m2劑量輻照處理45～60min，待紫外照射完成后，在-20～-15℃下靜置20～24h，即可制備得一種心肌仿生支架。
實例1
取鹿茸并球磨并過200目篩，得鹿茸粉末，按質(zhì)量比1:10，將鹿茸粉末與0.05mol/l、ph7.0的磷酸氫二鉀-磷酸二氫鉀緩沖液混合，在室溫下以800r/min勻漿處理2h，靜置后再在3500r/min下離心分離10min，收集上層清液并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/5，制備得濃縮凝膠液；取扇貝閉殼肌，按質(zhì)量比1:5，將扇貝閉殼肌與0.05mol/l、ph7.0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉溶液混合，在0℃冰水浴下均質(zhì)處理3h后，靜置1h后，在3500r/min下離心分離10min，收集下層沉淀并真空冷凍干燥，得閉殼肌肌原纖維；按體積比1:10，將0.05mol/l氯化鈉溶液與0.05mol/l、ph7.0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉溶液混合得混合液，隨后按質(zhì)量比1:8，將閉殼肌肌原纖維添加至混合液中，在0℃冰水浴下均質(zhì)處理3h后，靜置1h后，在3500r/min下離心分離10min，收集上層清液并置于透析袋中透析脫鹽20h，得肌原纖維蛋白凝膠液；按質(zhì)量比1:5，將濃縮凝膠液與肌原纖維蛋白凝膠液混合并置于200w下超聲分散處理10min，得分散混合液，將分散混合液澆注至模具中，待澆注完成后，將模具置于-20℃下冷凍保存1h，得冷凍物料，收集冷凍物料并浸入液氮中，靜置處理25s后，將物料取出，在0℃下，用紫外線發(fā)生器以500μw/m2劑量輻照處理45min，待紫外照射完成后，在-20℃下靜置20h，即可制備得一種心肌仿生支架。
實例2
取鹿茸并球磨并過200目篩，得鹿茸粉末，按質(zhì)量比1:10，將鹿茸粉末與0.05mol/l、ph7.0的磷酸氫二鉀-磷酸二氫鉀緩沖液混合，在室溫下以950r/min勻漿處理3h，靜置后再在3750r/min下離心分離12min，收集上層清液并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/5，制備得濃縮凝膠液；取扇貝閉殼肌，按質(zhì)量比1:5，將扇貝閉殼肌與0.05mol/l、ph7.0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉溶液混合，在2℃冰水浴下均質(zhì)處理4h后，靜置2h后，在3750r/min下離心分離13min，收集下層沉淀并真空冷凍干燥，得閉殼肌肌原纖維；按體積比1:10，將0.05mol/l氯化鈉溶液與0.05mol/l、ph7.0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉溶液混合得混合液，隨后按質(zhì)量比1:8，將閉殼肌肌原纖維添加至混合液中，在2℃冰水浴下均質(zhì)處理4h后，靜置2h后，在3750r/min下離心分離12min，收集上層清液并置于透析袋中透析脫鹽22h，得肌原纖維蛋白凝膠液；按質(zhì)量比1:5，將濃縮凝膠液與肌原纖維蛋白凝膠液混合并置于250w下超聲分散處理12min，得分散混合液，將分散混合液澆注至模具中，待澆注完成后，將模具置于-17℃下冷凍保存2h，得冷凍物料，收集冷凍物料并浸入液氮中，靜置處理27s后，將物料取出，在4℃下，用紫外線發(fā)生器以500μw/m2劑量輻照處理47min，待紫外照射完成后，在-17℃下靜置22h，即可制備得一種心肌仿生支架。
實例3
取鹿茸并球磨并過200目篩，得鹿茸粉末，按質(zhì)量比1:10，將鹿茸粉末與0.05mol/l、ph7.0的磷酸氫二鉀-磷酸二氫鉀緩沖液混合，在室溫下以1100r/min勻漿處理3h，靜置后再在4000r/min下離心分離15min，收集上層清液并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/5，制備得濃縮凝膠液；取扇貝閉殼肌，按質(zhì)量比1:5，將扇貝閉殼肌與0.05mol/l、ph7.0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉溶液混合，在5℃冰水浴下均質(zhì)處理5h后，靜置2h后，在4000r/min下離心分離15min，收集下層沉淀并真空冷凍干燥，得閉殼肌肌原纖維；按體積比1:10，將0.05mol/l氯化鈉溶液與0.05mol/l、ph7.0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉溶液混合得混合液，隨后按質(zhì)量比1:8，將閉殼肌肌原纖維添加至混合液中，在5℃冰水浴下均質(zhì)處理5h后，靜置2h后，在4000r/min下離心分離15min，收集上層清液并置于透析袋中透析脫鹽24h，得肌原纖維蛋白凝膠液；按質(zhì)量比1:5，將濃縮凝膠液與肌原纖維蛋白凝膠液混合并置于300w下超聲分散處理15min，得分散混合液，將分散混合液澆注至模具中，待澆注完成后，將模具置于-15℃下冷凍保存2h，得冷凍物料，收集冷凍物料并浸入液氮中，靜置處理30s后，將物料取出，在5℃下，用紫外線發(fā)生器以500μw/m2劑量輻照處理60min，待紫外照射完成后，在-15℃下靜置24h，即可制備得一種心肌仿生支架。
下面將以殼聚糖替換本發(fā)明肌原蛋白制備心肌仿生支架為空白對照組和本發(fā)明制備的心肌仿生支架的實例1，2，3進行對比：
由上表可知，本發(fā)明制備的心肌支架具有優(yōu)異的力學(xué)性能和良好的生物相容性。