本申請是申請日為2010年5月14日，發(fā)明名稱為“用于以sirpα-cd47的相互作用為靶標治療血液癌癥的組合物和方法”的中國專利申請no.2010800213987的分案申請。

相關(guān)申請

本申請要求美國臨時專利申請no.61/178,553的優(yōu)先權(quán)。

本發(fā)明涉及以sirpα-cd47的相互作用為靶標從而治療血液癌癥(特別是人類急性粒細胞白血病(aml))，以及用于該目的的化合物。

背景技術(shù)：

雖然供體-受體的人白細胞抗原具有遺傳同一性，但是在造血干細胞的移植中仍會發(fā)生移植失敗，這表明有其它因素調(diào)節(jié)移植。最近通過非肥胖糖尿病(nod)-重癥聯(lián)合免疫缺陷(scid)的異種移植模型發(fā)現(xiàn)，與具有等效的免疫缺陷相關(guān)突變的其它品系相比，nod情況能進行更好的造血移植(takenaka,k.等，polymorphisminsirpamodulatesengraftmentofhumanhematopoieticstemcells.nat.immunol.8,1313-1323(2007))。已經(jīng)鑒定出sirpa等位基因的多態(tài)性，并表明其是導致所分析的小鼠品系之間的移植差異的原因。雖然nod情況可給予人移植最好的支持，但是具有sirpa的其它多態(tài)性的小鼠不能被移植(即nod.nor-iddl3.scid)。在小鼠和人類中，sirpa編碼sirpα蛋白，所述的sirpα蛋白與其配體cd47相互作用。在造血系統(tǒng)中，sirpα主要發(fā)現(xiàn)于巨噬細胞、樹突細胞和粒細胞中，而cd47存在于大多數(shù)造血細胞中(matozaki,t.,murata,y.,okazawa,h.&ohnishi,h.functionsandmolecularmechanismsofthecd47-sirpalphasignallingpathway.trendscellbiol.19,72-80(2009))。據(jù)顯示，小鼠sirpa等位基因在與cd47相互作用的胞外的免疫球蛋白的v樣結(jié)構(gòu)域中是高度多態(tài)性的。對三十七(37)個不相關(guān)的正常人對照進行測序，鑒定出了4種多態(tài)性，這表明人的sirpa等位基因同小鼠的sirpa等位基因一樣，也是多態(tài)的(takenaka等，同上)。

大量的工作已經(jīng)表明，人類急性粒細胞白血病(aml)克隆是由白血病起始細胞(aml-lsc)分層組織和維持的(wang,j.c.&dick,j.e.cancerstemcells:lessonsfromleukemia.trendscellbiol.15,494-501(2005))。但是，對于用于控制aml-lsc的分子調(diào)節(jié)子仍然知之甚少。大多數(shù)的人aml樣本中均表達cd47，但是白血病母細胞的表達水平卻各不相同。相比于正常的hsc，人amllsc的cd47表達水平更高(majeti，r.等，cd47isanadverseprognosticfactorandtherapeuticantibodytargetonhumanacutemyeloidleukemiastemcells.cell138,286(2009))。較高的cd47表達在aml中已經(jīng)顯示為獨立的不良預(yù)測因素(majeti等，同上)。用直抗cd47的單克隆抗體治療移植了人aml的免疫缺陷小鼠，可導致小鼠骨髓中的白血病性移植的減少(majeti等，同上)。但是，由于cd47也與sirpγ和整聯(lián)蛋白β3亞基相結(jié)合，因此尚不明確這種效應(yīng)是否是通過破壞cd47-sirpα相互作用而特異性地介導的(matozaki等，同上)。

發(fā)明概述

根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種用于治療血液癌癥的方法，其包括調(diào)節(jié)人sirpα和人cd47之間的相互作用。優(yōu)選的是，通過給予治療有效量的多肽，從而調(diào)節(jié)所述人sirpα和人cd47之間的相互作用，所述多肽能夠與人cd47的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合。

根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了一種用于治療血液癌癥的化合物的用途，所述化合物包含一種多肽，所述多肽能通過與人cd47的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合，從而調(diào)節(jié)人sirpα和人cd47之間的相互作用。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種化合物在制備用于治療血液癌癥的藥物中的用途，所述化合物包含一種多肽，所述多肽能夠通過與人cd47的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合，從而調(diào)節(jié)人sirpα和人cd47之間的相互作用。

優(yōu)選地，所述多肽包含可溶性人sirpα、或其cd47結(jié)合片段。在一些實施方案中，所述多肽為人sirpα的胞外結(jié)構(gòu)域。

在一個實施方案中，所述多肽為sirpα-fc融合蛋白，并優(yōu)選為seqidno.13。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種確定人類中的影響血液癌癥的存活率的遺傳多態(tài)性的方法，所述方法包括：

a)對多個患有血液癌癥的人的sirpα基因進行測序；

b)確定所述多個人的sirpα基因的核苷酸的差異；以及

c)將所述的核苷酸的差異與存活率相關(guān)聯(lián)，從而確定相關(guān)多態(tài)性。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種預(yù)測血液癌癥的存活可能性的方法，所述方法包括：

a)對受體的sirpα基因進行測序；以及

b)確定本文所述相關(guān)多態(tài)性是否存在。

根據(jù)本發(fā)明的一些實施方案，能夠調(diào)節(jié)人sirpα和人cd47之間的相互作用的多肽，選自由下列物質(zhì)所組成的組中：

a)由seqidno.1的氨基酸序列構(gòu)成的多肽；

b)由seqidno.1的氨基酸序列的cd47結(jié)合片段構(gòu)成的多肽，其中所述片段包含seqidno.1的第31、32、34、37、74、77、83、84、86、87、90、91、96、100、102、114、118、126位殘基中的至少一個；以及

c)a)和b)中所述多肽中的任意一個的cd47結(jié)合變體，所述變體在該多肽的長度上的每7個氨基酸中具有至多一個氨基酸插入、缺失或置換，其中所述多肽包含seqidno.1的第31、32、34、37、74、77、83、84、86、87、90、91、96、100、102、114、118、126位殘基中的至少一個。

根據(jù)本發(fā)明的另一實施方案，能夠調(diào)節(jié)人sirpα和人cd47之間的相互作用的多肽，選自由下列物質(zhì)所組成的組中：

a)由seqidno.2的氨基酸序列構(gòu)成的多肽；

b)由seqidno.2的氨基酸序列的cd47結(jié)合片段構(gòu)成的多肽；以及

c)a)和b)中所述多肽中的任意一個的cd47結(jié)合變體，所述變體在該多肽的長度上的每7個氨基酸中具有至多一個氨基酸插入、缺失或置換；

其中：

i.在所述多肽中，seqidno.2的第31、32、34、37、74、77、83、84、86、87、90、91、96、100、102、114、118、126位殘基中的至少一個被置換為seqidno.1的第31、32、34、37、74、77、83、84、86、87、90、91、96、100、102、114、118、126位的相應(yīng)殘基；或

ii.在所述多肽中，seqidno.2的第129和130位殘基中至少一個是缺失的。

根據(jù)本發(fā)明的另一實施方案，能夠調(diào)節(jié)人sirpα和人cd47之間的相互作用的多肽，選自由下列物質(zhì)所組成的組中：

a)由選自由seqidnos.4-7所組成的組中的氨基酸序列構(gòu)成的多肽；

b)由選自由seqidnos.4-7所組成的組中的氨基酸序列的cd47結(jié)合片段構(gòu)成的多肽；以及

c)a)和b)所述多肽的任意一個的cd47結(jié)合變體，所述變體在該多肽的長度上的每7個氨基酸中具有至多一個氨基酸插入、缺失或置換。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種用于治療血液癌癥的藥物組合物，所述藥物組合物包含有效量的上述多肽以及可藥用的載體，所述血液癌癥優(yōu)選白血病，更優(yōu)選人類急性粒細胞白血病。

優(yōu)選地，所述血液癌癥優(yōu)選地包括存在cd47+的癌細胞或腫瘤(cd47+presentingcancercellortumor)。

附圖說明

在隨后的發(fā)明詳述中，本發(fā)明的優(yōu)選實施方案的上述特征和其它特征將更加清楚，所述發(fā)明詳述將參照以下附圖，其中：

圖1示出了攜帶nor-iddl3基因座的nod.scid小鼠(nod.nor-iddl3.scid)中無法進行人aml-lsc的再增殖(repopulation)。y軸表示的是在注射了來自4個患者的原發(fā)aml細胞7-8周之后，nod.scid(ns)和nod.nor-iddl3.scid(idd)小鼠的以下器官中發(fā)生人細胞移植的百分比：所注射的右股骨(rf)、非注射點的骨頭的骨髓(bm)或脾(spi)。通過靜脈(iv)或股骨內(nèi)(if)注射，將3×10⁶個細胞導入每只小鼠體內(nèi)。移植了同一患者樣本的小鼠用相同形狀的標記表示。

圖2(a)示出了nod.nor-iddl3.scid小鼠中的aml細胞有缺陷的歸巢(homing)。通過流式細胞儀檢測以下小鼠的bm或脾中發(fā)生人cd45+移植的百分比：在靜脈注射原發(fā)性aml細胞16h后，亞致死劑量輻照nod.scid和nod.nor-iddl3.scid(idd)的小鼠。各個點、方形或三角形表示的是一只小鼠。條狀物表示平均值±sem。

圖2(b)示出了aml-lsc的功能被天然免疫細胞抑制。用抗小鼠cd122抗體對nod.scid或nod.nor-iddl3.scid(idd)小鼠進行預(yù)處理，將具有不同白血病亞型和細胞遺傳標記的10例aml患者的原發(fā)細胞股骨內(nèi)移植入上述小鼠中。7-8周后測定在所注射的右股骨(rf)、未經(jīng)注射的骨頭的骨髓(bm)、或脾中的人細胞移植的百分比(y軸)。與未經(jīng)處理的小鼠(圖1)相比，使用了抗cd122的預(yù)處理降低了idd小鼠對白血病細胞移植的抑制。

圖3示出了小鼠的天然免疫對人類急性粒細胞白血病(aml)在小鼠中異種移植的影響。a)nod.scid或nod.nor-iddl3.scid中自然殺傷(nk)細胞和巨噬細胞(mφ)群的調(diào)節(jié)。示出了小鼠nk細胞和巨噬細胞的表面表型。b)巨噬細胞衰竭后人aml細胞移植入nod.scid或nod.nor-iddl3.scid(idd)中。圖中示出了在收獲器官中人白血病細胞的百分比。

圖4示出了人aml細胞的體外吞噬作用分析。a)cfse標記的人aml細胞與nod.scid或nod.nor-iddl3.scid小鼠巨噬細胞共孵育。2小時后收獲巨噬細胞，并且通過流式細胞儀檢測f4/80+cfse陽性小鼠巨噬細胞的百分比。b)通過熒光激活細胞分類術(shù)分選cfse+/f4/80+細胞，并通過共聚焦顯微鏡顯影。c)用細胞松弛素d預(yù)處理共培養(yǎng)物，所述細胞松弛素d通過抑制巨噬細胞中的肌動蛋白的聚合作用，而抑制吞噬作用。d)示出了未經(jīng)處理的或如上文所述的經(jīng)細胞松弛素d處理的cfse+/f4/80+小鼠巨噬細胞中人cd45的表達。

圖5示出了對人sirpα(v2)融合蛋白進行的體外預(yù)孵育，阻斷了原發(fā)aml細胞歸巢到nod.scid小鼠骨髓(bm)和脾臟中。

a)采用鼠抗人抗體，通過流式細胞儀，測量人cd44+aml細胞在bm和脾臟的百分比。每個符號代表不同的小鼠。b)通過下式計算aml細胞歸巢到nod.scid的bm和脾臟中的效率：[回收的aml細胞總數(shù)]/[所注射的aml細胞總數(shù)]×100。

圖6示出了采用人sirpα融合蛋白(hsirpα-fc)的體外處理降低了原發(fā)性aml細胞在nod.scid小鼠中的再增殖能力。條狀物表示的是hcd45+細胞的平均百分比。

圖7示出了采用人sirpα融合蛋白(hsirpα-fc)的體內(nèi)處理降低了原發(fā)性aml細胞在nod.scid小鼠中的移植。通過流式細胞儀分析染色的細胞，從而在hcd45+細胞的百分比的基礎(chǔ)上確定每個小鼠中的移植水平。條狀物表示各組中hcd45+人細胞的平均百分比。所顯示的p值用于比較hsirpα-fc處理與pbs處理。

圖8示出了wo09/046541中所公開的小鼠sirpα的蛋白質(zhì)序列比對。采用由bm的巨噬細胞所制備的cdna作為模板，對nod和nor小鼠sirpα轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進行pcr擴增。b6小鼠序列來自ensembl數(shù)據(jù)庫。

圖9示出了wo09/046541中所公開的小鼠和人sirpαigv結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)序列比對。(a)采用由bm巨噬細胞所制備的cdna作為模板，對nod和nor小鼠sirpα轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進行pcr擴增。c57bl/6(b6)、balb/c和129/sv序列得自ensembl和ncbi數(shù)據(jù)庫。開放框代表的是b-折疊(所述b-折疊是在sirpα的x-射線晶體結(jié)構(gòu)中鑒定得到的)并對應(yīng)于ig重鏈可變區(qū)中的類似區(qū)域。將在小鼠品系之間不相同的氨基酸打上陰影。將b6用作親本序列。(b)對人類基因組單體型圖(hapmap)第1階段發(fā)布的37個個體的基因組dna進行pcr擴增，從而得到包含igv結(jié)構(gòu)域的sirpα的外顯子3。開放框區(qū)域表示的是與(a)相同的特征，其以vl作為親本序列。

發(fā)明詳述

在以下描述中，為了深入地理解本發(fā)明，對許多具體細節(jié)進行了說明。但是，應(yīng)當理解，本發(fā)明在不包括這些具體細節(jié)的情況下也可以實施。

申請人示出了在異種移植模型中，cd47-sirpα的相互作用調(diào)節(jié)人aml-lsc的歸巢和移植。通過以cd47或sirpα為靶標而中斷cd47-sirpα信號，是一種有可能用于根除患者體內(nèi)的血液的cd47+癌細胞和腫瘤的治療方法，所述癌細胞和腫瘤包括癌干細胞，例如aml-lsc。

本文所用的術(shù)語“癌干細胞”是指在腫瘤和血液癌癥(例如aml)中發(fā)現(xiàn)的癌細胞，在aml中癌干細胞被稱為白血病干細胞(aml-lsc)，其在生物學上不同于塊狀腫瘤細胞，并且具有與干細胞相關(guān)的特性，特別是自我更新和增殖的能力，并在特定的癌樣本中產(chǎn)生所有細胞類型。

本文所用的術(shù)語“保守氨基酸置換”是指在某些共同特性的基礎(chǔ)上對氨基酸進行分組。對各個的氨基酸的共同特性進行定義的一種可行方式是，對同源生物體的相應(yīng)蛋白質(zhì)的氨基酸的改變的歸一頻率進行分析(schulz,g.e.andr.h.schirmer.,principlesofproteinstructure,springer-verlag)。根據(jù)該分析，可以這樣定義氨基酸組，其中在一組內(nèi)的氨基酸彼此優(yōu)先互換，因此在其對整體蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響上彼此最為類似(schulz,g.e.andr.h.schirmer.,principlesofproteinstructure,springer-verlag)。以這種方式定義的氨基酸組的例子包括：

(i)帶電組，由glu和asp、lys、arg和his組成，

(ii)帶正電組，由lys、arg和his組成，

(iii)帶負電組，由giu和asp組成，

(iv)芳香組，由phe、tyr和trp組成，

(v)氮環(huán)組，由his和trp組成，

(vi)大型脂肪族非極性組，由val、leu和ile組成，

(vii)弱極性組，由met和cys組成，

(viii)小殘基組，由ser、thr、asp、asn、gly、ala、glu、gln和pro組成，

(ix)脂肪族組，由val、leu、ile、met和cys組成，以及

(x)小羥基組，由ser和thr組成。

除上述各組外，每個氨基酸殘基可形成其特有的組，并且由單個氨基酸所形成的組可由本領(lǐng)域常用的該氨基酸的一個和/或三個字母的縮寫來表示。

本文中所用的術(shù)語“移植”細胞(例如癌干細胞，并優(yōu)選為人急性粒細胞白血病干細胞)，指的是將所述干細胞放入(例如通過注射放入)動物中，其中所述細胞在體內(nèi)持續(xù)存在。這可以很容易地通過腫瘤干細胞的能力(例如增殖能力)測量。

本文中所用的術(shù)語“片段”涉及多肽或多核苷酸，是指僅由相關(guān)基因的完整的多肽序列和結(jié)構(gòu)或核苷酸序列和結(jié)構(gòu)的一部分所組成的多肽或多核苷酸。多肽片段可包括天然多肽的c-末端缺失和/或n-末端缺失，或可來自分子內(nèi)部的部分。類似地，多核苷酸片段可包括天然多核苷酸的3'和/或5'缺失，或可來自分子內(nèi)部的部分。

本文中所用的術(shù)語“融合蛋白”是指復(fù)合多肽，即，單個鄰接的氨基酸序列，由兩個(或多個)不同的異源多肽組成，所述異源多肽在同一個氨基酸序列中通常不融合在一起或不天然融合在一起。因此，融合蛋白可包括這樣的單一的氨基酸序列，其中所述單一的氨基酸序列包含兩個完全不同的氨基酸序列或兩個相似或相同的多肽序列，而這些序列通常不會在自然發(fā)現(xiàn)的單個氨基酸序列中以相同的結(jié)構(gòu)組合在一起。通?？赏ㄟ^以下方法制備融合蛋白：采用重組核酸的方法，即作為重組基因融合產(chǎn)物的轉(zhuǎn)錄和翻譯的結(jié)果，其中所述融合包含編碼本發(fā)明的多肽的片段和編碼異源多肽的片段；或者通過本領(lǐng)域公知的化學合成方法。融合蛋白還可包含融合蛋白的組成性多肽之間的連接體多肽。術(shù)語“融合構(gòu)建體”或“融合蛋白構(gòu)建體”通常是指編碼融合蛋白的多核苷酸。在一個實施方案中，融合蛋白為與ig分子的一部分相融合的本文所述的多肽。融合蛋白的ig部分可包括免疫球蛋白恒定區(qū)，例如人cγl結(jié)構(gòu)域或cγ4結(jié)構(gòu)域(如人igcγl結(jié)構(gòu)域或igcγ4結(jié)構(gòu)域的鉸合部、ch2和ch3區(qū)域(參見(例如)capon等，美國專利nos.5,116,964；5,580,756；5,844,095等))。在一個優(yōu)選的實施方案中，ig融合蛋白包括與免疫球蛋白恒定區(qū)(例如fc區(qū)域)偶聯(lián)的本文所述的多肽。

在多肽與fc結(jié)構(gòu)域相偶聯(lián)的實施方案中，所述fc結(jié)構(gòu)域可選自任意免疫球蛋白(例如igg，如igg1或igg2a或igg4)。適合地，所選的fc結(jié)構(gòu)域是經(jīng)過修飾的(例如，通過在與fc受體相結(jié)合的關(guān)鍵殘基上進行氨基酸置換)，以減少或防止與fc受體在體內(nèi)的結(jié)合(即，經(jīng)修飾的fc結(jié)構(gòu)域優(yōu)選地表現(xiàn)出降低的親和力，所述親和力是針對內(nèi)源性fc受體，而非新生fc受體(fcrn)的，所述內(nèi)源性fc受體包括：例如，fcγri，fcγrii和fcγriii)。同時，所選的fc結(jié)構(gòu)域優(yōu)選為經(jīng)修飾而改變了效應(yīng)子功能的fc結(jié)構(gòu)域，如降低了補體的結(jié)合和/或降低或消除補體依賴細胞毒性。(例如)clark及其同事已經(jīng)對這樣的修飾進行了大量的描述，他們設(shè)計和描述了一系列igg1或igg2和igg4的fc結(jié)構(gòu)域的突變體，以及其與fcγr的結(jié)合屬性(armour等，1999；armour等，2002，在本申請中通過引用的方式將其內(nèi)容并入到本文中)。例如，選自第234、235、236、237、297、318、320和322位的一個或多個氨基酸可被置換，從而改變對效應(yīng)子配體的親和力，所述效應(yīng)子配體例如為fc受體或補體的cl組分，如winter等的美國專利us5,624,821和5,648,260中所詳細報道的那樣。如(例如)us6,194,551所述，選自第329、331和322位的一個或多個氨基酸也可被置換，從而改變c1q的結(jié)合并且/或者降低或消除cdc。在特別優(yōu)選的經(jīng)修飾的fc結(jié)構(gòu)域中，fc結(jié)構(gòu)域來自igg1(wines等，2000)，并且包含在氨基酸第234和/或235位的氨基酸(即leu²³⁴和/或leu²³⁵)修飾。這些亮氨酸殘基位于igg1的低鉸合部區(qū)，fc受體與fc結(jié)構(gòu)域在所述鉸合部區(qū)處連接?？蓪⑺隽涟彼釟埢械囊粋€或兩個進行置換或刪除，以阻止fc受體的連接(即結(jié)合)；例如可將leu²³⁴和leu²³⁵中的一個或兩個置換為丙氨酸(即l234a和/或l235a)，或其它合適的氨基酸(wines等，2000)。

在其他實施方案中，通過引入一個或多個氨基酸的修飾，而改善融合蛋白的半衰期，所述引入通常是氨基酸置換的形式，例如，在第252位殘基上(例如)引入thr，在第254位殘基上(例如)引入ser，和/或在第256位殘基上(例如)引入phe。也可作出其它修飾來改善半衰期，如通過改變chl或cl區(qū)域從而引入補救受體基序(salvagereceptormotif)，如發(fā)現(xiàn)于igg的fc區(qū)域的ch2結(jié)構(gòu)域的2個回環(huán)之間的基序。在(例如)us5,869,046和us6,121,022中描述了上述改變。

如us6194551所述，可通過改變恒定區(qū)第329、331和322位的氨基酸，改變c1q的結(jié)合或降低補體依賴的細胞毒性。如wo94/029351所述，可通過在恒定區(qū)第231和239位引入置換，而進一步改變抗體固定補體的能力。

本文所用的術(shù)語“血液癌癥”是指血液的癌癥，并且其中包括白血病、淋巴瘤和骨髓瘤等?！鞍籽　笔侵秆旱囊环N癌癥，其中產(chǎn)生了過量的對抵抗感染不起作用的白細胞，從而擠占了組成血液的其它部分，如血小板和紅細胞?？梢岳斫?，白血病的例子分為急性的或慢性的。某些形式的白血病可以是(例如)，急性淋巴細胞白血病(all)；急性粒細胞白血病(aml)；慢性淋巴細胞白血病(cll)；慢性粒細胞白血病(cml)；骨髓增生性疾病/瘤(mpds)；骨髓增生異常綜合征?！傲馨土觥笔侵富羝娼鹆馨土?、惰性和侵襲性非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、和濾泡型淋巴瘤(小細胞和大細胞)等。骨髓瘤可指多發(fā)性骨髓瘤(mm)、巨細胞性骨髓瘤、重鏈骨髓瘤(heavychainmyeloma)、輕鏈骨髓瘤(lightchainmyeloma)或本斯-瓊斯骨髓瘤(bence-jonesmyeloma)。

術(shù)語“cd47+”用于表示與所述多肽結(jié)合的靶細胞的表型。可通過流式細胞儀，采用cd47抗體作為親合配體，來鑒定cd47+細胞。用于檢測cd47表型的細胞可以包括標準腫瘤活檢樣本，所述樣本特別包含從懷疑具有cd47+腫瘤細胞的個體中獲得的血液樣品。

本文中所用的術(shù)語“巨噬細胞去抑制”或“巨噬細胞的去抑制”是指對巨噬細胞的作用、活性和/或效果的去抑制、抑制的消除、提高或啟動。

本文中所用的術(shù)語“可藥用的載體”是指生理上可兼容的任意的和所有的溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲和吸收延緩劑等。可藥用的載體的例子包括水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、葡萄糖、甘油、乙醇等中的一種或多種，及其組合。在許多情況下，優(yōu)選在其成分中包括等滲劑(如糖)、多元醇(如甘露醇)、山梨醇，或氯化鈉?？伤幱玫妮d體，還可包括少量輔助物質(zhì)，如潤濕劑或乳化劑、防腐劑或緩沖劑，所述輔助物質(zhì)能延長藥劑的保質(zhì)期或提高藥效。

本文中所用的術(shù)語“多肽”和“蛋白質(zhì)”可互換使用，是指蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)片段、經(jīng)修飾的蛋白質(zhì)、氨基酸序列和合成的氨基酸序列。所述多肽可以是糖基化的或非糖基化的。

本文中所用的術(shù)語“預(yù)測”是指預(yù)測或鑒定受試者的臨床結(jié)果。預(yù)測包括提供疾病惡化的指征，還包括提供因疾病或其它情況的死亡的可能性的指征。

本文中所用的術(shù)語“治療有效量”是指經(jīng)過必要的特定時期達到所需治療效果的有效劑量。藥劑的治療有效量可根據(jù)各種因素(如疾病狀態(tài)、年齡、性別和個體重量)而變化，并且所述藥劑引起個體中的所需反應(yīng)的能力也可不同。治療有效量也具有如下特性：其治療性有益效果超過藥劑的任何毒性或不利影響。

根據(jù)一個方面，提供了一種治療血液癌癥的方法，其包括：調(diào)節(jié)人sirpα和人cd47之間的相互作用。優(yōu)選地，通過給予治療有效量的多肽，調(diào)節(jié)所述人sirpα和所述人cd47之間的相互作用，所述多肽能夠與人cd47的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合。

根據(jù)另一個方面，提供了一種用于治療血液癌癥的化合物的用途，所述化合物包括一種多肽，所述多肽能夠通過與人cd47的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合，來調(diào)節(jié)人sirpα和人cd47之間的相互作用。

根據(jù)另一個方面，提供了一種化合物在制備用于治療血液癌癥的藥物中的用途，所述化合物包括一種多肽，所述多肽能夠通過與人cd47的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合，來調(diào)節(jié)人sirpα和人cd47之間的相互作用。

在一些實施方案中，所述多肽包含可溶性人sirpα或其片段，優(yōu)選的是，所述多肽為人sirpα的胞外結(jié)構(gòu)域。

在一些實施方案中，所述多肽與第二蛋白(優(yōu)選igg的fc部分)融合。優(yōu)選地，所得的融合蛋白為seqidno.13。

在一些實施方案中，所述調(diào)節(jié)導致巨噬細胞的去抑制。

在一些實施方案中，所述血液癌癥為白血病，優(yōu)選地是，選自急性淋巴細胞白血病、急性粒細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、慢性粒細胞白血病、和骨髓增生異常綜合征，優(yōu)選為人急性粒細胞白血病。

在一些實施方案中，所述血液癌癥為淋巴瘤或骨髓瘤，所述淋巴瘤或骨髓瘤選自霍奇金淋巴瘤、惰性和侵襲性非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、濾泡型淋巴瘤(小細胞和大細胞)、多發(fā)性骨髓瘤(mm)、巨細胞性骨髓瘤、重鏈骨髓瘤、輕鏈骨髓瘤或本斯-瓊斯骨髓瘤。

目前顯示，在aml中sirpα-cd47相互作用的中斷，會導致?lián)p害aml細胞的歸巢、移植和遷移。這些效果是通過宿主骨髓微環(huán)境中的巨噬細胞，由經(jīng)改善的天然免疫監(jiān)視介導的。該治療方法有可能對其它占據(jù)了骨髓微環(huán)境生態(tài)位(bonemarrowmicroenvironmentalniche)的血液癌癥有效。

wo09/065541描述了sirpα的多態(tài)性使nod巨噬細胞具有分化能力，以支持人的造血作用。在圖8和9中再現(xiàn)了wo09/065541中所述的sirpα的蛋白質(zhì)序列比對。采用bm來源的巨噬細胞的cdna作為模板，對nod和nor小鼠的sirpα轉(zhuǎn)錄本進行pcr擴增。對nod和nor的sirpα編碼序列進行比較，結(jié)果顯示出有24個氨基酸是不同的，其中的20個氨基酸位于該分子的胞外類igv結(jié)構(gòu)域，在所述類igv結(jié)構(gòu)域中，相比于nor和b6，nod序列示出了18個置換和2個缺失。在nod和nor或b6的sirpα類igv結(jié)構(gòu)域的n-端中觀測到的差異，比之前報道的在b6、balb/c和129/sv品系的該區(qū)域中的差異(sano,s等，(1999)biochemj344pt3,667-75)更大。

wo09/065541進一步描述了sirpα的多態(tài)性使其與人cd47進行不同的結(jié)合。wo09/065541描述了對來自人類hapmap基因組計劃中的37個彼此不相關(guān)的正常個體的sirpαigv結(jié)構(gòu)域進行測序(其中所述個體分別來自高加索(ceu)、非洲(yri)、中國(chb)和日本(jpt))，并鑒定出了4個不同的sirpαigv等位基因，其反映出了18個氨基酸的組合變異，如圖9再現(xiàn)所示。申請人在預(yù)測的cd47結(jié)合殘基處觀察到人等位基因的變異，并且所述變異在區(qū)分nod和nor等位基因的sirpαigv結(jié)構(gòu)域的相同亞區(qū)域上。wo09/065541進一步教導了，人cd47對得自nod的sirpαigv結(jié)構(gòu)域的結(jié)合力非常高，并可用于預(yù)測人干細胞的移植，以及該效應(yīng)是通過cd47-sirpα信號介導的。

根據(jù)本發(fā)明，提供了一種確定人中的遺傳多態(tài)性影響血液癌癥的存活率的方法，所述方法包括：

a)對多個患有所述血液癌癥的人的sirpα基因進行測序；

b)確定在所述多個人中sirpα基因的核苷酸差異；以及

c)將核苷酸差異與存活率相關(guān)聯(lián)，從而確定相關(guān)多態(tài)性。

另外一個方面，還提供了一種預(yù)測血液癌癥存活可能性的方法，所述方法包括：

a)對受體的sirpα基因進行測序；以及

b)確定本文所述的相關(guān)多態(tài)性是否存在。

在一些實施方案中，所述核苷酸差異導致氨基酸差異，優(yōu)選為下列情形的至少一種：

a)seqidno.2的第31、32、34、37、74、77、83、84、86、87、90、91、96、100、102、114、118、126位殘基中的至少一個被置換為seqidno.1的第31、32、34、37、74、77、83、84、86、87、90、91、96、100、102、114、118、126位的相應(yīng)殘基；或

b)seqidno.2的第129和130位中的至少一個殘基的缺失。

另外，根據(jù)一些實施方案，能夠調(diào)節(jié)人sirpα和人cd47之間相互作用的所述多肽，選自由下列物質(zhì)組成的組中：

a)由seqidno.1的氨基酸序列構(gòu)成的多肽；

b)由seqidno.1的氨基酸序列的cd47結(jié)合片段構(gòu)成的多肽，其中所述片段包含seqidno.1的第31、32、34、37、74、77、83、84、86、87、90、91、96、100、102、114、118、126位殘基中的至少一個；以及

c)a)和b)中所述多肽中的任意一個的cd47結(jié)合變體，所述變體在該多肽的長度上的每7個氨基酸中具有至多一個氨基酸插入、缺失或置換，其中所述多肽包含seqidno.1的第31、32、34、37、74、77、83、84、86、87、90、91、96、100、102、114、118、126位殘基中的至少一個。

優(yōu)選地，所述多肽為cd47結(jié)合片段，并且在以下至少一個區(qū)域中包含至少3個連續(xù)氨基酸：所述區(qū)域為在seqidno.1內(nèi)第50-57、63-71、74-80、88-92、95-100、103-109、114-125或128-141位殘基之間的區(qū)域。

根據(jù)另一實施方案，能夠調(diào)節(jié)人sirpα和人cd47之間相互作用的所述多肽，選自由下列物質(zhì)組成的組中：

a)由seqidno.2的氨基酸序列構(gòu)成的多肽；

b)由seqidno.2的氨基酸序列的cd47結(jié)合片段構(gòu)成的多肽；以及

c)a)和b)中所述多肽中的任意一個的cd47結(jié)合變體，所述變體在該多肽的長度上的每7個氨基酸中具有至多一個氨基酸插入、缺失或置換；

其中：

i.在所述多肽中，seqidno.2的第31、32、34、37、74、77、83、84、86、87、90、91、96、100、102、114、118、126位殘基中的至少一個被置換為seqidno.1的第31、32、34、37、74、77、83、84、86、87、90、91、96、100、102、114、118、126位的相應(yīng)殘基；或

ii.在所述多肽中，seqidno.2的第129和130位殘基中的至少一個是缺失的。

優(yōu)選地，所述多肽為cd47結(jié)合片段，并且在以下至少一個區(qū)域中包含至少3個連續(xù)氨基酸：所述區(qū)域為在seqidno.2內(nèi)第50-57、63-71、74-80、88-92、95-100、103-109、114-125或128-143位殘基之間的區(qū)域。

根據(jù)另一實施方案，能夠調(diào)節(jié)人sirpα和人cd47之間相互作用的所述多肽，選自由下列物質(zhì)組成的組中：

a)由選自由seqidnos.4-7組成的組中的氨基酸序列構(gòu)成的多肽；

b)由選自由seqidnos.4-7組成的組中的氨基酸序列的cd47結(jié)合片段構(gòu)成的多肽；以及

c)a)和b)中所述多肽中的任意一個的cd47結(jié)合變體，所述變體在該多肽的長度上的每7個氨基酸中具有至多一個氨基酸插入、缺失或置換。

優(yōu)選地，所述多肽為cd47結(jié)合片段，并且在以下至少一個區(qū)域中包含至少3個連續(xù)氨基酸，所述區(qū)域為：seqidnos.4、6和7中任意一個內(nèi)第24-31、37-45、48-54、62-66、69-74、77-83、88-99或102-116位殘基之間的區(qū)域；或seqidno.5內(nèi)第24-31、37-45、48-54、62-66、69-74、77-83、88-99或102-115位殘基之間的區(qū)域。

在一些實施方案中，所述氨基酸插入、缺失或置換為保守氨基酸置換。在其它實施方案中，沒有氨基酸插入、缺失或置換。

在一些實施方案中，所述多肽為cd47結(jié)合片段，并且長度為6到30個氨基酸，以下優(yōu)選性依次增加的是，長度為8到28個氨基酸，長度為10到26個氨基酸，長度為12到24個氨基酸，長度為14到22個氨基酸。

在一些實施方案中，所述多肽與第二多肽融合，優(yōu)選igg的fc部分。在一個實施方案中，所述多肽為sirpα-fc融合蛋白，并且優(yōu)選為seqidno.13。

根據(jù)另一方面，提供了一種治療血液癌癥的藥物組合物，所述血液癌癥優(yōu)選為白血病，更優(yōu)選為人急性粒細胞白血病，所述藥物組合物包含有效量的本文所述的多肽以及可藥用的載體。

通過下面的實施例，進一步對本發(fā)明的優(yōu)點進行說明。本文所述的實施例及其具體細節(jié)僅用作說明之用，而不應(yīng)當用于對本發(fā)明的權(quán)利要求進行限制。

實施例

小鼠

在安大略癌癥研究所(位于加拿大多倫多市)內(nèi)在無菌條件下繁殖并飼養(yǎng)nod/ltsz-prdkc^sc/sc(nod.scid)(shultz,l.d.等，multipledefectsininnateandadaptiveimmunologicfunctioninnod/ltsz-scidmice.jimmunol154,180-191(1995))。在兒童醫(yī)院(位于安大略省多倫多市)內(nèi)在特定的無病原體或隔離條件下飼養(yǎng)nod.nor-iddl3小鼠。

將nod.nor-iddl3與nod.scid小鼠雜交產(chǎn)生nod.nor-iddl3.scid小鼠，然后進行兄妹交配，并通過表型輔助型的標記進行篩選，直到iddl3和scid基因座均獲得純合性(takenaka等，同上)。

將人造血細胞移植到小鼠體內(nèi)

獲得知情同意后，根據(jù)人體實驗委員會批準的程序，從患者中取得外周血細胞以及原發(fā)性或繼發(fā)性aml。在ficoll-泛影鈉(ficoll-hypaque)(得自位于美國新澤西州皮斯卡塔韋的pharmacia公司)上分離后，收集低密度細胞(小于1.077g/ml)，然后在含有10％二甲基亞砜的fcs中凍存。

移植人類細胞前，用¹³⁷csγ-輻照器發(fā)出的275cgy亞致死性地輻照8-10周齡小鼠24小時。移植7-8周后處死小鼠，通過流式細胞儀分析是否存在人cd45+細胞，而對小鼠的bm和脾中的人細胞的移植進行評估。在進行股骨內(nèi)移植的小鼠中，分別對所注射的股骨和其它骨頭(非注射的股骨，脛骨)進行分析。在一些實驗中，輻照后用200μg的抗小鼠cd122進行腹腔注射，從而對小鼠進行預(yù)處理。

流式細胞術(shù)

在流式細胞儀中采用lsrii(bd公司)。為了對小鼠中的人細胞的移植進行分析，收集小鼠骨髓中的細胞，并用結(jié)合藻紅蛋白-cy7的抗人cd45進行染色(hi.30；bdpharmingen公司)。

克隆到i型tm載體中的人sirpvl和v2

在5×hf緩沖液中采用含有xho1的正向引物、含有bgiii的反向引物和phusionhotstartii型高保真聚合酶，對puc57質(zhì)粒中的人sirpα變體1和2的cdna進行pcr擴增，以獲得sirpα變體1和2的完整的igv結(jié)構(gòu)域。

用xhol和bgiii對puc57sirpα載體進行限制性酶切。用ecori和bgiii對pinfuse-higg4-fcl進行酶切，并采用購自promega^tm公司的ligafastrapiddna連接體系，將sirpα插入物連接入pinfuse-higg4-fcl中。

將所得的pinfuse-higg4fc1-人sirpα載體轉(zhuǎn)化入購自invitrogen公司的oneshottop10感受態(tài)e.coli中。

轉(zhuǎn)染

用適當體積的optimem稀釋質(zhì)粒dna和fectin并混合。在空氣中含8％co2的濕氛條件下在37℃的培養(yǎng)箱中轉(zhuǎn)染freestyle^tm293-f細胞。轉(zhuǎn)染4-6天后收獲細胞或培養(yǎng)基。

收獲蛋白質(zhì)

收獲293f培養(yǎng)物中的fc蛋白。旋轉(zhuǎn)分離培養(yǎng)物，收集上清并通過pes0.45μm過濾器過濾，然后通過pes0.22μm過濾器過濾。采用centricon-70ml離心過濾器在3500×g下離心10-20分鐘，從而對上清進行濃縮，并在4℃下將所述上清在g柱中洗脫。蛋白質(zhì)收集在1mtrishcl(ph8.0)中。將該樣品通過離心進一步脫鹽，并用pbs重懸。

實施例1

為了研究原發(fā)性人aml中的cd47-sirpα相互作用的相關(guān)性，我們將3個aml患者的原發(fā)性細胞，通過靜脈注射(i.v.)移植到nod.scid和nod.nor-iddl3.scid(idd)小鼠中。上述aml樣品都不能移植入idd小鼠中，但是卻觀測到其大量移植入nod.scid小鼠中(圖1)，從而證實了之前用正常人hscs獲得的數(shù)據(jù)。當將相同的樣品通過股骨注射(i.f.)進行移植時，6只idd小鼠中的2只在所注射的股骨中表現(xiàn)出了移植，但在其它骨骼或脾中沒有發(fā)現(xiàn)移植(圖1)。

實施例2

接下來，我們通過股骨注射(i.f.)移植到小鼠中，其中所述小鼠用直抗小鼠cd122的抗體進行了預(yù)處理，所述cd122可消耗宿主的自然殺傷(nk)細胞和一些巨噬細胞。在nod.scid小鼠的所檢測的10個aml樣品中全部觀察到所注射的股骨內(nèi)的移植(43/43，100％)，有趣的是，在42只idd小鼠中的31只(74％)(8/10aml檢測樣品)中觀測到所注射的股骨內(nèi)的移植(圖2b)，然而相比于nod.scid小鼠，idd小鼠的移植水平較低。與未經(jīng)抗cd122預(yù)處理獲得的結(jié)果形成對比，在8/42只idd小鼠中(19％，2/10aml檢測樣品)可檢測到未注射骨頭中的移植，而與預(yù)期一致的是，大部分進行移植后的nod.scid小鼠能發(fā)生遷移(38/43,88％,10/10aml檢測樣品)。然而相比于nod.scid小鼠，在idd小鼠中未注射的骨頭的移植水平顯著降低。此外，aml-lsc無法在idd小鼠的脾臟中再增殖。在本研究中采用具有最佳移植效果的aml樣品進行歸巢分析，結(jié)果表明相比于nod.scid小鼠，idd小鼠具有嚴重的歸巢缺陷(圖2a)。

實施例3

我們研究了在小鼠異種移植中，小鼠天然免疫對人類急性粒細胞白血病(aml)的影響。圖3a示出了nod.scid或nod.nor-iddl3.scid中自然殺傷(nk)細胞和巨噬細胞(mφ)群的調(diào)節(jié)。示出了小鼠nk細胞和巨噬細胞的表面表型。巨噬細胞而非nk細胞，可表達sirpα(左欄)。通過腹腔注射(i.p.)抗cd122(主要在nk細胞中表達)的抗體或氯膦酸鹽(clodronate)，對小鼠進行處理。cd122抗體處理(已被證明可提高人造血細胞在nod.scid小鼠中的移植)導致nk細胞迅速被消耗，但不減少小鼠巨噬細胞(右上欄)。雙膦酸鹽(氯膦酸鹽)的處理導致巨噬細胞的細胞凋亡和快速消耗(圖3a右下欄)。

圖3b示出了在巨噬細胞耗竭后，nod.scid或nod.nor-iddl3.scid(idd)中的人aml細胞的移植。亞致死劑量輻照的小鼠分別腹腔注射pbs(對照組)或氯膦酸鹽(cl)，48小時后股骨內(nèi)注射移植人aml細胞。每周一次氯膦酸鹽處理，直到小鼠移植8周后處死。收獲小鼠的經(jīng)注射的骨髓、非注射的骨髓、脾臟和外周血，并且通過流式細胞儀，采用人特異性標記物，來評價人白血病移植。圖中示出了收獲器官中的人白血病細胞的百分比。相比于nod.scid小鼠，股骨注射了pbs對照的idd小鼠中移植較低，而其他位點則沒有發(fā)生移植；在氯膦酸鹽處理后，在idd小鼠的所有位點中均發(fā)現(xiàn)了移植。這些發(fā)現(xiàn)為以下假設(shè)提供了支持：sirpα-cd47的相互作用是aml移植的關(guān)鍵，以及idd小鼠中的aml細胞的移植是通過巨噬細胞介導的。

實施例4

進行人aml細胞的體外吞噬作用分析。將cfse-標記的人aml細胞與nod.scid或nod.nor-iddl3.scid小鼠巨噬細胞共孵育。2小時后收獲巨噬細胞，并通過流式細胞儀測定cfse陽性的f4/80+小鼠巨噬細胞的百分比。小鼠巨噬細胞的cfse陽性表明了對人的cfse+aml細胞的吞噬(圖4a)。相比于nod.scid-aml共培養(yǎng)物，nod.nor-iddl3.scid-aml共培養(yǎng)物總是表現(xiàn)出cfse+/f4/80+更高的百分比。這表明，aml細胞上的cd47和小鼠巨噬細胞上的sirpα不發(fā)生相互作用，會導致對aml細胞的吞噬作用增強。

進行熒光激活細胞分選之后，采用共聚焦顯微鏡對cfse+/f4/80+細胞進行顯影。圖4b示出了一個指示巨噬細胞吞噬cfse+細胞的區(qū)域。

用細胞松弛素d預(yù)處理共培養(yǎng)物，所述細胞松弛素d可通過抑制巨噬細胞中的肌動蛋白聚合作用，而抑制其吞噬作用。細胞松弛素d的處理顯著地降低了cfse+/f4/80+細胞的百分比(圖4c)。

圖4d示出了人cd45在未經(jīng)處理的或經(jīng)細胞松弛素d處理的cfse+/f4/80+小鼠巨噬細胞中的表達。由于人的抗體不能結(jié)合被吞噬的細胞，人cd45的低表達表明小鼠巨噬細胞吞噬了人aml細胞。這些結(jié)果證實了大部分未經(jīng)處理的cfse+/f4/80+細胞是吞噬人aml細胞的巨噬細胞(cd45陰性)?？偠灾?，這些研究結(jié)果表明，sirpα-cd47的相互作用對aml細胞逃避天然免疫攻擊是關(guān)鍵性的，所述天然免疫攻擊是通過巨噬細胞進行的。

實施例5

實施例5證明了對人sirpα(v2)融合蛋白進行的體外預(yù)孵育，阻斷了原發(fā)性aml細胞歸巢到nod.scid小鼠骨髓(bm)和脾臟中。從amlpt9601收獲的原代細胞與或不與濃度為50μg/ml的人sirpα-fc融合蛋白，在imdm+15％bit中37℃下孵育2小時。收獲與(hsirpα-fc)或不與(無處理)融合蛋白孵育的細胞，并通過靜脈注射移植入亞致死劑量輻照后的nod.scid小鼠。移植16小時后，處死小鼠并從bm和脾臟中收獲細胞。

通過流式細胞儀，采用鼠抗人抗體，測量bm和脾臟中的人cd44+aml細胞的百分比。相比于未處理組，在體外與人sirpα-fc的共孵育顯著降低了bm(p<0.02)和脾臟(p＝0.018)中的人cd44+aml細胞的百分比(圖5a-每個符號代表不同的小鼠)。

通過下式計算aml細胞歸巢到nod.scid的bm和脾臟中的效率：[所回收的aml細胞總數(shù)]/[所注射的aml細胞總數(shù)]×100。人sirpα-fc處理顯著地降低了aml細胞歸巢到nod.scid的bm(p＝0.036)和脾臟(ns)中的效率(圖5b)。

實施例6

實施例6示出了用人sirpα融合蛋白(hsirpα-fc)進行的體外處理，降低了原發(fā)性aml細胞在nod.scid小鼠中的再增殖能力。pt90181(未分類的aml)的原發(fā)性aml細胞與或不與濃度為50μg/ml的hsirpα-fc，在imdm+15％bit中在37℃下孵育2小時。孵育后收獲細胞，并以每只鼠2.7×10⁶細胞通過股骨內(nèi)注射移植到亞致死劑量輻照的nod.scid小鼠中。移植4周后處死小鼠，并從所注射的股骨(rf)和非注射的股骨(bm)中收獲細胞，并用抗人抗體染色。通過流式細胞儀分析染色細胞，從而在hcd45+細胞的百分比的基礎(chǔ)上，確定每只小鼠的移植水平(圖6)。條狀物表示的是hcd45+細胞的平均百分比。相比于未處理的對照組，aml細胞與hsirpα-fc的預(yù)孵育，顯著地降低了rf(p＝0.0016)和bm(p＝0.01)中aml的移植水平。

實施例7

實施例7證明了人sirpα融合蛋白(hsirpα-fc)的體內(nèi)處理，降低了原發(fā)性aml細胞在nod.scid小鼠的移植。將來自患者0285(fabm2)的原發(fā)性aml細胞，通過股骨內(nèi)注射入亞致死劑量輻照的nod.scid小鼠中。移植后的最初10天內(nèi)，以每只鼠200μg(8mg/kg)的劑量，腹腔注射hsirpα-fc，3次/周注射7個劑量。之后處死小鼠，并收獲從所注射的股骨(rf)和非注射的股骨(bm)和脾中收獲細胞，并用抗人抗體染色。通過流式細胞儀分析染色細胞，從而在hcd45+細胞的百分比的基礎(chǔ)上，確定每個小鼠的移植水平(圖7)。條狀物表示的是每組中hcd45+人細胞的平均百分比。所標示的p值用于比較hsirpα-fc處理與pbs處理。用hsirpα-fc處理顯著地降低了所分析的所有組織中的aml的移植水平。在bm和脾臟中的aml細胞大幅降低至幾乎檢測不到的水平，這表明hsirpα-fc完全抑制了aml干細胞從所注射的股骨到其它造血位點的遷移。

討論

在此我們已經(jīng)表明了，人aml-lsc在nod.nor-iddl3.scid小鼠中的移植能力顯著降低了，這與正常造血細胞獲得的數(shù)據(jù)一致。我們的研究結(jié)果與抗cd47處理移植了aml的小鼠所得到的結(jié)果一致(majeti等，同上)，并支持以下假設(shè)：cd47-sirpα相互作用的弱化(如在idd小鼠中)削弱了aml-lsc的功能。通過抗cd122處理后的nk細胞和巨噬細胞的消耗，這種效果或多或少會得以改善，從而使得其能夠在所注射的股骨中移植，以及在某些情況下能夠遷移到其它骨頭中。這表明至少有一些體內(nèi)抗白血病活性可通過天然免疫系統(tǒng)細胞介導，特別是通過表達sirpα的巨噬細胞介導。我們的研究結(jié)果進一步表明，sirpα-cd47的相互作用對于aml細胞逃避天然免疫攻擊是關(guān)鍵性的，所述天然免疫攻擊是通過巨噬細胞進行的。通過以cd47或sirpα為靶標而中斷cd47-sirpα信號，是一種可用于消除血液癌癥細胞的治療方法，所述血液癌癥細胞為例如白血病干細胞，優(yōu)選aml-lsc。我們證實了，人sirpα(v2)融合蛋白阻斷了原發(fā)性aml細胞歸巢到nod.scid小鼠骨髓(bm)和脾中，并且降低了原發(fā)性aml細胞在nod.scid小鼠中的再增殖能力。值得注意的是，我們證實了，體內(nèi)的人sirpα融合蛋白(hsirpα-fc)的處理降低了nod.scid小鼠中的原發(fā)性aml細胞的移植。

以上對本發(fā)明的優(yōu)選實施方案進行了描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解，在不偏離本發(fā)明的精神或隨附的權(quán)利要求的范圍內(nèi)的情況下，可以進行各種變化。通過引用的方式并入本文所公開的所有文件。

序列表

<110>大學健康網(wǎng)絡(luò)

兒童醫(yī)院

dick,john

jin,liqing

prasolova,tatiana

theocharides,alexandre

danska,jayne

wang,jeanc.y.

<120>化合物用于治療患者體內(nèi)的cd47+癌細胞或腫瘤的用途

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