本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域,具體涉及一種防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的中藥組合物及其制備方法。
背景技術(shù):
絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥是中老年女性的常見慢性疾病,據(jù)全國十三個省市的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果,女性絕經(jīng)后,59歲以上多患有此病癥,尤其值得關(guān)注的事實是,骨質(zhì)疏松所致骨折等并發(fā)癥已經(jīng)成為中老年女性生活質(zhì)量下降和死亡的重要原因。中藥學(xué)的第一部專著《神農(nóng)本草經(jīng)》就有中藥“堅骨”“強骨”之論。時至現(xiàn)代,補腎中成藥為治療骨質(zhì)疏松癥所常用。由于絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者的病情、病程、體質(zhì)等的不同,臨床用藥應(yīng)依據(jù)辨證結(jié)果而發(fā)揮療效。
目前,防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的中藥,主要功效為補益肝腎、或補益脾腎、補腎壯陽等。本研究發(fā)現(xiàn),絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者以腎虛為本,多兼有氣虛、血瘀之候,如倦怠乏力、自汗少氣、腰背酸痛等。故臨床實踐需增補此類中藥組方,提高絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的療效。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的在于提供一種防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的中藥組合物及其制備方法,該中藥組合物可以補腎填精、益氣活血、壯骨強筋,主治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥,以及其他繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的:一種防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的中藥組合物,其特征在于該中藥組合物由以下質(zhì)量份數(shù)的組分組成:淫羊藿15-20份,凍干鹿茸5-10份,黃芪15-20份,紅花5-10份,生地15-20份,牡蠣5-10份,所述淫羊藿為君藥,凍干鹿茸、黃芪、紅花為臣藥,生地為佐藥,牡蠣為使藥。
優(yōu)選的,該中藥組合物由以下質(zhì)量份數(shù)的組分組成:淫羊藿18份,凍干鹿茸8份,黃芪18份,紅花8份,生地18份,牡蠣7份。
優(yōu)選的,該中藥組合物由以下質(zhì)量份數(shù)的組分組成:淫羊藿20份,凍干鹿茸5份,黃芪20份,紅花10份,生地15份,牡蠣5份。
優(yōu)選的,該中藥組合物由以下質(zhì)量份數(shù)的組分組成:淫羊藿20份,凍干鹿茸10份,黃芪15份,紅花5份,生地20份,牡蠣10份。
該中藥組合物可制成各種藥學(xué)治療學(xué)上可接受的口服制劑。
所述口服制劑為片劑、顆粒劑、丸劑、膠囊劑。
一種防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的中藥組合物的制備方法,該制備方法包括如下步驟:取凍干鹿茸、牡蠣,粉碎為極細粉,200目過篩,混勻,取淫羊藿、黃芪、生地、紅花加水煎煮三次,濾過,濾液合并,靜置;取上清液減壓濃縮成稠膏,與上述藥粉及輔料適量混勻,制成各種所需劑型。
與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明的優(yōu)點在于。
1.本處方為具有補腎益氣活血功效的中藥復(fù)方。
本處方以淫羊藿為君,《本草經(jīng)疏》稱淫羊藿“益腎肝則筋骨自堅”,并能“通氣行血”;以凍干鹿茸、黃芪、紅花為臣,《中藥大辭典》記載鹿茸有“壯元陽、補氣血、益精髓、強筋骨”之效;黃芪為益氣之要藥,使“氣能生精”,腎精充足,則骨壯髓榮,故《日華子本草》曰:“助氣壯筋骨,長肉補血”;紅花能行經(jīng)絡(luò)之中瘀血,見于《本草綱目》:“活血,潤燥,止痛,散腫,通經(jīng)”;生地佐之,制鹿茸、淫羊藿之偏勝,又滋補腎陰,如《本草匯言》:“生地,為補腎要藥,益陰上品,故涼血補血有功,血得補,則筋受榮,腎得之而骨強力壯”;牡蠣為使,入足少陰腎經(jīng),富含鈣類,《神農(nóng)本草經(jīng)》記載:“久服強骨節(jié)”。如此,鹿茸、牡蠣,源出一山一水,動靜相合;淫羊藿、生地,一陽一陰,陰陽互制;黃芪、紅花,一氣一血,氣血益精;動物藥、植物藥、礦物藥合為一方,取天地之精華,共奏補腎壯骨、益氣生精、活血止痛之效。
2.本處方中鹿茸的加工方法。
鹿茸的傳統(tǒng)加工方法為熱軋茸。由于鹿茸中含有多種活性物質(zhì),如促成骨、促造血、促神經(jīng)因子等,多屬蛋白或多肽類物質(zhì),熱軋茸方法可破壞此類物質(zhì),從而失去生物活性。故采取冷凍干燥方法進行加工,可以有效避免具有生物活性的蛋白或多肽類物質(zhì)丟失。
3.本處方中牡蠣的加工方法。
牡蠣含80%~95%的碳酸鈣、磷酸鈣及硫酸鈣,并含鎂、鋁、硅及氧化鐵等。
本處方所用牡蠣為球磨機粉碎,多呈納米級、微米級極細粉,加之200目過篩,更加有利于促進胃腸道吸收。
附圖說明
圖1為本發(fā)明各組分配伍交叉實驗24hbmscs增殖比較圖。
圖2為本發(fā)明各組分配伍交叉實驗48hbmscs增殖比較圖。
圖3為本發(fā)明各組分配伍交叉實驗72hbmscs增殖比較圖。
圖4為本發(fā)明各組分配伍交叉實驗9dalp蛋白活性表達圖。
圖5為本發(fā)明各組分配伍交叉實驗12dalp蛋白活性表達圖。
具體實施方式
實施例1。
取凍干鹿茸100g、牡蠣100g,粉碎為極細粉,200目過篩,混勻。取淫羊藿200g、黃芪200g、生地200g、紅花100g加水煎煮三次,濾過,濾液合并,靜置;取上清液減壓濃縮成稠膏,與上述藥粉及輔料適量混勻,制成顆粒,干燥,壓制成2000片,包糖衣或薄膜衣,即得。
成人劑量:每次4片(每片含生藥0.5g),每日2-3次,口服。
實施例2。
1.本發(fā)明對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的療效。
(1)顯著提高骨密度。
骨密度全稱是骨骼礦物質(zhì)密度,是骨骼強度的一個重要指標(biāo),是骨質(zhì)疏松癥診斷與評價療效的金標(biāo)準(zhǔn)。
①去卵巢絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥大鼠模型制備。
采用一次性摘除大鼠雙側(cè)卵巢法建立骨質(zhì)疏松癥動物模型。給予模型組大鼠10%水合氯醛注射液(3ml/kg體重),肌肉注射麻醉,于腰背部脊柱兩側(cè)做縱行切口暴露卵巢組織,絲線結(jié)扎其周圍組織后,將其完整切除,然后逐層縫合傷口。假手術(shù)組以同樣的方式手術(shù)暴露雙側(cè)卵巢,但不摘除。正常組不進行手術(shù)。
②實驗藥物。
補腎益氣活血方(成人每日劑量/60kg體重):淫羊藿20g、凍干鹿茸10g、生地20g,黃芪20g、紅花10g、牡蠣10g。
大鼠等效劑量給藥計算公式(g/kg)
=成人每日劑量(60kg體重)÷60kg×6.25。
③給藥方案。
正常組、假手術(shù)組及模型空白組大鼠給予0.9%生理鹽水灌胃,其余各組給予相應(yīng)藥物灌胃,容積為0.875ml/100g體重。
每日上午9時給藥1次共8周。
④取材。
各組大鼠按對應(yīng)藥物治療8w,最后一次灌胃后,禁食24h,稱重后按3ml/kg//的劑量給予10%水合醛腹腔注射麻醉,用碘伏消毒手術(shù)部位,開腹后用5ml注射器抽取腹主動脈血液,低溫離心機3000r/min離心15min,取血清,-20℃冷藏保存。取出大鼠左后肢股骨,并以生理鹽水浸潤的紗布包裹之后再用錫紙包裹,-70℃凍存,待后續(xù)dax檢測骨密度。
⑤檢測指標(biāo)及結(jié)果。
如表1所示,與正常組相比較,模型空白組左后肢股骨骨密度顯著降低(p<0.01),假手術(shù)組密度未見明顯變化(p>0.05);與模型空白組相比較,各治療組骨密度均有不同程度的升高,陽性藥物福善美組與補腎益氣活血組比較,兩者間無顯著差異(p>0.05)。
注:與正常組比較:*p<0.05,**p<0.01;與假手術(shù)組比較:△p<0.05,△△p<0.01;
與模型空白組相比較:☆p<0.05,☆☆p<0.01;與福善美組比較:◇p<0.05,◇◇p<0.01。下表同此。
結(jié)果表明,去卵巢大鼠出現(xiàn)骨密度下降的骨質(zhì)疏松,模型建立成功。補腎益氣活血組骨密度值明顯增高。
(2)顯著促進骨形成。
alp(alkalinephosphatase)即堿性磷酸酶,為成骨細胞活性的標(biāo)志物;opg(osteoclastogenesisinhibitoryfactor)即骨保護素,又稱破骨細胞抑制因子,是一種生長因子受體,屬于腫瘤壞死因子(tnf)受體家族。alp、opg是比較公認的標(biāo)志骨形成的骨代謝評價指標(biāo)。
去卵巢絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥大鼠模型制備、實驗藥物、給藥方案同前。
取材:各組大鼠按對應(yīng)藥物治療8周,最后一次灌胃后,禁食24小時,稱重后按3ml/kg的劑量給予10%水合醛腹腔注射麻醉,用碘伏消毒手術(shù)部位,開腹后用5ml注射器抽取腹主動脈血液,低溫離心機3000r/min離心15min,取血清,-20℃冷藏保存待測alp、opg。
檢測指標(biāo)及結(jié)果。
2.1骨形成指標(biāo)血清alp測定。
如表2所示,與正常組相比較,假手術(shù)組血清alp含量未見明顯差異(p>0.05),模型空白組血清alp含量明顯減少(p<0.01);與假手術(shù)組相比較,模型空白組alp含量明顯減少(p<0.01);與模型空白組相比較,各用藥組血清alp含量均明顯增加(p<0.01)。
2.2骨保護素(opg)測定。
如表3所示,與正常組相比較,假手術(shù)組血清opg未見明顯差異(p>0.05);模型空白組血清opg明顯減少(p<0.01);與模型空白組相比較,各用藥組血清opg均明顯增加(p<0.01),福善美組與補腎益氣活血組血清opg未見明顯差異(p>0.05)。
結(jié)果表明,去卵巢大鼠出現(xiàn)血清alp、opg含量明顯減少,呈明顯骨形成減低;補腎益氣活血組可明顯提高alp、opg含量,從而促進骨形成。
(3)顯著抑制骨吸收。
tracp(tartrateresistantacidphosphatase)即抗酒石酸酸性磷酸酶,為骨吸收和破骨細胞活性的良好標(biāo)志物,測定血清tracp有助于了解生理條件和各種病理條件下的骨代謝狀況。
去卵巢絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥大鼠模型制備、實驗藥物、給藥方案、取材同前。
骨吸收指標(biāo)血清tracp測定。
如表4所示:與正常組相比較,假手術(shù)組血清tracp含量未見明顯變化(p>0.05),模型空白組血清tracp含量明顯升高(p<0.01);與假手術(shù)組相比較,模型空白組tracp含量明顯升高(p<0.01);與模型空白組相比較,各用藥組血清tracp含量明顯降低(p<0.01)。福善美組與補腎益氣活血組血清tracp含量未見明顯差異(p>0.05)。
結(jié)果表明,去卵巢大鼠出現(xiàn)血清tracp含量明顯升高,呈明顯骨吸收增強;補腎益氣活血組可明顯降低tracp含量,從而抑制骨吸收。
2.本發(fā)明有效成分組分配伍對骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響。
本發(fā)明有效成分及標(biāo)準(zhǔn)品來源。
鹿茸凍干粉(遼寧清原鹿場)、黃芪甲苷(遼寧北方藥檢科技開發(fā)有限公司產(chǎn)品,批號201314)、淫羊藿苷(遼寧北方藥檢科技開發(fā)有限公司,產(chǎn)品批號200415)、地黃苷a(北京盈澤納新化工技術(shù)研究院,產(chǎn)品批號xj0706la14)、羥基紅花黃色素a(遼寧北方藥檢科技開發(fā)有限公司,產(chǎn)品批號201308)。
本發(fā)明有效成分組分配伍方案。
采用正交設(shè)計方案:5因素3水平正交設(shè)計l18(35)。按正交設(shè)計方案,進行五因素三水平藥物干預(yù),實驗分為20組,正常對照組(dmem+10ml/dl胎牛血清含100u/ml青、鏈霉素)、成骨轉(zhuǎn)化對照組(簡稱轉(zhuǎn)化液組)(成分:dmem+10ml/dl胎牛血清含100u/ml青、鏈霉素+1×10-7mol/l地塞米松+50g/l維生素c+10mmol/lb-甘油磷酸鈉)、正常組+中藥正交組分配伍組(1-18組)。
大鼠骨髓間充質(zhì)細胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,bmscs)饋贈自遼寧中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實驗室。
(1)補腎益氣活血方有效成分組分配伍可明顯促進bmscs增殖。
mtt法測定24、48、72hbmscs增殖分化情況。
各組bmscs24h增殖比較:與正常組比較,第1、3、4、7、8、9、10、11、13組bmscs增殖未見顯著差異(p>0.05),其余各組增殖情況均有顯著上升(第5、6、15組p<0.05;其余組p<0.01);與轉(zhuǎn)化液組比較,給藥各組均有顯著差異(p<0.01);各中藥正交組分配伍組組間比較發(fā)現(xiàn),第18組bmscs增殖顯著高于其他各組(vs第17組p<0.05;p<0.01)。見圖1。
各組bmscs48h增殖比較:與正常組比較,第1、3、5、7、8、9、11、12、13組bmscs增殖未見顯著差異(p>0.05),其余各組增殖情況均有顯著上升(vs第2、6、10、14、15組p<0.05;p<0.01);與轉(zhuǎn)化液組比較,第17、18組未見顯著差異(p>0.05),其余各組均有顯著差異(vs第4、16組p<0.05,p<0.01);各中藥正交組分配伍組組間比較發(fā)現(xiàn),第17、18組bmscs增殖顯著高于其他各組(p<0.01)。見圖2。
各組bmscs72h增殖比較:與正常組比較,轉(zhuǎn)化液組、第15、16、17組bmscs增殖未見顯著差異(p>0.05),其余各組增殖情況均有顯著上升(vs第10、12、13、18組p<0.05;p<0.01);與轉(zhuǎn)化液組比較,第10、12、13、15、16、17組未見顯著差異(p>0.05),其余各組均有顯著差異(vs第5、6、7、11組p<0.05,p<0.01);各中藥正交組分配伍組組間比較,第16、17、18組bmscs增殖顯著高于其他各組。見圖3。
bmscs增殖時效變化總結(jié):正常組、轉(zhuǎn)化液組及16、17、18組,均于48h到達增殖峰值(24hvs48hp<0.01,48hvs72hp<0.01)。
表5正常組、轉(zhuǎn)化液組及16、17、18組bmscs24、48、72h增殖變化。
16、17、18組的補腎益氣活血方組分配伍:16組為淫羊藿苷高劑量,鹿茸低劑量,黃芪甲苷、羥基紅花a中劑量,地黃苷a高劑量。17組為淫羊藿苷高劑量,鹿茸中劑量,黃芪甲苷、羥基紅花a高劑量,地黃苷a低劑量。18組為淫羊藿苷高劑量,鹿茸高劑量,黃芪甲苷、羥基紅花a低劑量,地黃苷a中劑量。
表6bmscs增殖時效與16、17、18組組分配伍量效關(guān)系。
(2)補腎益氣活血方有效成分組分配伍可明顯促進bmscs成骨分化。
bmscs成骨分化是骨形成的基礎(chǔ)。在定量指標(biāo)方面,成骨細胞標(biāo)志蛋白alp增高。
各組細胞9天、12天alp蛋白活性表達情況(elisa法)各組細胞9dalp蛋白活性表達比較:與正常組比較,各組alp蛋白活性均顯著增高(vs第2組p<0.05,p<0.01);與轉(zhuǎn)化液組比較,各組均有顯著差異(p<0.01);各中藥正交組分配伍組間比較,第16、18組alp蛋白活性表達最高(p<0.01)。見圖4。
各組細胞12dalp蛋白活性表達情況:與正常組比較,第2組未見顯著變化(p>0.05),其余各組alp蛋白活性均顯著增高(vs第3組p<0.05,p<0.01);與轉(zhuǎn)化液組比較,第16、18組未見顯著差異(p>0.05),其余各組均有顯著差異(p<0.01);各中藥正交組分配伍組間比較發(fā)現(xiàn),第16、18組alp蛋白活性表達高于其余各組(p<0.01)。見圖5。
如表7所示,正常組、轉(zhuǎn)化液組及16、18組9dalp活性表達均高于6d(p<0.01);正常組、轉(zhuǎn)化液組及16、18組12dalp活性表達均高9d(p<0.01)。
表7alp蛋白活性(成骨分化)時效與16、18組組分配伍量效關(guān)系。
綜上所述,根據(jù)體內(nèi)、體外實驗結(jié)果,補腎益氣活血方及其組分配伍具有促進骨髓間充質(zhì)干細胞增殖及成骨分化,促進骨形成,提高骨密度,改善骨代謝的作用,從而發(fā)揮防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的功效。從本方有效成分組分配伍分析,淫羊藿為本方君藥,劑量略高;益氣活血的黃芪甲苷、羥基紅花a、鹿茸配伍劑量比相近,為本方臣藥;地黃苷a為本方佐藥。補腎益氣活血方組分配伍確有療效基礎(chǔ),可為組分配伍中藥研發(fā)提供實驗依據(jù)。
實施例3。
淫羊藿18份,凍干鹿茸8份,黃芪18份,紅花8份,生地18份,牡蠣7份,加入適量的輔料,制成顆粒劑。
實施例4。
淫羊藿20份,凍干鹿茸5份,黃芪20份,紅花10份,生地15份,牡蠣5份,加入適量的輔料,制成丸劑。
實施例5。
淫羊藿20份,凍干鹿茸10份,黃芪15份,紅花5份,生地20份,牡蠣10份,加入適量的輔料,制成膠囊劑。