本發(fā)明涉及一種抗癌藥物，具體涉及一種包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

最近公布的全球癌癥大規(guī)模調(diào)查顯示：2015年全球癌癥患者1750萬(wàn)，死亡870萬(wàn)。與2005年比較，2015年癌癥發(fā)病率增加33％。

2015年，全球范圍內(nèi)發(fā)病率前10的癌癥依次是：肺癌、肝癌、胃癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、白血病、食管癌、胰腺癌、腦腫瘤和宮頸癌。

2015年，我國(guó)癌癥發(fā)病率排在前10的依次是：肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、食管癌、白血病、淋巴瘤、膀胱癌、子宮癌。

2015年，我國(guó)癌癥死亡率排在前10的依次是：肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、乳腺癌、白血病、腦腫瘤和前列腺癌。

在腫瘤的治療過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞幾乎都會(huì)在一定時(shí)間后對(duì)抗腫瘤藥物產(chǎn)生耐藥性，使所用的藥物無(wú)效。因此，必需不斷研發(fā)出新的抗腫瘤藥物，用于治療對(duì)現(xiàn)有抗腫瘤藥物產(chǎn)生耐藥性的腫瘤。

阿帕妥新是一類由藍(lán)藻產(chǎn)生的生物活性的小分子化合物，目前發(fā)現(xiàn)有8種阿帕妥新(阿帕妥新a、b、c、d、e、f、g、h)。在阿帕妥新家族中發(fā)現(xiàn)阿帕妥新a、f和g有較強(qiáng)的殺死癌細(xì)胞作用，但阿帕妥新a具有明顯的副反應(yīng)，如胰臟損害等。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明對(duì)阿帕妥新f和/或g進(jìn)行了大量的臨床前研究(細(xì)胞和動(dòng)物試驗(yàn))，發(fā)現(xiàn)阿帕妥新f和g對(duì)肺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、胰腺癌和腦腫瘤的腫瘤細(xì)胞有很強(qiáng)的抗癌作用，且副反應(yīng)小，但對(duì)前列腺癌、卵巢癌和肝癌等其他腫瘤殺傷力很弱?；诖耍景l(fā)明提供一種包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑及其制備方法與應(yīng)用，該制劑配方適用于靜脈給藥，將所發(fā)明藥物用二甲基亞砜溶解(如10mg/ml濃度)，加入等體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液(聚氧乙烯蓖麻油與丙二醇體積比為60:40)，之后加入9倍體積的生理鹽水，靜脈給藥。

本發(fā)明提供一種包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑，該抗癌制劑的成分中包括阿帕妥新f和/或g、二甲基亞砜、聚氧乙烯蓖麻油與丙二醇，其中，聚氧乙烯蓖麻油與丙二醇的體積比滿足(20-80):(80-20)，所述阿帕妥新f和/或g的質(zhì)量濃度為2-100mg/ml，所述二甲基亞砜濃度的質(zhì)量濃度為1.1g/ml。

優(yōu)選地，所述包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑以體積比為1:(9-125)的比例溶解于生理鹽水、葡萄糖生理鹽水溶液或葡萄糖溶液中，形成抗癌靜脈注射制劑，所述葡萄糖溶液為5％或10％的葡萄糖注射液，葡萄糖生理鹽水為5％的葡萄糖生理鹽水注射液。

優(yōu)選地，當(dāng)選擇阿帕妥新f和g構(gòu)成抗癌制劑時(shí)，阿帕妥新f和g的質(zhì)量比為(0.5-99.5):(99.5-0.5)。

本發(fā)明提供一種包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑的制備方法，包括以下步驟：

步驟一：將阿帕妥新f和/或g用二甲基亞砜溶解，溶解后阿帕妥新f和/或g于二甲基亞砜中的濃度滿足2-100mg/ml；

步驟二：將溶解有阿帕妥新f和/或g的二甲基亞砜制備成粉針劑；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解所用的二甲基亞砜等體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，使粉針劑溶解，得到包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑。

優(yōu)選地，還包括制備形成抗癌靜脈注射制劑的步驟四：向得到抗癌制劑中加入9-125倍于粉針劑混合液體積的生理鹽水、葡萄糖生理鹽水溶液或葡萄糖溶液，混合均勻，所述葡萄糖溶液為5％或10％的葡萄糖注射液，葡萄糖生理鹽水為5％的葡萄糖生理鹽水注射液。

優(yōu)選地，所述聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液中聚氧乙烯蓖麻油與丙二醇的體積比滿足(20-80):(80-20)。

優(yōu)選地，所述聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液中聚氧乙烯蓖麻油與丙二醇的體積比為60:40。

優(yōu)選地，所述粉針劑的粒徑為40～120微米。

優(yōu)選地，當(dāng)步驟一種選擇阿帕妥新f和g混合使用時(shí)，二者混合時(shí)的質(zhì)量比滿足(0.5-99.5):(99.5-0.5)。

本發(fā)明還提供一種包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑的應(yīng)用，其與其他抗腫瘤藥物聯(lián)合使用的方法，所述阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑以及所述其他抗腫瘤藥物均使用最低藥量，所述其他抗腫瘤藥物包括吉西他濱、白蛋白結(jié)合型紫杉醇、鉑制劑、替莫唑胺、洛莫司汀、卡莫司汀、甲基芐肼、長(zhǎng)春新堿、依托泊甙、替尼泊苷、免疫檢查點(diǎn)抑制劑、貝伐單抗、奧拉帕尼、西地尼布、萬(wàn)利魯單抗、阿雷替尼、克里唑替尼、達(dá)拉菲尼、曲美替尼、圖卡替尼、曲妥單抗、依匹單抗、曲美母單抗、色林納洛或依立替康。

本發(fā)明具有以下技術(shù)效果：

1、本發(fā)明中確定了包含阿帕妥新f的抗癌制劑對(duì)結(jié)腸癌和胰腺癌具有治療作用；

2、本發(fā)明通過(guò)體內(nèi)試驗(yàn)確定了阿帕妥新f的治療劑量以及毒性劑量；

3、本發(fā)明提供了檢測(cè)血藥濃度方法，即提供高效液相色譜儀(hplc)檢測(cè)血液中阿帕妥新f方法；

4、本發(fā)明確定靜脈給藥的包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑配方；

5、本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了包含阿帕妥新f和g的抗癌制劑對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞以及胰腺癌有很強(qiáng)的殺傷作用，而對(duì)肝癌、前列腺癌沒(méi)有抗癌作用。

附圖說(shuō)明

圖1a為本發(fā)明中阿帕妥新f的分子式。

圖1b為本發(fā)明中阿帕妥新g的分子式。

圖2為本發(fā)明中包含阿帕妥新f的抗癌制劑在不同給藥量下對(duì)結(jié)腸癌的抗癌效果對(duì)比圖；

圖3為本發(fā)明中包含阿帕妥新f和g的抗癌制劑以及包含阿帕妥新f的抗癌制劑在不同給藥量下對(duì)胰腺癌的抗癌效果對(duì)比圖；

圖4為本發(fā)明中hplc檢測(cè)的阿帕妥新f的出峰圖像。

圖5為本發(fā)明中hplc檢測(cè)時(shí)不同濃度阿帕妥新f在不同波長(zhǎng)下檢測(cè)信號(hào)相關(guān)性圖表。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

在本發(fā)明的描述中，需要說(shuō)明的是，術(shù)語(yǔ)“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“豎直”、“水平”、“內(nèi)”、“外”等指示的方位或位置關(guān)系為基于附圖所示的方位或位置關(guān)系，僅是為了便于描述本發(fā)明和簡(jiǎn)化描述，而不是指示或暗示所指的裝置或元件必須具有特定的方位、以特定的方位構(gòu)造和操作，因此不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。此外，術(shù)語(yǔ)“第一”、“第二”、“第三”僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示相對(duì)重要性。

在本發(fā)明的描述中，還需要說(shuō)明的是，除非另有明確的規(guī)定和限定，術(shù)語(yǔ)“安裝”、“相連”、“連接”應(yīng)做廣義理解，例如，可以是固定連接，也可以是可拆卸連接，或一體地連接；可以是機(jī)械連接，也可以是電連接；可以是直接相連，也可以通過(guò)中間媒介間接相連，可以是兩個(gè)元件內(nèi)部的連通。對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以具體情況理解上述術(shù)語(yǔ)在本發(fā)明中的具體含義。

阿帕妥新f的分子量為828，阿帕妥新g的分子量為814。阿帕妥新f和g通過(guò)抑制sec61復(fù)合體以及抑制stat3和表皮/成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(egfr/fgfr)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，從而產(chǎn)生抗癌作用。

如圖1所示，阿帕妥新f和g都含有5個(gè)氨基酸基本結(jié)構(gòu)和2個(gè)多聚酮結(jié)構(gòu)，5個(gè)氨基酸分別是2個(gè)丙氨酸、1個(gè)異亮氨酸、1個(gè)半胱氨酸和1個(gè)酪氨酸。阿帕妥新不直接溶于水，能溶于二甲基亞砜、乙醇等。

我們用體外細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)篩選候選化合物對(duì)8種腫瘤細(xì)胞的殺傷作用(抗癌作用表現(xiàn)為對(duì)分化細(xì)胞的毒性)，確定候選化合物是否有抗癌作用，以及對(duì)哪些腫瘤有作用。在該試驗(yàn)中，我們使用了9種細(xì)胞：一種人白血病細(xì)胞(ccrf-cem)以及八種實(shí)體瘤細(xì)胞，八種實(shí)體瘤細(xì)胞分別為hct-116人結(jié)腸癌細(xì)胞、h125人肺癌細(xì)胞、ovcar-5人卵巢癌細(xì)胞、mcf-7和mda-235人乳腺癌細(xì)胞、lncap人前列腺癌細(xì)胞、panc-1人胰腺癌細(xì)胞和u251n人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞)。

ccrf-cem是人淋巴細(xì)胞白血病，作為參考腫瘤細(xì)胞，用于確定候選化合物是否對(duì)實(shí)體瘤細(xì)胞用選擇性殺傷作用。如果候選化合物對(duì)實(shí)體瘤細(xì)胞和該白血病細(xì)胞具有相同的殺傷作用，則表明該候選化合物對(duì)對(duì)實(shí)體瘤細(xì)胞沒(méi)有選擇性。

實(shí)驗(yàn)步驟描述：用0.05％胰蛋白酶溶液消化培養(yǎng)中的腫瘤細(xì)胞，將收獲的腫瘤細(xì)胞按照每3ml培養(yǎng)液(rpmi-1640培養(yǎng)液，含15％胎牛血清和1％青霉素鏈霉素)3-6萬(wàn)個(gè)細(xì)胞濃度分配到直徑60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中。將準(zhǔn)備好的腫瘤細(xì)胞滴入0.3％瓊脂(全培養(yǎng)液溶解瓊脂)溶液中均勻混合，混合后總體積為3ml，倒入直徑60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿2ml(底層含凝固的溶于全培養(yǎng)液的0.6％瓊脂中培養(yǎng)(細(xì)胞培養(yǎng)的條件為37℃，5％co2)。

將阿帕妥新f或g化合物粉針劑用二甲基亞砜(dmso)溶解，溶解后阿帕妥新f或g的濃度為1-2mg/ml。取15微升化合物溶解液在直徑6.5毫米的濾紙片上，過(guò)夜自然干燥。干燥后的濾紙片放置于培養(yǎng)皿一側(cè)，根據(jù)不同細(xì)胞類型培養(yǎng)7-10天，之后在倒置顯微鏡下(10x)觀察抑制區(qū)域(濾紙片邊緣到開始形成正常細(xì)胞克隆的距離)。直徑6.5毫米的濾紙片作為200個(gè)單位，抑制區(qū)域小于300單位視作對(duì)腫瘤沒(méi)有殺傷作用，即無(wú)抗癌作用。通過(guò)實(shí)體瘤的抑制區(qū)與白血病細(xì)胞的抑制區(qū)差值，判斷化合物是否對(duì)實(shí)體瘤具有選擇性殺傷作用，如果差值大于等于250單位(至少不小于200單位)，表明化合物對(duì)該實(shí)體瘤細(xì)胞有選擇性殺傷作用。如果所用化合物濃度過(guò)高，毒性太強(qiáng)，則按照1:4或者1:10稀釋后重復(fù)實(shí)驗(yàn)。當(dāng)某濃度范圍時(shí)，抑制區(qū)差值保持不變。如1.4mg/ml的阿帕妥新f在1:16和1:64稀釋時(shí)，人膠質(zhì)瘤細(xì)胞u251n和人白血病細(xì)胞cem的抑制區(qū)差值在300左右，以u(píng)251nδcem＝300。該差值大于等于250單位(至少不小于200單位)，可以作為候選藥物進(jìn)一步進(jìn)行體內(nèi)、體外藥理學(xué)試驗(yàn)。

以上體外細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)表明阿帕妥新f和g對(duì)人腸癌、肺癌、胰腺癌和膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有極強(qiáng)的殺傷作用。阿帕妥新f和g對(duì)不同腫瘤細(xì)胞殺傷作用見表1。

表1：阿帕妥新f/g對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的殺傷作用

體外細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)表明，阿帕妥新f和g對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞hct-116、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞h125、人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞u251n和人胰腺癌細(xì)胞panc-1具有很強(qiáng)的殺傷作用，阿帕妥新f對(duì)人乳腺癌細(xì)胞mda-235具有很強(qiáng)的殺傷作用。但是，阿帕妥新f和g對(duì)前列腺癌細(xì)胞lncap和卵巢癌細(xì)胞ovcar-5殺傷力不明顯，表明阿帕妥新f可作為治療結(jié)腸癌、肺癌、膠質(zhì)瘤、乳腺癌和胰腺癌的候選藥進(jìn)一步開發(fā)，而阿帕妥新g可作為治療結(jié)腸癌、肺癌、膠質(zhì)瘤和胰腺癌的候選藥進(jìn)一步開發(fā)。通過(guò)這個(gè)試驗(yàn)結(jié)果，還可以得出以下結(jié)論：阿帕妥新f和g聯(lián)合使用，能增加可治療的腫瘤種類和/或增加抗癌效果，并且聯(lián)合使用時(shí)可減低各自的給藥劑量，毒性和副反應(yīng)比單獨(dú)使用時(shí)更低。

本發(fā)明首先深入研究了阿帕妥新f對(duì)結(jié)腸癌和胰腺癌的治療。由于阿帕妥新g和阿帕妥新f均屬于阿帕妥新家族，且分子結(jié)構(gòu)式相近，因此與阿帕妥新f比較，阿帕妥新g具有同樣的藥理和藥效，并且在合成制備工藝、制劑配方以及hplc檢測(cè)等方面類似。

基于以上試驗(yàn)，本發(fā)明提供了一種包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑，適用于靜脈給藥，

本發(fā)明提供一種包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑，該抗癌制劑的成分中包括阿帕妥新f和/或g、二甲基亞砜、聚氧乙烯蓖麻油與丙二醇，其中，聚氧乙烯蓖麻油與丙二醇的體積比滿足(20-80):(80-20)，所述阿帕妥新f和/或g的質(zhì)量濃度為2-100mg/ml的阿帕妥新f和/或g，所述二甲基亞砜濃度的質(zhì)量濃度為1.1g/ml。

所述包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑以體積比為1:(9-125)的比例溶解于生理鹽水、葡萄糖生理鹽水或葡萄糖溶液中，形成抗癌靜脈注射制劑，所述葡萄糖溶液的濃度為5或10％，葡萄糖生理鹽水的濃度為5％。

本發(fā)明提供一種包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑的制備方法，包括以下步驟：

步驟一：將阿帕妥新f和g中一種或者兩種(即阿帕妥新f、阿帕妥新g、或者阿帕妥新f和g)用二甲基亞砜(分析純或醫(yī)藥級(jí)，質(zhì)量分?jǐn)?shù)在99％以上)溶解，溶解后阿帕妥新f和/或g的濃度滿足2-100mg/ml，(優(yōu)選為10-30mg/ml，進(jìn)一步優(yōu)選為10mg/ml)；

步驟二：將溶解有阿帕妥新f和/或g的二甲基亞砜制備成粉針劑，粉針劑的粒徑為40～120微米，優(yōu)選為(60-80微米)；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解時(shí)所使用的二甲基亞砜等體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，該混合液為聚氧乙烯蓖麻油(分析純或醫(yī)藥級(jí))與分析純或醫(yī)藥級(jí)的丙二醇相互混合，混合后二者的體積比滿足(20-80):(80-20)，優(yōu)選為60:40，進(jìn)一步優(yōu)選為50:50，混合均勻，得到抗癌制劑。

以上得到的抗癌制劑為濃縮型，在靜脈注射時(shí)需要按照一定體積比例溶解于葡萄糖溶液或生理鹽水或葡萄糖生理鹽水中，以便于靜脈注射?？梢园凑湛拱┲苿┡c葡萄糖溶液或、生理鹽水或葡萄糖生理鹽水溶液之間體積比為1：(9-125)的比例完成稀釋，優(yōu)選為1:(10-20)。具體在實(shí)際生產(chǎn)中，可以生產(chǎn)步驟三中的抗癌制劑的濃縮藥品形式，在使用注射之前，按照比例與葡萄糖溶液、生理鹽水或葡萄糖生理鹽水溶液稀釋加以使用，也可以在生產(chǎn)時(shí)直接完成步驟四中的已使用葡萄糖溶液、生理鹽水或葡萄糖生理鹽水溶液稀釋所獲得的可直接靜脈注射使用的藥品。

其中，當(dāng)選擇阿帕妥新f和g混合使用時(shí)，二者混合時(shí)的質(zhì)量比滿足(0.5-99.5):(99.5-0.5)，優(yōu)選為(20-40):(80-60)。

本發(fā)明還提供一種包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑與已經(jīng)上市其它抗腫瘤藥聯(lián)合給藥的應(yīng)用，這些抗腫瘤藥包括但不限于：吉西他濱、白蛋白結(jié)合型紫杉醇、鉑制劑(奧沙利鉑、奈達(dá)鉑、卡鉑等)、替莫唑胺、洛莫司汀、卡莫司汀、甲基芐肼、長(zhǎng)春新堿、依托泊甙、替尼泊苷、免疫檢查點(diǎn)抑制劑(如納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、阿特朱單抗(atezolizumab)、度伐魯單抗(durvalumab)和巴文西亞(avelumab)等)、其他抗體藥物或小分子抗癌藥如貝伐單抗、奧拉帕尼、西地尼布、萬(wàn)利魯單抗(varlilumab)、阿雷替尼、克里唑替尼、達(dá)拉菲尼、曲美替尼、圖卡替尼(tucatinib)、曲妥單抗、依匹單抗、曲美母單抗、色林納洛(selinexor)、依立替康等。該配方能增加可治療的腫瘤種類和/或增加抗癌效果，毒性比單獨(dú)使用阿帕妥新f或者g或者其它抗腫瘤藥時(shí)更低。通過(guò)包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑與現(xiàn)有抗腫瘤藥聯(lián)合給藥，并按照藥品的使用劑量來(lái)給聯(lián)合給藥。當(dāng)選擇本發(fā)明提供的包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑與以上現(xiàn)有抗腫瘤藥聯(lián)合用藥時(shí)，可以在保證阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑以及對(duì)應(yīng)所選擇的現(xiàn)有抗腫瘤藥均使用最低藥量的情況下聯(lián)合給藥，這樣可以達(dá)到最佳藥效，且藥物副作用降低到最小。

本發(fā)明提供的包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑進(jìn)行體內(nèi)藥效試驗(yàn)，具有非常顯著的治療效果，具體如下：

體外試驗(yàn)篩選出的具有抗癌作用的候選化合物，進(jìn)行體內(nèi)藥效試驗(yàn)。如果體內(nèi)藥效試驗(yàn)?zāi)艽_定候選化合物對(duì)腫瘤的治療作用，則該化合物進(jìn)行臨床試驗(yàn)的候選化合物。在我國(guó)，結(jié)直腸癌和胰腺癌癌癥死亡率是排在前10的癌癥，并且不像肺癌、肝癌等有較多的治療藥物可選擇。因此，體內(nèi)藥效試驗(yàn)，我們選擇結(jié)腸癌和胰腺癌進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果表明，包含阿帕妥新f的抗癌制劑對(duì)結(jié)腸癌和胰腺癌有效。

實(shí)驗(yàn)步驟描述：選擇體重大于17克的嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠(severecombinedimmunedeficiencymice，scidmice)，小鼠之間的體重差異不超過(guò)5克。在每側(cè)腹股溝處皮下注射接種150萬(wàn)個(gè)腫瘤細(xì)胞，腫瘤大小可見時(shí)，隨機(jī)分成對(duì)照組和不同治療劑量組。不同治療劑量組以劑量2倍增加或者0.5倍減少。尾靜脈注射給藥。當(dāng)腫瘤體積達(dá)到1500立方毫米時(shí)，實(shí)施安樂(lè)死。

用卡尺測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)度和寬度，每周測(cè)量2次，腫瘤體積計(jì)算公式為：

腫瘤體積(mm3)＝(axb2)/2，a為腫瘤長(zhǎng)度，b為腫瘤寬度，單位為毫米(mm)

我們觀察了包含阿帕妥新f和/或g的抗癌制劑對(duì)結(jié)腸癌(接種hct-116人結(jié)腸癌細(xì)胞)和胰腺癌(接種panc-1人胰腺癌細(xì)胞)的治療作用。給藥方案：對(duì)結(jié)腸癌，包含阿帕妥新f的抗癌制劑對(duì)，每天1次，對(duì)應(yīng)注入的阿帕妥新f的有效藥量為每次0.25毫升，連續(xù)給藥5天；對(duì)胰腺癌，包含阿帕妥新f的抗癌制劑(設(shè)立吉西他濱治療對(duì)照組)每周給予1次，連續(xù)給藥3次，即在第6天、第13天和第20天給藥。

體內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)，包含阿帕妥新f的抗癌制劑對(duì)結(jié)腸癌和胰腺癌有明顯治療作用，并且對(duì)胰腺癌的治療，包含阿帕妥新f的抗癌制劑的治療效果明顯優(yōu)于現(xiàn)在臨床上用的吉西他濱化療藥。包含阿帕妥新f的抗癌制劑對(duì)結(jié)腸癌的抗癌效應(yīng)見圖2，不同給藥的劑量，其抗癌強(qiáng)度不同，其中control為對(duì)照組，對(duì)應(yīng)給予不含藥物的制劑，同一時(shí)間點(diǎn)，各組給藥劑量與對(duì)照組比較，腫瘤體積明顯小于對(duì)照組。包含阿帕妥新f以及包含阿帕妥新f和g(二者質(zhì)量百分比為比80:20)的抗癌制劑對(duì)胰腺癌的抗癌效應(yīng)見圖3，其中control為對(duì)照組，對(duì)應(yīng)給予不含藥物的制劑，可以看到包含阿帕妥新f和g的抗癌制劑以及包含阿帕妥新f的抗癌制劑都有比較好的抗癌效果，其效果明顯好于吉西他濱的療效，且包含阿帕妥新f和g的抗癌制劑的療效最優(yōu)。

如果體重減低超過(guò)20％或者藥物導(dǎo)致20％死亡，則表明該劑量是毒性劑量，不安全。胰腺癌治療試驗(yàn)，包含阿帕妥新f的抗癌制劑，在3.0mg/kg阿帕妥新f的對(duì)應(yīng)劑量下，1次給藥后，導(dǎo)致小鼠死亡，說(shuō)明劑量太大，達(dá)到或超過(guò)了阿帕妥新f的毒性劑量。其他組沒(méi)有出現(xiàn)藥物導(dǎo)致的死亡。也沒(méi)有出現(xiàn)小鼠體重降低超過(guò)20％的情況，說(shuō)明包含阿帕妥新f的抗癌制劑在這些劑量給藥時(shí)安全的。使用包含阿帕妥新f和g的抗癌制劑時(shí)，使對(duì)應(yīng)1.0mg/kg體重劑量的阿帕妥新f和g的用藥量，對(duì)胰腺癌的抗癌作用與使用包含阿帕妥新f的抗癌制劑，對(duì)應(yīng)1.5mg/kg體重阿帕妥新f劑量相當(dāng)，表明阿帕妥新f和阿帕妥新g在混合使用可能在等效情況下，可能毒性或者不良反應(yīng)會(huì)低于阿帕妥新f或g單獨(dú)使用。

通過(guò)小鼠體內(nèi)藥效試驗(yàn)可以推測(cè)，包含阿帕妥新f的抗癌制劑與現(xiàn)有的其他抗腫瘤藥聯(lián)合使用可以增強(qiáng)抗癌活性，降低單獨(dú)大劑量使用抗腫瘤藥物的副作用。如包含阿帕妥新f的抗癌制劑與吉西他濱聯(lián)合使用，對(duì)胰腺癌的治療效果能明顯優(yōu)于單獨(dú)使用，并且可以以最低有效濃度的劑量給予包含阿帕妥新f的抗癌制劑(低于1.5mg/kg阿帕妥新f劑量)或者吉西他濱(低于250mg/kg劑量)，從而將藥物毒性或者副反應(yīng)降到最低。

藥物檢測(cè)

200微升血漿中加入800微升乙腈，混勻，4℃溫度14000rpm離心30分鐘。收集上清液，真空干燥，加入200微升乙腈重懸。取100微升上hplc儀器，檢測(cè)阿帕妥新f。檢測(cè)條件：waterssymmetryc8，5μm柱子(4.6x150mm)，流動(dòng)相乙腈/水(70/30,v/v)，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。阿帕妥新f出峰時(shí)間7.383分鐘，見圖4。制備不同濃度阿帕妥新f的標(biāo)準(zhǔn)品0、125、250、500和1000ng/ml，分別在200、210和230nm波長(zhǎng)下檢測(cè)。檢測(cè)波長(zhǎng)在200nm時(shí)，可獲得非常好的信號(hào)強(qiáng)度和線性相關(guān)性(r²＝0.9984)，見圖5。

實(shí)施例1：

本實(shí)施例提供一種包含阿帕妥新f的抗癌制劑，抗癌制劑的配方的制備過(guò)程如下：

步驟一：將阿帕妥新f用二甲基亞砜溶解，溶解后阿帕妥新f的濃度滿足2mg/ml；

步驟二：將溶解有阿帕妥新f的二甲基亞砜制備成粉針劑，粉針劑的粒徑為40微米；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解時(shí)所使用的二甲基亞砜等體積的二甲基亞砜體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，混合均勻后得到包含阿帕妥新f的抗癌制劑。該氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液為聚氧乙烯蓖麻油(分析純或醫(yī)藥級(jí))與丙二醇(分析純或醫(yī)藥級(jí))相互混合，混合后二者的體積比滿足20：80。

可以再包含步驟四，制備形成能夠直接靜脈注射的藥物：再加入9倍體積的生理鹽水，混勻后，完成制劑的制備，可以直接靜脈給藥。

實(shí)施例2：

本實(shí)施例提供一種包含阿帕妥新f的抗癌制劑，抗癌制劑的配方的制備過(guò)程如下：

步驟一：將阿帕妥新f用二甲基亞砜溶解，溶解后阿帕妥新f的濃度滿足10mg/ml；

步驟二：將溶解有阿帕妥新f的二甲基亞砜制備成粉針劑，粉針劑的粒徑為60微米；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解時(shí)所使用的二甲基亞砜等體積的二甲基亞砜體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，混合均勻后得到包含阿帕妥新f的抗癌制劑。該氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液為聚氧乙烯蓖麻油(分析純或醫(yī)藥級(jí))與丙二醇(分析純或醫(yī)藥級(jí))相互混合，混合后二者的體積比滿足40：60。

可以再包含步驟四，制備形成能夠直接靜脈注射的藥物：再加入20倍體積的生理鹽水，混勻后，完成制劑的制備，可以靜脈給藥。

實(shí)施例3：

本實(shí)施例提供一種包含阿帕妥新f的抗癌制劑，適用于靜脈給藥，抗癌制劑的配方的制備過(guò)程如下：

步驟一：將阿帕妥新f用二甲基亞砜溶解，溶解后阿帕妥新f的濃度滿足80mg/ml；

步驟二：將溶解有阿帕妥新f的二甲基亞砜制備成粉針劑，粉針劑的粒徑為100微米；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解時(shí)所使用的二甲基亞砜等體積的二甲基亞砜體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，混合均勻后得到包含阿帕妥新f的抗癌制劑。該氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液為聚氧乙烯蓖麻油(分析純或醫(yī)藥級(jí))與丙二醇(分析純或醫(yī)藥級(jí))相互混合，混合后二者的體積比滿足60：40。

可以再包含步驟四，制備形成能夠直接靜脈注射的藥物：再加入50倍體積的葡萄糖溶液(葡萄糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％)，混勻后，完成制劑的制備，可以靜脈給藥。

實(shí)施例4：

本實(shí)施例提供一種包含阿帕妥新f的抗癌制劑，抗癌制劑的配方的制備過(guò)程如下：

步驟一：將阿帕妥新f用二甲基溶解，溶解后阿帕妥新f的濃度滿足100mg/ml；

步驟二：將溶解有阿帕妥新f的二甲基亞砜制備成粉針劑，粉針劑的粒徑為120微米；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解時(shí)所使用的二甲基亞砜相比2倍等體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，混合均勻后得到包含阿帕妥新f的抗癌制劑。該氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液為聚氧乙烯蓖麻油(分析純或醫(yī)藥級(jí))與丙二醇(分析純或醫(yī)藥級(jí))相互混合，混合后二者的體積比滿足80：20。

可以再包含步驟四，制備形成能夠直接靜脈注射的藥物：再加入125倍體積的生理鹽水，混勻后，完成制劑的制備，可以靜脈給藥。

實(shí)施例5：

本實(shí)施例提供了一種包含阿帕妥新g的抗癌制劑，抗癌制劑的配方的制備過(guò)程如下：

步驟一：將阿帕妥新g用二甲基亞砜溶解，溶解后阿帕妥新g的濃度滿足2mg/ml；

步驟二：將溶解有阿帕妥新g的二甲基亞砜制備成粉針劑，粉針劑的粒徑為120微米；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解時(shí)所使用的二甲基亞砜等體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，混合均勻后得到包含阿帕妥新g的抗癌制劑，混合均勻后得到包含阿帕妥新f的抗癌制劑。該氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液為聚氧乙烯蓖麻油(分析純或醫(yī)藥級(jí))與丙二醇(分析純或醫(yī)藥級(jí))相互混合，混合后二者的體積比滿足20:80。

可以再包含步驟四，制備形成能夠直接靜脈注射的藥物：再加入與得到粉針劑混合液體積相比較為9倍體積的葡萄糖溶液(葡萄糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％)，混勻后，完成制劑的制備，可以靜脈給藥。

實(shí)施例6：

本實(shí)施例提供了一種包含阿帕妥新g的抗癌制劑，適用于靜脈給藥，抗癌制劑的配方的制備過(guò)程如下：

步驟一：將阿帕妥新g用二甲基亞砜溶解，溶解后阿帕妥新g的濃度滿足10mg/ml；

步驟二：將溶解有阿帕妥新g的二甲基亞砜制備成粉針劑，粉針劑的粒徑為100微米；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解時(shí)所使用的二甲基亞砜相比等體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，混合均勻后得到包含阿帕妥新g的抗癌制劑。該氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液為聚氧乙烯蓖麻油(分析純或醫(yī)藥級(jí))與丙二醇(分析純或醫(yī)藥級(jí))相互混合，混合后二者的體積比滿足50:50。

可以再包含步驟四，制備形成能夠直接靜脈注射的藥物：再加入與得到粉針劑混合液體積相比較為30倍體積的生理鹽水，混勻后，完成制劑的制備，可以靜脈給藥。

實(shí)施例7：

本實(shí)施例提供了一種包含阿帕妥新g的抗癌制劑，適用于靜脈給藥，抗癌制劑的配方的制備過(guò)程如下：

步驟一：將阿帕妥新g用二甲基亞砜溶解，溶解后阿帕妥新g的濃度滿足100mg/ml；

步驟二：將溶解有阿帕妥新g的二甲基亞砜制備成粉針劑，粉針劑的粒徑為120微米；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解時(shí)所使用的二甲基亞砜相比等體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，混合均勻后得到包含阿帕妥新g的抗癌制劑。該氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液為聚氧乙烯蓖麻油(分析純或醫(yī)藥級(jí))與丙二醇(分析純或醫(yī)藥級(jí))相互混合，混合后二者的體積比滿足70:30。

可以再包含步驟四，制備形成能夠直接靜脈注射的藥物：再加入與得到粉針劑混合液體積相比較為60倍體積的生理鹽水，混勻后，完成制劑的制備，可以靜脈給藥。

實(shí)施例8：

本實(shí)施例提供了一種包含阿帕妥新g的抗癌制劑，適用于靜脈給藥，抗癌制劑的配方的制備過(guò)程如下：

步驟一：將阿帕妥新g用二甲基亞砜溶解，溶解后阿帕妥新g的濃度滿足90mg/ml；

步驟二：將溶解有阿帕妥新g的二甲基亞砜制備成粉針劑，粉針劑的粒徑為30微米；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解時(shí)所使用的二甲基亞砜相比等體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，混合均勻后得到包含阿帕妥新g的抗癌制劑。該氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液為聚氧乙烯蓖麻油(分析純或醫(yī)藥級(jí))與丙二醇(分析純或醫(yī)藥級(jí))相互混合，混合后二者的體積比滿足45:55。

可以再包含步驟四，制備形成能夠直接靜脈注射的藥物：再加入與得到粉針劑混合液體積相比較為125倍體積的生理鹽水，混勻后，完成制劑的制備，可以靜脈給藥。

實(shí)施例9：

本實(shí)施例提供了一種包含阿帕妥新g的抗癌制劑，適用于靜脈給藥，抗癌制劑的配方的制備過(guò)程如下：

步驟一：將阿帕妥新g用二甲基亞砜溶解，溶解后阿帕妥新g的濃度滿足70mg/ml；

步驟二：將溶解有阿帕妥新g的二甲基亞砜制備成粉針劑，粉針劑的粒徑為80微米；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解時(shí)所使用的二甲基亞砜等體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，混合均勻后得到包含阿帕妥新g的抗癌制劑。該氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液為聚氧乙烯蓖麻油(分析純或醫(yī)藥級(jí))與丙二醇(分析純或醫(yī)藥級(jí))相互混合，混合后二者的體積比滿足30:70。

可以再包含步驟四，制備形成能夠直接靜脈注射的藥物：再加入與得到粉針劑混合液體積相比較為60倍體積的生理鹽水，混勻后，完成制劑的制備，可以靜脈給藥。

實(shí)施例10：

本實(shí)施例提供了一種包含阿帕妥新f和g的抗癌制劑，適用于靜脈給藥，抗癌制劑的配方的制備過(guò)程如下：

步驟一：將阿帕妥新f和g用二甲基亞砜溶解，溶解后阿帕妥新f和g的濃度滿足2mg/ml，阿帕妥新f和g混合時(shí)的質(zhì)量比滿足0.5:99.5；

步驟二：將溶解有阿帕妥新f和g的二甲基亞砜制備成粉針劑，粉針劑的粒徑為40微米；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解時(shí)所使用的二甲基亞砜等體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，混合均勻后得到包含阿帕妥新g的抗癌制劑。該氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液為聚氧乙烯蓖麻油(分析純或醫(yī)藥級(jí))與丙二醇(分析純或醫(yī)藥級(jí))相互混合，混合后二者的體積比滿足20:80；

可以再包含步驟四，制備形成能夠直接靜脈注射的藥物：再加入與得到粉針劑混合液體積相比較為9倍體積的生理鹽水，混勻后，完成制劑的制備，可以靜脈給藥。

實(shí)施例11：

本實(shí)施例提供了一種包含阿帕妥新f和g的抗癌制劑，適用于靜脈給藥，抗癌制劑的配方的制備過(guò)程如下：

步驟一：將阿帕妥新f和g用二甲基亞砜溶解，溶解后阿帕妥新f和g的濃度滿足50mg/ml，阿帕妥新f和g混合時(shí)的質(zhì)量比滿足99.5:0.5；

步驟二：將溶解有阿帕妥新f和g的二甲基亞砜制備成粉針劑，粉針劑的粒徑為120微米；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解時(shí)所使用的二甲基亞砜相比等體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，混合均勻后得到包含阿帕妥新g的抗癌制劑。該氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液為聚氧乙烯蓖麻油(分析純或醫(yī)藥級(jí))與丙二醇(分析純或醫(yī)藥級(jí))相互混合，混合后二者的體積比滿足80:20。

可以再包含步驟四，制備形成能夠直接靜脈注射的藥物：再加入與得到粉針劑混合液體積相比較為125倍體積的生理鹽水，混勻后，完成制劑的制備，可以靜脈給藥。

實(shí)施例12：

本實(shí)施例提供了一種包含阿帕妥新f和g的抗癌制劑，適用于靜脈給藥，抗癌制劑的配方的制備過(guò)程如下：

步驟一：將阿帕妥新f和g用二甲基亞砜溶解，溶解后阿帕妥新f和g的濃度滿足10mg/ml，阿帕妥新f和g混合時(shí)的質(zhì)量比滿足20:80；

步驟二：將溶解有阿帕妥新f和g的二甲基亞砜制備成粉針劑，粉針劑的粒徑為60微米；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解時(shí)所使用的二甲基亞砜等體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，混合均勻后得到包含阿帕妥新g的抗癌制劑。該氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液為聚氧乙烯蓖麻油(分析純或醫(yī)藥級(jí))與丙二醇(分析純或醫(yī)藥級(jí))相互混合，混合后二者的體積比滿足40:60。

可以再包含步驟四，制備形成能夠直接靜脈注射的藥物：再加入與得到粉針劑混合液體積相比較為20倍體積的葡萄糖溶液(葡萄糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％)，混勻后，完成制劑的制備，可以靜脈給藥。

實(shí)施例13：

本實(shí)施例提供了一種包含阿帕妥新f和g的抗癌制劑，適用于靜脈給藥，抗癌制劑的配方的制備過(guò)程如下：

步驟一：將阿帕妥新f和g用二甲基亞砜溶解，溶解后阿帕妥新f和g的濃度滿足100mg/ml，阿帕妥新f和g混合時(shí)的質(zhì)量比滿足50:50；

步驟二：將溶解有阿帕妥新f和g的二甲基亞砜制備成粉針劑，粉針劑的粒徑為70微米；

步驟三：向粉針劑中加入與之前溶解時(shí)所使用的二甲基亞砜等體積的聚氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液，混合均勻后得到包含阿帕妥新g的抗癌制劑。該氧乙烯蓖麻油丙二醇混合液為聚氧乙烯蓖麻油(分析純或醫(yī)藥級(jí))與丙二醇(分析純或醫(yī)藥級(jí))相互混合，混合后二者的體積比滿足60:40。

可以再包含步驟四，制備形成能夠直接靜脈注射的藥物：再加入與得到粉針劑混合液體積相比較為125倍體積的生理鹽水，混勻后，完成制劑的制備，可以靜脈給藥。

以上僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。