本發(fā)明屬于中藥發(fā)酵制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種提高毛皮動物生長性能和消化代謝性能的中藥發(fā)酵制劑、其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：我國毛皮動物發(fā)展迅速，具備一定的產(chǎn)業(yè)規(guī)模，已成為畜牧業(yè)的重要組成部分。近年來,隨著毛皮動物飼養(yǎng)業(yè)的發(fā)展，飼養(yǎng)密度增加，飼養(yǎng)管理不當(dāng)?shù)仍颍率姑游镆卟≡谟行┑貐^(qū)時有發(fā)生，死亡率可達(dá)10％～20％，給毛皮動物飼養(yǎng)業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響了我國毛皮動物飼養(yǎng)業(yè)的健康和持續(xù)發(fā)展。在當(dāng)今的毛皮動物飼養(yǎng)業(yè)中，如何做到既能預(yù)防疾病、提高毛皮動物生長性能又能避免類似濫用抗生素而帶來的種種負(fù)作用，一直是廣大科學(xué)工作者的關(guān)注重點。益生菌制劑能夠通過生物措抗、釋放抗菌物質(zhì)、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能等方式達(dá)到預(yù)防疾病的目的，并且能夠產(chǎn)生消化酶、改善腸道結(jié)構(gòu)，促進(jìn)動物機(jī)體對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，以提高毛皮動物生長性能和消化代謝性能。是抗生素的最佳替代品之一。益生菌制劑在畜禽等養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用已十分廣泛，但在毛皮動物中的應(yīng)用研究卻很少。技術(shù)實現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的是提供一種天然安全的中藥發(fā)酵制劑以及制備該發(fā)酵制劑的方法，同時，提供一種含有該中藥發(fā)酵制劑的具有提高毛皮動物生長性能和消化代謝性能的飼料。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：一種中藥組合物，由以下組分按重量份數(shù)制備而成：黨參12～15份，白術(shù)12～15份，茯苓12～15份，柴胡8～12份，山藥6～12份，蓮肉(去心，炒)6～12份，白扁豆(炒)8～15份，薏苡仁6～12份，佛手6～12份，陳皮6-10份，郁金4～8份，縮砂仁4～8份，桔梗4～8份，炙甘草6～12份。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述中藥組合物，由以下組分按重量份數(shù)制備而成：黨參15份，白術(shù)10份，茯苓10份，柴胡10份，山藥10份，蓮肉(去心，炒)10份，白扁豆(炒)12份，薏苡仁10份，佛手9份，陳皮8份，郁金6份，縮砂仁6份，桔梗6份，炙甘草9份。一種中藥發(fā)酵制劑，由中藥組分與植物乳桿菌菌液混合后經(jīng)發(fā)酵制成；所述中藥組分按重量份數(shù)組成為：黨參12～15份，白術(shù)12～15份，茯苓12～15份，柴胡8～12份，山藥6～12份，蓮肉(去心，炒)6～12份，白扁豆(炒)8～15份，薏苡仁6～12份，佛手6～12份，陳皮6-10份，郁金4～8份，縮砂仁4～8份，桔梗4～8份，炙甘草6～12份。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述中藥組分按重量份數(shù)組成為：黨參15份，白術(shù)10份，茯苓10份，柴胡10份，山藥10份，蓮肉(去心，炒)10份，白扁豆(炒)12份，薏苡仁10份，佛手9份，陳皮8份，郁金6份，縮砂仁6份，桔梗6份，炙甘草9份。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述菌液中植物乳桿菌含量≥108cfu/ml。所述的植物乳桿菌為植物乳桿菌植物亞種(lactobacillusplantarumsubsp.plantarum)，編號as1.557，來源于中國科學(xué)院微生物研究所。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述中藥發(fā)酵制劑的制備方法，步驟如下：(1)按量取中藥組分，粉碎，過60目篩網(wǎng)，備用；(2)將粉碎后的各組分混合均勻，加入中藥成分總重量80％的水，攪拌均勻后于100℃蒸汽滅菌30min，冷卻至20-30℃；(3)向冷卻后的藥物中加入植物乳桿菌菌液，菌液用量占加入后總量的8～10％；置于單向排氣塑料袋中，在20℃～30℃條件下發(fā)酵30天。上述的單向排氣塑料袋為專利號為：200920100585.9的厭氧發(fā)酵飼料、中藥及添加劑的單向排氣袋。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述菌液由以下方法制得：將植物乳桿菌菌種接種于活化培養(yǎng)基進(jìn)行活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為37℃，時間24h；將活化好的菌種接種于發(fā)酵罐中，控制溫度37℃～43℃，時間24h～36h。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述活化培養(yǎng)基和所述發(fā)酵所用培養(yǎng)基為：mrs培養(yǎng)基，成分為(g/l)：蛋白胨10.0、肉膏10.0、酵母浸粉5.0、葡萄糖20.0、磷酸氫二鉀2.0、檸檬酸氫二銨2.0、乙酸鈉5.0、硫酸鎂0.58、硫酸錳0.28、半胱氨酸0.5、吐溫801.0，調(diào)ph6.2-6.4。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述中藥發(fā)酵制劑應(yīng)用于提高毛皮動物生長性能、消化代謝性能。一種具有提高毛皮動物生長性能、消化代謝性能的飼料，是在飼料中添加如上述方法制備的中藥發(fā)酵制劑，添加量為0.2％。本發(fā)明中各中藥的藥性藥效如下：黨參：主要成分為生物堿、皂甙、蛋白質(zhì)、淀粉、維生素b1、維生素b2等，具有補(bǔ)中益氣、補(bǔ)血、降壓、祛痰鎮(zhèn)咳等功效。白術(shù)：為菊科多年生草本植物白術(shù)的干燥根莖。多為栽培，亦有野生。主要成分為揮發(fā)油，其中主要為蒼術(shù)醇，另含白術(shù)酮、維生素a類等物質(zhì)。具有補(bǔ)脾益氣、燥濕利水等功效。茯苓：為寄菌多孔菌科茯苓的干燥菌核。主要成分為茯苓糖、茯苓酸、蛋白質(zhì)、脂肪、卵磷脂、組胺酸、膽堿、麥角甾醇和鉀鹽等，具有利水滲濕，益脾寧心之功效。柴胡：主要含柴胡皂甙、植物甾醇，另含少量揮發(fā)油，莖葉含蘆丁，具有疏氣、解郁、散火等功效。山藥：為薯蕷科多年生纏繞性草本植物薯蕷除去外皮的干燥塊根。多為栽培，亦有野生。主要成分為皂甙、粘液質(zhì)、精氨酸、尿囊素、淀粉酶、膽堿等，具有健脾開胃，補(bǔ)氣養(yǎng)陰，止瀉澀精之功效。蓮肉：為睡蓮科多年水生草本植物蓮(荷花)的干燥成熟種子。多為人工栽培，也有湖濱自生。主要含棉子糖、又鈣、磷、鐵等成分，具有健脾養(yǎng)心，止瀉固精之功效。白扁豆：為豆科一年生纏繞草本植物扁豆的成熟干燥種子。富含淀粉，并含維生素和煙酸等成分，具有消暑化濕、和中健脾、解毒之功效。薏苡仁：為禾本科一年生草本植物薏苡的成熟干燥種仁，多為栽培，亦有野生。主要含脂肪油、薏苡素、甾醇、氨基酸、維生素b1、薏苡仁脂等成分。具有利濕清熱，健脾補(bǔ)肺之功效。佛手：為蕓香科小喬木植物佛手柑的果實。主要含揮發(fā)油、檸檬橘內(nèi)酯及微量洋芫荽甙和橙皮甙等成分，具有疏肝止痛，行氣和胃，理氣化痰等功效。陳皮：為蕓香科植物常綠小喬木福柑、朱桔、蜜柑等多種桔柑的成熟干燥果皮，均為栽培。含橙皮甙、中肌醇、揮發(fā)油(主要成分為右旋檸檬烯)和維生素b1等主要成分，具有理氣健脾，燥濕化痰等功效。郁金：為姜科多年生草本姜黃屬四種植物川郁金或姜黃或莪術(shù)或毛莪術(shù)的塊根經(jīng)蒸煮后干燥而成，栽培或野生。主要含揮發(fā)油。具有舒氣解郁，涼血破瘀，利膽之功效?？s砂仁：為姜科多年生草本植物縮砂的干燥成熟果實(殼縮砂仁)或種子團(tuán)(縮砂仁)以及單粒種子(砂米)，少為栽培。主要含揮發(fā)油(乙酸龍腦酯、檸檬烯、紫蘇烯醋酸冰片酯、澄花叔醇等)，皂苷類，黃酮類化合物(豆蔻素、良羌素、槲皮苷、槲皮素)，有機(jī)酸類等成分，具有理氣解郁，開胃消食，安胎之功效。桔梗：為桔?？浦参锝酃５母?，含皂甙、菠菜甾醇、α-菠菜甾蒔-β-d-葡萄糖甙、δ7-豆甾烯醇、白樺脂醇，并含菊糖、桔梗聚糖、三萜烯類物質(zhì)：桔梗酸a、b及c等主要成分，具有開宣肺氣，祛痰排膿等功效。炙甘草：炙甘草是用蜜烘制的甘草，俗稱炮制。炙甘草為類圓形或橢圓形切片，表面紅棕色或灰棕色，微有光澤，切面黃色至深黃色，形成層環(huán)明顯，射線放射狀。主要含甘草皂甙，甘草黃甙，蔗糖，淀粉及微量維生素等成分，具有益氣滋陰，通陽復(fù)脈治療功效。具有補(bǔ)脾和胃，益氣復(fù)脈之功效。本發(fā)明的技術(shù)原理：方中黨參、白術(shù)、茯苓益氣健脾滲濕，柴胡疏肝和胃共為君；山藥、蓮肉共助黨參以健脾益氣、兼能止瀉，白扁豆、薏苡仁共助白術(shù)、茯苓以健脾滲濕，另有佛手理氣醒脾合為臣藥；郁金涼血除煩，砂仁、陳皮醒脾和胃、行氣化滯，桔梗宣肺利氣、載藥上行、以益肺氣為佐藥；炙甘草健脾和中、調(diào)和諸藥為使藥。諸藥合用，補(bǔ)其中氣，滲其濕濁，行其氣滯，恢復(fù)脾胃受納與健運之職，則諸癥自除。本方藥性平和，溫而不燥。本發(fā)明復(fù)合中藥發(fā)酵制劑具有以下特點：(1)植物乳桿菌作為腸道的益生菌群，具有維持腸道菌群平衡、促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收等多種作用。(2)本發(fā)明選用的植物乳桿菌及其代謝產(chǎn)物能有效的補(bǔ)充或增強(qiáng)原有藥物的功能；(3)該中藥組方健脾益氣、疏肝和胃、行氣化滯，調(diào)節(jié)機(jī)體恢復(fù)正常的生理狀態(tài)，提高生產(chǎn)性能和消化代謝性能。本發(fā)明方法選取的中藥組分結(jié)構(gòu)合理、比例適當(dāng)，選用的植物乳桿菌具有活性高、抗逆性強(qiáng)等優(yōu)勢，在本發(fā)明所選取的植物乳桿菌發(fā)酵作用下，顯著提高了原有藥物的藥效，使用本發(fā)明的發(fā)酵藥物可以顯著提高毛皮動物的生長性能和消化代謝性能。具體實施方式以下結(jié)合較佳實施例，對依據(jù)本發(fā)明提供的具體實施方式詳述如下：實施例1菌液的制備：將本發(fā)明的植物乳桿菌菌種接種于活化培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為37℃，時間24h；將活化好的菌種接種于發(fā)酵罐中，控制溫度37℃～43℃，時間24h～36h，制備發(fā)酵液。所述活化培養(yǎng)基為：mrs培養(yǎng)基，成分為(g/l)：蛋白胨10.0、肉膏10.0、酵母浸粉5.0、葡萄糖20.0、磷酸氫二鉀2.0、檸檬酸氫二銨2.0、乙酸鈉5.0、硫酸鎂0.58、硫酸錳0.28、半胱氨酸0.5、吐溫801.0，調(diào)ph6.2-6.4。發(fā)酵所用培養(yǎng)基為：mrs培養(yǎng)基，成分同上。發(fā)酵完成后，菌液中菌含量均≥108cfu/ml。所述的植物乳桿菌為植物乳桿菌植物亞種(lactobacillusplantarumsubsp.plantarum)，編號as1.557，來源于中國科學(xué)院微生物研究所。實施例2一種提高毛皮動物生長性能和消化代謝性能的中藥發(fā)酵制劑，其中藥組分的重量份數(shù)為：黨參15份，白術(shù)10份，茯苓10份，柴胡10份，山藥10份，蓮肉(去心，炒)10份，白扁豆(炒)12份，薏苡仁10份，佛手9份，陳皮8份，郁金6份，縮砂仁6份，桔梗6份，炙甘草9份。具體制備方法如下：(1)按量取中藥組分，粉碎，過60目篩網(wǎng)，備用；(2)將粉碎后的各組分混合均勻，加入中藥成分總重量80％的水，攪拌均勻后于100℃蒸汽滅菌30min，冷卻至20-30℃；(3)向冷卻后的藥物中加入植物乳桿菌菌液，菌液用量占加入后總量的8～10％；置于單向排氣塑料袋中，在20℃～30℃條件下發(fā)酵30天。上述的單向排氣塑料袋為專利號為：200920100585.9的厭氧發(fā)酵飼料、中藥及添加劑的單向排氣袋。實施例3一種提高毛皮動物生長性能和消化代謝性能的中藥發(fā)酵制劑，其中藥組分的重量份數(shù)為：黨參12份，白術(shù)12份，茯苓12份，柴胡8份，山藥6份，蓮肉(去心，炒)6份，白扁豆(炒)8份，薏苡仁6份，佛手6份，陳皮6份，郁金4份，縮砂仁4份，桔梗4份，炙甘草6份。制備方法與實施例2相同。實施例4一種提高毛皮動物生長性能和消化代謝性能的中藥發(fā)酵制劑，其各組分的重量份數(shù)為：黨參15份，白術(shù)15份，茯苓15份，柴胡12份，山藥12份，蓮肉(去心，炒)12份，白扁豆(炒)15份，薏苡仁12份，佛手12份，陳皮10份，郁金8份，縮砂仁8份，桔梗8份，炙甘草12份。制備方法與實施例2相同。一、藥效試驗：1.1試驗組方1.1.1傳統(tǒng)工藝制備的非發(fā)酵中藥制劑組(將本發(fā)明實施例2所選取的藥物進(jìn)行超微粉碎，粉碎至700目，混合均勻)；1.1.2實施例2的中藥發(fā)酵制劑組；1.1.3實施例3的中藥發(fā)酵制劑組；1.1.4實施例4的中藥發(fā)酵制劑組；1.1.5實施例2不含黨參、白術(shù)、茯苓、柴胡的中藥發(fā)酵制劑，記為對照組1；1.1.6實施例2不含山藥、蓮肉、白扁豆、薏苡仁、佛手的中藥發(fā)酵制劑組，記為對照組2；1.1.7實施例2不含郁金、縮砂仁、陳皮、桔梗的中藥發(fā)酵制劑組，記為對照組3；1.1.8實施例2不含炙甘草的中藥發(fā)酵制劑組，記為對照組4；1.1.9實施例2不含柴胡、佛手、陳皮、郁金的中藥發(fā)酵制劑組，記為對照組5；1.1.10空白對照組。1.2動物試驗1.2.1試驗設(shè)計選擇(55±5)日齡、體重相近的健康藍(lán)狐100只，隨機(jī)分為10組，每組10只。空白對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，超微粉組在基礎(chǔ)日糧中添加超微粉，實施例2、3和4組添加中藥發(fā)酵制劑，對照組1-5分別飼喂1.1.5-1.1.9的試驗組方，添加量均為0.2％。預(yù)試期7天，正式試驗期為56天。試驗開始前，對藍(lán)狐進(jìn)行常規(guī)免疫接種。每天8:00和15:00各飼喂1次，自由飲水。1.2.2試驗日糧藍(lán)狐基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。表1藍(lán)狐基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平1)每千克預(yù)混料含有va1000000iu，vb1600mg，vb2800mg，vb6300mg，vb1210mg，vc40000mg，vd3200000iu，ve6000iu，vk3100mg，煙酸4000mg，泛酸1200mg，葉酸80mg，生物素20mg，膽堿30000mg，mn1200mg，fe8200mg，cu800mg，zn5200mg，i50mg，se20mg，co50mg。2)粗蛋白、粗脂肪以及鈣和總磷含量為測定值，其他為計算值。1.2.3飼養(yǎng)管理飼養(yǎng)試驗于室外籠舍，采用自然光照照射。試驗期內(nèi)，所有試驗動物均由專門、固定的飼養(yǎng)人員進(jìn)行管理。飼養(yǎng)過程中保持籠箱內(nèi)清潔、衛(wèi)生，墊草充足，每天觀察藍(lán)狐釆食、飲水、糞尿排泄等變化，并做好相應(yīng)記錄。1.2.4消化代謝試驗正式試驗開始25天以后，從每組隨機(jī)挑選7只藍(lán)狐。使用糞尿分離的糞盤收集藍(lán)狐每日的糞尿，共3天，每天6:00和18:00定時收糞，。每天收集到的類便稱重后按鮮重的5％加入濃度為10％的硫酸溶液，并加入少量甲苯，保存于-20℃冰箱中備用。每日收集尿液按每100ml加入10ml濃度為10％硫酸溶液，滴加4滴防腐劑甲苯，保存于-20℃冰箱中備用。1.2.5指標(biāo)測定正式試驗開始的第1天早晨對藍(lán)狐空腹稱重，并將此結(jié)果視為試驗動物的初始體重，以后每隔15天需稱重1次，根據(jù)所記錄藍(lán)狐的體重計算出藍(lán)狐的平均日增重和料重比。根據(jù)記錄的每只藍(lán)狐每天的給料量和余料量，計算出每只藍(lán)狐的平均日釆食量以及料重比。飼糧及排泄物中的干物質(zhì)含量用烘干法進(jìn)行測算，參考gb/t6435-2006；粗脂肪含量測定釆用索氏抽提法進(jìn)行測算，參考gb/t6433-2006；粗蛋白質(zhì)含量用凱氏定氮法進(jìn)行測算，參考gb/t6432-1994。營養(yǎng)物質(zhì)消化率測定方法及計算公式如下：干物質(zhì)消化率(％)＝[(干物質(zhì)采食量－干物質(zhì)排出量)/干物質(zhì)采食量]×100蛋白質(zhì)消化率(％)＝[(蛋白質(zhì)攝入量－糞中蛋白質(zhì)含量)/蛋白質(zhì)攝入量]×100粗脂肪消化率(％)＝[(脂肪攝入量－糞中脂肪含量)/脂肪攝入量]×100氮沉積(g/d)＝食入氮－糞氮－尿氮凈蛋白質(zhì)利用率(％)＝(氮沉積/食入氮)×100蛋白質(zhì)生物學(xué)價值(％)＝[(氮沉積/(食入氮－糞氮)]×1001.3數(shù)據(jù)處理所有采集數(shù)據(jù)采用excel軟件進(jìn)行前期處理，然后用spss19.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，lsd進(jìn)行多重比較，結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。1.4結(jié)果與分析1.4.1復(fù)合中藥發(fā)酵制劑對育成期藍(lán)狐生長性能的影響表2復(fù)合中藥發(fā)酵制劑對育成期藍(lán)狐生長性能的影響注：同列肩標(biāo)字母相同表示差異不顯著(p>0.05)，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)，肩標(biāo)不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01)。由表2可知，試驗藍(lán)狐始重、末重及平均日采食量各組之間無顯著性差異(p>0.05)；平均日增重實施例2和實施例4組顯著高于空白對照組、對照組1、對照組2、對照組3和超微粉組(p<0.05)，實施例3組、對照組4和對照組5顯著高于空白對照組和對照組1(p<0.05)；料重比實施例2、3和4組顯著低于空白對照組、對照組1和對照組2(p<0.05)。1.4.2復(fù)合中藥發(fā)酵制劑對育成期藍(lán)狐營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響表3復(fù)合中藥發(fā)酵制劑對育成期藍(lán)狐營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響注：同列肩標(biāo)字母相同表示差異不顯著(p>0.05)，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)，肩標(biāo)不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01)。由表3可知，干物質(zhì)采食量各組之間無顯著性差異(p>0.05)；干物質(zhì)排出量實施例2、3和4組顯著低于空白對照組、對照組1和對照組2(p<0.05)，對照組3、對照組4、對照組5和超微粉組與其他各組之間無顯著性差異(p>0.05)；干物質(zhì)消化率和蛋白質(zhì)消化率，實施例2、3和4組顯著高于空白對照組、對照組1和對照組2(p<0.05)，對照組3、對照組4、對照組5和超微粉組與其他各組之間無顯著性差異(p>0.05)；脂肪消化率實施例2、3和4組極顯著高于空白對照組、對照組1和對照組2(p<0.01)，對照組3、對照組4、對照組5和超微粉組與其他各組之間無顯著性差異(p>0.05)。1.4.3復(fù)合中藥發(fā)酵制劑對育成期藍(lán)狐營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響表4復(fù)合中藥發(fā)酵制劑對育成期藍(lán)狐營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響注：同列肩標(biāo)字母相同表示差異不顯著(p>0.05)，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)，肩標(biāo)不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01)。由表4可知，食入氮各組之間無顯著性差異(p>0.05)；糞氮實施例2組顯著低于空白對照組、對照組1、對照組2、對照組3和超微粉組(p<0.05)，其他各組之間無顯著性差異(p>0.05)；尿氮實施例2組、實施例3組、實施例4組和對照組4極顯著低于其他各組(p<0.01)；氮沉積實施例2組極顯著高于空白對照組、對照組1、對照組2、對照組3、對照組5和超微粉組(p<0.01)，實施例3組、實施例4組和對照組4極顯著高于空白對照組、對照組1、對照組2、對照組3和超微粉組(p<0.01)；凈蛋白質(zhì)利用率和蛋白質(zhì)生物學(xué)價值實施例2組、實施例3組、實施例4組和對照組4極顯著高于空白對照組、對照組1、對照組2、對照組3和超微粉組(p<0.01)，對照組5與各組之間無顯著性差異(p>0.05)。二、藥理學(xué)毒性試驗2.1急性毒性試驗資料檢測試劑：血清ast、alt檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所。檢測設(shè)備micro-200半自動生化檢測儀，分析天平，解剖器械，注射器，試管等。2.2試驗方法選取體重為18～22g的icr鼠100只，經(jīng)3天適應(yīng)性飼養(yǎng)后，隨機(jī)均分為5組(雌雄各半)，超微粉組、實施例2組、實施例3組、實施例4組和空白對照組，每組各20只；空白對照組灌胃生理鹽水，超微粉組所用超微粉選用本發(fā)明實施例2中的中藥組合物進(jìn)行超微粉碎得到的超微粉；超微粉組將超微粉溶于水中灌服，實施例2組、實施例3組、實施例4組分別將各實施例制備的發(fā)酵制劑溶于水中灌服，超微粉組、實施例2組、實施例3組、實施例4組的藥物添加量為0.1g/ml，0.4ml/次，一天3次，連續(xù)7天。2.3測定指標(biāo)及方法(1)臨床癥狀觀察：每日觀察試驗鼠的精神狀態(tài)、飲食情況，每日記錄發(fā)病死亡情況。(2)病理學(xué)觀察：對于死亡鼠進(jìn)行剖檢觀察內(nèi)臟變化。(3)生長指標(biāo)觀察：對試驗鼠進(jìn)行定期稱重；試驗結(jié)束，撲殺鼠稱量體重、臟器重臟器指數(shù)測定：剖檢大鼠，取心臟、脾臟、肝臟、腎臟、睪丸、卵巢，稱重，按照下式計算臟器指數(shù)：臟器指數(shù)＝臟器重/體重×100。(4)肝臟功能變化觀察：試驗結(jié)束后，撲殺鼠，采取血液分離血清，測定ast、alt。2.4數(shù)據(jù)處理與分析所有采集數(shù)據(jù)采用excel軟件進(jìn)行前期處理，然后用spss19.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，lsd進(jìn)行多重比較，結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。2.5臨床癥狀觀察對照組和試驗組鼠，精神狀態(tài)和飲食欲、對外界反應(yīng)能力未見明顯的異常。各組鼠發(fā)病和死亡情況如下表5。表5鼠發(fā)病和死亡情況分組總數(shù)死亡(只)死亡率(％)超微粉2000實施例2組2000實施例3組2000實施例4組2000空白對照組2000病理學(xué)觀察：對照組和試驗組，鼠撲殺后進(jìn)行剖檢眼觀未見觀察內(nèi)臟器官明顯的病理變化。生長指標(biāo)觀察：試驗結(jié)束，撲殺鼠稱量體重、臟器重分析見表6。表6鼠臟器重分析分組肝臟指數(shù)心臟指數(shù)腎臟指數(shù)肺臟指數(shù)脾臟指數(shù)超微粉54.07±1.18a4.43±0.20a13.45±0.21a6.74±0.35a4.73±0.40a實施例2組54.14±1.22a4.59±0.19a13.55±0.27a6.79±0.46a4.80±0.31a實施例3組54.15±1.14a4.54±0.25a13.57±0.22a6.80±0.39a4.71±0.48a實施例4組54.12±1.05a4.47±0.17a13.51±0.28a6.77±0.35a4.82±0.41a空白對照組53.91±1.32a4.33±0.24a13.48±0.21a6.75±0.33a4.69±0.64a注：同列肩標(biāo)字母相同或無字母表示差異不顯著(p>0.05)，肩標(biāo)字母不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)。由表6可知，實施例2、3和4組顯著增加了icr鼠的脾臟指數(shù)(p<0.05)，超微粉組與實施例2、3和4組差異不顯著；其它指數(shù)對照組與試驗組無顯著性差異(p>0.05)。肝臟功能變化觀察試驗結(jié)束后，撲殺鼠，采取血液分離血清，測定ast(谷草轉(zhuǎn)氨酶)、alt(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)見表7。結(jié)果顯示各組數(shù)據(jù)與空白對照組相比差異不顯著，都處于正常范圍內(nèi)。表7ast、alt的測定結(jié)果分組總數(shù)altast超微粉2039.16±2.19a105.43±3.95a實施例2組2039.25±2.26a105.88±3.23a實施例3組2039.20±2.75a105.59±4.61a實施例4組2039.19±2.46a105.61±4.00a空白對照組2039.10±2.49a105.42±4.28a注：同列肩標(biāo)相同字母表示差異不顯著(p>0.05)，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)。由表7可知，各組數(shù)據(jù)與空白對照組相比差異不顯著，都處于正常范圍內(nèi)。2.6長期毒性試驗資料根據(jù)實施例2制備的本發(fā)明發(fā)酵制劑，20g/kg、100g/kg給1月齡icr鼠連續(xù)灌胃給藥1個月，動物的皮毛、膚色、攝食、活動、尿、便等均無異常；動物的血常規(guī)、肝、腎功能等血液生化指標(biāo)和動物的主要臟器指數(shù)均在正常范圍，且正常動力無差異，病理組織學(xué)檢查表明，心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、氣管、睪丸、卵巢等重要臟器無病理改變。停藥兩周后檢查以上各項指標(biāo)均無明顯毒性反應(yīng)，表明無蓄積毒性。以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非是對本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁12