本發(fā)明屬于西藥活性化合物技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種治療結(jié)核病的環(huán)絲氨酸藥物組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
結(jié)核病是當(dāng)今全球面臨的主要公共健康問題之一，它的病原體是結(jié)核分枝桿菌(mycobacteriumtuberculosis,mtb)，屬分枝桿菌屬。近年來，由于人類免疫缺陷病毒(hiv)合并結(jié)核分枝桿菌感染、大規(guī)模人口流動(dòng)等問題的出現(xiàn)，結(jié)核病疫情出現(xiàn)加重的趨勢。目前，全球每年約有900萬人發(fā)展成活動(dòng)性結(jié)核，200萬～300萬人死于結(jié)核病。據(jù)估計(jì)，目前全世界約有1/3的人口感染了mtb，其中絕大多數(shù)為潛伏性結(jié)核感染(latenttuberculosisinfection,ltbi)，即機(jī)體的免疫系統(tǒng)能夠控制結(jié)核桿菌的復(fù)制而不發(fā)展成為結(jié)核病，但又不能將其徹底清除的狀態(tài)。此時(shí)結(jié)核桿菌處于潛伏狀態(tài)，在免疫力低下者中，結(jié)核桿菌能夠重新復(fù)制，發(fā)展成為活動(dòng)性肺結(jié)核從而成為新的傳染源。感染者終生約有5％～10％的風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展成為活動(dòng)性結(jié)核病，若同時(shí)伴有hiv的感染，這種概率則高達(dá)每年10％，遠(yuǎn)高于hiv陰性者。流行病學(xué)調(diào)查顯示約有85％～90％新診斷的活動(dòng)性肺結(jié)核系結(jié)核菌素試驗(yàn)陽性的ltbi演變而來。
目前，結(jié)核病的治療應(yīng)用了美國公共衛(wèi)生署推薦的多種藥劑組合的配方，包括首先使用異煙肼、利福平、吡嗪酰胺和乙胺丁醇組合兩個(gè)月，然后再單獨(dú)使用異煙肼和利福平組合四個(gè)月。對(duì)于感染了艾滋病的患者，該種藥物組合的使用需延期至七個(gè)月。對(duì)于感染了耐多藥結(jié)核病的患者，該藥物組合還需添加其余二線藥劑，如鏈霉素、卡那霉素、阿米卡星、卷曲霉素、乙硫異煙胺、環(huán)絲氨酸、環(huán)丙沙星和氧氟沙星。相比于目前市面上的一線藥物，此類用于耐多藥結(jié)核病(通常療程超過2年)的患者的組合治療藥物，通常具有更低的活性和更高的副作用。另外，這些藥物往往毒副作用強(qiáng)，如異煙肼可能引起四肢麻木，鏈霉素對(duì)聽神經(jīng)及前庭神經(jīng)具有毒性，環(huán)絲氨酸對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)毒性反應(yīng)較大，亦可有胃腸道反熱等毒副作用等。不僅如此，大部分抗癆藥物對(duì)肝臟均有不同程度的毒副作用，且價(jià)格昂貴患者難以接受。
因此，迫切的需要新型的具有高活性的抗結(jié)核病藥物，以達(dá)到縮短治療時(shí)間又可減少毒副作用的目的。目前，尚沒有氨甲環(huán)酸抑殺結(jié)核分枝桿菌的文獻(xiàn)報(bào)道，更沒有將其與環(huán)絲氨酸聯(lián)用后用于治療結(jié)核病的文獻(xiàn)報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
鑒于環(huán)絲氨酸對(duì)結(jié)核病療效較差毒副作用大的問題，本發(fā)明的目的尋找一種療效好、不良反應(yīng)小、能長期維持使用的治療方法，從而提供一種以環(huán)絲氨酸和氨甲環(huán)酸為活性成分的治療結(jié)核病的藥物組合物。
本發(fā)明人曾在臨床用藥中意外地發(fā)現(xiàn)，某胃出血患者，其同時(shí)患有肺結(jié)核，住院后通過氨甲環(huán)酸注射液止血時(shí)，可顯著增強(qiáng)環(huán)絲氨酸在殺滅結(jié)核分枝桿菌方面的生物活性。針對(duì)這一發(fā)現(xiàn)，發(fā)明人進(jìn)一步設(shè)計(jì)了體外和體內(nèi)試驗(yàn)，最終發(fā)現(xiàn)氨甲環(huán)酸與環(huán)絲氨酸在一定配比范圍內(nèi)聯(lián)合用藥具有快速抑殺結(jié)核分枝桿菌的協(xié)同作用。
為此，本發(fā)明人在以環(huán)絲氨酸和氨甲環(huán)酸作為活性成分的基礎(chǔ)上，提供了一種治療結(jié)核病的藥物組合物，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。其具體的技術(shù)方案如下：
一種治療結(jié)核病的藥物組合物，該藥物組合物由活性成分和藥學(xué)上可接受的輔料制備而成，所述的活性成分包括氨甲環(huán)酸和環(huán)絲氨酸。需要說明的是，本發(fā)明采用的化合物氨甲環(huán)酸為反-4-氨甲基環(huán)已烷甲酸，環(huán)絲氨酸為右旋-4-氨基-3-四氫異惡唑酮。
進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述治療結(jié)核病的藥物組合物，其中的活性成分由氨甲環(huán)酸和環(huán)絲氨酸組成。
再進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述治療結(jié)核病的藥物組合物，其中的活性成分中氨甲環(huán)酸和環(huán)絲氨酸用量比為(2.5-10.0):1。
再進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述治療結(jié)核病的藥物組合物，其中的活性成分中氨甲環(huán)酸和環(huán)絲氨酸用量比為(2.5-5.0):1。
再進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述治療結(jié)核病的藥物組合物，其為固體口服制劑，每單位制劑中含氨甲環(huán)酸500mg，含環(huán)絲氨酸50-200mg。再進(jìn)一步優(yōu)選地，每單位制劑中含氨甲環(huán)酸500mg，含環(huán)絲氨酸100-200mg。
再進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述治療結(jié)核病的藥物組合物，其中所述的固體口服制劑包括片劑、膠囊、顆粒劑、滴丸。
基于本發(fā)明人的研究成果并結(jié)合本領(lǐng)域技術(shù)人員的普通技術(shù)知識(shí)，本發(fā)明還提供一種制藥用途，即，氨甲環(huán)酸在制備治療結(jié)核病的藥物中的應(yīng)用；或者氨甲環(huán)酸與環(huán)絲氨酸組成的活性成分組合物在制備治療結(jié)核病的藥物中的應(yīng)用；進(jìn)一步優(yōu)選的，本發(fā)明還提供了氨甲環(huán)酸與環(huán)絲氨酸組成的活性成分組合物在制備治療肺結(jié)核的藥物中的應(yīng)用。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明涉及的藥物組合物以環(huán)絲氨酸和氨甲環(huán)酸為活性成分，二者通過發(fā)揮協(xié)同作用不僅可以快速殺滅結(jié)核分支桿菌，還可以在一定程度上恢復(fù)被結(jié)核分支桿菌侵蝕的組織的活性，類似于咯血、臥床程度的嚴(yán)重的結(jié)核病患者。另外，本發(fā)明大幅度縮短了結(jié)核病患者的服藥療程，增強(qiáng)了療效。最重要的是，在給結(jié)核病患者用藥時(shí)，只需要服用原臨床用量的四分之一到三分之一，因此藥物對(duì)肝臟和腎臟損傷很小。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但是應(yīng)理解所述實(shí)施例僅是范例性的，不對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神下可以對(duì)技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改或替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例1：氨甲環(huán)酸聯(lián)用環(huán)絲氨酸對(duì)結(jié)核分枝桿菌的影響試驗(yàn)試驗(yàn)研究
1、改良羅氏培養(yǎng)基斜面的制作：磷酸二氫鉀2.4g/l，硫酸鎂0.24g/l，檸檬酸鎂0.6g/l，l-谷氨酸鈉7.2g/l，孔雀綠0.4g/l，馬鈴薯淀粉39.0g/l。制備方法：按配方稱取上述組分49.84g,并吸取甘油12ml,加熱攪拌溶解于600ml蒸餾水中,煮沸5-10分鐘,121℃高壓滅菌15分鐘取出。待冷至55℃左右時(shí),以無菌操作加入無菌攪勻的全蛋液1000ml,混勻(避免產(chǎn)生氣泡),分裝20mm×150mm試管,每管8ml,置成長斜面,用85℃流動(dòng)蒸汽50分鐘,備用。
2、結(jié)核分枝桿菌懸液的制備：稱取0.1mg結(jié)核分枝桿菌h37rv標(biāo)準(zhǔn)菌(atcc：27294)菌落，加入0.5ml生理鹽水與蘇通培養(yǎng)液(體積比為1∶3)的混合稀釋液分別接種于改良羅氏培養(yǎng)基斜面上。置37℃培養(yǎng)。18d后分別取改良羅氏培養(yǎng)基上生長良好的菌落于研磨器中，加少量含0.05％吐溫80的生理鹽水中研磨均勻，稀釋成白色均勻混濁的菌液。顯微鏡下計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)菌濃度為3×107個(gè)/ml(供試驗(yàn)用)。
3、試驗(yàn)分組與指標(biāo)數(shù)據(jù)采集：按上述方法將改良羅氏培養(yǎng)基分別制成含藥和不含藥平皿，即：不含藥的空白對(duì)照組；環(huán)絲氨酸組(環(huán)絲氨酸5、10mg/ml)；含不同濃度氨甲環(huán)酸組(40、20、10、5mg/ml)；在環(huán)絲氨酸(5mg/ml)基礎(chǔ)上含不同濃度氨甲環(huán)酸(40、20、10、5mg/ml)的復(fù)合藥物組。各組培養(yǎng)基每平皿15ml。取上述方法制備的菌懸液0.1ml接種于各含藥和不含藥平皿表面，每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)平皿，置37℃培養(yǎng)，每5d觀察1次，40d后以空白對(duì)照組結(jié)核分枝桿菌長滿培基表面為終止培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)數(shù)各皿菌落數(shù)。
4、試驗(yàn)結(jié)果分析：通過表1的試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，氨甲環(huán)酸隨著劑量的增加表現(xiàn)出一定的抑菌作用，環(huán)絲氨酸5mg/ml時(shí)對(duì)h37rv標(biāo)準(zhǔn)菌的抑殺作用不徹底，但聯(lián)用氨甲環(huán)酸20、40mg/ml時(shí)表現(xiàn)出了非常顯著的殺菌作用。
表1各含藥組結(jié)核分枝桿菌h37rv菌落數(shù)比較(個(gè))
實(shí)施例2氨甲環(huán)酸聯(lián)用環(huán)絲氨酸對(duì)結(jié)核病小鼠的影響試驗(yàn)研究
1、小鼠結(jié)核病模型的復(fù)制：清潔級(jí)km小鼠32只，8周齡，體質(zhì)量18-22g，雌雄各半。選用人型結(jié)核分枝桿菌h37rv標(biāo)準(zhǔn)菌株感染小鼠，具體方法是，取0.4ml含6.6×105個(gè)的結(jié)核分支桿菌h37rv菌懸液注入小鼠尾靜脈，以此建立小鼠結(jié)核病模型。
2、分組與給藥：將結(jié)核病模型小鼠按照雌雄各半的方式隨機(jī)分為如下四組：ck組、cs組、txa組、cs+txa組，每組8只小鼠。小鼠感染結(jié)核分枝桿菌h37rv第2天開始，各給藥組小鼠以其體質(zhì)量為基準(zhǔn)，灌胃對(duì)應(yīng)的藥物，2次/d，共6周；ck組灌胃給予等體積的生理鹽水，2次/d，共6周。
3、試驗(yàn)指標(biāo)數(shù)據(jù)采集：給藥結(jié)束后處死動(dòng)物，摘取小鼠的胸腺，用濾紙吸干殘血后，稱重(mg)，分別除以小鼠體重(g)，再乘以10，得到胸腺指數(shù)。肺、脾菌落計(jì)數(shù)：取小鼠肺和脾臟研磨、稀釋后接種于改良羅氏平皿培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)4周做菌落計(jì)數(shù)。
4、試驗(yàn)結(jié)果分析：通過表2的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，治療6周后與ck組相比，各給藥組小鼠的胸腺重量指數(shù)有一定程度的提高明顯增加，尤其是cs+txa組相比ck組或2個(gè)單藥組均具有顯著性差異(p＜0.05)。另外，cs+txa組小鼠的肺臟、脾臟菌落數(shù)顯著低于ck組、cs組和txa組，均具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。觀察動(dòng)物臟器結(jié)果顯示，cs+txa組小鼠的肝、腎無明顯變化。
表2各組小鼠試驗(yàn)指標(biāo)比較(n＝8)
與ck組比較，*p＜0.05；與cs組比較，#p＜0.05；與txa組比較，￥p＜0.05。