本發(fā)明屬于天然活性成分提取技術領域，具體而言，涉及一種以山礬花鮮品為原料提取制備的皮膚創(chuàng)傷清洗液及其制備方法。
背景技術：
傷口清洗的目的是盡快清除失去生機的組織，使已污染的傷口變?yōu)樾迈r而清潔的傷口，為傷口盡早愈合創(chuàng)良好的條件。然而，目前除了嚴重創(chuàng)傷和外科手術傷口等因病人在醫(yī)院由醫(yī)生護士嚴格按照標準執(zhí)行傷口清洗的情況，其他病人自己在家或其他地方都是隨意處理的，這樣會使得人體被病毒感染的風險增加。比如，被動物(犬)抓咬傷后注射疫苗和血清蛋白，不對傷口按規(guī)范進行處理，感染狂犬病毒的風險仍然非常高。因此清洗是傷口處理的一個重要環(huán)節(jié)。
目前，國內(nèi)用于皮膚消毒清創(chuàng)的主要藥物有醫(yī)用酒精、稀碘酊、碘伏、呋喃西林溶液、新潔爾滅溶液等，然而臨床應用發(fā)現(xiàn)這些藥物有的刺激性太強，不能大面積應用，有的清創(chuàng)效果不理想，甚至有過敏反應。另外，這些藥物均沒有促進肉芽生長及鎮(zhèn)痛等功能?，F(xiàn)代西醫(yī)外科學對手術造成的創(chuàng)傷傷口的處理方法是，對傷口滅菌、消毒，應用抗生素防止感染，縫合傷口后用醫(yī)用紗布包扎的方法?？p合具有閉合傷口，促進止血及組織愈合作用，是現(xiàn)代外科最基本的技術，因此手工縫合是目前應用最廣泛的方法。另外，現(xiàn)代外科不在傷口上用藥，傷口的愈合是靠機體自身的組織來修復的。一般在術后2-3天，患者更換一次敷料，目的是為觀察和清潔傷口。由此可見，西醫(yī)對于術后傷口的愈合完全依靠患者本身的組織修復能力，傷口愈合緩慢。
山礬(symplocoscaudatawallexa.dc.)為山礬科山礬屬灌木或小喬木，又名山桂花。生于山谷、溪邊灌叢中或山坡林下，分布江西、浙江、湖北、湖南、四川、福建、廣東等地。目前，研究人員一直停留在對山礬花香氣成分的研究(不同花期山礬花的香氣成分及其相對含量.王藝光；付建新；張超；胡紹慶；趙宏波.浙江農(nóng)林大學學報)(新鮮山礬花頭香成分的研究.余愛農(nóng)；譚志斗；甘華兵.精細化工)，尚沒有文獻報道山礬花有效部位的藥理活性。
技術實現(xiàn)要素：
鑒于現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種皮膚創(chuàng)傷清洗液及其制備方法。
為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過大量試驗研究并不懈努力，獲得了一種促進傷口愈合的山礬花鮮品提取物，通過該提取物可配制成皮膚創(chuàng)傷清洗液。
具體地，本發(fā)明的山礬花鮮品提取物按如下步驟制備而成：
(1)將新鮮的山礬花高速勻漿，所得漿液加入提取裝置中，并加入5-25倍體積的高濃度異丙醇水溶液，在3～7℃的低溫條件下攪拌提取5-12h，離心；
(2)將步驟(1)所得提取液真空濃縮并冷凍干燥后，用純化水溶解并用稀鹽酸調(diào)節(jié)ph為2～4，靜置8-24h；
(3)取步驟(2)所得上清液加入堿性硅藻土，于25-35℃攪拌0.5-1.5h，然后旋轉(zhuǎn)離心1-4次，分離上清液，真空濃縮；
(4)將步驟(3)所得濃縮液加入大孔吸附樹脂柱，先用1-3倍體積的純化水進行洗脫除雜，棄去水洗脫液，再用1-3倍體積的70-75％乙醇進行洗脫，最后用1-3倍體積的85-90％乙醇進行洗脫；
(5)收集步驟(4)得到的乙醇洗脫液，合并，真空濃縮，冷凍干燥，得山礬花鮮品提取物。
進一步優(yōu)選地，如上所述的山礬花鮮品提取物，其中步驟(1)中所述的異丙醇水溶液的體積分數(shù)為90％-95％。
進一步優(yōu)選地，如上所述的山礬花鮮品提取物，其中步驟(2)中所述的稀鹽酸的質(zhì)量分數(shù)為8-15％。
進一步優(yōu)選地，如上所述的山礬花鮮品提取物，其中步驟(3)中所述的堿性硅藻土按如下方法制得：將硅藻土粉末加入質(zhì)量分數(shù)10-20％氫氧化鈉溶液中，在40-50℃攪拌反應0.5-2.0h，將反應液旋轉(zhuǎn)離心，離心后得沉淀物，沉淀物用乙醇沖洗，然后置于55-60℃烘箱中烘干，將烘干物粉碎至40-80目，即得堿性硅藻土，在密封干燥條件下保存?zhèn)溆谩?/p>
進一步優(yōu)選地，如上所述的山礬花鮮品提取物，其中步驟(4)中所述的大孔吸附樹脂層析柱為hpd750或hpd826層析柱。
進一步優(yōu)選地，如上所述的山礬花鮮品提取物，其中步驟(2)、(3)和(5)中所述真空濃縮的溫度為40℃～50℃。
進一步優(yōu)選地，如上所述的山礬花鮮品提取物，其中步驟(2)和(5)中冷凍干燥溫度為-32℃～-25℃。
另外，本發(fā)明根據(jù)上述方法制備的山礬花鮮品提取物，配制出了一種皮膚創(chuàng)傷清洗液，配制方法包括如下步驟：稱取山礬花鮮品提取物和氯化鈉，加入30-40℃注射用水中，調(diào)節(jié)ph值6.5-7.5，過濾除菌，灌封，即得。
進一步優(yōu)選地，所述的山礬花鮮品提取物在清洗液中的質(zhì)量分數(shù)為0.1-0.5％，氯化鈉在清洗液中的質(zhì)量分數(shù)為0.6-0.9％。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明涉及的皮膚創(chuàng)傷清洗液根據(jù)民間驗方由山礬花鮮品制備而成，對傷口進行清洗時病人疼痛減輕，傷口愈合速度加快，同時無任何副反應。
具體實施方式
以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的制備過程和使用效果進行描述，所舉實例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
實施例1創(chuàng)傷清洗液的制備
(1)在山礬花盛開季節(jié)，采摘新鮮的山礬花1.2kg，高速勻漿，所得漿液加入提取裝置中，并加入10倍體積的92％異丙醇水溶液，在5℃的低溫條件下攪拌提取5h，5000rpm離心10min。
(2)分離離心后的上清液，40℃下真空濃縮，-30℃冷凍干燥，干燥物用5倍量的純化水溶解，并用10％的稀鹽酸調(diào)節(jié)ph為3.0，靜置12h。
(3)將硅藻土粉末加入10倍量的質(zhì)量分數(shù)15％氫氧化鈉溶液中，在45℃、100rpm條件下攪拌反應1h，將反應液旋轉(zhuǎn)離心，8000rpm離心10min，離心后得沉淀物，沉淀物用95％乙醇沖洗，然后置于55-60℃烘箱中烘干，將烘干物粉碎至60目，即得堿性硅藻土，在密封干燥條件下保存?zhèn)溆谩?/p>
(4)取步驟(2)靜置所得上清液加入堿性硅藻土，于30℃攪拌1h，然后旋轉(zhuǎn)離心2次，每次8000rpm離心10min，分離上清液，40℃下真空濃縮。
(5)將步驟(4)所得濃縮液加入hpd750大孔吸附樹脂柱，先用2倍柱體積的純化水進行洗脫除雜，棄去水洗脫液，再用2倍柱體積的75％乙醇進行洗脫，最后用2倍柱體積的90％乙醇進行洗脫，洗脫時的流速均為3倍柱體積/小時。
(6)收集步驟(5)得到的乙醇洗脫液，合并，40℃下真空濃縮，-30℃下冷凍干燥，得山礬花鮮品提取物。
(7)稱取山礬花鮮品提取物和氯化鈉，加入35℃注射用水中，使山礬花鮮品提取物在清洗液中的質(zhì)量分數(shù)為0.3％，氯化鈉在清洗液中的質(zhì)量分數(shù)為0.9％，調(diào)節(jié)ph值7.0，過濾除菌，灌封，即得。
實施例2創(chuàng)傷清洗液的制備(山礬花漿液采用乙醇提取)
(1)在山礬花盛開季節(jié)，采摘新鮮的山礬花1.2kg，高速勻漿，所得漿液加入提取裝置中，并加入10倍體積的92％乙醇水溶液，在5℃的低溫條件下攪拌提取5h，5000rpm離心10min。
(2)分離離心后的上清液，40℃下真空濃縮，-30℃冷凍干燥，干燥物用5倍量的純化水溶解，并用10％的稀鹽酸調(diào)節(jié)ph為3.0，靜置12h。
(3)將硅藻土粉末加入10倍量的質(zhì)量分數(shù)15％氫氧化鈉溶液中，在45℃、100rpm條件下攪拌反應1h，將反應液旋轉(zhuǎn)離心，8000rpm離心10min，離心后得沉淀物，沉淀物用95％乙醇沖洗，然后置于55-60℃烘箱中烘干，將烘干物粉碎至60目，即得堿性硅藻土，在密封干燥條件下保存?zhèn)溆谩?/p>
(4)取步驟(2)靜置所得上清液加入堿性硅藻土，于30℃攪拌1h，然后旋轉(zhuǎn)離心2次，每次8000rpm離心10min，分離上清液，40℃下真空濃縮。
(5)將步驟(4)所得濃縮液加入hpd750大孔吸附樹脂柱，先用2倍柱體積的純化水進行洗脫除雜，棄去水洗脫液，再用2倍柱體積的75％乙醇進行洗脫，最后用2倍柱體積的90％乙醇進行洗脫，洗脫時的流速均為3倍柱體積/小時。
(6)收集步驟(5)得到的乙醇洗脫液，合并，40℃下真空濃縮，-30℃下冷凍干燥，得山礬花鮮品提取物。
(7)稱取山礬花鮮品提取物和氯化鈉，加入35℃注射用水中，使山礬花鮮品提取物在清洗液中的質(zhì)量分數(shù)為0.3％，氯化鈉在清洗液中的質(zhì)量分數(shù)為0.9％，調(diào)節(jié)ph值7.0，過濾除菌，灌封，即得。
實施例3創(chuàng)傷清洗液的制備(無步驟2)
(1)在山礬花盛開季節(jié)，采摘新鮮的山礬花1.2kg，高速勻漿，所得漿液加入提取裝置中，并加入10倍體積的92％異丙醇水溶液，在5℃的低溫條件下攪拌提取5h，5000rpm離心10min。
(2)將硅藻土粉末加入10倍量的質(zhì)量分數(shù)15％氫氧化鈉溶液中，在45℃、100rpm條件下攪拌反應1h，將反應液旋轉(zhuǎn)離心，8000rpm離心10min，離心后得沉淀物，沉淀物用95％乙醇沖洗，然后置于55-60℃烘箱中烘干，將烘干物粉碎至60目，即得堿性硅藻土，在密封干燥條件下保存?zhèn)溆谩?/p>
(3)取步驟(1)所得上清液加入堿性硅藻土，于30℃攪拌1h，然后旋轉(zhuǎn)離心2次，每次8000rpm離心10min，分離上清液，40℃下真空濃縮。
(4)將步驟(3)所得濃縮液加入hpd750大孔吸附樹脂柱，先用2倍柱體積的純化水進行洗脫除雜，棄去水洗脫液，再用2倍柱體積的75％乙醇進行洗脫，最后用2倍柱體積的90％乙醇進行洗脫，洗脫時的流速均為3倍柱體積/小時。
(5)收集步驟(4)得到的乙醇洗脫液，合并，40℃下真空濃縮，-30℃下冷凍干燥，得山礬花鮮品提取物。
(6)稱取山礬花鮮品提取物和氯化鈉，加入35℃注射用水中，使山礬花鮮品提取物在清洗液中的質(zhì)量分數(shù)為0.3％，氯化鈉在清洗液中的質(zhì)量分數(shù)為0.9％，調(diào)節(jié)ph值7.0，過濾除菌，灌封，即得。
實施例4創(chuàng)傷清洗液的制備(無堿性硅藻土吸附處理)
(1)在山礬花盛開季節(jié)，采摘新鮮的山礬花1.2kg，高速勻漿，所得漿液加入提取裝置中，并加入10倍體積的92％異丙醇水溶液，在5℃的低溫條件下攪拌提取5h，5000rpm離心10min。
(2)分離離心后的上清液，40℃下真空濃縮，-30℃冷凍干燥，干燥物用5倍量的純化水溶解，并用10％的稀鹽酸調(diào)節(jié)ph為3.0，靜置12h，分離上清液，40℃下真空濃縮。
(3)將步驟(2)所得濃縮液加入hpd750大孔吸附樹脂柱，先用2倍柱體積的純化水進行洗脫除雜，棄去水洗脫液，再用2倍柱體積的75％乙醇進行洗脫，最后用2倍柱體積的90％乙醇進行洗脫，洗脫時的流速均為3倍柱體積/小時。
(4)收集步驟(3)得到的乙醇洗脫液，合并，40℃下真空濃縮，-30℃下冷凍干燥，得山礬花鮮品提取物。
(5)稱取山礬花鮮品提取物和氯化鈉，加入35℃注射用水中，使山礬花鮮品提取物在清洗液中的質(zhì)量分數(shù)為0.3％，氯化鈉在清洗液中的質(zhì)量分數(shù)為0.9％，調(diào)節(jié)ph值7.0，過濾除菌，灌封，即得。
實施例5清洗液對創(chuàng)面愈合的影響實驗研究
1、復制模型：成年sd大鼠90只，清潔級，雌雄各半，體質(zhì)量200-220g。適應性飼養(yǎng)一周后開始造模，方法為：用1％鹽酸氯胺酮溶液腹腔注射麻醉，劑量為3ml/kg。局部備皮，常規(guī)消毒，大鼠背部取直徑為1cm的圓形切口1個，剪開皮膚全層、皮下淺筋膜直至肌層，止血后在創(chuàng)面上加糞液1ml(正常人新鮮糞便10g，加生理鹽水5ml，混勻，離心，取上清液，現(xiàn)配現(xiàn)用)，以油紗、敷料、膠帶固定，48h后去除覆蓋物，見傷口有膿性分泌物、有糞臭味者為造模成功。
2、分組并干預處理：將模型大鼠分為對照組、試驗a組、試驗b組、試驗c組、試驗d組，每組16只大鼠。各組大鼠采用生理鹽水清洗傷口，采用碘伏消毒，包扎敷料。其中，對照組按青霉素鈉14萬u/kg腹腔注射給藥。試驗a組除按青霉素鈉14萬u/kg腹腔注射給藥外，同時分別將實施例1制備的創(chuàng)傷清洗液(28-32℃)，采用棉球蘸取后輕輕擦洗傷口，每天早中晚各一次。試驗b組、試驗c組、試驗d組按照同樣的方法，分別對應于實施例2、3、4制備的創(chuàng)傷清洗液進行處理。
3、試驗結(jié)果分析：在造模后第7、14天，分別處死各組8只大鼠，處死前計算創(chuàng)面閉合指數(shù)。創(chuàng)面閉合指數(shù)的計算公式：創(chuàng)面閉合指數(shù)＝(1-治療后創(chuàng)面面積/原始創(chuàng)面面積)*100％。
各組創(chuàng)面閉合指數(shù)比較見表1。根據(jù)表1的試驗統(tǒng)計結(jié)果可以看出，各試驗組與對照組相比，大鼠創(chuàng)面閉合指數(shù)有不同程度的提高，尤其是試驗a組相比對照組具有極顯著差異(p＜0.01)。在試驗開始后第14天時，試驗a組相比其他試驗組均具有極顯著差異(p＜0.01)。
表1各組創(chuàng)面閉合指數(shù)比較(％)
與對照組比較，*p＜0.01；與試驗b組比較，#p＜0.01；與試驗c組比較，&p＜0.01；與試驗d組比較，￥p＜0.01。
實施例6皮膚刺激實驗
以實施例1制備的創(chuàng)傷清洗液作為受試物。選用健康大耳白兔4只，試驗前24小時軀干背部脊柱兩側(cè)剪毛。24h后檢查皮膚無破損，取受試物0.5ml涂于右側(cè)剪毛皮膚上，油紙覆蓋，橡皮膏固定。4小時后去除覆蓋物，以清水清洗殘留受試物。以左側(cè)皮膚為對照，觀察記錄右側(cè)皮膚1、24、48h、局部是否紅斑、水腫形成。結(jié)果顯示：受試動物皮膚無紅斑、水腫形成，皮膚刺激反應積分均值為0，屬無刺激性。
以上所述僅為本發(fā)明的部分實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。