本發(fā)明屬于藥物技術(shù)，具體地涉及一種菊科類型環(huán)肽作為cgas-sting信號通路抑制劑的應(yīng)用，以及其在制備治療相關(guān)疾病藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

固有免疫是宿主機(jī)體免疫系統(tǒng)的第一道防線。在漫長的生物進(jìn)化過程中，宿主細(xì)胞中的模式識(shí)別受體能夠識(shí)別入侵病原微生物的保守組分病原相關(guān)分子模式，如核酸分子、lps等，感知到病原微生物的入侵，侵染信號通過下游接頭蛋白、激酶和轉(zhuǎn)錄因子傳遞，誘導(dǎo)i型干擾素和促炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)，最終清除入侵的病原微生物。過去幾十年的研究已經(jīng)詳細(xì)解析了宿主細(xì)胞識(shí)別以及清除“非己”rna的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，而最近幾年才開始對識(shí)別“非己”dna的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制進(jìn)行研究，特別是cgas-sting信號通路。

sting(stimulatorofinterferongenes)，又名為tmem173,mita,eris或mpys，作為胞內(nèi)應(yīng)答dna入侵的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)分子，在胞質(zhì)dna刺激下，它響應(yīng)來自胞質(zhì)dna受體的信號，對于誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素的過程中發(fā)揮了關(guān)鍵性的作用。宿主細(xì)胞的dna識(shí)別受體識(shí)別外源或內(nèi)源的“非己”dna后將信號傳遞給內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的節(jié)點(diǎn)分子sting，隨后sting迅速二聚化并從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)移到核外周小體上。在這個(gè)過程中，激酶tbk1也會(huì)被招募并轉(zhuǎn)移到核外周小體上激活，被激活的tbk1磷酸化轉(zhuǎn)錄因子irf3，隨后irf3發(fā)生二聚化并進(jìn)入細(xì)胞核激活多種靶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，參與多種生物效應(yīng)，包括抗病毒、炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答及腫瘤發(fā)生發(fā)展等重要的生理病理過程。

正常激活的cgas-sting信號通路有助于機(jī)體識(shí)別和清除入侵的dna病原微生物，但是異常過度激活的cgas-sting信號通路會(huì)造成機(jī)體發(fā)生炎癥及自身免疫性疾病等，如aicardi-goutieres綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡或狼瘡樣疾病。因此研究調(diào)控cgas-sting信號通路以維持固有免疫處于正常穩(wěn)定的狀態(tài)至關(guān)重要。目前的研究主要集中在cgas-sting信號通路關(guān)鍵分子的翻譯后修飾以及尋找新的調(diào)控分子，而小分子化合物參與調(diào)控cgas-sting信號通路的研究還比較少，但具有十分重要的應(yīng)用價(jià)值，這也成為重點(diǎn)關(guān)注的研究方向之一。

現(xiàn)有技術(shù)中未見cgas-sting信號通路抑制劑的報(bào)道，亦未見菊科類型環(huán)肽作用于該通路和制備治療自身免疫性疾病藥物的報(bào)道。菊科類型環(huán)肽在菊科植物中存在的種類不多，目前僅從菊科紫菀屬植物紫菀(astertataricusl.f.)中分離得到15個(gè)。菊科類型環(huán)肽類化合物的提取分離具有一定的特點(diǎn)，主要是因?yàn)樵擃惢衔锏臉O性小、溶解性不好且含量較低，難以得到純度較高的環(huán)肽類成分。近年來，從紫菀屬植物中分離環(huán)肽類成分已有若干方法公開發(fā)表，如徐會(huì)敏等報(bào)道，用甲醇回流提取菊科紫菀屬植物紫菀的根莖后，得甲醇浸膏，加水混懸后，用乙酸乙酯和正丁醇反復(fù)萃取，乙酸乙酯部分反復(fù)利用正反向硅膠柱層析、sephadexlh-20富集得到總環(huán)肽部位，再結(jié)合hplc對其進(jìn)行分離純化，得到一系列環(huán)肽。參見xu,h.m,etal.astinsk-p,sixnewchlorinatedcyclopentapeptidesfromastertataricus,tereahedron2013,69,7964-7969。專利cn102174083b也公開了類似的制備方法。但是這些方法普遍存在提取效率低，過程復(fù)雜，樣品損失量較大，重復(fù)性和可控性差等缺點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一類菊科類型環(huán)肽化合物作為cgas-sting信號通路抑制劑的應(yīng)用；以及其在制備治療cgas-sting信號通路異常激活的疾病的藥物中的應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：

菊科類型環(huán)肽化合物或其藥理學(xué)上容許的鹽作為cgas-sting信號通路抑制劑的應(yīng)用。

菊科類型環(huán)肽化合物或其藥理學(xué)上容許的鹽作為cgas-sting信號通路抑制劑在制備治療cgas-sting信號通路異常激活的疾病的藥物中的應(yīng)用。

其中，所述菊科類型環(huán)肽化合物優(yōu)選為下述結(jié)構(gòu)式所示的菊科類型環(huán)肽astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)，

進(jìn)一步優(yōu)選的，所述菊科類型環(huán)肽為astinc。

所述菊科類型環(huán)肽化合物或其藥理學(xué)上容許的鹽能夠抑制isd刺激下cgas-sting信號通路下游基因ifnβ、ifnα4和cxcl10的表達(dá)，從而達(dá)到抑制cgas-sting信號通路。

所述的藥理學(xué)上容許的鹽包括與無機(jī)酸、有機(jī)酸、堿金屬、堿土金屬或者堿性氨基酸形成的鹽。

進(jìn)一步的，本發(fā)明的所述菊科類型環(huán)肽或其藥理學(xué)上容許的鹽，可以列舉例如與鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸、氫溴酸等無機(jī)酸，或者馬來酸、富馬酸、酒石酸、乳酸、檸檬酸、乙酸、甲磺酸、對苯甲磺酸、己二酸、棕櫚酸、單寧酸等有機(jī)酸，鋰、鈉、鉀等堿金屬，鈣、鎂等堿土金屬，賴氨酸等堿性氨基酸形成的鹽。

本發(fā)明所述的治療cgas-sting信號通路異常激活的自身免疫性疾病的藥物，可以由菊科類型環(huán)肽化合物或其藥理學(xué)上容許的鹽，與藥學(xué)上可接受的載體組合后制備而成。制備的藥物劑型可以為片劑、膠囊、口服液、針劑、注射用凍干劑或粉針劑等。由于菊科類型環(huán)肽可從紫菀中提取分離，而片劑、膠囊、口服液、針劑、注射用凍干劑或粉針劑等藥物劑型的制備也是本領(lǐng)域的常規(guī)知識(shí)。因此，由菊科類型環(huán)肽化合物與相應(yīng)載體制備的各種藥物劑型也能夠由本領(lǐng)域技術(shù)人員實(shí)現(xiàn)。

上文中所述的藥學(xué)上可接受的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，例如：稀釋劑、賦形劑如水等，填充劑如淀粉、蔗糖等；黏合劑如纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；濕潤劑如甘油；崩解劑如瓊脂、碳酸鈣和碳酸氫鈉；吸收促進(jìn)劑如季銨化合物；表面活性劑如十六烷醇；吸附載體如高嶺土和皂黏土；潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣和硬脂酸鎂、以及聚乙二醇等。另外還可以在組合物中加入其它輔劑如香味劑、甜味劑等。

本發(fā)明化合物可以以組合物的形式通過口服、鼻吸入、直腸或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、粒劑、膠囊等，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其他液體制劑如糖漿、酏劑等；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、水或油性懸浮劑等。本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。

所述藥物中，優(yōu)選含有重量比為0.1％～99.5％的活性成分菊科類型環(huán)肽或其藥理學(xué)上容許的鹽，最優(yōu)選含有重量比為0.5％～95％的活性成分。

本發(fā)明所述藥物的施用量可根據(jù)用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療的疾病的類型和嚴(yán)重程度等變化，其日劑量可以是0.01～10mg/kg體重，優(yōu)選0.1～5mg/kg體重，可以一次或多次施用。

本發(fā)明是通過在mef細(xì)胞中檢測astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)對dna類似物isd刺激激活的cgas-sting信號通路下游基因表達(dá)的影響，以及在hsv-1誘導(dǎo)的小鼠血清中ifnβ蛋白表達(dá)的影響；發(fā)現(xiàn)菊科類型環(huán)肽能在體內(nèi)外抑制cgas-sting信號通路，是該通路的第一個(gè)抑制劑，可用于制備治療相關(guān)疾病的藥物。所述cgas-sting信號通路異常激活的疾病包括自身免疫性、炎癥性疾病和癌癥等，如aicardi-goutieres綜合癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等。

本發(fā)明中所述的astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)的制備方法可參照xu,h.m,etal.astinsk-p,sixnewchlorinatedcyclopentapeptidesfromastertataricus,tereahedron2013,69,7964-7969，以及專利cn102174083b中公開的類似的制備方法。但是上述方法普遍存在提取效率低，過程復(fù)雜，樣品損失量較大，重復(fù)性和可控性差等缺點(diǎn)，本申請中對制備方法做了改進(jìn)，改進(jìn)后的制備方法概括地說就是，甲醇浸膏直接經(jīng)硅膠柱層析，勿需萃取，既簡化了分離過程，又減少了樣品損失；通過正反相硅膠柱層析可以簡便的除去部分色素及其它低極性成分；利用sephadexlh-20凝膠色譜，可分開一部分與環(huán)肽分子量相差很大的小分子成分，同時(shí)快速富集環(huán)肽；利用高效液相色譜(hplc)純化及重結(jié)晶技術(shù)，即可成功分離得到環(huán)肽。另外，本方法僅利用實(shí)驗(yàn)室或工業(yè)上常規(guī)的層析材料，包括正反相硅膠、sephadexlh-20等?？傊?，本發(fā)明提取分離方法可控性和重現(xiàn)性好，樣品損失少，成本較低，操作方便，可分離得到微量環(huán)肽，溶劑可以反復(fù)回收利用，適用于工業(yè)生產(chǎn)。具體制備見實(shí)施例部分。

有益效果：本發(fā)明首次揭示了菊科類型環(huán)肽化合物是一種cgas-sting信號通路抑制劑，能夠有效抑制dna類似物isd刺激下cgas-sting信號通路下游基因ifnβ、ifnα4和cxcl10的表達(dá)；由此可應(yīng)用于制備治療cgas-sting信號通路異常激活的疾病的藥物，由于本發(fā)明所述的菊科類型環(huán)肽化合物為天然化合物，其劑型和用藥方式多樣化，具有廣泛的臨床應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的菊科類型環(huán)肽化合物的制備方法流程圖；

圖2a為本發(fā)明的菊科類型環(huán)肽化合物astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)在mef細(xì)胞中對dna類似物isd刺激激活的ifnβmrna表達(dá)的抑制作用；

圖2b為astinc(3)在mef細(xì)胞中對dna類似物isd刺激激活的cgas-sting信號通路下游基因ifnβ，ifnα4和cxcl10的表達(dá)的影響；

圖3為本發(fā)明的菊科類型環(huán)肽化合物astinc(3)對hsv-1誘導(dǎo)的小鼠血清中ifnβ蛋白表達(dá)的影響。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容。

本實(shí)施例中使用的設(shè)備、材料、試劑除有特殊說明以外，均可以通過市場購買獲取。

實(shí)施例1

菊科類型環(huán)肽化合物astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)的制備：(制備方法流程見圖1所示)

取紫菀(astertataricusl.)干燥根及根莖10kg，經(jīng)干燥、粉碎及甲醇浸泡過夜后，用甲醇熱回流提取，共提取三次，第一次4小時(shí)，第二次4小時(shí)，第三次3小時(shí)，合并提取液，經(jīng)減壓濃縮得甲醇浸膏4.6kg。該浸膏經(jīng)硅膠柱層析，用氯仿/甲醇(100:0，9:1，8:2，7:3，1:1，0:100)梯度洗脫，利用環(huán)肽tlc檢測方法合并含環(huán)肽各餾分，得總環(huán)肽部位(212.6g)；以下的每一過程都須結(jié)合環(huán)肽tlc檢測方法來指導(dǎo)分離純化?？偔h(huán)肽部位經(jīng)硅膠柱層析，用100:1-8:2的氯仿/甲醇梯度洗脫，根據(jù)環(huán)肽點(diǎn)的不同合并為五個(gè)組分fr.1–fr.5。對fr.1(64g)經(jīng)硅膠柱層析，12:1-1:1的石油醚/丙酮梯度洗脫，分離得到三個(gè)組分fr.1-1–fr.1-3；fr.1-2(10g)經(jīng)sephadexlh-20凝膠柱層析，1:1的氯仿/甲醇為洗脫劑，所富集的含有環(huán)肽的部分再經(jīng)硅膠柱層析，10:1-3:1的氯仿/乙酸乙酯梯度洗脫，得到三個(gè)組分fr.1-2-1–fr.1-2-3；fr.1-2-1(34mg)組分經(jīng)odshplc半制備柱純化，20％乙腈和5‰三氟乙酸為流動(dòng)相，得到astinl(10)(5mg)；fr.1-2-2(231mg)再經(jīng)硅膠柱層析，1:3的氯仿/乙酸乙酯為洗脫劑，得到astink(9)(20mg)。對fr.2(15g)經(jīng)硅膠柱層析，2:1-1:2的石油醚/丙酮梯度洗脫，得到五個(gè)組分fr.2-1–fr.2-5；其中fr.2-2(2.8g)再經(jīng)硅膠柱層析，7:1的氯仿/甲醇等度洗脫，得到四個(gè)組分fr.2-2-1–fr.2-2-4；fr.2-2-1(786mg)經(jīng)sephadexlh-20層析，1:1的氯仿/甲醇為洗脫劑，得環(huán)肽組分經(jīng)odshplc半制備柱純化，35％乙腈和5‰三氟乙酸為流動(dòng)相，得到astinf(6)(10mg)，astinh(8)(15mg)和astinm(11)(7mg)；fr.2-3(1.1g)經(jīng)sephadexlh-20層析，1:1的氯仿/甲醇為洗脫劑，得環(huán)肽組分再經(jīng)硅膠柱層析，20:1-5:1的氯仿/甲醇梯度洗脫，得到四個(gè)組分fr.2-3-1–fr.2-3-4，其中fr.2-3-4(41mg)經(jīng)odshplc半制備柱純化得到astinn(12)(5mg)；fr.2-4(789mg)經(jīng)硅膠柱層析，20:1-5:1氯仿/甲醇梯度洗脫，得到astind(4)(200mg)；fr.2-5(971mg)經(jīng)sephadexlh-20層析，1:1的氯仿/甲醇為洗脫劑，得兩組分fr.2-5-1–fr.2-5-2；其中fr.2-5-1(128mg)經(jīng)硅膠柱層析，25:1的乙酸乙酯/甲醇等度洗脫，得到astina(1)(12.7mg)；fr.2-5-2(78mg)經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，用氯仿/丙酮洗脫分離得到astino(13)(3mg)。對fr.3(30g)經(jīng)硅膠柱層析，1:1-1:2的石油醚/丙酮梯度洗脫，得到三個(gè)組分fr.3-1–fr.3-3；其中fr.3-1(8g)再經(jīng)硅膠柱層析，3:1-5:1的氯仿/乙酸乙酯為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，合并得到五個(gè)組分fr.3-1-1–fr.3-1-5。其中fr.3-1-2(3g)經(jīng)sephadexlh-20層析，1:1的氯仿/甲醇為洗脫劑，合并環(huán)肽部分，該部分經(jīng)甲醇重結(jié)晶得到化合物astinc(3)(1.4g)；fr.3-2(12g)經(jīng)rp-18柱層析，10％-80％的甲醇/水梯度洗脫，得到三個(gè)組分fr.3-2-1–fr.3-2-3；fr.3-2-2(4.1g)經(jīng)sephadexlh-20層析，1:1的氯仿/甲醇為洗脫劑，得到富集環(huán)肽的部分；該部分再經(jīng)硅膠層析，20:1-5:1的氯仿/甲醇為洗脫劑梯度洗脫，得到四個(gè)組分fr.3-2-2-1–fr.3-2-2-4；fr.3-2-2-2(821mg)經(jīng)odshplc半制備柱純化，45％乙腈和5‰三氟乙酸為洗脫劑，得到astinp(14)(12mg)和astine(5)(200mg)；fr.3-2-2-3(44mg)經(jīng)odshplc半制備柱純化，15％乙腈和5‰三氟乙酸為洗脫劑，得到asting(7)(12mg)。fr.3-2-2-4(1.3g)經(jīng)硅膠柱層析，1:3-1:9的氯仿/乙酸乙酯梯度洗脫，將環(huán)肽部分富集，該部分經(jīng)sephadexlh-20層析純化后，再經(jīng)硅膠柱層析，15:1-5:1氯仿/甲醇梯度洗脫，得到化合物astinb(2)(786mg)。

實(shí)施例2

實(shí)施例1制備所得菊科類型環(huán)肽化合物astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)在mef細(xì)胞中檢測對dna類似物isd刺激激活的cgas-sting信號通路下游基因表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)原理、方法和結(jié)果如下：

實(shí)驗(yàn)原理：在固有免疫信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中，cgas-sting信號通路能夠識(shí)別入侵機(jī)體的外源dna病原微生物。外源dna刺激能夠誘導(dǎo)下游i型干擾素基因和干擾素刺激基因的表達(dá)。因此，在外源dna(dna類似物isd)刺激下，通過檢測通路下游基因ifnβ，ifnα4和cxcl10的表達(dá)可以反映cgas-sting信號通路的激活情況，從而評價(jià)化合物對cgas-sting信號通路激活的影響。

實(shí)驗(yàn)方法：(1)細(xì)胞培養(yǎng)：mef細(xì)胞使用含有10％胎牛血清(gibco)及含50u/ml盤尼西林和50μg/ml鏈霉素的dmem(invotrogen)培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為37℃、5％的co2，每兩天傳代一次；(2)脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染與化合物處理：將mef細(xì)胞鋪于12孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，用10μm相應(yīng)的化合物和等量的dmso預(yù)處理細(xì)胞6小時(shí)后，用lipo2000(invotrogen)轉(zhuǎn)染5μgisd刺激細(xì)胞，6小時(shí)后棄去培養(yǎng)液，用pbs將細(xì)胞離心收集于ep管中；(3)rna抽提：用500μltrizol將(2)中細(xì)胞裂解，然后加入100μlchcl3萃取裂解液中的rna，4℃12000g離心15min，轉(zhuǎn)移200μl最上層清液到新的ep管中，加入等體積的異丙醇將rna沉淀出來，靜置10min后，4℃12000g離心10min，去掉上清，加入1ml含75％乙醇的depc水清洗沉淀，4℃7500g離心5min，去掉上清，并在室溫干燥沉淀5min，然后用適量的depc水溶解rna進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)；(4)實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測下游基因表達(dá)：以(2)中抽提得到細(xì)胞總rna為模板，以oligodt為引物，通過逆轉(zhuǎn)錄得到cdna。使用powersybrgreenpcrmastermix(abi)試劑進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量pcr，以gadph作為內(nèi)參基因。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖2。其中，圖2a為本發(fā)明的菊科類型環(huán)肽化合物astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)在mef細(xì)胞中對dna類似物isd刺激激活的ifnβmrna表達(dá)的抑制作用；圖2b為astinc(3)在mef細(xì)胞中對dna類似物isd刺激激活的cgas-sting信號通路下游基因ifnβ，ifnα4和cxcl10的表達(dá)的影響。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，菊科類型環(huán)肽化合物能夠抑制dna類似物isd刺激下cgas-sting信號通路下游基因ifnβ，ifnα4和cxcl10的表達(dá)，其中astinc活性最好，說明菊科類型環(huán)肽能抑制cgas-sting信號通路活性，是目前發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)該通路的抑制劑。

實(shí)施例3

實(shí)施例1制備所得菊科類型環(huán)肽化合物astinc(3)對hsv-1誘導(dǎo)的小鼠血清中ifnβ蛋白表達(dá)的影響。

實(shí)驗(yàn)原理：機(jī)體內(nèi)ifnβ蛋白的表達(dá)是固有免疫抗感染反應(yīng)的標(biāo)志事件，ifnβ表達(dá)后能夠激活干擾素受體(ifnr)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)干擾素刺激基因等細(xì)胞因子和炎癥因子的表達(dá)，然后通過招募nk細(xì)胞或進(jìn)一步激活適應(yīng)性免疫反應(yīng)等分子機(jī)制，最終清除入侵的病原微生物。因此，在dna病毒hsv-1感染小鼠后，通過檢測小鼠血清中ifn-β的表達(dá)量可以反映機(jī)體抗固有抗感染免疫反應(yīng)的激活情況，從而評價(jià)化合物對機(jī)體固有抗感染免疫反應(yīng)活性的影響。

實(shí)驗(yàn)方法：(1)構(gòu)建hsv-1感染小鼠模型：取6-8周齡的野生型小鼠，通過尾靜脈注射的方式將100μl滴度為1×10⁷的hsv-1注射入小鼠體內(nèi)，6h后收集獲得血清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)；(2)化合物處理小鼠方式：通過尾靜脈注射的方式向野生型小鼠注射一定濃度的化合物，每隔一天注射一次，注射3次；(3)眼眶取血法收集小鼠血液獲得血清：用毛細(xì)管刺破小鼠眼眶毛細(xì)血管，通過毛細(xì)管引流收集200μl外周血到ep管中，室溫靜置過夜，然后3000rpm離心10min，取上清；(4)elisa檢測血清中ifnβ蛋白含量：根據(jù)verikine試劑盒(pblassayscience)的實(shí)驗(yàn)操作手冊上的方法步驟檢測小鼠血清中的ifnβ蛋白的含量。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，菊科類型環(huán)肽化合物astinc(3)能夠明顯降低hsv-1誘導(dǎo)的小鼠血清中ifnβ蛋白含量，說明菊科類型環(huán)肽能在體內(nèi)抑制cgas-sting信號通路活性。

實(shí)施例4

實(shí)施例1所得化合物astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)，加入4％的硫酸乙醇溶液，ph＝4，過濾，干燥，制成硫酸鹽化合物1-14。

實(shí)施例5

實(shí)施例1所得化合物astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)，加入4％的鹽酸溶液，ph＝4，過濾，干燥，制成鹽酸鹽化合物1-14。

實(shí)施例6

實(shí)施例1所得化合物astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)，加入4％的酒石酸溶液，ph＝4，過濾，干燥，制成酒石酸鹽化合物1-14。

實(shí)施例7

實(shí)施例1所得化合物astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)，加入4％的檸檬酸溶液，ph＝4，過濾，干燥，制成檸檬酸鹽化合物1-14。

實(shí)施例8

片劑：實(shí)施例1所得化合物astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)或?qū)嵤├?-7所得的鹽10mg，乳糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸鎂5mg。

制備方法：將化合物或其鹽、乳糖和淀粉混和，用水均勻濕潤，把濕潤后的混合物過篩并干燥，再過篩，加入硬脂酸鎂，然后將混合物壓片，每片重250mg，化合物含量為10mg。

實(shí)施例9

安瓿劑：實(shí)施例1所得化合物astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)或?qū)嵤├?-7所得的鹽2mg，氯化鈉10mg。

制備方法：將化合物或其鹽和氯化鈉溶解于適量的注射用水中，過濾所得溶液，在無菌條件下裝入安瓿瓶中。

實(shí)施例10

注射用凍干劑：實(shí)施例1所得化合物astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)或?qū)嵤├?-7所得的鹽10mg，碳酸氫鈉2mg，甘露醇252mg。

制備方法：將碳酸氫鈉、甘露醇，加注射用水溶解，加活性碳吸附30分鐘除熱原，過濾除去活性碳，在濾液中加入化合物或其鹽，超聲處理使溶解，用1n鹽酸調(diào)節(jié)ph為5.0-7.0，微孔濾膜濾過，加注射用水，分裝，冷凍干燥，上塞，軋蓋，即得。

實(shí)施例11

膠囊劑：實(shí)施例1所得化合物astinsa-h(1-8)和astinsk-p(9-14)或?qū)嵤├?-7所得的鹽10mg，乳糖187mg，硬脂酸鎂3mg。

制備方法：將化合物或其鹽與助溶劑混和，過篩，均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊，每個(gè)膠囊重200mg，活性成分含量為10mg。