本發(fā)明涉及一種脆弱擬桿菌的應(yīng)用，具體而言，涉及脆弱擬桿菌在改善和/或治療腸炎中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、腸炎是指微生物感染、缺血、放射線或機(jī)體免疫失調(diào)等各種原因引起的腸道炎癥性反應(yīng)。最常見的癥狀有腹痛、腹瀉、血便、發(fā)熱等，嚴(yán)重者可引起脫水和電解質(zhì)紊亂，甚至威脅生命。腸炎根據(jù)發(fā)病原因的不同，可分為炎癥性腸炎和非感染性腸炎，炎癥性腸炎根據(jù)發(fā)病位置的不同，又分為克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎等；非感染性腸炎又包括過(guò)敏性結(jié)腸炎、放射性腸炎、壞死性腸炎、缺血性腸炎和菌群失調(diào)性腸炎等。

2、

3、當(dāng)出現(xiàn)腹痛，腹瀉、血便及發(fā)熱等臨床癥狀時(shí)，應(yīng)及時(shí)就醫(yī)，目前腸炎的診斷方法主要通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢查(血液相關(guān)檢查、糞便檢查)和影像學(xué)檢查(ct或mri、造影檢查、腸系膜血管ct血管成像)進(jìn)行判斷，必要時(shí)可根據(jù)病變部位不同，選擇小腸鏡、全結(jié)腸鏡、乙狀結(jié)腸鏡、直腸鏡等。內(nèi)鏡下發(fā)現(xiàn)病變時(shí)，可進(jìn)一步取病變組織進(jìn)行病理檢查。臨床上感染性腸炎早期治療可經(jīng)驗(yàn)選擇敏感的抗感染藥物，根據(jù)細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果及時(shí)調(diào)整藥物，選擇更加敏感的抗感染藥物，長(zhǎng)期用藥容易產(chǎn)生抗生素耐藥性。炎癥性腸炎多采用免疫抑制治療，臨床治療以水楊酸類、糖皮質(zhì)激素類和免疫抑制劑等抗炎藥物治療為主，病情易復(fù)發(fā)，長(zhǎng)期用藥常帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)負(fù)擔(dān)。

4、當(dāng)前的證據(jù)表明，益生菌在艱難梭菌感染、炎癥性腸病、腸易激綜合征、感染性腸胃炎和壞死性腸炎等發(fā)揮著重要作用。huang?m等使用美沙拉嗪聯(lián)合雙歧桿菌三聯(lián)活菌治療uc，結(jié)果顯示患者臨床癥狀評(píng)分、疾病活動(dòng)指數(shù)、炎性因子較對(duì)照組明顯下降，不良反應(yīng)發(fā)生率低，對(duì)uc患者粘膜顯示出巨大的保護(hù)作用，提示益生菌可恢復(fù)腸粘膜屏障功能。目前關(guān)于益生菌的研究多為活菌，而關(guān)于滅活菌相關(guān)的研究較少，為彌補(bǔ)這一研究空白，為后續(xù)益生菌產(chǎn)品開發(fā)提供新思路。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了脆弱擬桿菌在改善和/或治療腸炎中的應(yīng)用。

2、為了更好地解決上述問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、第一方面，本發(fā)明提供了脆弱擬桿菌在制備改善和/或治療腸炎的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述脆弱擬桿菌為滅活菌；

4、所述脆弱擬桿菌選自保藏編號(hào)為cgmcc?no.10685的脆弱擬桿菌zy-312、脆弱擬桿菌nctc9343。

5、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，所述腸炎包括非感染性腸炎和結(jié)腸炎；

6、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，所述非感染性腸炎包括放射性腸炎和過(guò)敏性結(jié)腸炎；

7、和/或，所述結(jié)腸炎包括克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎。

8、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，所述放射性腸炎為x射線引起的放射性結(jié)腸炎；

9、和/或，所述過(guò)敏性結(jié)腸炎為飲食引起的突發(fā)性結(jié)腸炎。

10、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，滅活菌為形態(tài)完整的滅活菌和/或形態(tài)不完整的滅活菌。

11、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，滅活菌是通過(guò)干熱、濕熱、過(guò)濾、有機(jī)溶劑、化學(xué)試劑、紫外或紅外射線、發(fā)酵、凍干、基因重組、基因修飾或改造中的任意一種或多種方法滅活的。

12、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，滅活菌為脆弱擬桿菌滅活菌粉。

13、優(yōu)選地，所述脆弱擬桿菌滅活菌粉的制備方法如下：脆弱擬桿菌發(fā)酵培養(yǎng)并離心得菌體、氯化鈉水溶液洗滌菌體并離心得洗滌后的菌體、加入賦形劑重懸、滅活并離心得滅活菌泥、干燥。

14、進(jìn)一步優(yōu)選地，所述脆弱擬桿菌滅活菌粉的制備方法如下：

15、(1)取脆弱擬桿菌發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后，對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行離心，收集菌體；

16、(2)按菌體與氯化鈉水溶液的重量體積比為1g:(10～30)ml加入氯化鈉水溶液洗滌、離心，得到洗滌后的菌體；

17、(3)向洗滌后的菌體中加入第一賦形劑溶液混合重懸得到菌體溶液，再進(jìn)行滅活處理，離心，收集滅活菌泥；

18、(4)向步驟(3)獲得的滅活菌泥中加入第二賦形劑溶液，得滅活菌原液；

19、(5)將步驟(4)獲得的滅活菌原液干燥至殘留水分低于5wt％，即得脆弱擬桿菌滅活菌粉。

20、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，滅活菌為滅活菌粉混懸液；

21、優(yōu)選地，所述滅活菌粉混懸液的制備方法如下：脆弱擬桿菌發(fā)酵培養(yǎng)并離心得菌體、氯化鈉水溶液洗滌菌體并離心得洗滌后的菌體、加入賦形劑重懸、滅活并離心得滅活菌泥、干燥得滅活菌粉、滅活菌粉與水?dāng)嚢枧渲茰缁罹刍鞈乙海?/p>

22、進(jìn)一步優(yōu)選地，所述滅活菌粉混懸液的制備方法如下：

23、(1)取脆弱擬桿菌發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后，對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行離心，收集菌體；

24、(2)按菌體與氯化鈉水溶液的重量體積比為1g:(10～30)ml加入氯化鈉水溶液洗滌、離心，得到洗滌后的菌體；

25、(3)向洗滌后的菌體中加入第一賦形劑溶液混合重懸得到菌體溶液，再進(jìn)行滅活處理，離心，收集滅活菌泥；

26、(4)向步驟(3)獲得的滅活菌泥中加入第二賦形劑溶液，得滅活菌原液；

27、(5)將步驟(4)獲得的滅活菌原液干燥至殘留水分低于5wt％，即得脆弱擬桿菌滅活菌粉；

28、(6)將步驟(5)所得的滅活菌粉加入水，按菌粉：水＝1：(2～5)的質(zhì)量比例進(jìn)行投料，攪拌器攪拌，配制滅活菌粉混懸液。

29、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，步驟(1)中，發(fā)酵液的菌數(shù)達(dá)到108cfu/ml以上。

30、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，步驟(2)中，所述氯化鈉水溶液的質(zhì)量濃度為0.6-1.5wt％，優(yōu)選為0.65-1.2wt％，更優(yōu)選為0.8-1.0wt％，最優(yōu)選0.85-0.95wt％，例如為0.9wt％的氯化鈉水溶液。

31、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，步驟(3)的第一賦形劑與步驟(4)中的第二賦形劑相同或不同，彼此獨(dú)立地選自甘露醇、山梨醇、麥芽糊精、乳糖、氯化鈉、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、右旋糖酐、脯氨酸、賴氨酸、丙氨酸、酪蛋白、脫脂乳中的至少一種。

32、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，步驟(3)中，菌體與第一賦形劑溶液的重量體積比為1g:(5～40)ml。

33、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，步驟(3)和/或步驟(4)中，賦形劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4～30wt％。

34、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，步驟(3)和/或步驟(4)中，賦形劑溶液選自氯化鈉水溶液；優(yōu)選地，賦形劑溶液選自生理鹽水，例如0.9wt％氯化鈉水溶液。

35、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，步驟(3)中，所述滅活處理的方法選自熱滅活、冷凍滅活或者化學(xué)滅活中的至少一種，優(yōu)選為熱滅活。

36、示例性地，所述熱滅活的溫度為60～100℃，熱滅活的時(shí)間為10～60min。

37、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，步驟(4)中，加入第二賦形劑溶液使滅活菌原液的總重量與步驟(3)滅活前的菌體溶液重量一致。

38、示例性地，所述第二賦形劑溶液與所述第一賦形劑溶液相同。

39、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，步驟(5)中，所述干燥的方式選自真空冷凍干燥、噴霧干燥，優(yōu)選為真空冷凍干燥。

40、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，所述真空冷凍干燥的條件包括：冷凍溫度為-20～-40℃，冷凍時(shí)間為1～3小時(shí)，真空度為0.20～0.25mbar；示例性地，所述真空冷凍干燥的工藝包括：-40±2℃預(yù)凍1～3小時(shí)后，-20±2℃預(yù)凍0.5～1h，最后-40±2℃再冷凍0.5～2h，0.25mbar真空度下經(jīng)一次干燥、解析干燥制備成滅活菌粉。

41、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，所述制備方法中，對(duì)所述離心的條件不做具體限定，只要能實(shí)現(xiàn)所需的離心效果即可，例如所述離心的轉(zhuǎn)速為10000～20000rpm。

42、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，步驟(6)中，攪拌器500～1000rpm攪拌10～30min至混懸液中無(wú)肉眼可見顆粒物；

43、和/或，配制成菌體濃度為2×1010cells/g以上的滅活菌粉混懸液。

44、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，產(chǎn)品可以是藥物組合物、食品、保健品或食品添加劑中的任意一種。

45、優(yōu)選地，所述的藥物組合物含有藥學(xué)有效劑量的保藏編號(hào)為cgmcc?no.10685的滅活的脆弱擬桿菌zy-312菌粉。

46、上述的藥物組合物中，所述藥學(xué)有效劑量為107-109cells/ml。

47、上述的藥物組合物中，藥物組合物的劑型為丸劑、片劑、顆粒劑、膠囊、散劑、混懸劑、口服液或灌腸劑；優(yōu)選地，所述藥物組合物通過(guò)口服或灌腸的形式給藥。

48、上述的藥物組合物，所述藥物組合物的給藥周期為間歇給藥、周期性給藥、持續(xù)給藥或長(zhǎng)期給藥。

49、第二方面，本發(fā)明提供了脆弱擬桿菌在制備改善和/或治療非感染性腸炎的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述脆弱擬桿菌為活菌；所述脆弱擬桿菌為保藏編號(hào)為cgmcc?no.10685的脆弱擬桿菌zy-312。

50、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，所述非感染性腸炎包括放射性腸炎和過(guò)敏性結(jié)腸炎。

51、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，所述放射性腸炎為x射線引起的放射性結(jié)腸炎；

52、和/或，所述過(guò)敏性結(jié)腸炎為飲食引起的突發(fā)性結(jié)腸炎。

53、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，產(chǎn)品可以是藥物組合物、食品、保健品或食品添加劑中的任意一種。

54、上述的藥物組合物中，藥物組合物的劑型為丸劑、片劑、顆粒劑、膠囊、散劑、混懸劑、口服液或灌腸劑；優(yōu)選地，所述藥物組合物通過(guò)口服或灌腸的形式給藥。

55、上述的藥物組合物，所述藥物組合物的給藥周期為間歇給藥、周期性給藥、持續(xù)給藥或長(zhǎng)期給藥。

56、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

57、本發(fā)明通過(guò)不同的動(dòng)物結(jié)腸炎模型試驗(yàn)證明，脆弱擬桿菌，特別是保藏編號(hào)為cgmccno.10685的脆弱擬桿菌zy-312滅活菌液、滅活菌粉，具有改善和治療感染性腸炎和非感染性腸炎的作用。本發(fā)明提供的形態(tài)完整的脆弱擬桿菌滅活菌粉在不同濃度配方下，對(duì)改善非感染性腸炎和結(jié)腸炎效果好且對(duì)機(jī)體沒(méi)有副作用，具有很好的食用和應(yīng)用前景。