本發(fā)明屬于藥物制劑，具體涉及到一種用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致惡性腫瘤致死率高的根本原因，傳統(tǒng)治療腫瘤的手段包括手術(shù)、放療和化療，這些方法雖然可以清除局部腫瘤，但對(duì)轉(zhuǎn)移的抑制效果差。因此，開發(fā)有效的手段預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移對(duì)于惡性腫瘤的治療至關(guān)重要。研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤轉(zhuǎn)移前，其預(yù)轉(zhuǎn)移靶器官的微環(huán)境已發(fā)生改變，靶器官組織內(nèi)部出現(xiàn)髓源細(xì)胞聚集、持續(xù)炎癥反應(yīng)、氧自由基增多和基質(zhì)重塑等現(xiàn)象。這種支持腫瘤轉(zhuǎn)移的微環(huán)境被定義為預(yù)轉(zhuǎn)移生態(tài)(premetastatic?niche，pmn)，是腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的必要條件。由此可見，阻斷pmn的形成是有效抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。

2、pmn依賴原發(fā)腫瘤分泌的因子、髓源細(xì)胞和局部間質(zhì)成分之間的復(fù)雜相互作用而啟動(dòng)和建立，這種組成上的復(fù)雜性決定了抑制一個(gè)或幾個(gè)組件的活性不足以阻斷pmn形成。一方面，若能同時(shí)消耗腫瘤來源的多種因子，將有效抑制髓源細(xì)胞向pmn的募集；另一方面，重塑pmn中已募集的關(guān)鍵性髓源細(xì)胞，將pmn轉(zhuǎn)為免疫激活狀態(tài)，才能實(shí)現(xiàn)對(duì)pmn構(gòu)建的成功阻斷。研究證實(shí)，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tam)能被招募到遠(yuǎn)端靶器官，觸發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)的序列重構(gòu)、分泌促pmn形成因子和抑制腫瘤抗原提呈，協(xié)助pmn構(gòu)建。但tam具有很強(qiáng)的可塑性，能夠響應(yīng)局部微環(huán)境變化迅速向m1型tam轉(zhuǎn)化，進(jìn)而執(zhí)行相應(yīng)的免疫功能，這為將pmn轉(zhuǎn)為免疫激活狀態(tài)提供了靶點(diǎn)。

3、中性粒細(xì)胞能夠響應(yīng)病變部位炎癥因子的招募，穿透血管進(jìn)入組織，在炎癥因子刺激下形成胞外誘捕網(wǎng)(neutrophil?extracellular?traps，nets)釋放所運(yùn)載的藥物，實(shí)現(xiàn)抗腫瘤治療。然而，研究證實(shí)，nets中的中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶和基質(zhì)金屬蛋白酶會(huì)切割組織中的層粘連蛋白，喚醒休眠的腫瘤細(xì)胞。并且癌細(xì)胞表達(dá)的ccdc25能夠識(shí)別net釋放的dna，激活ilk-β-parvin通路，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。所以，直接利用中性粒細(xì)胞運(yùn)載納米藥物會(huì)產(chǎn)生促腫瘤轉(zhuǎn)移的副作用。目前相關(guān)研究人員主要通過在中性粒細(xì)胞上負(fù)載dna酶來降解炎癥位點(diǎn)處中性粒細(xì)胞釋放的nets，從而減少中性粒細(xì)胞釋放nets產(chǎn)生的副作用，但是dna酶在體內(nèi)運(yùn)載過程中會(huì)發(fā)生脫落、降解等，dna酶活力顯著降低，導(dǎo)致炎癥位點(diǎn)處nets只能少量降解，無法徹底清除炎癥位點(diǎn)處的nets。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本部分的目的在于概述本發(fā)明的實(shí)施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實(shí)施例。在本部分以及本技術(shù)的說明書摘要和發(fā)明名稱中可能會(huì)做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發(fā)明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發(fā)明的范圍。

2、鑒于上述和/或現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，提出了本發(fā)明。

3、本發(fā)明的其中一個(gè)目的是提供一種用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑，規(guī)避了傳統(tǒng)的活的中性粒細(xì)胞作為體內(nèi)藥物遞送載體時(shí)響應(yīng)炎癥信號(hào)釋放胞外誘捕網(wǎng)促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的弊端，但保持了中性粒細(xì)胞靶向炎癥位點(diǎn)和清除炎癥因子的性能。

4、為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：一種用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑，包括，

5、速凍中性粒細(xì)胞；以及，

6、納米制劑，所述納米制劑搭載在所述速凍中性粒細(xì)胞表面；

7、其中，所述速凍中性粒細(xì)胞表達(dá)多種細(xì)胞因子受體并且具有炎癥趨向性，可靶向腫瘤預(yù)轉(zhuǎn)移生態(tài)位并消耗腫瘤預(yù)轉(zhuǎn)移生態(tài)位中的腫瘤細(xì)胞衍生的細(xì)胞因子；

8、所述納米制劑為包裹生物膜的氧化鐵納米制劑，所述納米制劑能夠?qū)⒛[瘤預(yù)轉(zhuǎn)移生態(tài)位中的m2型巨噬細(xì)胞極化為m1型。

9、作為本發(fā)明用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑的一種優(yōu)選方案，其中：所述速凍中性粒細(xì)胞選自骨髓或外周血。

10、作為本發(fā)明用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑的一種優(yōu)選方案，其中：所述速凍中性粒細(xì)胞表達(dá)的細(xì)胞因子受體包括細(xì)胞因子il-1β、g-csf、gm-csf和il-10的受體。

11、作為本發(fā)明用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑的一種優(yōu)選方案，其中：所述速凍中性粒細(xì)胞與所述納米制劑的連接方式包括受體-配體作用、靜電吸附作用、物理穿插作用和共價(jià)結(jié)合作用中的一種。

12、作為本發(fā)明用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑的一種優(yōu)選方案，其中：采用四價(jià)鋯離子與磷酸基團(tuán)之間的共價(jià)結(jié)合作用將所述速凍中性粒細(xì)胞與所述納米制劑連接。

13、作為本發(fā)明用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑的一種優(yōu)選方案，其中：所述細(xì)菌內(nèi)源合成的包裹生物膜的氧化鐵納米制劑是由細(xì)菌攝取氧化鐵納米材料釋放的包裹生物膜的氧化鐵納米制劑形成；或，是由細(xì)菌攝取鐵相關(guān)物質(zhì)并在體內(nèi)通過氧化還原反應(yīng)生成的包裹生物膜的氧化鐵納米制劑形成中的一種或多種。

14、作為本發(fā)明用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑的一種優(yōu)選方案，其中：所述速凍中性粒細(xì)胞和所述納米制劑的質(zhì)量比為10：1～20：1。

15、本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供如上述任一項(xiàng)所述的用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑的制備方法，包括，

16、制備速凍中性粒細(xì)胞；

17、制備包裹生物膜的氧化鐵納米制劑；

18、將納米制劑與速凍中性粒細(xì)胞搭載，得到速凍中性粒細(xì)胞制劑。

19、作為本發(fā)明用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑的制備方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述制備速凍中性粒細(xì)胞，將中性粒細(xì)胞提取后立即用冷凍培養(yǎng)基重懸，并迅速浸泡于液氮中12h以上。

20、作為本發(fā)明用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑的制備方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述制備包裹生物膜的氧化鐵納米制劑，通過細(xì)菌攝取氧化鐵納米材料釋放的包裹生物膜的氧化鐵納米制劑形成；或，通過細(xì)菌攝取鐵相關(guān)物質(zhì)并在體內(nèi)通過氧化還原反應(yīng)生成的包裹生物膜的氧化鐵納米制劑形成。

21、作為本發(fā)明用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑的制備方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述將納米制劑與速凍中性粒細(xì)胞搭載，采用四價(jià)鋯離子與磷酸基團(tuán)之間的共價(jià)結(jié)合作用將所述速凍中性粒細(xì)胞與所述納米制劑連接。

22、作為本發(fā)明用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑的制備方法的一種優(yōu)選方案，其中：包括，

23、將包裹生物膜的氧化鐵納米制劑用含zr4+的緩沖液重懸，形成復(fù)合物；

24、將復(fù)合物與速凍中性粒細(xì)胞的pbs溶液孵育，得到速凍中性粒細(xì)胞納米制劑。

25、作為本發(fā)明用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑的制備方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述zr4+的濃度為1～10mm；

26、所述包裹生物膜的氧化鐵納米制劑與zr4+的質(zhì)量比為200:9～20:9。

27、本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供如上述任一項(xiàng)所述的用于抵抗腫瘤轉(zhuǎn)移的速凍中性粒細(xì)胞制劑在制備抗腫瘤轉(zhuǎn)移治療藥物中的應(yīng)用，所述抗腫瘤轉(zhuǎn)移治療藥物同時(shí)適用于腫瘤術(shù)前和術(shù)后患者。

28、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

29、本發(fā)明創(chuàng)新利用速凍中性粒細(xì)胞作為遞送載體，避了傳統(tǒng)的活的中性粒細(xì)胞作為體內(nèi)藥物遞送載體時(shí)響應(yīng)炎癥信號(hào)釋放胞外誘捕網(wǎng)促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的弊端，但保持了中性粒細(xì)胞靶向炎癥位點(diǎn)和清除炎癥因子的性能，該細(xì)胞制劑能夠靶向遠(yuǎn)端腫瘤預(yù)轉(zhuǎn)移生態(tài)位，清除腫瘤預(yù)轉(zhuǎn)移生態(tài)位中的腫瘤衍生的細(xì)胞因子，將m2型巨噬細(xì)胞極化為m1型，從多層面阻斷腫瘤預(yù)轉(zhuǎn)移生態(tài)位的形成，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。