本發(fā)明涉及心臟疾病(例如心肌病)的治療，并且更具體而言，涉及用于治療與肌營養(yǎng)不良蛋白有關(guān)的心肌病的基因療法方法和藥物組合物。

背景技術(shù)：

0、發(fā)明背景

1、盡管藥理學(xué)在治療例如心臟衰竭的各種心臟疾患中取得進(jìn)展，但死亡率和發(fā)病率仍然高得令人無法接受。此外，某些治療方法不適合許多患者(例如患有晚期心臟衰竭疾患并且伴有其他共病癥的患者)。替代方法，例如基因療法和細(xì)胞療法已引起較大關(guān)注，因?yàn)槠溆锌赡茉诮鉀Q許多心臟病的根本致病機(jī)制方面具有獨(dú)特的針對(duì)性和有效性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的某些實(shí)施方案的目標(biāo)是提供將治療性多核苷酸序列遞送至人類受試者的心肌細(xì)胞的方法。

2、本發(fā)明的某些實(shí)施方案的另一個(gè)目標(biāo)是利用用于治療與肌營養(yǎng)不良蛋白有關(guān)的心肌病的基因療法方法。

3、本發(fā)明的某些實(shí)施方案的另一個(gè)目標(biāo)是將編碼微肌營養(yǎng)不良蛋白構(gòu)建體的多核苷酸序列向量化。

4、本發(fā)明的某些實(shí)施方案的另一個(gè)目標(biāo)是向人類患者的心臟組織遞送向量化的微肌營養(yǎng)不良蛋白構(gòu)建體。

5、本發(fā)明滿足以上目標(biāo)和其他目標(biāo)，其中某些實(shí)施方案涉及用于治療或預(yù)防人類受試者的心肌病的基因療法藥物，所述基因療法藥物包含：載體，其包含編碼微肌營養(yǎng)不良蛋白的多核苷酸序列，其中所述多核苷酸編碼序列編碼肌營養(yǎng)不良蛋白的重復(fù)單元r1-r24的子集，并且其中所述子集的重復(fù)單元選自由以下組成的組：r1、r2、r24、其部分和其組合，條件是r1和r24或其部分存在于所述子集中。

6、在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸編碼序列僅編碼所述肌營養(yǎng)不良蛋白的鉸鏈域的鉸鏈1、鉸鏈3和鉸鏈4。

7、在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸編碼序列僅編碼所述肌營養(yǎng)不良蛋白的鉸鏈域的鉸鏈1和鉸鏈4。

8、在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述子集的重復(fù)單元由r1和r24或其部分組成。在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸編碼序列編碼肌營養(yǎng)不良蛋白的整個(gè)ct域。在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸編碼序列編碼約65％至約85％的r1和約20％至約40％的r24。在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸編碼序列編碼約65％至約85％的r1和約50％至約70％的r24，條件是所述多核苷酸序列完全編碼所述肌營養(yǎng)不良蛋白基因的外顯子60。在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸編碼序列編碼約95％或更高的r1和約60％或更低的r24，條件是所述多核苷酸序列完全編碼所述肌營養(yǎng)不良蛋白基因的外顯子60。

9、在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸序列僅編碼所述肌營養(yǎng)不良蛋白的富含半胱氨酸的域的外顯子70-75或其部分。在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸序列進(jìn)一步編碼重復(fù)單元r2的至少一部分。在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸序列僅編碼所述肌營養(yǎng)不良蛋白的鉸鏈域的鉸鏈1、鉸鏈3和鉸鏈4，并且其中所述子集的重復(fù)單元由r1、r2和r24或其部分組成。

10、在至少一個(gè)實(shí)施方案中，基因療法藥物包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列包含與seq?id?no:2、seq?id?no:3、seq?id?no:4或seq?id?no:5至少90％同一的微肌營養(yǎng)不良蛋白編碼序列。

11、在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸序列進(jìn)一步編碼心肌特異性啟動(dòng)子。在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述心肌特異性啟動(dòng)子為tnnt2啟動(dòng)子。

12、在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述載體包含病毒載體。在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述病毒載體為aav載體。在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述aav載體包含aav9。

13、在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸編碼序列在人類受試者中的表達(dá)產(chǎn)物能夠恢復(fù)肌營養(yǎng)不良蛋白缺陷型心肌中的互養(yǎng)蛋白結(jié)合和定位。

14、在至少一個(gè)實(shí)施方案中，治療或預(yù)防人類受試者的與肌營養(yǎng)不良蛋白有關(guān)的心肌病的方法包括：將前述基因療法藥物中的任一者遞送至人類受試者的心臟組織。在至少一個(gè)實(shí)施方案中，所述與肌營養(yǎng)不良蛋白有關(guān)的心肌病與杜氏肌營養(yǎng)不良(duchennemuscular?dystrophy)或貝克肌營養(yǎng)不良(becker?muscular?dystrophy)相關(guān)。

15、至少一個(gè)實(shí)施方案涉及由seq?id?no:2編碼的功能性微肌營養(yǎng)不良蛋白。

16、至少一個(gè)實(shí)施方案涉及由seq?id?no:3編碼的功能性微肌營養(yǎng)不良蛋白。

17、至少一個(gè)實(shí)施方案涉及由seq?id?no:4編碼的功能性微肌營養(yǎng)不良蛋白。

18、至少一個(gè)實(shí)施方案涉及由seq?id?no:5編碼的功能性微肌營養(yǎng)不良蛋白。

技術(shù)特征：

1.一種用于治療或預(yù)防人類受試者的心肌病的基因療法藥物，所述基因療法藥物包含：

2.如權(quán)利要求1所述的基因療法藥物，其中所述多核苷酸編碼序列僅編碼所述肌營養(yǎng)不良蛋白的鉸鏈域的鉸鏈1、鉸鏈3和鉸鏈4。

3.如權(quán)利要求1所述的基因療法藥物，其中所述多核苷酸編碼序列僅編碼所述肌營養(yǎng)不良蛋白的鉸鏈域的鉸鏈1和鉸鏈4。

4.如權(quán)利要求1所述的基因療法藥物，其中所述子集的重復(fù)單元由r1和r24或其部分組成。

5.如權(quán)利要求4所述的基因療法藥物，其中所述多核苷酸編碼序列編碼所述肌營養(yǎng)不良蛋白的整個(gè)ct域。

6.如權(quán)利要求4所述的基因療法藥物，其中所述多核苷酸編碼序列編碼約65％至約85％的r1和約20％至約40％的r24。

7.如權(quán)利要求4所述的基因療法藥物，其中所述多核苷酸編碼序列編碼約65％至約85％的r1和約50％至約70％的r24，條件是所述多核苷酸序列完全編碼所述肌營養(yǎng)不良蛋白基因的外顯子60。

8.如權(quán)利要求4所述的基因療法藥物，其中所述多核苷酸編碼序列編碼約95％或更高的r1和約60％或更低的r24，條件是所述多核苷酸序列完全編碼所述肌營養(yǎng)不良蛋白基因的外顯子60。

9.如權(quán)利要求1所述的基因療法藥物，其中所述多核苷酸序列僅編碼所述肌營養(yǎng)不良蛋白的富含半胱氨酸的域的外顯子70-75或其部分。

10.如權(quán)利要求9所述的基因療法藥物，其中所述多核苷酸序列進(jìn)一步編碼重復(fù)單元r2的至少一部分。

11.如權(quán)利要求9所述的基因療法藥物，其中所述多核苷酸序列僅編碼所述肌營養(yǎng)不良蛋白的鉸鏈域的鉸鏈1、鉸鏈3和鉸鏈4，并且其中所述子集的重復(fù)單元由r1、r2和r24或其部分組成。

12.一種基因療法藥物，所述基因療法藥物包含含有與seq?id?no:2、seq?id?no:3、seqid?no:4或seq?id?no:5至少90％同一的微肌營養(yǎng)不良蛋白編碼序列的多核苷酸序列。

13.如權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的基因療法藥物，其中所述多核苷酸序列進(jìn)一步編碼心肌特異性啟動(dòng)子。

14.如權(quán)利要求13所述的基因療法藥物，其中所述心肌特異性啟動(dòng)子為tnnt2啟動(dòng)子。

15.如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的基因療法藥物，其中所述載體包含病毒載體。

16.如權(quán)利要求15所述的基因療法藥物，其中所述病毒載體為aav載體。

17.如權(quán)利要求16所述的基因療法藥物，其中所述aav載體包含aav9。

18.如權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的基因療法藥物，其中所述多核苷酸編碼序列在所述人類受試者中的表達(dá)產(chǎn)物能夠恢復(fù)肌營養(yǎng)不良蛋白缺陷型心肌中的互養(yǎng)蛋白結(jié)合和定位。

19.一種功能性微肌營養(yǎng)不良蛋白，所述功能性微肌營養(yǎng)不良蛋白由seq?id?no:2或與其具有至少約85％同一性的其變體編碼，或具有seq?id?no:25的氨基酸序列或與其具有至少約85％同一性的變體。

20.一種功能性微肌營養(yǎng)不良蛋白，所述功能性微肌營養(yǎng)不良蛋白由seq?id?no:3或與其具有至少約85％同一性的其變體編碼，或具有seq?id?no:26的氨基酸序列或與其具有至少約85％同一性的變體。

21.一種功能性微肌營養(yǎng)不良蛋白，所述功能性微肌營養(yǎng)不良蛋白由seq?id?no:4或與其具有至少約85％同一性的其變體編碼，或具有seq?id?no:27的氨基酸序列或與其具有至少約85％同一性的變體。

22.一種功能性微肌營養(yǎng)不良蛋白，所述功能性微肌營養(yǎng)不良蛋白由seq?id?no:5或與其具有至少約85％同一性的其變體編碼，或具有seq?id?no:28的氨基酸序列或與其具有至少約85％同一性的變體。

23.一種基因療法藥物，所述基因療法藥物用于在人類受試者的心臟組織中表達(dá)權(quán)利要求19-22中任一項(xiàng)所述的功能性微肌營養(yǎng)不良蛋白。

24.一種治療或預(yù)防人類受試者的與肌營養(yǎng)不良蛋白有關(guān)的心肌病的方法，所述方法包括：

25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述與肌營養(yǎng)不良蛋白有關(guān)的心肌病與杜氏肌營養(yǎng)不良或貝克肌營養(yǎng)不良相關(guān)。

技術(shù)總結(jié)
公開了一種治療或預(yù)防人類受試者的心肌病的組合物和方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，方法包括將基因療法藥物遞送至所述人類受試者的心肌組織。所述基因療法藥物包含含有微肌營養(yǎng)不良蛋白的多核苷酸編碼序列的載體。

技術(shù)研發(fā)人員：瓦萊利亞·里科蒂
受保護(hù)的技術(shù)使用者：迪納柯公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2