本技術(shù)涉及生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，更具體地說，它涉及一種脫細(xì)胞基質(zhì)材料及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、傳統(tǒng)的美容醫(yī)療領(lǐng)域中，常用的填充材料和修復(fù)材料往往存在一定的局限性，例如合成材料可能引起免疫反應(yīng)或不良反應(yīng)，且有時(shí)難以實(shí)現(xiàn)與宿主組織的良好結(jié)合。為了解決這些問題，近年來，脫細(xì)胞基質(zhì)（decellularized?extracellular?matrix，簡稱decm）作為一種新型的生物材料引起了廣泛關(guān)注。

2、decm是從動物組織中提取的一種生物材料，經(jīng)過特殊處理去除了細(xì)胞成分，但保留了天然的細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)及其包含的生長因子、膠原蛋白和其他重要成分。這使得decm具有良好的生物相容性，能夠減少免疫反應(yīng)，同時(shí)提供支持細(xì)胞生長和修復(fù)所需的理想環(huán)境。與傳統(tǒng)的合成材料相比，decm在美容醫(yī)療領(lǐng)域中展示了顯著的優(yōu)勢和潛力。

3、然而，盡管decm在醫(yī)美應(yīng)用中顯示出諸多優(yōu)點(diǎn)，但其在醫(yī)美領(lǐng)域的應(yīng)用仍面臨許多挑戰(zhàn)。例如，由于其天然來源及制備過程，在某些應(yīng)用中的穩(wěn)定性和持久性不佳。此外，盡管經(jīng)過處理，但脫細(xì)胞的基質(zhì)仍可能存在潛在的生物相容性問題，需要進(jìn)一步的優(yōu)化和調(diào)整以提高與宿主組織的兼容性。如何改善decm的生物相容性，提高安全性，成為當(dāng)前研究和開發(fā)的重要課題。這些努力將有助于推動decm在美容醫(yī)療領(lǐng)域中的廣泛應(yīng)用，提升其治療效果和患者滿意度，從而滿足市場上日益增長的需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了改善脫細(xì)胞基質(zhì)的生物相容性，本技術(shù)提供一種脫細(xì)胞基質(zhì)材料及其制備方法。

2、本技術(shù)提供采用如下的技術(shù)方案：

3、一方面，本技術(shù)提供一種脫細(xì)胞基質(zhì)材料的制備方法，其包括：

4、提取哺乳動物的組織材料，對組織材料進(jìn)行脫細(xì)胞處理，得到脫細(xì)胞后的組織材料，將組織材料冷凍干燥后，粉碎得到動物源性脫細(xì)胞基質(zhì)；

5、將動物源性脫細(xì)胞基質(zhì)重懸于水中得到脫細(xì)胞粉混懸液，與改性環(huán)氧化殼聚糖溶液混合，調(diào)節(jié)混合體系的ph為7.5-8.0，并加入0.5-0.8%的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶，置于33-35℃下以200-400rmp的轉(zhuǎn)速攪拌18-24h，將所得產(chǎn)物冷凍干燥后得到脫細(xì)胞基質(zhì)材料。

6、上述技術(shù)方案，首先通過對哺乳動物的組織材料整體進(jìn)行脫細(xì)胞處理后再粉碎，一方面有利于完全去除組織材料中的細(xì)胞成分，尤其是細(xì)胞核和細(xì)胞膜碎片，進(jìn)而減少免疫原性物質(zhì)；另一方面，能夠避免細(xì)胞外基質(zhì)中含有的生物活性因子被破壞，從而影響脫細(xì)胞基質(zhì)的生物活性和誘導(dǎo)能力。

7、該方法通過將動物源性脫細(xì)胞基質(zhì)與改性環(huán)氧化殼聚糖進(jìn)行交聯(lián)，能夠提高脫細(xì)胞基質(zhì)的生物相容性，減少免疫排斥反應(yīng)；同時(shí)，由于該交聯(lián)反應(yīng)是在轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的作用下進(jìn)行的生物交聯(lián)，脫細(xì)胞基質(zhì)中含有的生物活性因子在交聯(lián)過程中不易被破壞，也不會有化學(xué)殘留，相比于化學(xué)交聯(lián)更加的安全。在交聯(lián)過程中，通過精確控制交聯(lián)的條件（如ph、溫度、時(shí)間），確保了交聯(lián)反應(yīng)的高效進(jìn)行，同時(shí)又有效避免了因過度交聯(lián)損壞脫細(xì)胞基質(zhì)的功能。

8、進(jìn)一步地，哺乳動物的組織材料包括豬皮、牛皮、豬心包、牛心包、豬覆膜和豬小腸粘膜下層中的任一種。

9、進(jìn)一步地，脫細(xì)胞粉混懸液中動物源性脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量濃度為3.5-4.5%，環(huán)氧化殼聚糖溶液中改性環(huán)氧化殼聚糖的質(zhì)量濃度為1.5-2%，混合體系中脫細(xì)胞粉混懸液與環(huán)氧化殼聚糖溶液的體積比為4-5:1。

10、上述技術(shù)方案，對動物源性脫細(xì)胞基質(zhì)與改性環(huán)氧化殼聚糖的含量進(jìn)行了限定。改性環(huán)氧化殼聚糖與脫細(xì)胞基質(zhì)的含量比例對材料的生物相容性和免疫原性有影響。適量的殼聚糖可以提高材料的生物相容性，但過量的殼聚糖可能會引起免疫反應(yīng)，影響材料在體內(nèi)的應(yīng)用。

11、相比于采用天然的殼聚糖直接進(jìn)行交聯(lián)，本技術(shù)采用改性后的環(huán)氧化殼聚糖與脫細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行交聯(lián)，由于環(huán)氧化殼聚糖中含有多個(gè)環(huán)氧基團(tuán)，可以與脫細(xì)胞基質(zhì)中的氨基形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵，從而提高交聯(lián)效率以及材料的穩(wěn)定性。為了進(jìn)一步的增強(qiáng)材料的生物相容性，提高使用的安全性，本技術(shù)優(yōu)化的方案中，將環(huán)氧化殼聚糖與白芨多糖進(jìn)行復(fù)合改性，在交聯(lián)劑的作用下二者發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的交聯(lián)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，其對細(xì)胞幾乎沒有毒性作用，且由于殼聚糖和白芨多糖均具有良好的生物相容性，在交聯(lián)改性后，材料的生物相容性進(jìn)一步增強(qiáng)，減少對生物體的免疫反應(yīng)，有利于細(xì)胞的粘附、增殖和分化。

12、?進(jìn)一步地，改性環(huán)氧化殼聚糖通過將環(huán)氧化殼聚糖與白芨多糖按照質(zhì)量比1-3:1進(jìn)行復(fù)合改性獲得。

13、優(yōu)選地，復(fù)合改性的方法包括：

14、將環(huán)氧化殼聚糖溶解在酸性溶液中，得到濃度為3-5wt%的殼聚糖溶液，將白芨多糖溶解在酸性溶液中，得到濃度為1-3wt%的白芨多糖溶液；

15、將殼聚糖溶液和白芨多糖溶液混合，調(diào)節(jié)混合溶液ph為4-6，在混合溶液中加入交聯(lián)劑后于60-70℃下交聯(lián)5-6h。

16、優(yōu)選地，交聯(lián)劑為0.1-1%的京尼平。京尼平是梔子苷經(jīng)β-葡萄糖苷酶水解后的產(chǎn)物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)中包含羥基、羧基以及一個(gè)特殊的烯碳原子（c-3位），在酸性條件下這些反應(yīng)基團(tuán)在交聯(lián)過程中能夠與殼聚糖和白芨多糖上的活性基團(tuán)發(fā)生親核反應(yīng)，京尼平作為交聯(lián)橋?qū)⒍嗵欠肿舆B接起來，形成穩(wěn)定的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。

17、進(jìn)一步地，對組織材料進(jìn)行脫細(xì)胞處理的方法包括：

18、對組織材料進(jìn)行預(yù)處理后，在胰酶溶液中進(jìn)行一次消化處理；

19、隨后將所得到的組織材料置于核酸酶溶液中進(jìn)行二次消化處理；

20、再將所得到的組織材料置于n-月桂?；?l-谷氨酸鈉溶液中進(jìn)行三次深層處理。

21、上述技術(shù)方案，通過對組織材料進(jìn)行預(yù)處理及后續(xù)的三次處理，有助于徹底脫細(xì)胞，清除細(xì)胞碎片殘留、dna殘留以及試劑殘留，減少免疫原性物質(zhì)，從而提升材料使用的安全性。尤其是采用n-月桂?；?l-谷氨酸鈉進(jìn)行三次深層處理，n-月桂酰基-l-谷氨酸鈉能夠插入到細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙層中，破壞脂質(zhì)結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞膜解離、溶解，有助于去除細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、細(xì)胞器等，進(jìn)一步確保細(xì)胞的完全去除，提高脫細(xì)胞基質(zhì)的純度。

22、優(yōu)選地，三次深層處理中，n-月桂?；?l-谷氨酸鈉溶液的濃度為5-6%，處理溫度為30-35℃，處理時(shí)間為8-10h。

23、優(yōu)選地，胰酶溶液的濃度為0.15-0.25%，處理時(shí)間為8-9h；核酸酶包括0.01-0.02%的核糖核酸酶和0.02-0.04%的脫氧核糖核酸酶，處理時(shí)間為4-5h。

24、優(yōu)選地，動物源性脫細(xì)胞基質(zhì)的粒徑為20-300μm。

25、第二方面，本技術(shù)提供一種由上述方法制得的脫細(xì)胞基質(zhì)材料。

26、綜上所述，本技術(shù)具有以下有益效果：

27、本技術(shù)通過將動物源性脫細(xì)胞基質(zhì)與改性環(huán)氧化殼聚糖進(jìn)行交聯(lián)，能夠提高脫細(xì)胞基質(zhì)的生物相容性，減少免疫排斥反應(yīng)；同時(shí)，由于該交聯(lián)反應(yīng)是在轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的作用下進(jìn)行的生物交聯(lián)，脫細(xì)胞基質(zhì)中含有的生物活性因子在交聯(lián)過程中不易被破壞，也不會有化學(xué)殘留，相比于化學(xué)交聯(lián)更加的安全。

28、相比于采用天然的殼聚糖直接進(jìn)行交聯(lián)，本技術(shù)采用改性后的環(huán)氧化殼聚糖與脫細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行交聯(lián)，由于環(huán)氧化殼聚糖中含有多個(gè)環(huán)氧基團(tuán)，可以與脫細(xì)胞基質(zhì)中的氨基形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵，從而提高交聯(lián)效率、材料穩(wěn)定性以及生物相容性。