本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體而言，涉及一種干預(yù)彈性蛋白酶為主的胞外基質(zhì)降解酶在預(yù)防和拮抗衰老中的作用機(jī)制及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、下列描述僅僅是方面閱讀者理解本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制。

2、衰老以及多種老年病會伴隨細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular?matrix，ecm)不正常重塑和過度降解，使血清、尿液、滑液等液體中游離態(tài)ecm片段增加，而近年的研究表明ecm降解產(chǎn)物并非惰性，會進(jìn)一步導(dǎo)致組織損傷和代謝紊亂。

3、胞外間質(zhì)片段在血液中的濃度升高被發(fā)現(xiàn)會導(dǎo)致炎癥，同時(shí)還會造成組織器官的損傷，比如含vgvapg基序的edp(elastin-derived?peptide)對單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等幾種免疫細(xì)胞具有趨化特性，還通過刺激mapk-ap-1-nf-kb通路使人血淋巴細(xì)胞向th1極化，誘導(dǎo)mmps表達(dá)并正反饋增強(qiáng)彈性蛋白水解。在誘導(dǎo)組織器官損傷方面，向小鼠體內(nèi)注射edp片段會加速粥樣動脈硬化進(jìn)程。

4、在衰老過程中，細(xì)胞和細(xì)胞外間質(zhì)發(fā)生退行性改變。當(dāng)前，抗衰老研究主要集中在細(xì)胞層面，對通過細(xì)胞外基質(zhì)減緩衰老的探索相對較少。衰老時(shí)，細(xì)胞外間質(zhì)會大量降解和異常重塑，致使血清、滑液等體液中游離態(tài)細(xì)胞外間質(zhì)成分增加。以彈性蛋白為例，其在衰老中受損，在多種蛋白酶作用下降解生成彈性蛋白片段，具有“gxxpg”等生物活性序列。彈性蛋白片段中的e-motif能與彈性蛋白受體復(fù)合物結(jié)合，61kda的膜蛋白neu1負(fù)責(zé)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，雖已知其介導(dǎo)部分疾病，但neu1與系統(tǒng)性衰老的關(guān)系尚不明晰。此外，對于衰老機(jī)制的探索多集中于某些特定基因或細(xì)胞信號通路，但對于胞外基質(zhì)降解酶，尤其是彈性蛋白酶在衰老中的作用認(rèn)識不足，且缺乏針對彈性蛋白酶的有效干預(yù)策略。

5、因此，急需找到干預(yù)彈性蛋白酶為主的胞外基質(zhì)降解酶在預(yù)防和拮抗衰老中的作用機(jī)制及其應(yīng)用，通過深入探究彈性蛋白酶對胞外基質(zhì)的降解作用路徑，以及其與機(jī)體衰老相關(guān)的生理生化過程之間的關(guān)聯(lián)，從而明確如何精準(zhǔn)有效地抑制彈性蛋白酶的過度活性，維持胞外基質(zhì)的穩(wěn)定與平衡，起到延緩甚至逆轉(zhuǎn)衰老進(jìn)程的作用，為抗衰老領(lǐng)域開辟新的方向和策略。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供一種干預(yù)彈性蛋白酶為主的胞外基質(zhì)降解酶在預(yù)防和拮抗衰老中的作用機(jī)制及其應(yīng)用，通過系統(tǒng)深入地研究彈性蛋白酶與胞外基質(zhì)降解的具體作用過程，解析其在衰老相關(guān)生理生化變化中的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)，從而精準(zhǔn)揭示該酶在衰老進(jìn)程中的調(diào)控機(jī)制，解決了以往無法有效針對彈性蛋白酶進(jìn)行干預(yù)以預(yù)防和拮抗機(jī)體衰老的技術(shù)難題，為抗衰老研究和應(yīng)用提供了全新的理論依據(jù)和實(shí)踐方法，具有良好的應(yīng)用前景。

2、為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下方案實(shí)現(xiàn)：

3、一方面，本發(fā)明提供一種標(biāo)志物用于制備預(yù)測個體是否處于衰老進(jìn)程的試劑的用途，所述標(biāo)志物包括選自如下的任意一種或多種：彈性蛋白片段、膠原蛋白片段、纖連蛋白片段和透明質(zhì)酸片段。

4、進(jìn)一步地，所述標(biāo)志物為彈性蛋白片段。

5、在抗衰老的研究領(lǐng)域中，由于衰老現(xiàn)象復(fù)雜且嚴(yán)重，急需找到準(zhǔn)確指示衰老進(jìn)程的生物標(biāo)志物，基于細(xì)胞外基質(zhì)在維持組織和器官功能方面的關(guān)鍵作用及與衰老的可能關(guān)聯(lián)，在一些實(shí)施方式中，對多種血清中游離態(tài)的細(xì)胞外基質(zhì)片段包括彈性蛋白片段(eln)、膠原蛋白片段(col)、纖連蛋白片段(fn)和透明質(zhì)酸片段(ha)展開研究。收集了不同年齡段人群和小鼠的血清樣本，對這些片段的含量進(jìn)行精確測定，結(jié)果表明多種ecm片段的血清含量和年齡呈正相關(guān)，其中彈性蛋白片段與年齡增長的正相關(guān)關(guān)系最為顯著且穩(wěn)定。

6、然而，需要注意的是，相關(guān)并不一定意味著就是標(biāo)志物，而是標(biāo)志物的一定是相關(guān)。雖然圖1中的細(xì)胞外基質(zhì)片段都與衰老相關(guān)，但并不是都能作為標(biāo)志物。只有相關(guān)并且會導(dǎo)致衰老，才等于真正意義上的衰老標(biāo)志物。隨著衰老，會有很多物質(zhì)出現(xiàn)，但是反過來，如果這些物質(zhì)出現(xiàn)，并不是一定意味著衰老。相反，如果某種物質(zhì)出現(xiàn)就會導(dǎo)致衰老，不出現(xiàn)就不衰老，這樣的物質(zhì)才有作為標(biāo)志物的重要意義。

7、并進(jìn)行相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，膠原蛋白片段、纖連蛋白片段和透明質(zhì)酸片段雖有一定影響，但并未顯著導(dǎo)致衰老。而彈性蛋白片段的作用則極為顯著，在小鼠年齡約90周時(shí)，有50％的老鼠死亡。對比之下，ha、fn以及col組即便出現(xiàn)某些表征，其導(dǎo)致死亡的情況在三者之間差異并不顯著。然而，eln組與其他三組及對照相比，均達(dá)到顯著水平。這充分證明，只有彈性蛋白片段才是本發(fā)明中指示衰老的重要標(biāo)志物。

8、因此在本發(fā)明中，膠原蛋白片段、纖連蛋白片段和透明質(zhì)酸片段，僅僅與衰老呈正相關(guān)，但并不是這些片段出現(xiàn)就必然會導(dǎo)致衰老，因此，它們都不能作為衰老的標(biāo)志物。而彈性蛋白片段不僅與衰老相關(guān)，其出現(xiàn)更確切地會導(dǎo)致衰老，效應(yīng)最為顯著，因此在本發(fā)明中，只有彈性蛋白片段才可作為衰老的重要標(biāo)志物。

9、進(jìn)一步地，所述彈性蛋白片段包括基序“(gxxpg)n”，其中“x”為除脯氨酸以外的任意氨基酸，n為≥1的整數(shù)。

10、進(jìn)一步地，所述彈性蛋白片段包括基序vgvapg、pgaipg、gavpg中的任意一種或多種。

11、進(jìn)一步地，所述彈性蛋白片段包括基序vgvapg。

12、在一些實(shí)施方式中，當(dāng)選擇彈性蛋白片段基序?yàn)関gvapg(即e-motif)時(shí)，對小鼠衰老具有最為顯著的影響，且彈性蛋白片段e-motif與彈性蛋白受體復(fù)合物結(jié)合后，激活下游通路導(dǎo)致衰老相關(guān)生理變化的具體作用機(jī)制為：彈性蛋白中的e-motif與彈性蛋白受體復(fù)合物結(jié)合后，61kda的膜蛋白neu1發(fā)揮關(guān)鍵的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，將激活信號傳遞至細(xì)胞內(nèi)，如激活erk?1/2通路以調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化和存活，同時(shí)上調(diào)mmp1表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)降解和重構(gòu)。此外，e-motif對單核細(xì)胞有趨化和促炎效應(yīng)，激活cd4+t細(xì)胞并誘導(dǎo)產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子，通過激活mapk-ap-1-nf-kb通路使th細(xì)胞極化，引發(fā)炎癥反應(yīng)和免疫異常，從而導(dǎo)致衰老相關(guān)的生理變化，如組織損傷和免疫功能失調(diào)等。

13、進(jìn)一步地，所述試劑用于檢測個體血清樣本中的彈性蛋白片段的有無或相對豐度或濃度。

14、進(jìn)一步地，所述衰老包括動物細(xì)胞、組織、器官或個體的衰老。

15、在一些實(shí)施方式中，衰老個體為小鼠；組織層面的衰老為脂肪組織、肌肉組織、結(jié)締組織；器官層面的衰老為心、肝臟、脾臟、肺、腦、肌肉、骨、腎臟。

16、具體地，所述機(jī)體的慢性炎癥狀態(tài)包括衰老、肥胖、細(xì)胞衰老及其衰老相關(guān)的分泌表型、降解細(xì)胞組分的再循環(huán)和消除受損、慢性感染以及有缺陷的免疫細(xì)胞、小腸屏障通透性的改變等造成的慢性炎癥狀態(tài)。

17、另一方面，本發(fā)明提供一種預(yù)測個體是否處于衰老進(jìn)程的試劑盒，所述試劑盒包括如上技術(shù)方案中任一項(xiàng)所述用途的標(biāo)志物的檢測試劑。

18、再一方面，本發(fā)明提供一種預(yù)測個體是否處于衰老進(jìn)程的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括數(shù)據(jù)分析模塊；所述數(shù)據(jù)分析模塊用于分析生物標(biāo)志物的檢測值，所述生物標(biāo)志物包括彈性蛋白片段。

19、進(jìn)一步地，所述系統(tǒng)還包括數(shù)據(jù)存儲模塊、數(shù)據(jù)輸入界面和數(shù)據(jù)輸出界面；所述數(shù)據(jù)存儲模塊用于存儲生物標(biāo)志物的檢測值；數(shù)據(jù)輸入界面用于輸入生物標(biāo)志物的檢測值，數(shù)據(jù)輸出界面用于輸出預(yù)測結(jié)果。

20、在一些實(shí)施方式中，為了進(jìn)一步驗(yàn)證彈性蛋白片段作為系統(tǒng)性衰老標(biāo)志物的準(zhǔn)確性和可靠性，進(jìn)行了血清樣本檢測及多項(xiàng)衰老相關(guān)指標(biāo)的測定實(shí)驗(yàn)。采用uplc-ms/ms檢測方法，對不同年齡段小鼠血清中的彈性蛋白片段、膠原蛋白片段、纖連蛋白片段和透明質(zhì)酸片段含量進(jìn)行測定，并對不同組別小鼠的運(yùn)動性能、生存時(shí)間、衰老相關(guān)血清指標(biāo)等進(jìn)行綜合評估。最終結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)血清中彈性蛋白片段的含量超過正常范圍(低于300ng/ml)時(shí)，小鼠處于加速衰老階段。本發(fā)明中，彈性蛋白片段的auc值、準(zhǔn)確率、靈敏度和特異性方面均達(dá)到最高，其診斷效能在多批不同的驗(yàn)證集測試中也表現(xiàn)出色，顯著高于膠原蛋白片段、纖連蛋白片段和透明質(zhì)酸片段。而其他幾種細(xì)胞外基質(zhì)片段的診斷效能均較低，無法準(zhǔn)確預(yù)測小鼠的衰老進(jìn)程。因此，只有彈性蛋白片段才是能夠精準(zhǔn)、可靠地預(yù)測衰老的有效標(biāo)志物，為衰老相關(guān)的研究和臨床應(yīng)用提供了極具價(jià)值的檢測指標(biāo)。

21、再一方面，本發(fā)明提供一種靶向彈性蛋白片段的試劑用于制備預(yù)防或拮抗衰老的試劑的用途，所述靶向彈性蛋白片段的試劑包括抑制彈性蛋白片段生成的試劑，和/或促進(jìn)彈性蛋白片段水解的試劑。

22、進(jìn)一步地，所述抑制彈性蛋白片段生成的試劑包括抑制彈性蛋白酶表達(dá)的試劑，抑制彈性蛋白酶活性或降低其含量的試劑，或抑制彈性蛋白酶基因表達(dá)的試劑中的一種或多種。

23、進(jìn)一步地，所述抑制彈性蛋白酶表達(dá)的試劑包括消除、敲除、敲減彈性蛋白酶基因表達(dá)的試劑；所述抑制彈性蛋白酶基因表達(dá)的試劑包括靶向彈性蛋白酶基因的sirna、shrna或dsrna中的任意一種或多種。

24、進(jìn)一步地，所述抑制彈性蛋白酶活性或降低其含量的試劑包括彈性蛋白酶抑制劑、彈性蛋白酶的抗體、靶向彈性蛋白酶的protac試劑中的一種或多種。

25、進(jìn)一步地，所述彈性蛋白酶抑制劑包括細(xì)胞外基質(zhì)酶抑制劑、中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶抑制劑、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、絲氨酸蛋白酶抑制劑、半胱氨酸蛋白酶抑制劑中的任意一種或多種。

26、進(jìn)一步地，所述彈性蛋白酶抑制劑包括中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶抑制劑ly。

27、在一些方式中，所述抑制彈性蛋白酶活性或降低其含量的試劑包括下述酶類的抑制劑，所述酶的種類具體包括：中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶(基質(zhì)金屬蛋白酶2，7，9，12，14)、絲氨酸蛋白酶(嗜中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、組織蛋白酶g和蛋白酶-3)、半胱氨酸蛋白酶(組織蛋白酶k，l，s和v)等所有可以水解包括彈性蛋白在內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)的酶類。

28、在一些方式中，所述抑制劑能夠通過抑制彈性蛋白酶的活性減少彈性蛋白的降解以及彈性蛋白片段的產(chǎn)生；或者，所述抑制劑能夠通過抑制彈性蛋白酶在內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)降解酶的活性以減少細(xì)胞外基質(zhì)片段的產(chǎn)生。

29、在一些方式中，所述試劑可以是藥品、保健品或研究用試劑等；所述試劑的應(yīng)用包括各種注射濃度、各種注射頻率、持續(xù)時(shí)間及各種注射方式。

30、再一方面，本發(fā)明提供一種彈性蛋白酶抑制劑用于制備預(yù)防和/或治療慢性炎癥的試劑的用途。

31、進(jìn)一步地，所述彈性蛋白酶抑制劑通過抑制炎癥因子il-1、mcp-1或tnf-α的表達(dá)，從而預(yù)防和/或治療慢性炎癥。

32、在一些實(shí)施方式中，采用彈性蛋白酶抑制劑ly，觀察其對小鼠血清炎癥因子的影響。結(jié)果表明：彈性蛋白酶抑制劑ly可顯著抑制小鼠的炎癥表型，與對照組相比，ly實(shí)驗(yàn)組mcp-1，il-1，tnf-α的蛋白質(zhì)表達(dá)水平均顯著下調(diào)，這說明彈性蛋白酶可以間接調(diào)控炎癥因子的分泌，可作為治療靶點(diǎn)。血清中23種炎癥因子檢測表明，與僅接受vehicle注射的對照組相比，ly組小鼠的炎癥因子表達(dá)普遍下調(diào)，表明彈性蛋白酶抑制劑ly至少部分抑制了衰老相關(guān)的慢性炎癥。

33、再一方面，本發(fā)明提供一種彈性蛋白酶抑制劑用于制備預(yù)防和/或治療骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松的試劑的用途。

34、在一些實(shí)施方式中，鑒于彈性蛋白片段在衰老過程中的關(guān)鍵作用，本發(fā)明在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)過程中，進(jìn)一步針對上述靶點(diǎn)，深入探索其在改善衰老相關(guān)疾病中的應(yīng)用。結(jié)果表明：彈性蛋白酶抑制劑ly可以顯著改善衰老進(jìn)程中骨關(guān)節(jié)炎的病情，緩解衰老相關(guān)關(guān)節(jié)軟骨的損傷磨損；同時(shí)ly組的軟骨組織oarsi評分顯著低于對照組小鼠，證明通過抑制彈性蛋白酶來控制彈性蛋白片段的產(chǎn)生，對于延緩和改善衰老相關(guān)的骨關(guān)節(jié)炎病癥具有確切且顯著的效果，為今后針對衰老相關(guān)骨關(guān)節(jié)炎的治療策略提供了有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和新的研究方向。

35、在一些實(shí)施方式中，采用“彈性蛋白酶抑制劑ly”拮抗彈性蛋白片段，改善衰老相關(guān)骨質(zhì)疏松病癥。結(jié)果表明：彈性蛋白酶抑制劑ly可以顯著改善衰老進(jìn)程中骨質(zhì)疏松相關(guān)癥狀，改善骨相關(guān)指標(biāo)情況，ly組的骨體積占組織體積比例(bv/tv)和骨小梁厚度(tb.th)等參數(shù)顯著高于對照組小鼠，證明抑制彈性蛋白酶控制彈性蛋白片段的產(chǎn)生可以改善骨密度等骨質(zhì)疏松相關(guān)指標(biāo)，干預(yù)彈性蛋白酶活性可以作為潛在治療靶標(biāo)。

36、進(jìn)一步地，所述彈性蛋白酶抑制劑通過抑制彈性蛋白片段的生成，從而預(yù)防和/或治療骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松。

37、在一些實(shí)施方式中，采用“彈性蛋白酶抑制劑ly”拮抗彈性蛋白片段，改善衰老相關(guān)骨關(guān)節(jié)炎模型病癥。結(jié)果表明：對于不同病理因素(關(guān)節(jié)腔注射碘乙酸鈉或膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)半月板失穩(wěn)術(shù))導(dǎo)致的骨關(guān)節(jié)炎，彈性蛋白酶抑制劑ly均顯著改善了小鼠的關(guān)節(jié)炎病理狀況，進(jìn)一步驗(yàn)證了彈性蛋白酶抑制劑在骨關(guān)節(jié)炎治療中的有效性和潛力，可作為治療骨關(guān)節(jié)炎的潛在有效藥物，為骨關(guān)節(jié)炎的治療提供了新的思路和方法。

38、再一方面，本發(fā)明提供一種抑制彈性蛋白片段與受體結(jié)合的試劑用于制備預(yù)防或拮抗衰老的試劑的用途。

39、進(jìn)一步地，所述彈性蛋白片段包括基序“(gxxpg)n”，其中“x”為除脯氨酸以外的任意氨基酸，n為≥1的整數(shù)。

40、進(jìn)一步地，所述受體包括膜蛋白neu1。

41、進(jìn)一步地，所述抑制彈性蛋白片段與受體結(jié)合的試劑包括能夠結(jié)合彈性蛋白片段的抗體或抗體片段，能夠結(jié)合neu1的抗體或抗體片段，消除、敲除、敲減neu1基因表達(dá)的試劑，或彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑中的一種或多種。

42、進(jìn)一步地，所述彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑包括組織蛋白酶a抑制劑、彈性蛋白結(jié)合蛋白ebp抑制劑、唾液酸酶neu1抑制劑。

43、再一方面，本發(fā)明提供一種敲除neu1基因表達(dá)的試劑用于制備降低血清炎癥因子含量的試劑的用途，所述炎癥因子包括il-1、mcp-1或tnf-α中的任意一種或多種。

44、在一些實(shí)施方式中，為了進(jìn)一步探究彈性蛋白片段e-motif導(dǎo)致衰老的內(nèi)在機(jī)制以及尋找潛在的干預(yù)靶點(diǎn)，因此探究敲除neu1基因?qū)ψ⑸鋏-motif后的小鼠體重的影響。結(jié)果表明：特異性敲除neu1基因阻斷e-motif的下游效應(yīng)。到28周齡收樣時(shí)，與neu1(f/f)小鼠相比，neu1(f/f)+e-motif組的體重已經(jīng)發(fā)生顯著升高，而neu1(-/-)+e-motif組小鼠體重與對照組保持同一水平，顯著低于neu1(f/f)+e-motif組。這一結(jié)果證實(shí)了neu1基因在影響e-motif下游體重的負(fù)面作用；因此可知，neu1基因是控制下游e-motif效應(yīng)的關(guān)鍵分子靶點(diǎn)，針對neu1基因進(jìn)行干預(yù)可拮抗衰老作用。

45、在一些實(shí)施方式中，為了更全面地了解彈性蛋白片段e-motif導(dǎo)致衰老的相關(guān)機(jī)制，因此進(jìn)一步探究敲除neu1基因?qū)ψ⑸鋏-motif后的小鼠血清炎癥因子il-1和mcp-1含量的影響。結(jié)果表明：特異性敲除neu1基因阻斷e-motif的下游效應(yīng)。到28周齡收樣時(shí)，neu1(f/f)+e-motif組的il-1和mcp-1含量已經(jīng)顯著高于neu1(f/f)組、neu1(-/-)+e-motif組。這一結(jié)果證實(shí)了neu1基因在影響e-motif下游炎癥水平升高的負(fù)面作用，因此可知neu1基因是控制下游e-motif效應(yīng)的關(guān)鍵分子靶點(diǎn)，針對neu1基因進(jìn)行干預(yù)可拮抗衰老作用。

46、再一方面，本發(fā)明提供一種敲除neu1基因表達(dá)的試劑用于制備預(yù)防和/或治療衰老相關(guān)肝臟疾病的試劑的用途。

47、在一些實(shí)施方式中，敲除彈性蛋白受體復(fù)合物中neu1基因后，拮抗彈性蛋白片段，改善衰老相關(guān)肝臟疾病。結(jié)果表明：敲除neu1基因顯著改善了肝臟功能，谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶水平恢復(fù)正常。肝臟組織病理學(xué)顯示，肝細(xì)胞形態(tài)趨于正常，炎癥細(xì)胞浸潤減少，肝臟纖維化程度明顯減輕。這充分證明敲除彈性蛋白受體復(fù)合物中neu1基因能夠有效拮抗彈性蛋白片段，顯著改善衰老相關(guān)肝臟疾病的病癥，為肝臟疾病的治療提供了新的思路和潛在靶點(diǎn)。

48、再一方面，本發(fā)明提供一種彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑用于制備預(yù)防或拮抗衰老的試劑的用途。

49、再一方面，本發(fā)明提供一種彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑用于制備預(yù)防和/或治療衰老相關(guān)心血管疾病的試劑的用途。

50、在一些實(shí)施方式中，采用“彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑dana”拮抗彈性蛋白片段，改善衰老相關(guān)心血管疾病。結(jié)果表明：彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑dana顯著改善了心血管功能，降低了心率和血壓，提高了心輸出量。同時(shí)，動脈血管壁厚度減小，粥樣硬化斑塊明顯縮小，血液中炎癥因子和氧化應(yīng)激標(biāo)志物水平顯著降低。

51、因此可知，“彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑dana”能夠有效拮抗彈性蛋白片段，對衰老相關(guān)心血管疾病具有顯著的改善作用，為衰老相關(guān)心血管疾病的治療提供了新的潛在方向和有效策略。

52、再一方面，本發(fā)明提供一種彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑用于制備提高運(yùn)動能力或減少脊柱側(cè)彎的試劑的用途。

53、在一些實(shí)施方式中，采用彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑dana，觀察其對小鼠運(yùn)動能力的影響，從而驗(yàn)證其具有延緩衰老表型的作用。結(jié)果表明：彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑dana可顯著延緩小鼠運(yùn)動能力的下降，與vehicle組相比，dana實(shí)驗(yàn)組小鼠的電擊次數(shù)顯著低，表明dana實(shí)驗(yàn)組小鼠的跑步耐力更強(qiáng)；曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示dana組小鼠運(yùn)動總距離和平均速度較vehicle組顯著提高，運(yùn)動范圍更廣；因此可知彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑dana可拮抗彈性蛋白片段，顯著延緩小鼠運(yùn)動能力的下降，彈性蛋白片段受體復(fù)合物及其下游通路可作為潛在治療靶點(diǎn)。

54、在一些實(shí)施方式中，采用彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑dana，觀察其對小鼠脊柱彎曲的影響，從而驗(yàn)證其具有延緩衰老表型的作用。結(jié)果表明：彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑dana可顯著緩解衰老相關(guān)的小鼠脊柱彎曲，與vehicle組相比，dana實(shí)驗(yàn)組小鼠的脊柱彎曲程度低，定量分析結(jié)果顯示dana實(shí)驗(yàn)組小鼠的ki值顯著升高。因此可知彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑dana可拮抗彈性蛋白片段，顯著緩解自然衰老小鼠出現(xiàn)的“駝背”表型，彈性蛋白片段受體復(fù)合物及其下游通路可作為潛在治療靶點(diǎn)。

55、再一方面，本發(fā)明提供一種彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑用于制備降低衰老相關(guān)血清指標(biāo)含量的試劑的用途，其特征在于，所述衰老相關(guān)血清指標(biāo)包括ast、alt、glu或ldl中的任意一種或多種。

56、在一些實(shí)施方式中，采用彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑dana，驗(yàn)證其對衰老相關(guān)血清指標(biāo)的影響。結(jié)果表明：彈性蛋白片段受體復(fù)合物抑制劑dana可顯著降低小鼠的血清衰老因子水平，與vehicle組相比，dana實(shí)驗(yàn)組肝功能指標(biāo)：ast和alt含量均顯著下降；血糖glu和血脂ldl的血清含量在dana組也發(fā)生顯著降低。這表明dana至少部分地抑制了衰老相關(guān)的肝功能下降和糖代謝、脂代謝的紊亂，彈性蛋白片段受體復(fù)合物及其下游通路可作為潛在治療靶點(diǎn)。

57、本發(fā)明的有益效果為：

58、1、本發(fā)明提供的一種干預(yù)彈性蛋白酶為主的胞外基質(zhì)降解酶在預(yù)防和拮抗衰老中的作用機(jī)制及其應(yīng)用，首次發(fā)現(xiàn)了彈性蛋白片段是衰老的重要標(biāo)志物，為衰老研究提供了新的方向和指標(biāo)。根據(jù)全新發(fā)現(xiàn)的彈性蛋白導(dǎo)致衰老的兩方面作用機(jī)制：(1)彈性蛋白中的彈性蛋白片段e-motif與彈性蛋白受體復(fù)合物結(jié)合后，激活下游通路導(dǎo)致衰老相關(guān)生理變化；(2)彈性蛋白酶促進(jìn)彈性蛋白降解，增加彈性蛋白片段的產(chǎn)生從而導(dǎo)致衰老；采用三方面措施對所述靶點(diǎn)進(jìn)行特異性干擾：敲除neu1基因、注射彈性蛋白受體復(fù)合物抑制劑以及注射彈性蛋白酶抑制劑，證實(shí)了所述干擾措施能夠有效地減緩甚至逆轉(zhuǎn)衰老相關(guān)的生理變化和癥狀。不僅從理論上深入揭示了衰老的新機(jī)制，還在實(shí)踐應(yīng)用層面為抗衰老的治療策略提供了切實(shí)可行且具有創(chuàng)新性的方法和思路，為抗衰老領(lǐng)域的發(fā)展帶來了新的契機(jī)和希望。

59、2、本發(fā)明中，首次明確了彈性蛋白片段與衰老的緊密關(guān)聯(lián)，能夠更精準(zhǔn)地評估個體的衰老程度，避免了以往檢測方法的模糊性和不確定性，為個性化的衰老評估和干預(yù)策略制定提供了可靠的依據(jù)。

60、3、本發(fā)明從干預(yù)彈性蛋白酶的角度出發(fā)，揭示了彈性蛋白片段在衰老過程中的作用機(jī)制，填補(bǔ)了細(xì)胞外基質(zhì)干預(yù)衰老的應(yīng)用空白，能夠進(jìn)一步闡明細(xì)胞外基質(zhì)與衰老之間的復(fù)雜關(guān)系，推動衰老相關(guān)的基礎(chǔ)研究取得突破性進(jìn)展。

61、4、本發(fā)明為抗衰老藥物的研發(fā)提供了新的靶點(diǎn)，證明通過抑制彈性蛋白酶活性、敲除表達(dá)基因neu1、抑制彈性蛋白酶受體復(fù)合物活性等方法可以抗衰老，為抗衰老治療提供了潛在的靶點(diǎn)和策略；基于彈性蛋白片段在衰老中的關(guān)鍵作用，藥物研發(fā)可以針對性地設(shè)計(jì)抑制或調(diào)節(jié)其作用的藥物，有望開發(fā)出更有效的抗衰老藥物。

62、5、本發(fā)明提供的一種干預(yù)彈性蛋白酶為主的胞外基質(zhì)降解酶在預(yù)防和拮抗衰老中的作用機(jī)制及其應(yīng)用，在臨床應(yīng)用方面具有重要意義，可以用于早期診斷衰老、慢性炎癥、骨關(guān)節(jié)炎以及骨質(zhì)疏松等衰老相關(guān)疾病，提前采取預(yù)防和治療措施，降低疾病的發(fā)生率和嚴(yán)重程度，提高患者的生活質(zhì)量。

63、6、本發(fā)明提供的一種干預(yù)彈性蛋白酶為主的胞外基質(zhì)降解酶在預(yù)防和拮抗衰老中的作用機(jī)制及其應(yīng)用，首次證明了抑制彈性蛋白酶能夠降低促炎癥因子含量，改善慢性炎癥指標(biāo)，改善骨關(guān)節(jié)炎模型中軟骨損傷情況，改善骨質(zhì)疏松相關(guān)指標(biāo)，并延緩衰老。