本技術涉及一種基于mofs的超聲敏化納米材料及其制備方法和應用，屬于生物材料。

背景技術：

1、b細胞淋巴瘤(bcl)是一種具有高度異質性的血液惡性腫瘤，是成熟b細胞的侵襲性增殖。目前，全身化療、體外放療和免疫療法是治療bcl的主要方法。放射治療是侵襲性淋巴瘤患者的一種有效治療方式，但作為化療-免疫治療后的鞏固治療，尤其是晚期患者的鞏固治療還存在不確定性，此外，放射治療只能針對淺表和可見的腫瘤組織，無法清除轉移或滲入骨髓深部的淋巴細胞。免疫療法，包括抗原特異性單克隆抗體(如抗cd20、雙特異性抗體)、免疫檢查點抑制劑(如pd1/pdl1阻斷劑)和嵌合抗原受體(car)t細胞，已成功應用于臨床前模型或臨床環(huán)境中治療bcl，對特定患者非常有效，然而，大多數bcl患者并未從這些免疫療法中獲益，還有一些患者病情復發(fā)或出現耐藥性，最終導致疾病進展。聲動力療法(sdt)是一種新興的實體瘤非侵入性治療方式，具有特異性強、對正常細胞損傷小、組織穿透深、空間精確度高和誘導免疫反應等優(yōu)點。sdt利用高組織穿透性超聲波(us)照射聲敏劑，引發(fā)活性氧(ros)的產生，從而進入深層腫瘤并誘導細胞死亡。

2、盡管傳統的bcl治療方法在臨床試驗中取得了初步成功，但大多數患者最終會產生耐藥性，臨床療效不佳。表觀遺傳失調是bcl發(fā)病機制的一個主要因素，鑒于bcl在程序性死亡(如細胞凋亡、銅突變、鐵死亡等)和表觀遺傳調控機制方面具有血液腫瘤和實體瘤的特征，針對表觀遺傳通路的療法是治療bcl的一種很有前景的替代策略。

技術實現思路

1、為了解決治療bcl的材料現有技術中存在的易產生耐藥性、臨床療效不佳等問題，本技術提供了一種基于mofs的超聲敏化納米材料及其制備方法和應用，通過將m6a-mrna去甲基化酶抑制劑和銅的配合物封裝到uio-66-nh2中，利用uio-66-nh2具有的z型異質結構可以在超聲激活下高效分離電子-空穴對的特性產生ros。作為bcl的替代療法，當基于mofs的超聲敏化納米材料被mpeg-po3和抗cd19抗體功能化，形成的cruppa19粒子可以特異性地聚集在bcl組織中，還可以靶向滲入骨髓的淋巴瘤細胞，一旦內化，cruppa19就能在超聲波作用下誘導細胞內ros生成和細胞凋亡。隨后，超聲波刺激引發(fā)了自噬介導的cu和rhein從cruppa19中釋放，從而增加了蛋白質脂?；腿謒rna甲基化，分別導致了銅死亡和pdl1轉錄抑制。這些級聯協同誘導腫瘤中的免疫原性細胞死亡，促進cd8+t細胞的活化，最終導致抗淋巴瘤免疫反應，使得cruppa19介導的超聲免疫療法不僅能消除原發(fā)性和轉移性淋巴瘤，還能清除骨髓中的淋巴瘤細胞，進而可增強抗血液腫瘤免疫力。

2、本技術采用如下技術方案：

3、根據本技術的一方面，提供了一種基于mofs的超聲敏化納米材料，包括載藥的mofs；

4、所述mofs選自uio-66-nh2；

5、所述uio-66-nh2為uio-66上連接有氨基官能團的微粒；

6、所述載藥的mofs中裝載有m6a-mrna去甲基化酶抑制劑復合物；

7、所述m6a-mrna去甲基化酶抑制劑復合物由rhein分子和二價銅離子配位形成；

8、所述載藥的mofs的外表面結合抗cd19抗體；

9、所述載藥的mofs的外表面還修飾有mpeg-po3。

10、可選的，其特征在于，所述載藥的mofs的粒徑為200～260nm。

11、rhein(1,8-二羥基-3-羧基蒽醌)是一種天然產物的蒽醌衍生物，被廣泛用作抗菌消炎藥。蒽醌衍生物，如紫堇素、大黃素等，也是理想的光敏劑，因為它們能夠吸收可見光到近紅外(nir)區(qū)域的光，并產生大量的ros。此外，蒽醌衍生物的光催化活性可通過直接配位氧化還原活性金屬中心而得到增強。

12、根據本技術的另一方面，提供了一種上述mofs的超聲敏化納米材料的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

13、s1、向含有rhein、可溶性二價銅鹽、醇的混合液中，滴加氨水直至混合液的ph達到10時停止滴加，然后將混合液攪拌、分離、洗滌、干燥得到m6a-mrna去甲基化酶抑制劑復合物。

14、s2、獲取uio-66-nh2，然后將含有uio-66-nh2、m6a-mrna去甲基化酶抑制劑復合物、溶劑的混合溶液，攪拌、分離、洗滌、干燥后得到載藥的mofs；

15、s3、獲取mpeg-po3、抗cd19抗體；

16、s4、將羧基活化劑加入到含有抗cd19抗體的水懸浮液中，活化羧基后加入含有載藥的mofs的水懸浮液，反應，得到表面結合抗cd19抗體的載藥的mofs的水懸浮液，然后加入含有mpeg-po3的水溶液，攪拌、分離、洗滌、干燥后得到所述mofs的超聲敏化納米材料。

17、可選的，步驟s1中，所述rhein與可溶性二價銅鹽的摩爾比為1：0.25～0.75.

18、可選的，步驟s1中，所述rhein與醇的用量比為1mmol：70～90ml.

19、可選的，步驟s1中，所述可溶性二價銅鹽選自cucl2.

20、可選的，步驟s1中，所述醇選自乙醇.

21、可選的，步驟s1中，所述攪拌的條件包括：在30～50℃下，攪拌6～18h。

22、可選的，步驟s2中，所述獲取uio-66-nh2的方法包括：將正丙醇鋯溶液加入到含有乙酸、dmf的混合物，置入密閉容器中，加熱反應，然后向產物中加入連接劑，攪拌、分離、洗滌、干燥得到uio-66-nh2。

23、可選的，正丙醇鋯溶液與乙酸的用量比為1μg：53～55ml。

24、可選的，正丙醇鋯溶液與dmf的用量比為1μg：93～95ml。

25、可選的，正丙醇鋯溶液與連接劑的重量比為1μg：1.1～1.3mg。

26、可選的，連接劑選自2-氨基-1,4-苯二甲酸、1,4-苯二甲酸酯中的至少一種。

27、bdc-nh2相比于bdc連接劑可提高uio-66聲波靈敏度。

28、可選的，所述加熱反應的條件包括：反應溫度為120～140℃，反應時間為1～3h。

29、可選的，步驟s2中，uio-66-nh2、m6a-mrna去甲基化酶抑制劑復合物的重量比為1：0.1～1.5。

30、可選的，步驟s2中，所述溶劑選自水。

31、可選的，步驟s2中，所述攪拌的條件包括：超聲波處理20～40s后，以150～300rpm的轉速攪拌16～24h。

32、可選的，步驟s3中，獲取mpeg-po3的方法包括：

33、將含有氧氯化磷、二氯甲烷的、三乙胺的混合液a與含有聚(乙二醇)甲醚、二氯甲烷的混合液b混合，加入水，攪拌，然后真空去除二氯甲烷，透析純化得到mpeg-po3。

34、可選的，所述混合液a中氧氯化磷的含量為40～60mmol/l，三乙胺的含量為140～160mmol/l。

35、可選的，所述混合液b中聚(乙二醇)甲醚的含量為14～16mmol/l。

36、可選的，混合液a與混合液b的體積比為1：8～10ml。

37、可選的，步驟s4中，羧基活化劑選自1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、n-羥基琥珀酰亞胺中的至少一種。

38、可選的，步驟s4中，所述活化羧基的時間為30～60min。

39、可選的，步驟s4中，反應的條件包括反應溫度為0～5℃，反應時間為6～18h。

40、可選的，步驟s4中，含有抗cd19抗體的水懸浮液中羧基活化劑的含量為0.01～0.02mmol/l，所述抗cd19抗體的含量為1～3mmol/l。

41、可選的，步驟s4中，所述含有載藥的mofs的水懸浮液中載藥的mofs的含量為1～3mmol/l。

42、可選的，步驟s4中，所述含有抗cd19抗體的水懸浮液與含有載藥的mofs的水懸浮液的體積比為1：0.5～1.5。

43、可選的，步驟s4中，含有mpeg-po3的水溶液中，mpeg-po3的含量為20～30mg/ml。

44、可選的，步驟s4中，表面結合抗cd19抗體的載藥的mofs的水懸浮液與含有mpeg-po3的水溶液的體積比為1:2～3。

45、可選的，步驟s4中，攪拌的條件包括：在0～5℃攪拌12～24h。

46、根據本技術的另一方面，還提供了一種上述mofs的超聲敏化納米材料或根據上述制備方法得到的mofs的超聲敏化納米材料在制備用于超聲驅動b細胞淋巴瘤級聯免疫療法的藥物中的應用。

47、sdt可誘導免疫原性細胞死亡(icd)，從而引發(fā)全身性抗腫瘤免疫反應，這種現象被稱為聲動力免疫療法(sono-immunotherapy)。將聲動力免疫療法與免疫檢查點抑制劑結合使用，不僅可以消融原發(fā)腫瘤，還可以通過腹腔效應抑制遠端或轉移性腫瘤的生長。

48、fto去甲基化酶抑制劑rhein的銅(cu)復合物被封裝到uio-66-nh2中，后者通過z型機制增強了rhein由us產生的單線態(tài)氧(1o2)和羥自由基(-oh)，從而增加了電子-空穴對的生成。這些cur@uio66聲納敏化劑被mpeg-po3和抗cd19抗體功能化，所產生的cruppa19粒子具有很高的生物相容性，并能通過cd19受體介導的內吞作用特異性地靶向b淋巴瘤細胞。cruppa19一旦被淋巴細胞內化，就會在超聲作用下引發(fā)細胞內ros生成和細胞凋亡。此外，超聲波刺激促進了自噬介導的納米顆粒中cu和rhein的釋放，從而增加了蛋白質脂?；腿謒rna甲基化，并分別導致了銅死亡和pdl1下調。這些細胞內級聯促進了腫瘤中的免疫原性細胞死亡(icd)，進而通過促進樹突狀細胞(dc)的成熟、增強t細胞對腫瘤抗原的識別以及cd8+t細胞的交叉刺激，激發(fā)抗bcl免疫反應。cruppa19介導的超聲免疫療法不僅抑制了小鼠模型中的原發(fā)性和轉移性淋巴瘤，還清除了骨髓中的淋巴瘤細胞。

49、本技術能產生的有益效果包括：

50、本技術提供的mofs的超聲敏化納米材料，是一種基于mofs的新型“表納米聲敏化劑”(cruppa19)，封裝的銅和rhein復合物有效地敏化了mofs主體并控制能帶結構，從而產生了很高的聲動力活性，在bcl療法應用中，通過聲免疫療法根除原發(fā)性淋巴瘤和浸潤淋巴瘤細胞，cruppa19還能有效積聚在淋巴瘤組織中，并靶向滲入骨髓的cd19+淋巴細胞，cruppa19納米顆?？赏ㄟ^cd19受體被淋巴瘤細胞內吞，并在超聲波刺激下引發(fā)級聯放大，誘導細胞程序性死亡。cruppa19介導的sdt通過觸發(fā)ros的產生誘導細胞凋亡，隨后，sdt對自噬的激活導致了cruppa19的解體，而從納米顆粒中釋放出的cu和rhein增加了蛋白質的脂?；腿謒rna甲基化，從而導致了銅死亡和pdl1的轉錄下調。此外，這些級聯還誘導了icd并促進了腫瘤微環(huán)境中dc的成熟，從而增強了cd8+t細胞的浸潤和隨后對腫瘤細胞的識別。最后，cruppa19介導的超聲免疫療法抑制了原發(fā)性腫瘤的生長，抑制了轉移，并清除了a20淋巴瘤小鼠骨髓中的淋巴瘤細胞。這項研究擴展了納米表觀遺傳療法的概念，既可用于實體腫瘤，也可用于血液惡性腫瘤，為治療各種類型的bcls提供了另一種視角，可將其應用于臨床。