本發(fā)明屬于醫(yī)藥，尤其涉及一種gw7647在制備抑制非洲豬瘟病毒蛋白引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、非洲豬瘟(african?swine?fever，asf)是由非洲豬瘟病毒(african?swine?fevervirus，asfv)引起的烈性傳染病，給生豬養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。盡管目前關(guān)于asf的研究已經(jīng)獲得一定成果，但關(guān)于其致病和免疫逃避機(jī)制尚待進(jìn)一步闡明，目前仍未有針對asf的特效疫苗或藥物，因此進(jìn)一步確定asfv毒力因子和免疫抑制因子，對于asf的防治至關(guān)重要。天然免疫反應(yīng)是宿主抵御病原體入侵的第一道防線，其中cgas-sting信號通路可識別胞質(zhì)中病毒dna并產(chǎn)生一系列抗病毒反應(yīng)以起到保護(hù)宿主的作用；同時病毒感染往往會導(dǎo)致細(xì)胞氧化還原穩(wěn)態(tài)失衡，造成細(xì)胞脂質(zhì)過氧化與氧化應(yīng)激，進(jìn)而導(dǎo)致病毒的免疫逃逸，促進(jìn)病毒的復(fù)制，使宿主抗感染能力下降，目前沒有抑制asfv感染造成脂質(zhì)過氧化的藥物。

2、氧化應(yīng)激是指細(xì)胞受到某種刺激后，細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive?oxygen?species，ross)和活性氮(reactive?nitrogen?species，rnss)等自由基產(chǎn)生過多，其水平超出了細(xì)胞清除自由基等氧化物的能力范圍、細(xì)胞氧化還原系統(tǒng)失衡從而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生損傷。脂質(zhì)過氧化(lipid?peroxidation，lpo)是指氧化降解脂類，具體過程為引發(fā)、擴(kuò)散、終止三步驟，具體表現(xiàn)為在外來或內(nèi)生因素刺激下，過量活性氧自由基與脂肪基團(tuán)反應(yīng)氧化反應(yīng)產(chǎn)生過氧脂肪酸基團(tuán)，此后會發(fā)生一系列鏈反應(yīng)中間將生成不同的脂肪酸自由基，最終生成丙二醛(malondialdehyde，mda)和4-羥基壬烯醛等脂質(zhì)過氧化物。多不飽和脂肪酸(polyunsaturated?fatty?acids，pufas)容易在自由基誘導(dǎo)下發(fā)生lpo，因此富含pufa的磷脂和膽固醇的細(xì)胞膜和脂蛋白在氧化應(yīng)激下更容易損傷。如病原體入侵往往會造成細(xì)胞氧化應(yīng)激，產(chǎn)生的自由基會與脂質(zhì)發(fā)生反應(yīng)形成氧化脂質(zhì)，富含多不飽和脂肪酸的細(xì)胞膜更易受到攻擊，造成細(xì)胞膜破裂，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

3、病毒感染往往會造成細(xì)胞氧化還原穩(wěn)態(tài)失衡，有許多研究發(fā)現(xiàn)病毒會上調(diào)細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)過氧化水平以有利用自身感染復(fù)制。如cheng等人發(fā)現(xiàn)豬流感病毒(swineinfluenza?virus，siv)可通過下調(diào)slc7a11水平降低導(dǎo)致gsh耗竭，進(jìn)而抑制gpx4活性以增強(qiáng)病毒復(fù)制。cao等人發(fā)現(xiàn)人類免疫缺陷病毒(human?immunodeficiency?virus，hiv)在感染早期降低t細(xì)胞的gpx4水平來增強(qiáng)鐵死亡，導(dǎo)致cd4+t細(xì)胞在t細(xì)胞受體激活誘導(dǎo)鐵死亡作用下逐漸消耗，有利于促進(jìn)疾病的發(fā)生發(fā)展。

4、一般來說大部分的研究發(fā)現(xiàn)病毒能夠通過促進(jìn)細(xì)胞膜脂質(zhì)損傷破裂的方式，促進(jìn)病毒在細(xì)胞間的傳播，增加病毒復(fù)制滴度，降低人或宿主的抗感染能力，導(dǎo)致相關(guān)病毒性疾病的發(fā)生。

5、綜上可知，細(xì)胞脂質(zhì)過氧化在病毒感染繁殖過程中具有重要的研究價值，目前沒有有效的抑制asfv感染造成脂質(zhì)過氧化的藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明實(shí)施例提供一種gw7647在制備抑制非洲豬瘟病毒蛋白引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物中的應(yīng)用，旨在解決目前沒有有效的抑制非洲豬瘟病毒蛋白導(dǎo)致細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物的問題。

2、本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

3、本發(fā)明實(shí)施例構(gòu)建了非洲豬瘟病毒a151r真核表達(dá)質(zhì)粒，并通過熒光探針和免疫熒光染色檢測細(xì)胞ros水平及脂質(zhì)ros水平、western?blot檢測細(xì)胞蛋白羰基化水平等實(shí)驗(yàn)確認(rèn)了非洲豬瘟病毒a151r與細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的關(guān)系，結(jié)果顯示a151r能夠顯著促進(jìn)細(xì)胞ros及脂質(zhì)ros的產(chǎn)生，表明asfv?a151r促進(jìn)細(xì)胞脂質(zhì)過氧化損傷。

4、本發(fā)明實(shí)施例為進(jìn)一步探究gw7647在非洲豬瘟病毒a151r促進(jìn)細(xì)胞脂質(zhì)過氧化過程中的作用，通過檢測gpx4及相關(guān)蛋白的表達(dá)水平和細(xì)胞gsh含量，檢測細(xì)胞ros及脂質(zhì)ros水平，結(jié)果顯示a151r能夠顯著抑制gpx4、slc7a11表達(dá)，降低細(xì)胞gsh水平，提高mda水平，而gw7647處理可恢復(fù)由a151r造成的細(xì)胞ros和脂質(zhì)ros累積，增加gsh水平，降低mda水平。

5、上述實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證可知，gw7647在制備抑制非洲豬瘟病毒蛋白引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物中的應(yīng)用。

6、進(jìn)一步優(yōu)選的，所述細(xì)胞優(yōu)選為哺乳動物細(xì)胞。更進(jìn)一步優(yōu)選的，所述哺乳動物細(xì)胞為豬肺泡巨噬細(xì)胞3d4/21a、人胚腎細(xì)胞293t或豬原代肺泡巨噬細(xì)胞pam中的至少一種。

7、進(jìn)一步優(yōu)選的，所述非洲豬瘟病毒蛋白為非洲豬瘟病毒a151r。

8、進(jìn)一步優(yōu)選的，所述gw7647的化學(xué)式為c29h46n2o3s。

9、進(jìn)一步優(yōu)選的，所述gw7647的結(jié)構(gòu)式如式i所示：

10、

11、病毒感染以及病毒蛋白(如a151r)常常引起細(xì)胞發(fā)生氧化損傷，其中脂質(zhì)過氧化可通過羰基化蛋白影響蛋白結(jié)構(gòu)及功能，抑制信號通路的信息轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)而影響細(xì)胞的抗病毒反應(yīng)。因此抑制細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物對于病毒感染、以及細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的研究具有重要價值。

12、本發(fā)明的技術(shù)方案與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下有益效果：

13、本發(fā)明證實(shí)了gw7647具有抑制非洲豬瘟蛋白導(dǎo)致的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的功能，可以在制備抑制非洲豬瘟病毒蛋白引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)asfv?a151r可促進(jìn)細(xì)胞脂質(zhì)過氧化損傷，并誘導(dǎo)細(xì)胞脂質(zhì)過氧化。而gw7647能夠抑制asfv?a151r引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化，并能在研究非洲豬瘟病毒對細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化中應(yīng)用。抑制細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物對于病毒感染、以及細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的研究具有重要價值。

技術(shù)特征：

1.gw7647在制備抑制非洲豬瘟病毒蛋白引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物中的應(yīng)用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的gw7647在制備抑制非洲豬瘟病毒蛋白引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述細(xì)胞為哺乳動物細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的gw7647在制備抑制非洲豬瘟病毒蛋白引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述哺乳動物細(xì)胞為豬肺泡巨噬細(xì)胞3d4/21a、人胚腎細(xì)胞293t或豬原代肺泡巨噬細(xì)胞pam中的至少一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的gw7647在制備抑制非洲豬瘟病毒蛋白引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述非洲豬瘟病毒蛋白為非洲豬瘟病毒a151r。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的gw7647在制備抑制非洲豬瘟病毒蛋白引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述gw7647的化學(xué)式為c29h46n2o3s。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的gw7647在制備抑制非洲豬瘟病毒蛋白引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述gw7647的結(jié)構(gòu)式如式i所示：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種GW7647在制備抑制非洲豬瘟病毒蛋白引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明證實(shí)GW7647在制備抑制非洲豬瘟病毒蛋白引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物中的應(yīng)用；所述非洲豬瘟病毒蛋白為非洲豬瘟病毒A151R。本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)ASFV?A151R可促進(jìn)細(xì)胞脂質(zhì)過氧化損傷，并誘導(dǎo)細(xì)胞脂質(zhì)過氧化；而GW7647能夠抑制ASFV?A151R引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化，并能在研究非洲豬瘟病毒對細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化中應(yīng)用；抑制細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的藥物對于非洲豬瘟病毒的感染宿主抗感染能力以及細(xì)胞脂質(zhì)過氧化與天然免疫的關(guān)系等研究具有重要價值。

技術(shù)研發(fā)人員：戴漢川,陳怡沁,李文杰,王俊杰,鄧易安,劉明澤
受保護(hù)的技術(shù)使用者：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6