本發(fā)明屬于桑葉發(fā)酵提取，具體是一種桑葉提取物及其制備方法與在化妝品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、桑葉是一種廣泛認(rèn)可的藥用植物，富含黃酮類化合物、蛋白質(zhì)、氨基酸和綠原酸等生物活性成分。這些成分在抗氧化、抗炎和降血糖等方面顯示出顯著的療效。盡管傳統(tǒng)的桑葉提取物制備方法，如熱水提取和超聲波提取等物理方法，以及酸解和堿解等化學(xué)方法，能夠提取出一些活性成分，但這些方法的提取效率較低，且難以有效提取蛋白質(zhì)。

2、近年來通過微生物發(fā)酵，可以顯著提高植物材料中有效成分的含量，并通過微生物代謝將大分子物質(zhì)轉(zhuǎn)化為更易吸收的小分子物質(zhì)。然而，將發(fā)酵技術(shù)應(yīng)用于桑葉提取物的制備，仍面臨發(fā)酵條件控制和發(fā)酵產(chǎn)物提取的技術(shù)挑戰(zhàn)。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明旨在解決上述問題，提出了一種桑葉提取物及其制備方法與在化妝品中的應(yīng)用。該方法利用復(fù)合菌發(fā)酵技術(shù)，顯著提高桑葉中黃酮的含量。同時，通過雙水相萃取技術(shù)，高效提取發(fā)酵液中的有效成分。此外，本發(fā)明還對發(fā)酵條件和提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，確保了提取物的高純度和高活性。

2、本發(fā)明通過以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題。

3、本發(fā)明提供一種桑葉提取物的制備方法，包括以下步驟：

4、s1.將復(fù)合菌接種到培養(yǎng)基中，得到培養(yǎng)液；

5、s2.將桑葉樣品加入到培養(yǎng)液中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵過程中流加補料，得到發(fā)酵液；

6、s3.將發(fā)酵液經(jīng)滅菌、過濾、離心、濃縮，得到粗提取物；

7、s4.將粗提取物經(jīng)雙水相萃取、萃取、超濾、干燥后，得到桑葉提取物。

8、s1中，所述復(fù)合菌包括以下質(zhì)量份原料：10份枯草芽孢桿菌、8～12份植物乳桿菌和3～5份產(chǎn)朊假絲酵母。

9、本發(fā)明中，復(fù)合菌能顯著提高桑葉中黃酮含量，會降解大分子蛋白質(zhì)成肽、可溶性蛋白質(zhì)和游離氨基酸。其中，枯草芽孢桿菌在發(fā)酵過程中可以分泌酯酶和水解酶，這些酶可以分解桑葉中的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，從而增加黃酮類化合物的溶解度和可提取性。植物乳桿菌能夠提升黃酮類成分的抗氧化能力，因為植物乳桿菌在發(fā)酵過程中會分泌酶使桑葉中的纖維素和其他復(fù)雜多糖分解，從而使得黃酮等活性成分更容易被人體吸收。產(chǎn)朊假絲酵母在發(fā)酵過程中主要負(fù)責(zé)蛋白質(zhì)的降解和轉(zhuǎn)化，它通過分泌蛋白酶將桑葉中的蛋白質(zhì)分解成更小的肽段和氨基酸，從而提高蛋白質(zhì)的利用率和消化吸收率。

10、s1中，所述接種是將4×107～7×107cfu/ml的10ml菌液接種于1l培養(yǎng)基中。

11、s1中，所述培養(yǎng)基為mrs培養(yǎng)基。

12、s2中，所述桑葉樣品是將桑葉清洗、烘干、滅菌和粉碎后得到的。

13、s2中，每1l所述培養(yǎng)液中加80～130g所述桑葉樣品。

14、s2中，所述發(fā)酵的溫度為25～30℃，較佳的為26～28℃。

15、s2中，所述發(fā)酵的時間為10～25h。

16、s2中，所述發(fā)酵的攪速為200～500rpm。

17、s2中，所述補料包括17～25g/l葡萄糖、9～15g/l海藻糖、8～12g/l蛋白胨、2～6g/l酵母浸粉、3～7g/l乙酸鈉、0.1～0.9g/l硫酸鎂、0.1～0.3g/l磷酸二氫鉀。

18、s2中，所述補料與所述培養(yǎng)基的體積比為10:2～4，較佳的為10:2.5～3.3。

19、s2中，所述流加的流速為30～50ml/min。

20、s3中，所述濃縮的方式為減壓濃縮，溫度為50～60℃。

21、s3中，所述濃縮至含固量為50～65％。

22、s4中，所述雙水相的第一相為有機溶劑和水。

23、s4中，所述雙水相的第二相為鹽和水。

24、s4中，所述雙水相萃取的溫度為15～20℃。

25、s4中，所述雙水相萃取可采用超聲輔助萃取，超聲輔助時間為5～20min。

26、s4中，所述雙水相萃取保留第一相。

27、進(jìn)一步s4中，所述有機溶劑為乙二醇。

28、進(jìn)一步s4中，所述有機溶劑在第一相的含量為18～35wt％，較佳的為20～30wt％。

29、進(jìn)一步s4中，所述鹽為磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉或檸檬酸鈉。

30、進(jìn)一步s4中，所述鹽在第二相的含量為6～20wt％，較佳的為9～15wt％。

31、s4中，所述萃取是將第一相與乙酸乙酯進(jìn)行萃取，保留乙酸乙酯層。

32、s4中，所述超濾的截留分子量為5kda。

33、s4中，所述干燥的方式為真空干燥，所述干燥的溫度為45～55℃。

34、本發(fā)明還提供如前述制備方法制得的桑葉提取物，包含119.72～123.58mg/g黃酮、36.78～46.54mg/g多肽和3.84～6.28mg/g綠原酸。

35、在一些優(yōu)選方案中，桑葉提取物包含121.47～123.58mg/g黃酮、43.42～46.54mg/g肽和5.94～6.28mg/g綠原酸。

36、本發(fā)明中，提取物中黃酮和綠原酸均能清除dpph自由基，并且還能抑制酪氨酸酶的能力；肽對dpph自由基也有較好的清除作用。

37、本發(fā)明中，所述肽的分子量≤5kda。

38、本發(fā)明中，所述桑葉選用小葉桑、湖桑197或農(nóng)桑14號。

39、本發(fā)明中，所述桑葉選用發(fā)芽后生長25～35天的桑葉。

40、本發(fā)明提供前述桑葉提取物在化妝品中的應(yīng)用，所述化妝品具備抗氧化、延緩衰老、促進(jìn)細(xì)胞修復(fù)和再生、增強皮膚屏障和美白功能的至少一種。

41、在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實例。

42、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

43、1.本發(fā)明通過復(fù)合菌發(fā)酵技術(shù)，顯著提高了桑葉中黃酮的含量。同時，該技術(shù)還能將大分子蛋白質(zhì)降解為肽和可溶性蛋白以及游離氨基酸。這些變化不僅提升了有益成分的生物利用度，還提高了其提取效率。為了確保發(fā)酵過程的高效性，本發(fā)明嚴(yán)格控制發(fā)酵條件，使得發(fā)酵更加高效。

44、2.本發(fā)明采用的雙水相萃取體系，特別適用于從發(fā)酵液中提取各種有效成分，該體系的高提取率確保了黃酮、肽和綠原酸等成分的高效提取。

45、3.本發(fā)明制備的發(fā)酵提取物富含黃酮、肽和綠原酸等有效成分，這不僅提高了提取效率，還增強了桑葉提取物的藥用價值。在濃度為0.05mg/ml時，這些提取物展現(xiàn)出顯著的抗氧化能力，dpph自由基清除率可達(dá)66.5～82.4％，特別是在一些優(yōu)選方案中，清除率可進(jìn)一步提高至79.2～82.4％。此外，這些提取物還表現(xiàn)出良好的酪氨酸酶抑制效果，抑制率在43.2～66.5％之間，優(yōu)選方案中抑制率可達(dá)58.7～66.5％。

技術(shù)特征：

1.一種桑葉提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.如權(quán)利要求1所述的桑葉提取物的制備方法，其特征在于，所述s1滿足以下條件(1)～(3)中的至少一種：

3.如權(quán)利要求1所述的桑葉提取物的制備方法，其特征在于，所述s2滿足以下條件(1)～(7)中的至少一種：

4.如權(quán)利要求1所述的桑葉提取物的制備方法，其特征在于，所述雙水相萃取滿足以下條件(1)～(5)中的至少一種：

5.如權(quán)利要求4所述的桑葉提取物的制備方法，其特征在于，所述雙水相萃取滿足以下條件(1)～(4)中的至少一種：

6.如權(quán)利要求1所述的桑葉提取物的制備方法，其特征在于，所述s4滿足以下條件(1)～(3)中的至少一種：

7.如權(quán)利要求1～6任一項所述的桑葉提取物的制備方法制備的桑葉提取物，其特征在于，包含119.72～123.58mg/g黃酮、36.78～46.54mg/g肽和3.84～6.28mg/g綠原酸。

8.如權(quán)利要求7所述的桑葉提取物，其特征在于，所述肽的分子量≤5kda。

9.如權(quán)利要求7所述的桑葉提取物，其特征在于，滿足以下條件(1)～(2)中的至少一種：

10.如權(quán)利要求7～9任一項所述的桑葉提取物在化妝品中的應(yīng)用，其特征在于，所述化妝品具備抗氧化、延緩衰老、促進(jìn)細(xì)胞修復(fù)和再生、增強皮膚屏障和美白功能的至少一種。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種桑葉提取物及其制備方法與在化妝品中的應(yīng)用，涉及桑葉發(fā)酵提取技術(shù)領(lǐng)域。桑葉提取物的制備方法包括以下步驟：S1.將復(fù)合菌接種到培養(yǎng)基中，得到培養(yǎng)液；S2.將桑葉樣品加入到培養(yǎng)液中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵過程中流加補料，得到發(fā)酵液；S3.將發(fā)酵液經(jīng)滅菌、過濾、離心、濃縮，得到粗提取物；S4.將粗提取物經(jīng)雙水相萃取、萃取、超濾、干燥后，得到桑葉提取物。該方法制備的桑葉提取物黃酮、綠原酸和肽含量高；抑制酪氨酸酶和清除DPPH自由基效果好。

技術(shù)研發(fā)人員：羅華,張有發(fā),黃六仔,盧小剛,馮江洪,姚勝迷
受保護(hù)的技術(shù)使用者：湖南杰萃生物技術(shù)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/23