本申請(qǐng)涉及納米盾牌及制備，具體涉及一種可預(yù)防呼吸道病毒感染的納米盾牌、制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、甲型流感病毒(iav)屬于正黏病毒科，包括許多亞型，具有結(jié)構(gòu)復(fù)雜，變異性高，感染宿主范圍廣的特點(diǎn)，是一種急性上呼吸道感染傳染病。在全球范圍內(nèi)造成嚴(yán)重的健康問(wèn)題、高死亡率和社會(huì)經(jīng)濟(jì)損失。目前，預(yù)防病毒感染的方法主要有兩種：接種疫苗和依靠抗病毒藥物。接種疫苗是預(yù)防病毒感染最有效的方法之一，可通過(guò)降低發(fā)病率和死亡率來(lái)預(yù)防傳染病，其主要作用是產(chǎn)生針對(duì)病毒表面蛋白的中和抗體。然而，病毒表面蛋白的突變可能會(huì)限制這些疫苗的功效，而且目前尚不清楚免疫保護(hù)能持續(xù)多久?？共《舅幬锿ㄟ^(guò)抑制病毒復(fù)制和傳播的關(guān)鍵步驟來(lái)控制流感病毒的傳播。然而，流感病毒具有極強(qiáng)的重組變異和抗原漂移能力，且隨著耐藥性突變株的出現(xiàn)，也制約了抗病毒藥物的時(shí)效性。因此，迫切需要能夠有效預(yù)防流感病毒感染的強(qiáng)有力的策略，最好是在病毒到達(dá)目標(biāo)肺細(xì)胞之前。這對(duì)于流感病毒的有效預(yù)防具有重要意義。

2、大多數(shù)呼吸道病毒通過(guò)空氣中的飛沫傳播到鼻粘膜，而流感病毒作為呼吸道感染的重要病原體，它通過(guò)空氣傳播，首先必須穿透黏液并進(jìn)入呼吸道內(nèi)壁細(xì)胞。同時(shí)，呼吸道病毒高傳播性的可能原因包括感染早期病毒在氣道上皮細(xì)胞中的活躍復(fù)制。因此，作為免疫系統(tǒng)的第一層和頂層，氣道內(nèi)壁粘液等物理屏障在防御感染方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，尤其是在阻止許多呼吸道病毒到達(dá)靶細(xì)胞方面。目前已有研究利用生物粘附聚合物和粘液之間的相互作用，增強(qiáng)其擴(kuò)散屏障特性、減少病毒滲透，從而有效預(yù)防病毒的感染。雖然目前有許多鼻噴霧劑可用于預(yù)防病毒的感染，為使用者構(gòu)建物理性病毒屏障。但大多數(shù)鼻噴霧劑的設(shè)計(jì)是通過(guò)增加黏度，產(chǎn)生黏性屏障，從而屏蔽病毒，或阻斷病毒進(jìn)入細(xì)胞所需的蛋白或受體等，從而抵抗病毒的入侵。然而，這些保護(hù)劑的預(yù)防時(shí)間短、成本高和廣譜性不足等問(wèn)題。因此，開發(fā)一種能有效預(yù)防多種亞型流感病毒感染的強(qiáng)效廣譜保護(hù)劑具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N可預(yù)防呼吸道病毒感染的納米盾牌、制備方法及應(yīng)用，解決了現(xiàn)有技術(shù)中保護(hù)劑的預(yù)防時(shí)間短、成本高和廣譜性不足等技術(shù)問(wèn)題。

2、根據(jù)本申請(qǐng)的第一個(gè)方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N可預(yù)防呼吸道病毒感染的納米盾牌，所述納米盾牌是由內(nèi)部包裹著藥物的dspe-peg雙親性聚合物自組裝形成球形結(jié)構(gòu)，所述dspe-peg雙親性聚合物可以插入上皮細(xì)胞表面，阻斷病毒進(jìn)入上皮細(xì)胞表面；所述納米盾牌可以在體內(nèi)解組裝成dspe-peg分子并釋放阿比多爾藥物，釋放的阿比多爾藥物抑制病毒復(fù)制，從而預(yù)防病毒感染。

3、在一實(shí)施例中，所述納米盾牌的粒徑為8-40nm；所述納米盾牌的黏度為1.75mpa.s。

4、根據(jù)本申請(qǐng)的第二個(gè)方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N納米盾牌的制備方法，按不同的質(zhì)量比稱取dspe-peg雙親性聚合物和阿比多爾藥物，用氯仿溶解，并在4℃超聲條件下破碎20-30min超聲破碎后，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去氯仿，將所得溶液溶于pbs緩沖溶液中，并使用nap-5脫鹽柱去除游離的阿比多爾藥物，即得到納米盾牌，使用紫外-可見分光光度計(jì)測(cè)定藥物的包載效率(ee)，用1％triton?x-100破壞納米盾牌，然后定量測(cè)定內(nèi)部藥物的總含量。ee％的計(jì)算公式如下：

5、

6、在一實(shí)施例中，所述dspe-peg雙親性聚合物和阿比多爾藥物的質(zhì)量比為400：(1-16)；優(yōu)選地，所述dspe-peg雙親性聚合物和阿比多爾藥物的質(zhì)量比為400：8。

7、在一實(shí)施例中，所述dspe-peg雙親性聚合物是由脂質(zhì)分子dspe作為雙親性的一端，骨架peg作為雙親性的另一端在水溶液中自組裝形成。

8、在一實(shí)施例中，所述dspe-peg雙親性聚合物的分子量為350-20000；所述dspe-peg雙親性聚合物的鏈長(zhǎng)為0.35k-20k；優(yōu)選地，所述dspe-peg雙親性聚合物的濃度為10μm-200μm。

9、根據(jù)本申請(qǐng)的第三個(gè)方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝擞缮鲜鲋苽浞椒ㄖ苽涞玫降募{米盾牌，所述納米盾牌通過(guò)阻止病毒進(jìn)入上皮細(xì)胞表面以及抑制病毒復(fù)制從而預(yù)防病毒感染。

10、根據(jù)本申請(qǐng)的第四個(gè)方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝松鲜鏊龅募{米盾牌在預(yù)防呼吸道病毒感染中的應(yīng)用，所述的納米盾牌用于預(yù)防病毒感染，病毒包括h1n1流感病毒、h9n2流感病毒以及新冠假病毒等。

11、根據(jù)本申請(qǐng)的第五個(gè)方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝松鲜鏊龅募{米盾牌制備得到的預(yù)防呼吸道病毒感染的藥物，所述預(yù)防呼吸道病毒感染的藥物包括包含所述納米盾牌鼻滴噴霧劑、注射劑、口服劑、顆粒劑等。

12、本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N可預(yù)防呼吸道病毒感染的納米盾牌、制備方法及應(yīng)用，納米盾牌由(1,2-二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙酰胺-n-[甲氧基(聚乙二醇)(dspe-peg))雙親性聚合物自組裝形成，其內(nèi)部包裹著流感預(yù)防性抗病毒藥物阿比多爾，通過(guò)優(yōu)化雙親性聚合物中peg的鏈長(zhǎng)，篩選出在呼吸道系統(tǒng)產(chǎn)生高黏度以物理防御病毒進(jìn)入，在進(jìn)入體液系統(tǒng)后，在體液剪切力和蛋白質(zhì)的作用下，納米盾牌可解組裝成dspe-peg分子，釋放出阿比多爾藥物，然后，dspe-peg分子可以通過(guò)親水性和疏水性相互作用插入上皮細(xì)胞表面，peg形成的水合層可以阻斷病毒與細(xì)胞之間的相互作用，同時(shí)，阿比多爾可進(jìn)一步抑制病毒包膜與細(xì)胞膜的融合，阻斷病毒核酸釋放，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)表明，納米盾牌對(duì)病毒感染具有三重預(yù)防作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，單次吸入納米盾牌可提供至少8h的有效保護(hù)，此外，納米盾牌只有幾十納米，不會(huì)干擾正常的呼吸功能，其抗病毒功效也不會(huì)受到病毒突變的影響。因此，這種抗病毒方法可以為人群提供額外的保護(hù)，使其免受其他亞型流感病毒甚至其他呼吸道病原體的侵襲。這一設(shè)計(jì)原理可為針對(duì)其他呼吸道病毒和致病病原體的保護(hù)性抗病原藥物設(shè)計(jì)提供重要指導(dǎo)。

技術(shù)特征：

1.一種可預(yù)防呼吸道病毒感染的納米盾牌，其特征在于，所述納米盾牌是由內(nèi)部包裹著藥物的dspe-peg雙親性聚合物自組裝形成球形結(jié)構(gòu)，所述dspe-peg雙親性聚合物可以插入上皮細(xì)胞表面，阻斷病毒進(jìn)入上皮細(xì)胞表面；所述納米盾牌可以在體內(nèi)解組裝成dspe-peg分子并釋放阿比多爾藥物，釋放的阿比多爾藥物抑制病毒復(fù)制，從而預(yù)防病毒感染。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米盾牌，其特征在于，所述納米盾牌的粒徑為8-40nm；所述納米盾牌的黏度為1.75mpa.s。

3.根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的可預(yù)防呼吸道病毒感染的納米盾牌的制備方法，其特征在于，按不同的質(zhì)量比稱取dspe-peg雙親性聚合物和阿比多爾藥物，用氯仿溶解，并在4℃超聲條件下破碎20-30min超聲破碎后，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去氯仿，將所得溶液溶于pbs緩沖溶液中，并使用nap-5脫鹽柱去除游離的阿比多爾藥物，即得到納米盾牌。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的可預(yù)防呼吸道病毒感染的納米盾牌的制備方法，其特征在于，所述dspe-peg雙親性聚合物和阿比多爾藥物的質(zhì)量比為400：(1-16)；優(yōu)選地，所述dspe-peg雙親性聚合物和阿比多爾藥物的質(zhì)量比為400：8。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的可預(yù)防呼吸道病毒感染的納米盾牌的制備方法，其特征在于，所述dspe-peg雙親性聚合物是由脂質(zhì)分子dspe作為雙親性的一端，骨架peg作為雙親性的另一端在水溶液中自組裝形成。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的可預(yù)防呼吸道病毒感染的納米盾牌的制備方法，其特征在于，所述dspe-peg雙親性聚合物的分子量為350-20000；所述dspe-peg雙親性聚合物的鏈長(zhǎng)為0.35k-20k；優(yōu)選地，所述dspe-peg雙親性聚合物的濃度為10μm-200μm。

7.根據(jù)權(quán)利要求3-6任意一項(xiàng)所述的制備方法制備得到的納米盾牌，其特征在于，所述納米盾牌通過(guò)阻止病毒進(jìn)入上皮細(xì)胞表面以及抑制病毒復(fù)制從而預(yù)防病毒感染。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的納米盾牌在預(yù)防呼吸道病毒感染中的應(yīng)用，其特征在于，所述的納米盾牌用于預(yù)防病毒感染。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的納米盾牌制備得到的預(yù)防呼吸道病毒感染的藥物，其特征在于，所述預(yù)防呼吸道病毒感染的藥物包括包含所述納米盾牌的鼻滴噴霧劑、注射劑、口服劑、顆粒劑。

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N可預(yù)防呼吸道病毒感染的納米盾牌、制備方法及應(yīng)用，納米盾牌由DSPE?PEG雙親性聚合物自組裝形成，其內(nèi)部包裹抗病毒藥物阿比多爾，通過(guò)優(yōu)化雙親性聚合物中PEG的鏈長(zhǎng)，篩選出可以在呼吸道系統(tǒng)產(chǎn)生高黏度，減慢病毒顆粒的自由擴(kuò)散，物理防御病毒進(jìn)入上皮細(xì)胞表面，在進(jìn)入體液系統(tǒng)后，在體液剪切力和蛋白質(zhì)的作用下，納米盾牌可解組裝成DSPE?PEG分子，DSPE?PEG分子可以通過(guò)親水性和疏水性相互作用插入上皮細(xì)胞表面，PEG形成的水合層可以阻斷病毒與細(xì)胞之間的相互作用；同時(shí)釋放出阿比多爾藥物，阿比多爾可進(jìn)一步抑制病毒包膜與細(xì)胞膜的融合，阻斷病毒核酸釋放，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，單次吸入納米盾牌可提供至少8h的有效保護(hù)。

技術(shù)研發(fā)人員：劉書琳,李靜,王志剛,龐代文
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南開大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9