本發(fā)明屬于類風濕關(guān)節(jié)炎分子生物學領(lǐng)域，具體涉及一種lncrna?mir22hg/mir-597-3p/arhgef3組合在類風濕關(guān)節(jié)炎中的應用。

背景技術(shù)：

1、類風濕關(guān)節(jié)炎(ra)是以對稱性多關(guān)節(jié)病變?yōu)橹饕R床特點，以滑膜炎、血管翳形成、血小板活化，及凝血纖溶系統(tǒng)異常為重要病理基礎(chǔ)的慢性全身性自身免疫性疾病。在成年人中ra的患病率為0.5％-1％，男女患病比例約為1∶3。ra臨床指標也多呈現(xiàn)凝血纖溶異常，體內(nèi)存在高凝狀態(tài)。

2、長鏈非編碼rna(lncrna)是一類長度大于200核苷酸的rna，主要存在于細胞核中，與mrna相似，但lncrna穩(wěn)定性和保守性均較低，但具有更強的特異性，因缺少開放閱讀框，幾乎不具有編碼蛋白質(zhì)功能。但目前隨著對lncrna研究的深入，其可通過某些復雜的關(guān)系調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄機制的募集、轉(zhuǎn)錄后的修飾與表達以及表觀遺傳學。此外，lncrna參與ra的免疫應答、細胞分化等功能，可見lncrna的表達異常與ra密切相關(guān)，這也意味著lncrna在未來可能作為診斷或治療ra的重要依據(jù)。

3、lncrna能競爭性結(jié)合mirna，形成以lncrna為中心的cerna(competingendogenous?rna,cerna)調(diào)控組合，lncrna可作為cerna通過競爭共享mirna應答元件，與mrna發(fā)生反應以達到調(diào)節(jié)彼此表達水平。lncrna/mirna/mrna三者可形成一種復雜的rna分子間調(diào)控模式，參與ra的細胞生物學過程，如增殖、凋亡、炎癥和高凝狀態(tài)等。因此探究cerna組合在ra高凝狀態(tài)中的應用具有很好的臨床實用價值。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明通過實驗研究獲得lncrna?mir22hg在ra中作為mir-597-3p的cerna發(fā)揮作用，可以靶向arhgef3，參與高凝狀態(tài)和炎癥反應。同時，通過細胞轉(zhuǎn)染、基因編輯和挽救實驗，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)一種新的cerna組合，即lncrna?mir22hg/mir-597-3p/arhgef3，作為治療ra高凝狀態(tài)的診斷以及治療新靶點。

2、本發(fā)明所采取的技術(shù)方案為：

3、本發(fā)明提出了一種lncrnamir22hg/mir-597-3p/arhgef3組合在ra高凝狀態(tài)中的應用，具體為，所述lncrna?mir22hg能夠通過競爭性結(jié)合mir-597-3p靶向arhgef3，促進ra高凝狀態(tài)和炎癥反應。

4、本發(fā)明還提出了一種沉默lncrnamir22hg的制劑在制備ra治療制劑中的應用，具體的，沉默所述lncrna?mir22hg，能夠通過競爭性結(jié)合mir-597-3p靶向arhgef3，從而降低炎癥反應，改善ra高凝狀態(tài)。

5、本發(fā)明通過rt-qpcr技術(shù)檢測ra患者外周血單個核細胞(pbmcs)中的lncrnamir22hg表達上調(diào)，roc曲線結(jié)果顯示lncrna?mir22hg的曲線下面積為93.91％，因此可以說明lncrnamir22hg是ra特異性生物標志物。相關(guān)性分析結(jié)果顯示lncrna?mir22hg的表達與年齡、病程、esr、crp、iga、igg、igm、c3、c4、das28、vas、sas呈正相關(guān)，與pf、bp、gh、sf呈負相關(guān)。logostic回歸結(jié)果顯示esr、igg、c3、das28、pf是lncrnamir22hg的危險因素。在ra滑膜成纖維細胞(fls)中，lncrna?mir22hg表達升高，沉默lncrnamir22hg降低炎癥和凝血指標的表達，過表達lncrna?mir22hg1則會升高炎癥和凝血指標的表達。雙熒光素酶報告實驗驗證lncrna?mir22hg與mir-597-3p、mir-597-3p與arhgef3之間具有結(jié)合位點，說明lncrnamir22hg/mir-597-3p/arhgef3能形成cerna組合。挽救實驗證明了mir-597-3p抑制劑和過表達arhgef3恢復了lncrnamir22hg對fls炎癥和凝血指標的影響。因此，lncrnamir22hg/mir-597-3p/arhgef形成的cerna組合可以作為ra高凝狀態(tài)治療的新靶點。

6、因此，本發(fā)明研究提示lncrna?mir22hg可作為ra高凝狀態(tài)的生物學標志物和潛在的治療靶點。進一步鑒定了lncrnamir22hg通過mir-597-3p/arhgef軸發(fā)揮cerna作用。這一發(fā)現(xiàn)提高了對ra進展機制的理解，并為ra的診療提供了新的分子靶點。

技術(shù)特征：

1.lncrnamir22hg/mir-597-3p/arhgef3組合在類風濕關(guān)節(jié)炎中的應用，其特征在于，lncrnamir22hg能夠通過競爭性結(jié)合mir-597-3p靶向arhgef3，促進ra高凝狀態(tài)和炎癥反應。

2.沉默lncrna?mir22hg的制劑在制備ra治療制劑中的應用，其特征在于，沉默所述lncrna?mir22hg，能夠通過競爭性結(jié)合mir-597-3p靶向arhgef3，從而降低炎癥反應，改善ra高凝狀態(tài)。

技術(shù)總結(jié)
lncRNA?MIR22HG/miR?597?3p/ARHGEF3組合在類風濕關(guān)節(jié)炎中的應用，屬于類風濕關(guān)節(jié)炎分子生物學領(lǐng)域。LncRNA?MIR22HG能夠通過靶向miR?597?3p調(diào)控ARHGEF3的表達，促進RA高凝狀態(tài)和炎癥反應。本發(fā)明通過實驗證明了lncRNA?MIR22HG可以發(fā)揮海綿樣作用，競爭性的與miR?597?3p結(jié)合而使其失用，進而調(diào)控相應靶基因ARHGEF3的表達，促進RA高凝狀態(tài)和炎癥反應，從而證實了其可以用于治療RA高凝狀態(tài)和炎癥反應。

技術(shù)研發(fā)人員：文建庭,劉健,萬磊,范海霞,縱瑞凱,王帆帆
受保護的技術(shù)使用者：安徽中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院（安徽省中醫(yī)院）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6