本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥材料領(lǐng)域，具體涉及一種黑水虻多肽-原花青素納米顆粒及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、原花青素屬于黃烷醇類，由于分子結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)酚羥基，因此，它也屬于多酚類化合物。原花青素具有強(qiáng)大抗氧化能力，其單體是兒茶素類化合物，包括兒茶素、表兒茶素、沒(méi)食子兒茶素、表沒(méi)食子酸兒茶素、表兒茶素沒(méi)食子酸酯和表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯等。然而，原花青素在胃腸消化道中不穩(wěn)定，生物利用率較低，對(duì)光、熱、氧氣、濕度以及ph值都很敏感，且在中性或堿性環(huán)境中穩(wěn)定性很差，易被差向異構(gòu)化和氧化，在胃腸消化道環(huán)境下也非常不穩(wěn)定。由此可見(jiàn)，如果能針對(duì)以原花青素為代表的黃酮類物質(zhì)設(shè)計(jì)載體系統(tǒng)，將其封裝于其中進(jìn)行胃腸道輸送，與載體之間形成分子間相互作用，抵御低ph值以及酶等因素對(duì)原花青素的降解，可防止其在胃中酸性條件下降解，調(diào)控其在腸道吸收部位釋放，這是提高其生物利用率的有效方法。

2、目前，納米載體運(yùn)載技術(shù)已廣泛應(yīng)用在食品、制藥、醫(yī)療和化妝品等行業(yè)，尤其是生物活性物質(zhì)的封裝。而多肽自組裝體系在此領(lǐng)域有巨大的應(yīng)用潛力，這主要得益于其多方面優(yōu)點(diǎn)，比如：分子由天然氨基酸組成，具有高的生物相容性和低毒性；分子可設(shè)計(jì)性強(qiáng)，可以自組裝形成各種形貌和尺寸的豐富的納/微米結(jié)構(gòu)；自組裝結(jié)構(gòu)易于修飾，可以方便地引入特定功能基團(tuán)和活性物等。但現(xiàn)有的研究數(shù)據(jù)中還沒(méi)有報(bào)道多肽作為原花青素的納米載體，為解決原花青素生物利用率問(wèn)題，亟需開(kāi)發(fā)多肽納米遞送體系。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于克服上述技術(shù)不足，提供一種黑水虻多肽-原花青素納米顆粒及其制備方法，解決現(xiàn)有技術(shù)中原花青素生物利用率低的技術(shù)問(wèn)題。

2、為達(dá)到上述技術(shù)目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：

3、第一方面，本發(fā)明提供一種黑水虻多肽-原花青素納米顆粒，該黑水虻多肽-原花青素納米顆粒是黑水虻多肽溶液與原花青素溶液混合攪拌均勻，再經(jīng)過(guò)離心和干燥得到的，其中黑水虻多肽與原花青素的質(zhì)量比為(0.1～0.5)：20。

4、第二方面，本發(fā)明提供一種黑水虻多肽-原花青素納米顆粒的制備方法，包括以下步驟：

5、將黑水虻多肽粉溶于水配制成黑水虻多肽溶液；將原花青素溶于水配制成原花青素溶液；

6、將黑水虻多肽溶液與原花青素溶液混合攪拌均勻，得到黑水虻多肽-原花青素納米顆粒溶液；其中黑水虻多肽與原花青素的質(zhì)量比為(0.1～0.5)：20；

7、黑水虻多肽-原花青素納米顆粒溶液再經(jīng)過(guò)離心和干燥，得到黑水虻多肽-原花青素納米顆粒。

8、優(yōu)選的，黑水虻多肽溶液的具體配制步驟包括：按10mg/ml的濃度，將黑水虻多肽粉溶于蒸餾水中，依次經(jīng)過(guò)磁力攪拌、水合、調(diào)節(jié)ph至弱堿性、加熱和冷卻，得到黑水虻多肽溶液備用。

9、進(jìn)一步優(yōu)選的，黑水虻多肽溶液的具體配制步驟中，磁力攪拌溫度為室溫，攪拌轉(zhuǎn)速為550～600r/min，攪拌時(shí)間為0.5～1.5h；水合溫度為4～8℃，水合時(shí)間為10h以上，用0.1mol/l的檸檬酸調(diào)節(jié)ph至7.2～7.8；加熱溫度為75～85℃，加熱時(shí)間為30～45min；以上參數(shù)選擇用于確保黑水虻多肽能夠充分溶解。

10、優(yōu)選的，原花青素溶液的濃度為0.1～0.5mg/ml。

11、優(yōu)選的，原花青素溶液與黑水虻多肽溶液按體積比為1:2混合，室溫下攪拌1～3h，攪拌轉(zhuǎn)速為550～600r/min；黑水虻多肽-原花青素納米顆粒溶液的離心速度為4000～5000r/min。以上參數(shù)選擇用于確保能夠打斷黑水虻多肽之間的非共價(jià)相互作用，使聚集體降解，與原花青素形成更小尺寸的粒子。

12、優(yōu)選的，黑水虻多肽粉的制備步驟包括：

13、s1、將黑水虻幼蟲(chóng)清洗后滅酶，再制成蟲(chóng)漿；

14、s2、向所得蟲(chóng)漿中加入堿性蛋白酶進(jìn)行酶解反應(yīng)；

15、s3、待酶解反應(yīng)結(jié)束后，滅酶，離心得到油脂層、酶解液層和殘?jiān)鼘?，其中酶解液層為多肽粗產(chǎn)物；

16、s4、將多肽粗產(chǎn)物通過(guò)膜分離后噴霧干燥得到黑水虻多肽粉。

17、進(jìn)一步優(yōu)選的，步驟s1中，蟲(chóng)漿的制取方法具體為：先將黑水虻幼蟲(chóng)在自然條件下放置2～3天，采用微波清洗機(jī)清洗后熱燙滅酶，將黑水虻幼蟲(chóng)粉碎后于9000～10000r/min均質(zhì)10～15min得到蟲(chóng)漿。

18、進(jìn)一步優(yōu)選的，步驟s2中，堿性蛋白酶的加入量為蟲(chóng)漿質(zhì)量的0.2～0.6％，酶解反應(yīng)條件為：45～60℃酶解3～5h。

19、進(jìn)一步優(yōu)選的，步驟s3中，滅酶為高溫滅酶，且滅酶參數(shù)為：80～95℃加熱15～20min；離心是在9000～11000r/min的條件下離心15～25min。

20、進(jìn)一步優(yōu)選的，步驟s4中，膜分離采用3000～5000da的濾膜。

21、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果包括：

22、本發(fā)明以黑水虻多肽為載體，負(fù)載原花青素形成納米顆粒，其中黑水虻多肽作為一種新型的昆蟲(chóng)源生物活性肽，具有多肽自組裝體系的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)，其適合作為遞送原花青素的載體，負(fù)載率高達(dá)85～90％，并有效提高原花青素的生物利用率，制備方法簡(jiǎn)單。

技術(shù)特征：

1.一種黑水虻多肽-原花青素納米顆粒，其特征在于，所述黑水虻多肽-原花青素納米顆粒是黑水虻多肽溶液與原花青素溶液混合攪拌均勻，再經(jīng)過(guò)離心和干燥得到的，其中黑水虻多肽與原花青素的質(zhì)量比為(0.1～0.5)：20。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黑水虻多肽-原花青素納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的黑水虻多肽-原花青素納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述黑水虻多肽溶液的具體配制步驟包括：按10mg/ml的濃度，將黑水虻多肽粉溶于蒸餾水中，依次經(jīng)過(guò)磁力攪拌、水合、調(diào)節(jié)ph至弱堿性、加熱和冷卻，得到黑水虻多肽溶液備用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的黑水虻多肽-原花青素納米顆粒的制備方法，其特征在于，黑水虻多肽溶液的具體配制步驟中，磁力攪拌溫度為室溫，攪拌轉(zhuǎn)速為550～600r/min，攪拌時(shí)間為0.5～1.5h；水合溫度為4～8℃，水合時(shí)間為10h以上，用0.1mol/l的檸檬酸調(diào)節(jié)ph至7.2～7.8；加熱溫度為75～85℃，加熱時(shí)間為30～45min。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的黑水虻多肽-原花青素納米顆粒的制備方法，其特征在于，原花青素溶液的濃度為0.1～0.5mg/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的黑水虻多肽-原花青素納米顆粒的制備方法，其特征在于，原花青素溶液與黑水虻多肽溶液按體積比為1:2混合，室溫下攪拌1～3h，攪拌轉(zhuǎn)速為550～600r/min；黑水虻多肽-原花青素納米顆粒溶液的離心速度為4000～5000r/min。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的黑水虻多肽-原花青素納米顆粒的制備方法，其特征在于，黑水虻多肽粉的制備步驟包括：

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的黑水虻多肽-原花青素納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟s1中，蟲(chóng)漿的制取方法具體為：先將黑水虻幼蟲(chóng)在自然條件下放置2～3天，采用微波清洗機(jī)清洗后熱燙滅酶，將黑水虻幼蟲(chóng)粉碎后于9000～10000r/min均質(zhì)10～15min得到蟲(chóng)漿。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的黑水虻多肽-原花青素納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟s2中，堿性蛋白酶的加入量為蟲(chóng)漿質(zhì)量的0.2～0.6％，酶解反應(yīng)條件為：45～60℃酶解3～5h。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的黑水虻多肽-原花青素納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟s3中，滅酶為高溫滅酶，且滅酶參數(shù)為：80～95℃加熱15～20min；離心是在9000～11000r/min的條件下離心15～25min；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)一種黑水虻多肽?原花青素納米顆粒及其制備方法，包括以下步驟：將黑水虻多肽粉溶于水配制成黑水虻多肽溶液；將原花青素溶于水配制成原花青素溶液；將黑水虻多肽溶液與原花青素溶液混合攪拌均勻，得到黑水虻多肽?原花青素納米顆粒溶液；其中黑水虻多肽與原花青素的質(zhì)量比為(0.1～0.5)：20；黑水虻多肽?原花青素納米顆粒溶液再經(jīng)過(guò)離心和干燥，得到黑水虻多肽?原花青素納米顆粒。本發(fā)明以黑水虻多肽為載體，負(fù)載原花青素形成納米顆粒，負(fù)載率高，并有效提高原花青素的生物利用率，制備方法簡(jiǎn)單。

技術(shù)研發(fā)人員：楊芳,謝辰陽(yáng),王存文
受保護(hù)的技術(shù)使用者：武漢工程大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2