本發(fā)明涉及從天然產(chǎn)物中提取抗纖毛蟲藥物的方法，尤其涉及一種抗纖毛蟲用療效高毒性小的補(bǔ)骨脂提取物的制備方法。

背景技術(shù)：

1、隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，集約化養(yǎng)殖導(dǎo)致的病害問題也日益增多。其中，由原生動(dòng)物纖毛蟲（如小瓜蟲、車輪蟲和四膜蟲）引起的水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病，嚴(yán)重阻礙了水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。特別是四膜蟲，主要感染孔雀魚，會(huì)導(dǎo)致魚體體表黏液增加，鰭條潰爛缺損等癥狀，在嚴(yán)重的情況下，可進(jìn)展為影響內(nèi)臟器官的全身性感染，并最終導(dǎo)致孔雀魚死亡。此外，四膜蟲也可感染其他觀賞魚類和養(yǎng)殖魚類，給世界范圍內(nèi)的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，針對(duì)四膜蟲感染，最普遍的防治選擇是使用化學(xué)藥物，比如煙酰胺、阿苯達(dá)唑和氯喹等，然而，化學(xué)藥物的頻繁使用存在水產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)和環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)。?中草藥由于其生物降解性和環(huán)保性，在疾病防治方面越來越受到養(yǎng)殖戶的歡迎。

2、補(bǔ)骨脂（ psoralea?corylifolia?l.）為豆科補(bǔ)骨脂屬植物的干燥成熟果實(shí)，是一種臨床應(yīng)用歷史豐富的傳統(tǒng)中草藥，主要包括香豆素類、苯并呋喃類、黃酮類及單萜酚類化學(xué)成分，具有抗腫瘤、抗氧化、抗菌、抗炎等多種藥理作用。先前的研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂中的補(bǔ)骨脂乙素、新補(bǔ)骨脂異黃酮等黃酮類化合物在體內(nèi)外對(duì)梨形四膜蟲都具有很好的抗蟲效果，然而由于上述黃酮類化合物制備成本很高，在實(shí)際應(yīng)用中很難被推廣。相比之下，使用中草藥提取物抗蟲的方式相對(duì)經(jīng)濟(jì)，容易獲取，不需要過度的分離化合物單體，但是提取物所含成分復(fù)雜，既包含有效成分又包含毒性成分。如何制備一種抗纖毛蟲用療效高毒性的補(bǔ)骨脂提取物，是本領(lǐng)技術(shù)領(lǐng)域亟待解決的技術(shù)難題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述技術(shù)問題，提供一種抗纖毛蟲用療效高毒性的補(bǔ)骨脂提取物的制備方法。

2、本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：一種抗纖毛蟲用療效高毒性的補(bǔ)骨脂提取物的制備方法，依次按照如下步驟進(jìn)行：

3、步驟1.乙酸乙酯提?。菏褂靡宜嵋阴ト軇?duì)補(bǔ)骨脂干燥粉進(jìn)行浸泡提取，浸泡后收集的提取液先在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中初步濃縮，再使用氮吹儀去除殘留溶劑，得到補(bǔ)骨脂乙酸乙酯提取物。

4、步驟2.正己烷洗脫：使用正己烷溶劑對(duì)獲得的補(bǔ)骨脂乙酸乙酯提取物進(jìn)行浸泡后過濾，收集濾液，得到補(bǔ)骨脂提取物。

5、優(yōu)選的技術(shù)方案是所述步驟1是將補(bǔ)骨脂粉碎，過篩并在烘箱中干燥；將補(bǔ)骨脂干燥粉放入容器中，加入乙酸乙酯浸泡后收集濾液，所述補(bǔ)骨脂干燥粉與乙酸乙酯用量比為1g:10ml，浸泡時(shí)間為1小時(shí)；將濾液在真空下以45℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，再使用氮吹儀完全去除溶劑，獲得補(bǔ)骨脂乙酸乙酯提取物。

6、優(yōu)選的技術(shù)方案是所述步驟2是補(bǔ)骨脂乙酸乙酯提取物與正己烷的用量比為1g:10ml，浸泡1?h后過濾。

7、本發(fā)明是依次使用乙酸乙酯和正己烷對(duì)補(bǔ)骨脂進(jìn)行分步提取，得到毒性更低、療效更高的抗纖毛蟲補(bǔ)骨脂提取物，制備方法簡(jiǎn)單、成本低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：所述補(bǔ)骨脂提取物體外抗四膜蟲最小殺滅濃度為15?mg/l，在動(dòng)物水平上對(duì)孔雀魚的lc50-24?h值為47.68mg/l，在體內(nèi)對(duì)四膜蟲的ec50-24?h值為22.48?mg/l，體內(nèi)抗蟲的最佳給藥濃度和時(shí)間分別為40?mg/l和24?h。

技術(shù)特征：

1.一種抗纖毛蟲用療效高毒性小的補(bǔ)骨脂提取物的制備方法，其特征在于依次按照如下步驟進(jìn)行：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗纖毛蟲用療效高毒性小的補(bǔ)骨脂提取物的制備方法，其特征在于所述步驟1是將補(bǔ)骨脂粉碎，過篩并在烘箱中干燥；將補(bǔ)骨脂干燥粉放入容器中，加入乙酸乙酯浸泡后收集濾液，所述補(bǔ)骨脂干燥粉與乙酸乙酯用量比為1g:10ml，浸泡時(shí)間為1小時(shí)；將濾液在真空下以45℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，再使用氮吹儀完全去除溶劑，獲得補(bǔ)骨脂乙酸乙酯提取物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗纖毛蟲用療效高毒性小的補(bǔ)骨脂提取物的制備方法，其特征在于所述步驟2是補(bǔ)骨脂乙酸乙酯提取物與正己烷的用量比為1g:10ml，浸泡1?h后過濾。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開一種抗纖毛蟲用療效高毒性小的補(bǔ)骨脂提取物的制備方法，按照如下步驟進(jìn)行：乙酸乙酯提?。菏褂靡宜嵋阴ト軇?duì)補(bǔ)骨脂干燥粉進(jìn)行浸泡提取，浸泡后收集的提取液先在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中初步濃縮，再使用氮吹儀去除殘留溶劑，得到補(bǔ)骨脂乙酸乙酯提取物；正己烷洗脫：使用正己烷溶劑對(duì)獲得的補(bǔ)骨脂乙酸乙酯提取物進(jìn)行浸泡后過濾，收集濾液，得到補(bǔ)骨脂提取物。得到毒性更低、療效更高的抗纖毛蟲補(bǔ)骨脂提取物，制備方法簡(jiǎn)單、成本低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：所述補(bǔ)骨脂提取物體外抗四膜蟲最小殺滅濃度為15?mg/L，在動(dòng)物水平上對(duì)孔雀魚的LC<subgt;50</subgt;?24?h值為47.68?mg/L，在體內(nèi)對(duì)四膜蟲的EC<subgt;50</subgt;?24?h值為22.48?mg/L，體內(nèi)抗蟲的最佳給藥濃度和時(shí)間分別為40?mg/L和24?h。

技術(shù)研發(fā)人員：葉仕根,李毅豪,周維佳,崔艷紅
受保護(hù)的技術(shù)使用者：大連海洋大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6