本發(fā)明涉及屬分子生物學和肝病防治，具體地說，是關于一種治療肝纖維化、肝硬化的基因編輯人臍帶間充質干細胞及其應用。

背景技術：

1、肝硬化是各種慢性肝病進展至以肝臟彌漫性纖維化、假小葉形成、再生結節(jié)及肝內外血管增生為特征的病理階段。代償期肝硬化無明顯臨床癥狀，失代償期以門靜脈高壓和肝功能嚴重損傷為特征，患者常因并發(fā)腹水、消化道出血、肝性腦病、肝腎綜合征或癌變等導致多臟器功能衰竭而死亡。目前，肝移植是國際公認的終末期肝硬化的最佳治療手段，但受供體缺乏、排異反應以及免疫抑制劑毒副作用等限制。因此，探尋肝移植的替代療法顯得尤為迫切。近年來，干細胞移植成為肝硬化治療研究的新熱點，尤其人臍帶間充質干細胞(huc-mscs)具有易獲取、無排異反應及倫理問題等優(yōu)勢，已在乙肝肝硬化、酒精性肝硬化等治療中初顯成效，但如何調控移植后的huc-mscs精準分化以提高療效，尚有待于深入研究。

2、numb是進化上高度保守的干細胞命運決定因子，通過有絲分裂時的不對稱分配控制干細胞的命運。近年來，numb作為一種腫瘤抑制因子受到廣泛關注，如提高numb表達水平可抑制肝癌、乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤等，但對于其在肝硬化治療中的作用知之甚少。shu等報道numb基因敲除小鼠予以3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氫吡啶(ddc)飲食喂養(yǎng)6w后，可見門脈周圍廣泛的肝祖細胞增殖及膽管反應，且肝纖維化程度較野生型小鼠更為嚴重，表明numb缺失可促進實驗性肝纖維化的進展。我們前期研究發(fā)現自身免疫性肝炎、乙型肝炎和原發(fā)性膽汁性膽管炎相關肝硬化患者的肝活檢組織中numb蛋白水平顯著下降，分別為健康人群的51.9％、25.1％和25.3％，提示肝硬化患者肝臟numb蛋白水平明顯不足。根據我們的研究結果，認為過表達numb基因的huc-mscs(huc-mscsnumb-oe)在肝纖維化、肝硬化治療中可發(fā)揮重要作用。并且經查證目前尚無本申請內容相關專利公布，亦未發(fā)現與本專利申請相同的基因編輯細胞在肝病領域應用的文獻報道。

技術實現思路

1、本發(fā)明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種治療肝纖維化、肝硬化的基因編輯人臍帶間充質干細胞及其應用。

2、第一方面，本發(fā)明提供了過表達numb基因的間充質干細胞在制備治療慢性肝病藥物中的應用。

3、作為一個優(yōu)選例，所述的慢性肝病病理表現為肝細胞排列紊亂、廣泛性的壞死、肝小葉的結構破壞、炎性細胞的浸潤、膽管細胞增生、纖維間隔中的一種或多種，所述的間充質干細胞為人臍帶間充質干細胞。

4、作為另一優(yōu)選例，所述的慢性肝病為肝炎、慢加急性肝衰竭、肝纖維化、肝硬化。

5、作為另一優(yōu)選例，所述過表達numb基因的huc-mscs減輕膽管細胞增殖及膽管反應、改善血清肝功能及膽汁淤積程度、抑制肝纖維化進展、促進肝組織修復。

6、作為另一優(yōu)選例，所述藥物為生物治療藥物、化學藥物或植物藥物。

7、第二方面，本發(fā)明提供了一種基因工程修飾的間充質干細胞，所述基因工程修飾的間充質干細胞為過表達numb基因的間充質干細胞。

8、作為一個優(yōu)選例，所述的間充質干細胞為人臍帶間充質干細胞。

9、第三方面，本發(fā)明提供了過表達numb基因的間充質干細胞，是由下列方法制備得到的：

10、步驟a、獲取原代間充質干細胞；

11、步驟b、原代間充質干細胞的傳代培養(yǎng)；

12、步驟c、numb基因過表達慢病毒的構建；

13、步驟d、numb基因過表達慢病毒轉染間充質干細胞，并篩選出穩(wěn)轉細胞系，得到過表達numb基因的間充質干細胞。

14、第四方面，本發(fā)明提供了一種治療慢性肝病的藥物組合物，以過表達numb基因的間充質干細胞為唯一活性組分。

15、作為一個優(yōu)選例，所述的慢性肝病為肝炎、慢加急性肝衰竭、肝纖維化、肝硬化。

16、本發(fā)明優(yōu)點在于：本發(fā)明中提供了一種新的治療肝纖維化、肝硬化的huc-msc：過表達numb基因的huc-mscs(huc-mscsnumb-oe)可劑量依賴性地抑制肝臟炎癥反應及肝纖維化進展；劑量依賴性地抑制膽管反應，改善膽汁淤積；并可劑量依賴性地促進肝細胞增殖，提高血清白蛋白含量。且以上治療作用均優(yōu)于同等劑量的huc-mscs。表明huc-mscsnumb-oe既可直接用作治療肝纖維化、肝硬化的細胞，也可以此為工具篩選治療肝纖維化、肝硬化的生物或化學藥品。

技術特征：

1.過表達numb基因的間充質干細胞在制備治療慢性肝病藥物中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的慢性肝病病理表現為肝細胞排列紊亂、廣泛性的壞死、肝小葉的結構破壞、炎性細胞的浸潤、膽管細胞增生、纖維間隔中的一種或多種，所述的間充質干細胞為人臍帶間充質干細胞。

3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于，所述的慢性肝病為肝炎、慢加急性肝衰竭、肝纖維化、肝硬化。

4.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于，所述過表達numb基因的huc-mscs減輕膽管細胞增殖及膽管反應、改善血清肝功能及膽汁淤積程度、抑制肝纖維化進展、促進肝組織修復。

5.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于，所述藥物為生物治療藥物、化學藥物或植物藥物。

6.一種基因工程修飾的間充質干細胞，其特征在于，所述基因工程修飾的間充質干細胞為過表達numb基因的間充質干細胞。

7.根據權利要求6所述的基因工程修飾的間充質干細胞，其特征在于，所述的間充質干細胞為人臍帶間充質干細胞。

8.過表達numb基因的間充質干細胞，是由下列方法制備得到的：

9.一種治療慢性肝病的藥物組合物，以權利要求6或7所述的過表達numb基因的間充質干細胞為唯一活性組分。

10.根據權利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，所述的慢性肝病為肝炎、慢加急性肝衰竭、肝纖維化、肝硬化。

技術總結
本發(fā)明涉及過表達Numb基因的間充質干細胞在制備治療慢性肝病藥物中的應用。本發(fā)明還提供了一種基因工程修飾的間充質干細胞，所述基因工程修飾的間充質干細胞為過表達Numb基因的間充質干細胞。本發(fā)明提供了一種新的治療慢加急性肝衰竭、肝纖維化、肝硬化的人臍帶間充質干細胞(hUC?MSC)：過表達Numb基因的hUC?MSCs可劑量依賴性地抑制肝臟炎癥反應及肝纖維化進展；劑量依賴性地抑制膽管反應，改善膽汁淤積；并可劑量依賴性地促進肝細胞增殖，提高血清白蛋白含量。且以上治療作用均優(yōu)于同等劑量的hUC?MSCs。表明hUC?MSCs<supgt;Numb?OE</supgt;既可直接用作治療慢加急性肝衰竭、肝纖維化、肝硬化的細胞，也可以此為工具篩選治療肝纖維化、肝硬化的生物或化學藥品。

技術研發(fā)人員：慕永平,張士豪,邢飛飛,宗夢瑤,楊明艷,劉平,陳佳美,劉偉
受保護的技術使用者：上海中醫(yī)藥大學附屬曙光醫(yī)院
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/6