本發(fā)明屬于納米藥物遞送系統(tǒng)抗菌，具體涉及一種基于脂蛋白復合物靜電吸附介孔二氧化硅納米材料的制備方法及抗菌佐劑應用。

背景技術：

1、目前，抗生素是治療臨床細菌感染的有效藥物，但抗生素的濫用導致細菌對抗生素產(chǎn)生耐藥性，影響藥物的治療效果，甚至導致無藥可用的困境。

2、1995年發(fā)現(xiàn)的脂蛋白復合物hamlet/bamlet由人/牛α-乳清白蛋白和油酸構成，最初被發(fā)現(xiàn)可以殺滅癌細胞用于腫瘤治療。研究表明hamlet/bamlet除抗腫瘤外，還可以通過與細胞凋亡的機制殺滅細菌。同時具有作為抗生素增強劑的潛力，恢復肺炎鏈球菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素的敏感性，但對耐藥細菌的研究鮮有報道。通常hamlet/bamlet通過色譜柱交換法或透析方法制備。

3、介孔二氧化硅(msn)具有較高的比表面積，且粒徑和形貌可調(diào)控，表面易官能化。作為理想的納米遞送平臺，msn能夠通過靜電吸附或化學鍵合有效地負載小分子、蛋白質(zhì)等藥物。msn的粒徑是影響其表面吸附蛋白成分和結(jié)構的關鍵因素。在生物體液中，不同粒徑二氧化硅納米顆粒表面吸附形成不同的血清蛋白冠，所形成的蛋白冠可能直接影響納米粒子在生物體中的命運。

4、針對耐藥菌的新型抗生素藥物的開發(fā)停滯不前，不足以應對日益增長的抗生素耐藥性威脅。

5、hamelt/bamlet作為抗菌劑的mic在mg/ml內(nèi)，傳統(tǒng)制備方法耗費大量人力物力，阻礙了其實際應用。因此，研發(fā)納米遞送載體通過靜電吸附脂蛋白復合物大大降低了制備成本與時間。但未考慮選擇和制備合適尺寸的納米遞送載體，這將極大程度的影響脂蛋白復合物發(fā)揮作用的效果。

6、因此，迫切需要恢復耐藥細菌對傳統(tǒng)抗生素的敏感性，為緩解抗生素耐藥危機提供新的策略。

技術實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有問題的不足，本發(fā)明的目的是提供一種基于靜電作用穩(wěn)定的介孔二氧化硅脂蛋白復合物載藥系統(tǒng)及抗菌佐劑應用。

2、本發(fā)明解決其技術問題采用的技術方案是：

3、第一方面，本發(fā)明請求保護一種基于靜電作用穩(wěn)定的介孔二氧化硅脂蛋白復合物載藥系統(tǒng)的制備方法，所述方法包括如下步驟：

4、第一步，準備氨基化介孔二氧化硅納米粒子；

5、第二步，將抗氧化藥物均勻分散于乙醇中，加入氨基化介孔二氧化硅納米粒子，于室溫下攪拌，干燥后即得負載藥物的介孔二氧化硅納米粒子；

6、第三步，將負載藥物的介孔二氧化硅納米粒子超聲均勻分散于磷酸鹽緩沖溶液中，向其中加入牛α-乳清白蛋白(bla)，振蕩孵育；

7、第四步，待孵育結(jié)束后，加入油酸(oa)，再靜置孵育，反應后干燥即得脂蛋白包裹介孔二氧化硅負載抗氧化藥物復合材料。

8、在具體的實施方案中，第一步中，所述氨基化介孔二氧化硅為商業(yè)購買或自行制備。

9、在更具體的實施方案中，本發(fā)明提供了一種氨基化介孔二氧化硅的制備方法，所述制備方法如下：

10、(1)稱取十六烷基三甲基溴化銨(ctab)和堿于去離子水中80～95℃反應0.1～1h，反應過程中持續(xù)攪拌；后加入正硅酸四乙酯(teos)繼續(xù)反應1～2h經(jīng)離心收集；

11、(2)將步驟(1)中得到的干燥產(chǎn)物于馬弗爐550±50℃煅燒4-8h優(yōu)選6h以去除十六烷基三甲基溴化銨(ctab)得到；

12、(3)將步驟(2)中收集產(chǎn)物分散于乙醇中，加入3-氨基丙基三乙氧基硅烷(aptes)，于78±5℃下冷凝回流12-24h；

13、(4)將步驟(3)中產(chǎn)物離心收集，洗滌干凈后，干燥后得msn-nh2。

14、在更具體的實施方案中，所述步驟(1)中，堿為三乙醇胺(tea)或naoh等等。通過改變tea或naoh加入量，可以制備不同尺寸的介孔二氧化硅納米載體。例如，步驟(1)加入71.2μl?tea，經(jīng)過后續(xù)處理步驟可以獲得25nm±10nm大小的介孔二氧化硅納米載體；步驟(1)加入50μl?tea，經(jīng)過后續(xù)處理步驟可以獲得50nm±5nm大小的介孔二氧化硅納米載體。步驟(1)先加入0.2g?ctab和700μl?naoh(2.0m)，于96ml去離子水中80℃反應0.5h，反應過程中持續(xù)攪拌；后滴加1.5ml正硅酸四乙酯(teos)繼續(xù)反應1h經(jīng)離心收集，經(jīng)過后續(xù)處理步驟可以獲得100nm±10nm。

15、在具體的實施方案中，所述步驟(3)中，msn與乙醇的質(zhì)量體積比為100±30mg：20±5ml。在具體的實施方案中，所述第二步中的抗氧化藥物為姜黃素。

16、優(yōu)選的，所述第二步的方法具體如下：

17、(1)將疏水性抗氧化藥物姜黃素(cur)分散于乙醇中，可按與cur質(zhì)量比為2：1～1：1加入msn-nh2，反應溫度為25±5℃，反應時間至少為24h；

18、(2)離心收集反應產(chǎn)物，去離子水洗滌，干燥后得負載姜黃素的介孔二氧化硅納米顆粒(msn-nh2/cur)。

19、在具體的實施方案中，所述msn-nh2與cur質(zhì)量比為1：1。

20、在具體的實施方案中，第四步中，油酸與α-乳清白蛋白的摩爾比為30～50：1優(yōu)選40：1，反應條件為：反應溫度45±5℃，反應時間為15±5min；采用超速離心的方式收集沉淀后經(jīng)冷凍干燥獲得固體材料(bmsn/cur)。

21、第二方面，本發(fā)明保護一種上述方法制備得到的脂蛋白包裹介孔二氧化硅負載抗氧化藥物復合材料(又稱脂蛋白復合納米粒子)。

22、第三方面，本發(fā)明保護上述基于脂蛋白包裹介孔二氧化硅負載抗氧化藥物復合材料在制備抗生素佐劑中的應用。

23、在具體的實施方案中，所述抗生素佐劑還含有藥學上可接受的輔料。

24、作為抗生素佐劑的活性成分與氨基糖苷類抗生素聯(lián)用可以恢復mrsa對傳統(tǒng)抗生素的敏感性，負載在孔道中的抗氧化藥物緩慢釋放，清除感染部位生成的自由基利于細菌感染部位治療與恢復。

25、有益效果

26、本發(fā)明所獲得的脂蛋白包裹介孔二氧化硅負載抗氧化藥物復合材料納米粒子，作為抗生素佐劑的活性成分能夠恢復mrsa對氨基糖苷類抗生素的敏感性。

27、本發(fā)明所述的脂蛋白包裹介孔二氧化硅負載抗氧化藥物復合材料納米粒子制備方法簡單，對正常細胞毒性小，生物相容性良好。負載抗氧化藥物可以清除自由基，加速傷口感染部位恢復。

技術特征：

1.一種基于靜電作用穩(wěn)定的介孔二氧化硅脂蛋白復合物載藥系統(tǒng)的制備方法，所述方法包括如下步驟：

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述氨基化介孔二氧化硅為商業(yè)購買或自行制備。

3.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于，所述氨基化介孔二氧化硅的制備方法具體如下：

4.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，堿為三乙醇胺或naoh；

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二步中的抗氧化藥物為姜黃素。

6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，所述第二步的方法具體如下：

7.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，所述第四步的方法具體如下：油酸與α-乳清白蛋白的摩爾比為30～50：1優(yōu)選40：1，反應條件為：反應溫度45±5℃，反應時間為15±5min；

8.權利要求1-7任一所述的方法制備得到的脂蛋白包裹介孔二氧化硅負載抗氧化藥物復合材料。

9.權利要求8所述的基于脂蛋白包裹介孔二氧化硅負載抗氧化藥物復合材料在制備抗生素佐劑中的應用。

10.根據(jù)權利要求9所述的應用，其特征在于，所述抗生素佐劑還含有藥學上可接受的輔料。

技術總結(jié)
本發(fā)明公開一種基于脂蛋白復合物靜電吸附介孔二氧化硅納米材料的制備方法及抗菌佐劑應用；所述方法如下：第一步，準備氨基化介孔二氧化硅；第二步，將抗氧化藥物均勻分散于乙醇中，加入氨基化介孔二氧化硅，于室溫下攪拌，干燥后即得負載藥物的介孔二氧化硅；第三步，將負載藥物的介孔二氧化硅超聲均勻分散于磷酸鹽緩沖溶液中，向其中加入牛α?乳清白蛋白，振蕩孵育；第四步，待孵育結(jié)束后，加入油酸，靜置孵育，反應后干燥即得脂蛋白包裹介孔二氧化硅負載抗生素藥物復合材料。本發(fā)明所獲得的脂蛋白包裹介孔二氧化硅負載抗生素藥物復合材料，作為抗生素佐劑能夠恢復MRSA對氨基糖苷類抗生素的敏感性。

技術研發(fā)人員：陳進,李雨晴,蔡鈴
受保護的技術使用者：南京醫(yī)科大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/30