本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體涉及一種工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡、黑色素瘤疫苗及制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、黑色素瘤疫苗通過(guò)展示黑色素瘤產(chǎn)生的特定腫瘤抗原來(lái)激發(fā)身體的免疫反應(yīng)，使機(jī)體產(chǎn)生對(duì)抗腫瘤的免疫效應(yīng)和長(zhǎng)期免疫記憶，從而達(dá)到阻止腫瘤的生長(zhǎng)、擴(kuò)散甚至是復(fù)發(fā)的作用。如何精確選擇有效的抗原以激發(fā)特異性免疫反應(yīng)，以及如何設(shè)計(jì)和開(kāi)發(fā)能夠提高疫苗效力和安全性的新型疫苗載體，是當(dāng)前黑色素瘤疫苗的研究重點(diǎn)?，F(xiàn)有的包含所有黑色素瘤抗原的全細(xì)胞疫苗理論上可以防止腫瘤逃避免疫攻擊，但其免疫效果還不夠強(qiáng)，需要改進(jìn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡、黑色素瘤疫苗及制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡能夠制備黑色素瘤疫苗，安全性好，穩(wěn)定性強(qiáng)，有良好的免疫和抗黑色素瘤效果。

2、本發(fā)明提供了一種工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡，所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡負(fù)載有干擾素基因刺激因子激動(dòng)劑和氧化處理的黑色素瘤細(xì)胞來(lái)源的全抗原工程囊泡。

3、優(yōu)選的是，所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡的粒徑為150～200nm。

4、優(yōu)選的是，所述干擾素基因刺激因子激動(dòng)劑包括diabzi。

5、優(yōu)選的是，所述氧化處理的黑色素瘤細(xì)胞來(lái)源的全抗原工程囊泡的制備方法包括以下步驟：

6、將黑色素瘤細(xì)胞進(jìn)行次氯酸氧化處理，得到氧化處理后的黑色素瘤細(xì)胞；

7、將氧化處理后的黑色素瘤細(xì)胞進(jìn)行孵育，得到孵育后的黑色素瘤細(xì)胞；

8、將孵育后的黑色素瘤細(xì)胞采用擠壓法進(jìn)行膜過(guò)濾，得到氧化處理的黑色素瘤細(xì)胞來(lái)源的全抗原工程囊泡。

9、優(yōu)選的是，所述氧化處理使用的次氯酸的濃度為300～450μm。

10、本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡的制備方法，包括以下步驟：

11、將樹(shù)突狀細(xì)胞與氧化處理的黑色素瘤細(xì)胞來(lái)源的全抗原工程囊泡混合進(jìn)行孵育，得到負(fù)載有氧化處理的黑色素瘤細(xì)胞來(lái)源的全抗原工程囊泡的樹(shù)突狀細(xì)胞；

12、將負(fù)載有氧化處理的黑色素瘤細(xì)胞來(lái)源的全抗原工程囊泡的樹(shù)突狀細(xì)胞進(jìn)行洗滌，將細(xì)胞刮下，得到細(xì)胞懸液，離心，得到沉淀；

13、將沉淀與干擾素基因刺激因子激動(dòng)劑混合，采用梯度擠出法進(jìn)行擠壓處理，得到工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡。

14、優(yōu)選的是，所述孵育的過(guò)程中，氧化處理的黑色素瘤細(xì)胞來(lái)源的全抗原工程囊泡的蛋白濃度為5～75μg/ml；樹(shù)突狀細(xì)胞的密度為5.0×105～2.0×106個(gè)/ml。

15、優(yōu)選的是，所述干擾素基因刺激因子激動(dòng)劑的濃度為0.001～2.2μg/ml。

16、本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡或上述技術(shù)方案所述制備方法制備得到的工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡在制備預(yù)防和/或治療黑色素瘤的藥物中的應(yīng)用。

17、本發(fā)明還提供了一種黑色素瘤疫苗，包括活性成分和藥學(xué)上可接受的輔料，活性成分包括上述技術(shù)方案所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡或上述技術(shù)方案所述制備方法制備得到的工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡。

18、本發(fā)明提供了一種工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡。本發(fā)明所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡能夠制備黑色素瘤疫苗，安全性好，在反復(fù)凍融后還能保持較強(qiáng)的穩(wěn)定性，有良好的抗黑色素瘤效果，且對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞有促成熟效果，并將抗原有效呈遞到淋巴細(xì)胞，促進(jìn)淋巴細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤免疫作用，在黑色素瘤b16荷瘤小鼠模型中，通過(guò)皮下注射工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡，能夠引起強(qiáng)大的腫瘤特異性t細(xì)胞免疫反應(yīng)，重塑腫瘤微環(huán)境，并有效抑制腫瘤生長(zhǎng)。本發(fā)明所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡易被抗原呈遞細(xì)胞(antigen-presenting?cells,apc)識(shí)別并被dc呈遞到t細(xì)胞，能刺激腫瘤免疫微環(huán)境中的促進(jìn)型免疫細(xì)胞增強(qiáng)免疫反應(yīng)。通過(guò)檢測(cè)dcs細(xì)胞的表面標(biāo)志物的表達(dá)情況，得到所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡有利于促進(jìn)dcs分化成熟，利于抗原在體內(nèi)的有效呈遞。對(duì)黑色素瘤疫苗進(jìn)行穩(wěn)定性檢測(cè)，結(jié)果表明，所述黑色素瘤疫苗在4℃和在-80℃經(jīng)過(guò)儲(chǔ)存和凍融過(guò)程條件下保持良好的穩(wěn)定性，pdi值均在0.1以下的水平，證明粒徑分布均勻粒徑仍然能維持。

技術(shù)特征：

1.一種工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡，其特征在于，所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡負(fù)載有干擾素基因刺激因子激動(dòng)劑和氧化處理的黑色素瘤細(xì)胞來(lái)源的全抗原工程囊泡。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡，其特征在于，所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡的粒徑為150～200nm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡，其特征在于，所述干擾素基因刺激因子激動(dòng)劑包括diabzi。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡，其特征在于，所述氧化處理的黑色素瘤細(xì)胞來(lái)源的全抗原工程囊泡的制備方法包括以下步驟：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡，其特征在于，所述氧化處理使用的次氯酸的濃度為300～450μm。

6.權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡的制備方法，包括以下步驟：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述孵育的過(guò)程中，氧化處理的黑色素瘤細(xì)胞來(lái)源的全抗原工程囊泡的蛋白濃度為5～75μg/ml；樹(shù)突狀細(xì)胞的密度為5.0×105～2.0×106個(gè)/ml。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述干擾素基因刺激因子激動(dòng)劑的濃度為0.001～2.2μg/ml。

9.權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡或權(quán)利要求6～8任一項(xiàng)所述制備方法制備得到的工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡在制備預(yù)防和/或治療黑色素瘤的藥物中的應(yīng)用。

10.一種黑色素瘤疫苗，包括活性成分和藥學(xué)上可接受的輔料，其特征在于，活性成分包括權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡或權(quán)利要求6～8任一項(xiàng)所述制備方法制備得到的工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡、黑色素瘤疫苗及制備方法和應(yīng)用，具體屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡負(fù)載有干擾素基因刺激因子激動(dòng)劑和氧化處理的黑色素瘤細(xì)胞來(lái)源的全抗原工程囊泡。本發(fā)明所述工程化仿生納米樹(shù)突狀細(xì)胞囊泡能夠制備黑色素瘤疫苗，安全性好，穩(wěn)定性強(qiáng)，有良好的抗黑色素瘤效果。

技術(shù)研發(fā)人員：陳中建,陸家葉,臺(tái)宗光,朱全剛,劉俊,趙穎超,繆豐澤,孟煜,丁煒宏
受保護(hù)的技術(shù)使用者：上海市皮膚病醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2