本申請(qǐng)涉及天然分子芫花酯甲應(yīng)用，特別是一種用于促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的芫花酯甲制劑及其方法。

背景技術(shù)：

1、

2、目前腫瘤免疫治療已成為傳統(tǒng)治療之外的重要治療手段，甚至認(rèn)為是最有可能攻克癌癥的治療方式，其中靶向pd-1/pd-l1，ctla-4免疫檢查點(diǎn)抑制劑的治療在實(shí)體瘤中展現(xiàn)出了一定的治療效果，但是總體腫瘤病人的響應(yīng)率僅有5％-25％，急需新的腫瘤免疫治療分子的出現(xiàn)；此外過(guò)繼t細(xì)胞療法在世界范圍內(nèi)取得了令人矚目的成功，尤其是car-t細(xì)胞療法，然而其安全性一直備受爭(zhēng)議，比如fda于2023年11月28日宣布開(kāi)始調(diào)查car-t治療后繼發(fā)性癌癥的嚴(yán)重風(fēng)險(xiǎn)，其中潛在風(fēng)險(xiǎn)適用于所有目前批準(zhǔn)的car-t療法，包括吉利德科學(xué)(gilead?sciences)旗下kite?pharma的yescarta和tecartus，諾華(novartis)的kymriah和bristol?myers?squibb的breyanzi，強(qiáng)生(johnson&johnson)和legend?biotech的carvykti；并且很快就在2024年1月24日將所有bcma和cd19靶向的car-t細(xì)胞治療標(biāo)記了最高級(jí)別的黑框警告；自此使用病毒載體導(dǎo)入外源核酸修飾的car-t、tcr-t等細(xì)胞治療的繼發(fā)性癌癥風(fēng)險(xiǎn)已是安全性需求的最大障礙，急需探索新的細(xì)胞治療方式。

3、天然小分子調(diào)節(jié)的t淋巴細(xì)胞免疫治療相比抗體藥物，如靶向pd-1/pd-l1、ctla-4的蛋白制劑，或外源核酸修飾的細(xì)胞治療，如car-t、tcr-t過(guò)繼細(xì)胞治療，有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

4、芫花酯甲，也稱(chēng)為芫花萜，是一種從瑞香科植物芫花中提取的二萜類(lèi)化合物，具有顯著的抗癌和致流產(chǎn)作用。芫花酯甲的分子式為c37h44o10。如中王玉玨,尚新悅,姚國(guó)棟.芫花酯甲的藥理作用與臨床應(yīng)用[j].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2020,25(10):1188-1194.中公開(kāi)了“1986年，hall等發(fā)現(xiàn)芫花酯甲抑制dna的合成是其抗癌作用機(jī)理之一。芫花酯甲主要作用于細(xì)胞分裂s期，通過(guò)多位點(diǎn)抑制dna的合成，從而起到抗腫瘤作用。1992年，張德昌等發(fā)現(xiàn)芫花酯甲是蛋白激酶c(proteinkinasec，pkc)受體特異性拮抗劑。實(shí)驗(yàn)指出花酯甲選擇性地抑制pdbu對(duì)pkc的激活作用并呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系，對(duì)pkc本身卻無(wú)影響2006年，zhang等對(duì)花酷甲抗癌活性進(jìn)行深入研究，發(fā)現(xiàn)對(duì)dna拓?fù)洚悩?gòu)酶i(dnatopoi)的抑制可能是瑞香二萜酯(包括芫花酯甲)的另一抗腫瘤機(jī)制。對(duì)dna?topo?i的抑制活性實(shí)驗(yàn)中與陽(yáng)性對(duì)照藥物羥基喜樹(shù)堿(ic50＝48.0μmol/l)相比，芫花酯甲ic50為40.0μmol/l，表現(xiàn)為中等抑制活性，后續(xù)實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)瑞香烷型二萜類(lèi)化合物是一種具有新型結(jié)構(gòu)的dna?topo?i抑制劑。因此，芫花酯甲可以通過(guò)作用于多種酶位點(diǎn),抑制dna和蛋白質(zhì)合成,同時(shí)調(diào)控細(xì)胞調(diào)亡基因水平,多途徑抑制腫瘤生長(zhǎng),此機(jī)制使芫花酯甲在多種腫瘤抑制試驗(yàn)均有較好表現(xiàn)?！钡F(xiàn)有研究并未提出芫花酯甲具有促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。

5、另如cn201280035568.6中公開(kāi)的芫花酯甲用途為可有效增加th1免疫細(xì)胞中細(xì)胞因子的分泌，并可阻抑特應(yīng)癥小鼠模型中的特應(yīng)癥。但該用途并不顯示芫花酯甲具有促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。

6、公開(kāi)于背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對(duì)本發(fā)明的總體背景的理解，而不應(yīng)當(dāng)被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本申請(qǐng)針對(duì)上述技術(shù)問(wèn)題提供了一種用于促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的芫花酯甲制劑及其方法，該制劑能具有促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞。

2、本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N用于促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的芫花酯甲制劑，包括：濃度大于200pg/ml的芫花酯甲。采用該濃度的芫花酯甲制劑能實(shí)現(xiàn)促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的效果，該物質(zhì)來(lái)源天然，能減少對(duì)人體的損傷的同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺滅。

3、優(yōu)選地，包括：濃度為200pg/ml～200ng/ml的芫花酯甲。采用該濃度能促進(jìn)t細(xì)胞對(duì)人體中常見(jiàn)的各類(lèi)腫瘤細(xì)胞的殺傷效果。

4、優(yōu)選地，腫瘤細(xì)胞為腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞t98g、肺癌細(xì)胞h1299、肝癌細(xì)胞mhcc97h、乳腺癌細(xì)胞bt549、結(jié)直腸癌細(xì)胞hct116、胰腺癌細(xì)胞bxpc-3、胃癌細(xì)胞nugc4、前列腺癌細(xì)胞pc-3、黑色素瘤細(xì)胞b16f10、卵巢癌細(xì)胞skov3、宮頸癌細(xì)胞hela、骨肉瘤細(xì)胞u2os、腎癌細(xì)胞achn、白血病細(xì)胞molm13、淋巴瘤細(xì)胞u937中的至少一種。所用腫瘤細(xì)胞采購(gòu)自atcc公司。

5、優(yōu)選地，為細(xì)胞培養(yǎng)體系中添加芫花酯甲至芫花酯甲的終濃度大于200pg/ml。

6、優(yōu)選地，為細(xì)胞培養(yǎng)體系中添加芫花酯甲至芫花酯甲的終濃度為200pg/ml～200ng/ml。

7、優(yōu)選地，用于腫瘤治療藥物的制備中。在制備用于治療腫瘤的藥物中，可根據(jù)前述最低起效標(biāo)準(zhǔn)添加芫花酯甲，或由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)藥物的給藥形式，以及人體吸收效率通過(guò)有限次實(shí)驗(yàn)測(cè)試得到具體添加量。藥物可以為各類(lèi)常用給藥劑型，例如注射劑、片劑、膠囊劑、口服液、顆粒劑、干粉吸入劑等。

8、優(yōu)選地，腫瘤治療藥物中包括：芫花酯甲制劑。

9、本申請(qǐng)的另一方面還提供了一種促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的方法，在添加如上述的芫花酯甲制劑的細(xì)胞培養(yǎng)體系中培養(yǎng)至少培養(yǎng)t淋巴細(xì)胞。

10、優(yōu)選地，包括以下步驟：

11、將t淋巴細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞按個(gè)數(shù)比為200～1：1混合后，接種于細(xì)胞培養(yǎng)體系中，并在細(xì)胞培養(yǎng)體系中添加終濃度大于200pg/ml的芫花酯甲。

12、優(yōu)選地，包括以下步驟：

13、將芫花酯甲制劑培養(yǎng)后的t淋巴細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞混合后培養(yǎng)。

14、本申請(qǐng)能產(chǎn)生的有益效果包括：

15、1)本申請(qǐng)所提供的用于促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的芫花酯甲制劑及其方法，天然分子芫花酯甲能誘導(dǎo)t淋巴細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞，提高t淋巴細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的效果，通過(guò)添加芫花酯甲，相對(duì)未添加芫花酯甲的細(xì)胞培養(yǎng)體系，t淋巴細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的比例能從0％提高到10％-100％，說(shuō)明具有顯著的促進(jìn)t淋巴細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的效果

技術(shù)特征：

1.一種用于促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的芫花酯甲制劑，其特征在于，包括：濃度大于200pg/ml的芫花酯甲。

2.根據(jù)權(quán)利要求1用于促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的芫花酯甲制劑，其特征在于，包括：濃度為200pg/ml～200ng/ml的芫花酯甲。

3.根據(jù)權(quán)利要求1用于促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的芫花酯甲制劑，其特征在于，腫瘤細(xì)胞為腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞t98g、肺癌細(xì)胞h1299、肝癌細(xì)胞mhcc97h、乳腺癌細(xì)胞bt549、結(jié)直腸癌細(xì)胞hct116、胰腺癌細(xì)胞bxpc-3、胃癌細(xì)胞nugc4、前列腺癌細(xì)胞pc-3、黑色素瘤細(xì)胞b16f10、卵巢癌細(xì)胞skov3、宮頸癌細(xì)胞hela、骨肉瘤細(xì)胞u2os、腎癌細(xì)胞achn、白血病細(xì)胞molm13、淋巴瘤細(xì)胞u937中的至少一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1用于促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的芫花酯甲制劑，其特征在于，為細(xì)胞培養(yǎng)體系中添加芫花酯甲至芫花酯甲的終濃度大于200pg/ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求1用于促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的芫花酯甲制劑，其特征在于，為細(xì)胞培養(yǎng)體系中添加芫花酯甲至芫花酯甲的終濃度為200pg/ml～200ng/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求1用于促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的芫花酯甲制劑，其特征在于，用于腫瘤治療藥物的制備中。

7.根據(jù)權(quán)利要求6用于促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的芫花酯甲制劑，其特征在于，腫瘤治療藥物中包括：芫花酯甲制劑。

8.一種促進(jìn)t細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的方法，其特征在于，在添加如權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)芫花酯甲制劑的細(xì)胞培養(yǎng)體系中培養(yǎng)至少培養(yǎng)t淋巴細(xì)胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求6方法，其特征在于，包括以下步驟：

10.根據(jù)權(quán)利要求6方法，其特征在于，包括以下步驟：

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)公開(kāi)了一種用于促進(jìn)T細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的芫花酯甲制劑及其方法，包括：濃度大于200pg/ml的芫花酯甲。該制劑能具有促進(jìn)T細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞。

技術(shù)研發(fā)人員：羅曉東,代智,趙云麗,趙立興,葉洪波,劉雪萌
受保護(hù)的技術(shù)使用者：云南大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6