本發(fā)明涉及天然藥物，具體涉及一種抗腫瘤組合物及其制備方法。

背景技術：

1、近年來，抗腫瘤功能成分的篩選和作用機制研究是生物醫(yī)療領域的研究重點。在中國，由于腫瘤的發(fā)病率快速上升，抗腫瘤藥物市場發(fā)展前景十分廣闊，同時因為目前藥物療效的局限性，新的抗腫瘤藥物市場亟待大力開發(fā)，抗腫瘤藥物開發(fā)已成為制藥行業(yè)的一大熱門。臨床上應用的很多抗腫瘤藥物都是通過天然抗腫瘤先導化合物跟蹤分離篩選、結構改造與化學合成得到的。以酶、受體、基因等為新的分子作用靶點可為研究抗癌藥物作用靶點提供實驗依據和思路。在活性物質的提取方法也很多，最常用的方法包括：超濾離心、薄層層析、制備色譜制備分離等方法。通過分離純化的方法逐步篩選有效成分，并測定細胞凋亡、細胞毒性、細胞信號轉導等機制是近年來的研究熱點。

技術實現思路

1、本發(fā)明的目的在于提出一種抗腫瘤組合物及其制備方法，提高該物質對于樹突細胞、巨噬細胞的靶向能力，進而誘導大量特異性的腫瘤殺傷性car-t細胞的增殖，從而顯著增強了腫瘤疫苗的臨床防治療效。經過驗證，該抗腫瘤組合物對于腫瘤細胞有很好的體外和體內抑制作用。

2、本發(fā)明的技術方案是這樣實現的：

3、本發(fā)明提供一種抗腫瘤組合物的制備方法，包括以下步驟：

4、(1)將黑參和靈芝洗凈，超高壓低溫破壁處理，研磨，得到破壁粉；

5、(2)將破壁粉加入水中，加入復合酶酶解，滅酶，加入葡萄糖，發(fā)酵，過濾，濾液透析，截留分子量為2-5kda的黑人參靈芝活性液；

6、(3)將分子量為2-5kda的黑人參靈芝活性液中加入鋅鹽，攪拌反應，透析，冷凍干燥，獲得螯合zn的活性組分；

7、(4)將螯合zn的活性組分經過表面修飾，獲得抗腫瘤組合物。

8、作為本發(fā)明的進一步改進，步驟(1)中所述黑參和靈芝的質量比為15-20:3-5，所述超高壓低溫破壁處理的壓力為2-3個大氣壓，溫度為30-35℃，時間為1-2h。

9、作為本發(fā)明的進一步改進，步驟(2)中所述破壁粉、復合酶、葡萄糖和水的質量比為100:3-5:20-25:500-700。

10、作為本發(fā)明的進一步改進，步驟(2)中所述復合酶為中性蛋白酶和果糖酶，質量比為5-7:1-2，所述酶解的溫度為40-50℃，時間為1-3h。

11、作為本發(fā)明的進一步改進，步驟(2)中發(fā)酵的發(fā)酵菌為枯草芽孢桿菌，發(fā)酵條件為45-50℃，100-150r/min，發(fā)酵培養(yǎng)24-36h。

12、作為本發(fā)明的進一步改進，步驟(3)中所述分子量為2-5kda的黑人參靈芝活性液、鋅鹽的質量比為100:1-2，所述鋅鹽選自氯化鋅、硫酸鋅、硝酸鋅中的至少一種；所述攪拌反應的溫度為35-45℃，時間為0.5-1h，所述透析采用的透析袋孔徑為2-5kda。

13、作為本發(fā)明的進一步改進，步驟(4)中所述螯合zn的活性組分表面修飾的方法如下：取澳洲茄堿和紫杉醇放入聚乙二醇溶液中，加入螯合zn的活性組分，加熱攪拌反應，離心去除上清液，得到的沉淀即為抗腫瘤組合物。

14、作為本發(fā)明的進一步改進，所述澳洲茄堿、紫杉醇、螯合zn的活性組分的質量比為3-5:1-2:100，所述加熱攪拌反應的溫度為50-60℃，時間為2-4h。

15、作為本發(fā)明的進一步改進，具體包括以下步驟：

16、(1)將15-20重量份黑參和3-5重量份靈芝洗凈，超高壓低溫破壁處理，2-3個大氣壓，溫度為30-35℃，時間為1-2h，研磨1-2h，得到破壁粉；

17、(2)將100重量份破壁粉加入500-700重量份水中，加入3-5重量份復合酶，40-50℃酶解1-3h，滅酶，加入20-25重量份葡萄糖，發(fā)酵，發(fā)酵菌為枯草芽孢桿菌，發(fā)酵條件為45-50℃，100-150r/min，發(fā)酵培養(yǎng)24-36h，過濾，濾液透析2-4h，截留分子量為2-5kda的黑人參靈芝活性液；

18、所述復合酶為中性蛋白酶和果糖酶，質量比為5-7:1-2；

19、(3)將100重量份分子量為2-5kda的黑人參靈芝活性液中加入1-2重量份鋅鹽，35-45℃攪拌反應0.5-1h，透析2-4h，冷凍干燥，獲得螯合zn的活性組分；

20、(4)取3-5重量份澳洲茄堿和1-2重量份紫杉醇放入200重量份聚乙二醇溶液中，加入100重量份螯合zn的活性組分，加熱至50-60℃，攪拌反應2-4h，離心去除上清液，得到的沉淀即為抗腫瘤組合物。

21、本發(fā)明進一步保護一種上述的制備方法制得的抗腫瘤組合物。

22、本發(fā)明具有如下有益效果：黑參和靈芝中含有豐富的多糖、蛋白、氨基酸、皂苷等活性物質，具有很好的抗氧化、抗炎、抗腫瘤等活性，本發(fā)明制得的抗腫瘤組合物以黑參和靈芝為原料，經過液氮冷凍處理后，簡單方便的獲得了破裂細胞壁的黑參和靈芝粉，加入水中，經過復合酶(中性蛋白酶和果膠酶)酶解后，經過透析袋截留分子量為2-5kda的活性物質，包括蛋白肽、寡糖、糖蛋白肽、皂苷等活性物質，與zn離子螯合后，得到了螯合zn的活性組分，表面經過澳洲茄堿和紫杉醇的修飾后，提高該物質對于樹突細胞、巨噬細胞的靶向能力，進而誘導大量特異性的腫瘤殺傷性car-t細胞的增殖，從而顯著增強了腫瘤疫苗的臨床防治療效。經過驗證，該抗腫瘤組合物對于腫瘤細胞有很好的體外和體內抑制作用。

技術特征：

1.一種抗腫瘤組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述黑參和靈芝的質量比為15-20:3-5，所述超高壓低溫破壁處理的壓力為2-3個大氣壓，溫度為30-35℃，時間為1-2h。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述破壁粉、復合酶、葡萄糖和水的質量比為100:3-5:20-25:500-700。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述復合酶為中性蛋白酶和果糖酶，質量比為5-7:1-2，所述酶解的溫度為40-50℃，時間為1-3h。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中發(fā)酵的發(fā)酵菌為枯草芽孢桿菌，發(fā)酵條件為45-50℃，100-150r/min，發(fā)酵培養(yǎng)24-36h。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述分子量為2-5kda的黑人參靈芝活性液、鋅鹽的質量比為100:1-2，所述鋅鹽選自氯化鋅、硫酸鋅、硝酸鋅中的至少一種；所述攪拌反應的溫度為35-45℃，時間為0.5-1h，所述透析采用的透析袋孔徑為2-5kda。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述螯合zn的活性組分表面修飾的方法如下：取澳洲茄堿和紫杉醇放入聚乙二醇溶液中，加入螯合zn的活性組分，加熱攪拌反應，離心去除上清液，得到的沉淀即為抗腫瘤組合物。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述澳洲茄堿、紫杉醇、螯合zn的活性組分的質量比為3-5:1-2:100，所述加熱攪拌反應的溫度為50-60℃，時間為2-4h。

9.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

10.一種如權利要求1-9任一項所述的制備方法制得的抗腫瘤組合物。

技術總結
本發(fā)明提出了一種抗腫瘤組合物及其制備方法，屬于天然藥物技術領域。包括以下步驟：(1)將黑參和靈芝洗凈，超高壓低溫破壁處理，研磨，得到破壁粉；(2)將破壁粉加入水中，加入復合酶酶解，滅酶，過濾，濾液透析，截留分子量為2?5kDa的黑人參靈芝活性液；(3)將分子量為2?5kDa的黑人參靈芝活性液中加入鋅鹽，攪拌反應，透析，冷凍干燥，獲得螯合Zn的活性組分；(4)將螯合Zn的活性組分經過表面修飾，獲得抗腫瘤組合物。本發(fā)明抗腫瘤組合物提高該物質對于樹突細胞、巨噬細胞的靶向能力，進而誘導大量特異性的腫瘤殺傷性Car?T細胞的增殖，從而顯著增強了腫瘤疫苗的臨床防治療效。

技術研發(fā)人員：郭春雨,聶秀萍,劉軍
受保護的技術使用者：農鑫高科（北京）科技開發(fā)有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/6