本發(fā)明屬于分子生物技術(shù)與基因工程，具體涉及抑制dusp23表達(dá)的試劑在制備抗肝癌藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、截止2020年，全球有近1千萬(wàn)人被診斷為肝癌，其發(fā)病率位居惡性腫瘤第六位，且肝癌患者的預(yù)后極差，是全球惡性腫瘤相關(guān)死亡的第三大原因。由于肝臟所處的位置比較隱蔽，且一般情況下肝癌早期癥狀僅表現(xiàn)為食欲不振、乏力、惡心等常見(jiàn)消化系統(tǒng)障礙，所以往往容易被人們忽視。目前，早期肝癌篩查主要依賴于血清甲胎蛋白和腹部超聲檢查，但目前學(xué)術(shù)界對(duì)afp檢測(cè)的敏感性、特異性和預(yù)測(cè)價(jià)值仍存在爭(zhēng)議，而且正常情況下無(wú)癥狀患者并不會(huì)主動(dòng)就醫(yī)進(jìn)行超聲檢查，加之肝癌的惡性程度高，具有易轉(zhuǎn)移、易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)，導(dǎo)致大部分患者一經(jīng)發(fā)現(xiàn)就已經(jīng)處于肝癌中、晚期，基本都需要藥物治療。但是目前上市的抗肝癌藥物治療效果欠佳，而且大部分系統(tǒng)治療藥物使用后會(huì)產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致肝癌患者的預(yù)后極差，致使肝癌患者的藥物治療成為目前臨床的一大難題。因此，研究肝癌中異常高表達(dá)的基因和蛋白對(duì)肝癌患者診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)的作用以及對(duì)開(kāi)發(fā)新型抗肝癌藥物并改善肝癌患者的預(yù)后都有重要理論意義和應(yīng)用價(jià)值。

2、dusp23是目前為止發(fā)現(xiàn)的最小的ptps，屬于dusps家族中的非典型dusps亞家族，于2004年由3個(gè)不同的研究團(tuán)隊(duì)克隆并表達(dá)鑒定，又名vhz或ldp-3。dusp23基因位于人1號(hào)染色體1q23，編碼150個(gè)氨基酸，在進(jìn)化中高度保守。作為一種磷酸酶，dusp23在多種生理過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。例如，有研究發(fā)現(xiàn)dusp23在胎盤(pán)發(fā)育的過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。有研究表明，dusp23可能通過(guò)調(diào)節(jié)polo樣激酶4活性控制中心粒復(fù)制和紡錘體形成從而調(diào)控細(xì)胞有絲分裂。目前，有研究結(jié)果表明dusp23在包括乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤組織中表達(dá)水平均上調(diào)，過(guò)表達(dá)dusp23蛋白能夠促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖和遷移，而敲低dusp23可通過(guò)影響乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)程導(dǎo)致dna合成減少?gòu)亩种萍?xì)胞增殖。但是，目前dusp23在肝癌中的研究及其用于肝癌治療的靶點(diǎn)尚未見(jiàn)報(bào)道。

3、rna干擾是由小干擾rna引發(fā)其同源信使rna降解的一種轉(zhuǎn)錄后基因沉默形式。rnai技術(shù)由于具有特異性和強(qiáng)制性的基因沉默特點(diǎn)，近年來(lái)被認(rèn)為可以通過(guò)操縱疾病相關(guān)基因表達(dá)從而成為一種有前途的針對(duì)于各種感染性疾病、腫瘤、心血管和神經(jīng)退行性疾病的新型治療策略。目前，已有多款sirna類(lèi)藥物上市或在臨床研究中，成為繼化學(xué)藥物、生物蛋白藥物之后的第三大新藥類(lèi)型。與傳統(tǒng)療法相比，如小分子和蛋白質(zhì)藥物，利用sirna療法具有許多優(yōu)勢(shì)。首先，與小分子、蛋白類(lèi)藥物包括單克隆抗體等常規(guī)療法相比，sirna療法僅具有拮抗作用，而常規(guī)療法可同時(shí)產(chǎn)生激動(dòng)劑和拮抗作用；其次，sirna治療的靶點(diǎn)可以存在于任何位置，甚至可以是不可成藥的靶點(diǎn)；第三，sirna的選擇性非常高，這是小分子類(lèi)藥物無(wú)法達(dá)到的；最后，易于合成是sirna的另一個(gè)特點(diǎn)。因此，針對(duì)特定基因所設(shè)計(jì)的敲減效果顯著的sirna，在臨床基因治療藥物的開(kāi)發(fā)中具有重大的利用價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，得到能有效治療肝癌的rnai藥物，發(fā)明人以dusp23基因?yàn)榘悬c(diǎn)，通過(guò)研究dusp23在肝癌組織中的表達(dá)水平、設(shè)計(jì)dusp23基因的sirna序列并構(gòu)建相應(yīng)的sirna，特異性抑制人肝癌細(xì)胞中dusp23基因和蛋白的表達(dá)，從而抑制人肝癌細(xì)胞增殖、遷移、細(xì)胞周期進(jìn)程等過(guò)程，提示該sirna分子可以用于治療肝癌。這一發(fā)現(xiàn)開(kāi)拓了肝癌新的治療基因靶點(diǎn)，為新的靶向治療提供方向，從而形成了本發(fā)明的基礎(chǔ)。

2、因此，本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種基于rnai技術(shù)的針對(duì)dusp23靶向的sirna。本發(fā)明的另一個(gè)目的提供上述dusp23靶向的sirna在制備用于治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。

3、為了達(dá)到以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

4、抑制dusp23表達(dá)的試劑在制備抗肝癌藥物中的應(yīng)用，所述抑制dusp23表達(dá)的試劑為核苷酸序列如seq?id?no.3-seq?id?no.4所示的sirna或核苷酸序列如seq?id?no.5-seqid?no.6所示的sirna。

5、優(yōu)選的，所述藥物為由核苷酸序列如seq?id?no.3-seq?id?no.4所示的sirna所配制的溶液；

6、所述藥物為由核苷酸序列如seq?id?no.5-seq?id?no.6所示的sirna所配制溶液。

7、優(yōu)選的，所述溶劑為depc水或無(wú)菌注射水。

8、優(yōu)選的，所述的抗肝癌藥物是抑制肝癌細(xì)胞增殖能力和降低肝癌細(xì)胞克隆形成能力的藥物。

9、優(yōu)選的，所述的抗肝癌藥物是抑制肝癌細(xì)胞遷移能力的藥物。

10、優(yōu)選的，所述的抗肝癌藥物是誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞細(xì)胞周期進(jìn)程阻滯和凋亡的藥物。

11、優(yōu)選的，所述的抗肝癌藥物是影響肝癌細(xì)胞細(xì)胞周期進(jìn)程和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的藥物。

12、優(yōu)選的，所述的抗肝癌藥物是對(duì)肝癌細(xì)胞的裸鼠移植瘤具有顯著的抑瘤活性的藥物。

13、一種dusp23靶向的sirna，所述sirna為所述核苷酸序列如seq?id?no.5-seq?idno.6所示的sirna。

14、一種抗肝癌藥物，含有所述的dusp23靶向的sirna。

15、優(yōu)選的，所述抗肝癌藥物還含有depc水。

16、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

17、本發(fā)明采用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)和定量蛋白組學(xué)技術(shù)檢測(cè)肝癌中dusp23基因和蛋白表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)dusp23基因和蛋白在肝癌組織中的表達(dá)均顯著高于癌旁組織，為肝癌的治療提供了dusp23基因這樣一個(gè)非常有效的作用靶點(diǎn)，可用于相應(yīng)rnai、單克隆抗體及小分子拮抗劑等靶向治療藥物的開(kāi)發(fā)。

18、本發(fā)明設(shè)計(jì)了靶向抑制人dusp23基因的sirna，且該sirna能夠高效抑制人肝癌細(xì)胞中dusp23基因和蛋白的表達(dá)，并因此有效抑制肝癌細(xì)胞增殖和遷移能力，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞細(xì)胞周期g0/g1期阻滯和細(xì)胞凋亡，并對(duì)肝癌細(xì)胞的裸鼠移植瘤具有顯著的抑瘤活性。本發(fā)明為肝癌治療提供了一個(gè)新的基因靶點(diǎn)和藥物，為針對(duì)dusp23開(kāi)發(fā)治療肝癌的靶向治療藥物提供了一種行之有效的方法，對(duì)于制備治療肝癌的藥物意義重大。

技術(shù)特征：

1.抑制dusp23表達(dá)的試劑在制備抗肝癌藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述抑制dusp23表達(dá)的試劑為核苷酸序列如seq?id?no.3-seq?id?no.4所示的sirna或核苷酸序列如seqid?no.5-seq?id?no.6所示的sirna。

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物為由核苷酸序列如seq?id?no.3-seq?id?no.4所示的sirna所配制的溶液；

3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，配制溶液使用的溶劑為depc水或無(wú)菌注射水。

4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗肝癌藥物是抑制肝癌細(xì)胞增殖能力和降低肝癌細(xì)胞克隆形成能力的藥物。

5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗肝癌藥物是抑制肝癌細(xì)胞遷移能力的藥物。

6.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗肝癌藥物是誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞細(xì)胞周期進(jìn)程阻滯和凋亡的藥物。

7.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗肝癌藥物是對(duì)肝癌細(xì)胞的裸鼠移植瘤有抑瘤活性的藥物。

8.一種dusp23靶向的sirna，其特征在于，所述sirna為權(quán)利要求1中所述核苷酸序列如seq?id?no.5-seq?id?no.6所示的sirna。

9.一種抗肝癌藥物，其特征在于，所述抗肝癌藥物含有權(quán)利要求9所述的dusp23靶向的sirna。

10.如權(quán)利要求9所述的抗肝癌藥物，其特征在于，所述抗肝癌藥物還含有depc水。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了DUSP23靶向的siRNA及其應(yīng)用，屬于分子生物技術(shù)與基因工程技術(shù)領(lǐng)域。通過(guò)研究DUSP23在肝癌組織中的表達(dá)水平，為肝癌的治療提供了DUSP23基因這一作用靶點(diǎn)；提供了抑制人DUSP23基因和蛋白表達(dá)的siRNA及其應(yīng)用，該siRNA的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5?SEQ?ID?NO.6所示。通過(guò)在肝癌細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染該siRNA，能調(diào)控和干擾DUSP23基因和蛋白表達(dá)，抑制細(xì)胞增殖和遷移能力，誘導(dǎo)細(xì)胞周期G0/G1期阻滯和細(xì)胞凋亡，并對(duì)肝癌細(xì)胞的裸鼠移植瘤具有顯著的抑瘤活性。

技術(shù)研發(fā)人員：蘇暢,招明高,楊樂(lè)
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9