本發(fā)明屬于生物，具體地，本發(fā)明涉及一種治療脂肪性肝病的細(xì)胞治療藥物。

背景技術(shù)：

1、脂肪性肝病(fatty?liver?disease,fld)是指肝臟中脂肪積累異常增多的狀況，主要分為酒精性脂肪性肝病(alcoholic?fatty?liver?disease,afld)和非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic?fatty?liver?disease,nafld)。nafld是目前最常見的肝臟疾病之一，以肝細(xì)胞脂肪變性為主要特征，病程中常伴隨肥胖、二型糖尿病、高血壓及血脂異常等代謝綜合征的發(fā)生。在缺乏持續(xù)或近期大量飲酒歷史、未使用促進(jìn)脂肪生成藥物及不患有特定遺傳病的情況下，肝臟出現(xiàn)肝細(xì)胞單純脂肪變性(>5％)，可被診斷為nafld。其嚴(yán)重程度可以從單純的脂肪積累(單純性脂肪肝)到伴有炎癥的脂肪性肝炎(nash)，甚至發(fā)展為肝硬化和肝細(xì)胞癌。

2、脂肪性肝病在全球范圍內(nèi)廣泛流行，特別是在西方國家。nafld是西方國家中最常見的慢性肝病，其患病率隨著肥胖和2型糖尿病的流行而增加。脂肪性肝病的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)，特別是在經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的國家和地區(qū)。全球nafld匯總患病率估算為32.4％，男性(39.7％)高于女性(25.6％)，患病率逐年增加，2016年以后高達(dá)37.8％；匯總患病率以拉丁美洲最高(44.4％)，其后依次為中東、北非、南亞、東南亞、北美、東亞地區(qū)，西歐最低(25.1％)。過去20年我國成人nafld匯總患病率為29.6％，男性(34.8％)高于女性(23.5％)，肥胖、t2dm患者nafld患病率分別為66.2％和51.8％，現(xiàn)已取代病毒性肝炎成為我國第一大慢性肝病(中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì).代謝相關(guān)(非酒精性)脂肪性肝病防治指南(2024年版)[j].中華肝臟病雜志,2024,32(5):418-434.)。

3、目前，脂肪性肝病的治療主要集中在控制危險(xiǎn)因素和預(yù)防疾病進(jìn)展，包括改變生活方式，減重、增加體力活動(dòng)和改善飲食習(xí)慣是治療nafld的基礎(chǔ)，減重5％可顯著改善肝脂肪變性(easl-easd-easoclinical?practice?guidelines?on?the?managementofmetabolic?dysfunction-associated?steatotic?liver?disease(masld)[j].jhepatol,2024,81(3):492-542.)；藥物治療，目前尚無專門針對(duì)nafld的批準(zhǔn)藥物，但一些藥物如維生素e、胰島素增敏劑(如二甲雙胍)和抗炎藥物(如皮質(zhì)類固醇)在臨床試驗(yàn)中顯示出一定的效果(xiang?y,shen?l,xue?y,et?al.efficacy?and?safety?ofdiacereinmonotherapy?in?adults?with?obesity:a?randomized,double-blind,placebo-controlled?trial[j].diabetes?obes?metab,2024.)；手術(shù)治療，對(duì)于嚴(yán)重肥胖導(dǎo)致的脂肪性肝病患者，如果生活方式干預(yù)和藥物治療效果不佳，可考慮進(jìn)行減重手術(shù)，夠顯著降低體重，改善脂肪性肝病的病情(楊家林，彭勇.減重手術(shù)治療非酒精性脂肪性肝病的研究進(jìn)展[j].中國現(xiàn)代普通外科進(jìn)展,2021,24(1):51-53,57.)。但生活方式的調(diào)整要求患者長(zhǎng)期堅(jiān)持并可能見效緩慢；藥物治療可能伴隨不良反應(yīng)，必須在專業(yè)醫(yī)療人員的指導(dǎo)下進(jìn)行；手術(shù)治療則涉及較高的風(fēng)險(xiǎn)，并且費(fèi)用不菲。因此，迫切需要開發(fā)新的藥物來治療脂肪性肝病，為脂肪性肝病患者提供更多的治療選擇。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在得問題，本發(fā)明發(fā)明人通過廣泛而深入的研究，首次發(fā)現(xiàn)了ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞具有治療脂肪性肝病尤其是非酒精性脂肪性肝病的作用，為脂肪性肝病的治療提供了一種新的治療手段。

2、基于此，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明的第一方面提供了一種治療、預(yù)防、減輕和/或緩解與脂肪變性相關(guān)疾病的藥物組合物。

4、進(jìn)一步，所述藥物組合物包括ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞。

5、本文使用的術(shù)語“內(nèi)皮祖細(xì)胞”意指其分化指向內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞。內(nèi)皮祖細(xì)胞可通過分析轉(zhuǎn)錄因子或細(xì)胞表面抗原的表達(dá)模式來確認(rèn)。例如，單獨(dú)或組合測(cè)量轉(zhuǎn)錄因子或細(xì)胞表面抗原的表達(dá)模式，其中其表達(dá)水平未被檢測(cè)到或低(即使在誘導(dǎo)分化之前被檢測(cè)到)，并且在誘導(dǎo)分化之后顯著增加。有效用于確認(rèn)內(nèi)皮祖細(xì)胞的標(biāo)志物包括ubxn11，lrrc75a，mmachc，fxyd5，vmp1，krt18，yipf2，cnp，spata21，sap30l-as1，slc12a6，anp32e，ctnnb1，vim，cnn3，rpl8，ywhah，sdc4，hist1h4i，srpx2，dnase1，myo19，sh3kbp1，asap1，rnf24，spns2，s100a11，sox4，rnf214，plp2，pih1d2，sgpl1，elk3，f3，ugdh，rbms2，fmnl3，rpl6，atp2a1，efcab10，slc12a2，uckl1-as1，arhgap18，rpe，sft2d2，cxcl16，paics，zbtb11-as1，clic1，cers5，ccdc85c，dhrs7，ctrl，tyms，spcs1，ifitm3，rps27，rpl34，mzf1-as1，tram1，supt7l，nol9，mfsd11，pld4，nqo1，neat1，gnas，ldha，unkl，ldhb，cenpk，c1orf174，hsp90b1，tcf7l2，leng8，iqgap3，ankrd13d，npc1，myh11，atp2b4，fancd2，tnrc6b，ddx17，tirap，herc4，dstn，foxp3，abl2，kdelr2，ccdc50，park7，capn2，acap1，slc13a4，sept11，raph1，krt8，lmo3，cirbp，cyp20a1，ly6e，fam69a，prss3，mest，npb，clmp，msn，sucla2，pcmtd1，psmc3，tomm7，gchfr，meis1，triap1，usp34，spag1，rpl39l，pdk1，lars，map4k4，qtrt1，clk1，tsc22d1-as1，il1b，mkrn2os，arl16，tspan13，hmgcs1，psap，slc44a2，tnfrsf10b，msc，eng，tldc2，trim41，cpm，creb3l2，nsun6，ahcy，ncbp1，n4bp2l2，rab31，rnf149，srpk2，sbds，nampt，aes，serpinf1，rps27l，haus2，ap4b1-as1，kdm2b，usp6nl，tonsl，fblim1，slc31a2，adgrl1，efhc1，smad9，slc7a11，lpin1，ddah2，pid1，scaf11，bbs1，pcyox1，cd55，pmel，tor1b，ubqln1，dusp5，cuedc2，fkbp5，lmf2，lyrm7，nsg1，sat2，lman1，nfx1，commd1，ccpg1，ninj1，rnaseh1，spata5，cenpw，dnajc4，pttg1，tmem109，mcts1，tmem63a，fbn1，tpm1，mavs，adprhl2，ctsk，insig1，c16orf74，maz，meg3，rftn2，agap6，gpc6，pdlim5，slc25a5-as1，rsl1d1，fam219b，cflar，gnptab，pigu，itgb3bp，ntm，znf106，rprd1b，ets1，itgae，ecscr，snd1，trio，angptl1，sec61g，cdr2，crmp1，pnisr，oxld1，prkaca，nfkbiz，morn2，rab3d，crkl，msl1，tmpo，galnt2，creld2，ets2，alkbh4，phf19，polh，trrap，net1，adgre5，gas6，vezf1，bmpr2，smad3，gfod1，rabgap1l，slc39a7，tctn1，csrnp1，lrrn3，tnrc6a，mfap2，tmem98，spatc1l，linc00476，cenpq，cstf3，slc8a1，e2f7，rpl7l1，zfhx4，txndc11，stk4，stx16，tmem11，ptk6，zfas1，u2af2，trim16，zbtb7a，p3h3，tmco3，c15orf39，acvrl1，shq1，gns，spry1，diaph2，dlc1，tcf3，fam229a，ptges3l，rrp7a，mgrn1，git2，ube2t，csgalnact2，efemp2，csnk1e，maged2，c5ar1，arhgap45，cdkn2b-as1，tmem234，rnf213，sidt2，tex2，mcm3，tmem67，zkscan1，slc2a1，mad2l1，mgll，nr3c1，phgdh，syt1，rere，kif1b，ncapd3，nadk，foxred2，gnb5，tmem204，usp24，kif20b，gadd45b，znf135，tacc3，fosb，acot9，ebf1，myo1e，ppp1r10，nfkbib，robo4，tpgs1，cfd，kif22，eif4a3，rnf14，npat，stx11，cdca7，st6galnac4，rbl1，nif3l1，glce，cdca7l，rasa3，stk10，ednra，ica1l，dctn5，gng2，ptpn2，bst1，bmp1，rps6ka2，sec11c，trmu，h1f0，stxbp5l，ap5b1，stam，mcm2，aldh3b1，slc23a2，tnfaip3，klf7，dip2c，kmt2b，galnt7，nuak2，plxna4，mri1，flnb，mboat2，tmem136，ap3m2，acss2，aars，dus3l，ngly1，znf274，icam1，fam129a，ppp6r1，tie1，numbl，plxnd1，enc1，ccdc142，bcan，prr15，flrt2，nucb2，tars2，polb，rab24，kbtbd6，slc38a4，map2，pmp22，top3a，vamp2，ubtd2，plk4，mapk8ip3，apba2，tbc1d17，znf444，plekhg4b，mtor，stil，gba，ift88，b9d1，ramp1，s1pr3，shisa9，mocs3，cep104，tiam1，kif15，znf793，znf865，abcb10，ankhd1-eif4ebp3，cmpk2，sytl3，shroom1，spata6，ppp2r3b，tnfsf13b，fkbp7，cntrob，pex11a，lhfpl2，dok3，armc9，ranbp10，znf561，scamp5，arhgap39，dennd3，atp9a，dcps，znf302，arhgap9，ip6k1，adam22，emcn，cyfip2，wdr90，ppm1m，c1qtnf6，dach1，bmf，setd4，tbc1d9，pik3ip1，p4htm，cd101，scpep1，tldc1，gtpbp10，tap2。內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離、純化、離體培養(yǎng)和特征在hill等，n.engl.j.med.：593-600(2003)；assmus等，circulation106：3009-16(2002)；王等，j.am.coll.cardiol.4949：1566-71(2007)；和kalka等，p.n.a.s.97：3422-7(2000)中被描述，其內(nèi)容通過整體引用并入本文。

6、內(nèi)皮祖細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞子代可以通過任何本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行冷凍保存直至需要它們。(參見，例如，美國專利第5071741號(hào)，pct國際專利申請(qǐng)wo93/14191、wo95/07611、wo96/27287、wo96/29862和wo98/14058，karlsson等，65biophysicalj.2524-2536(1993))。可以將epc懸浮在含有特定冷凍保存劑的等滲溶液中，優(yōu)選細(xì)胞培養(yǎng)基。這種冷凍保存劑包括二甲基亞砜(dmso)、甘油等。這些冷凍保存劑以5-15％(例如，8-10％)的濃度被使用。細(xì)胞被逐漸冷凍到-10℃至-150℃的溫度(例如，-20℃至-100℃、或-70℃至-80℃)。

7、在一些實(shí)施方案中，ipsc可以來源于體細(xì)胞，由體細(xì)胞誘導(dǎo)分化而成。所述體細(xì)胞可以是干細(xì)胞或成熟細(xì)胞。這些細(xì)胞可以被稱為“供體細(xì)胞”。成體干細(xì)胞是遍布全身的未分化細(xì)胞。它們可以通過細(xì)胞分裂增殖以補(bǔ)充死細(xì)胞并再生受損的組織。已在許多器官和組織中鑒定出成體或體干細(xì)胞，這些器官和組織包括腦、骨髓、外周血、血管、骨骼肌、皮膚、牙齒、心臟、腸、肝、卵巢上皮和睪丸。它們被認(rèn)為位于每個(gè)組織中被稱為“干細(xì)胞巢”的特定區(qū)域并僅為那個(gè)組織提供細(xì)胞來源。成體干細(xì)胞的類型包括造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、上皮干細(xì)胞、皮膚干細(xì)胞。如果收獲成熟細(xì)胞作為供體細(xì)胞，則它們可以來自任何組織、器官、體液或身體分泌物。因此，細(xì)胞可以是皮膚細(xì)胞、毛囊細(xì)胞、血細(xì)胞、從尿液中提取的細(xì)胞、通過活檢之類從任何組織或器官中收集的細(xì)胞，這些組織或器官包括但不限于骨骼、牙齒、牙齒組織、心臟、肺、腦、胰腺、肝、腎臟、膀胱、子宮、腸、胃、膽囊、肌肉、脂肪、睪丸、粘膜、眼、包皮、前列腺、脾或任何其他組織。

8、在本發(fā)明中，可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的許多標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)中的任何一種來誘導(dǎo)ipsc分化為內(nèi)皮祖細(xì)胞。例如，可以通過在培養(yǎng)基中添加特定的生長(zhǎng)因子或調(diào)整培養(yǎng)基成分(如添加血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子vegf或促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分化的因子fgf-2等)誘導(dǎo)ipsc分化為內(nèi)皮祖細(xì)胞。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞來源于呈諾再生醫(yī)學(xué)科技(北京)有限公司。

9、進(jìn)一步，所述藥物組合物還包括藥學(xué)上可接受的載體。

10、ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞可以與載體一起以適合的形態(tài)進(jìn)行劑型化，該載體為常用于細(xì)胞治療的藥學(xué)上可接受的載體。故本發(fā)明的前面所述的藥物組合物包含內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞和藥學(xué)上可接受的載體。所謂“藥學(xué)上可接受的”是指生理學(xué)上允許的、且向人類給藥時(shí)通常不會(huì)引起胃腸障礙、眩暈等過敏反應(yīng)或與此類似反應(yīng)的組合物。作為藥學(xué)上可接受的載體，例如有：水、合適的油、生理鹽水、水溶性葡萄糖及乙二醇等非口服給藥用載體等，還可進(jìn)一步包括穩(wěn)定劑及保存劑。合適的穩(wěn)定劑為，亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉或抗壞血酸等抗氧化劑。合適的保存劑為，苯扎氯銨、對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯、氯丁醇。作為其它藥學(xué)上可接受的載體，可參考以下文獻(xiàn)中記載的內(nèi)容(remington's?pharmaceutical?sciences,19thed.,mack?publishing?company,easton,pa,1995)。

11、在一些實(shí)施方案中，用于口服給藥的固體劑型可以包括片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑等，這樣的固體制劑可以向一種以上的混合物混合一種以上的賦形劑，例如，混合淀粉、碳酸鈣、蔗糖(sucrose)或乳糖(lactose)、明膠等來制備。并且，除單純的賦形劑以外，還可以使用硬脂酸鎂、滑石粉等潤滑劑。用于口服給藥的液體制劑有懸混劑、內(nèi)溶液劑、乳劑、糖漿劑等，除廣泛使用的作為單純稀釋劑的水、液體石蠟以外，還可以包含多種賦形劑，例如濕潤劑、甜味劑、芳香劑、保存劑等。

12、在一些實(shí)施方案中，用于胃腸外給藥的制劑包括滅菌的水溶液、非水性溶劑、油劑、冷凍干燥制劑、栓劑等。非水性溶劑、助懸劑可以使用丙二醇、聚乙二醇、橄欖油等植物油、油酸乙酯等可注射的脂類等。栓劑的基劑可以使用witepsol、聚乙二醇、吐溫(tween)61、可可脂、月桂酸酯、甘油、明膠等。

13、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物可以具有選自由片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、懸混劑、內(nèi)溶液劑、乳劑、糖漿劑、滅菌的水溶液、非水性溶劑、懸浮劑、油劑、冷凍干燥劑及栓劑組成的組中的任一劑型。栓劑的基劑可以使用witepsol、聚乙二醇、吐溫61、可可脂、月桂酸酯、甘油、明膠等。

14、進(jìn)一步，所述與脂肪變性相關(guān)疾病包括脂肪性肝病、冠心病、心肌梗死、腎臟疾病、糖尿病、高脂血癥。

15、進(jìn)一步，所述與脂肪變性相關(guān)疾病選自脂肪性肝病。

16、在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，申請(qǐng)人通過實(shí)驗(yàn)證明ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞能夠改善小鼠脂肪性肝病脂肪變性的癥狀。因此，本發(fā)明所述的包含ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞的藥物組合物可以治療、預(yù)防、減輕和/或緩解與脂肪變性相關(guān)疾病，所述疾病包括脂肪性肝病、冠心病、心肌梗死、腎臟疾病、糖尿病、高脂血癥，其中所述癥狀是脂肪變性。

17、進(jìn)一步，所述藥物組合物還包括下述功能性成分中的任意一種或多種：

18、1)維持內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞活性的成分；

19、2)促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞增殖的成分；

20、3)促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞分化的成分。

21、進(jìn)一步，所述功能性成分包括血清替代物、非必需氨基酸、谷氨酰胺、l-丙氨酰-l-谷氨酰胺的穩(wěn)定化二肽、生長(zhǎng)因子或其任意組合。

22、進(jìn)一步，所述功能性成分包括kosr、msc無血清添加劑、ultrosertmg、甘氨酸、l-丙氨酸、l-天冬酰胺、l-天冬氨酸、l-谷氨酸、l-脯氨酸、l-絲氨酸、vegf、bfgf、egf、tgfβ、pdgf或其任意組合。

23、作為另外一個(gè)替代方案，本發(fā)明的藥物組合物包含ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞的分泌物。

24、所述分泌物可以是ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)上清，也可以是經(jīng)過純化的培養(yǎng)上清中含有的ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞的分泌因子。

25、在本發(fā)明中，術(shù)語“培養(yǎng)上清”是指，對(duì)細(xì)胞(例如，本發(fā)明的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞)進(jìn)行培養(yǎng)而得到的不含細(xì)胞本身的培養(yǎng)液。因而，例如可以通過在培養(yǎng)后分離去除細(xì)胞成分來得到可用于本發(fā)明的培養(yǎng)上清。該培養(yǎng)上清也可以經(jīng)過其他處理，例如離心、濃縮、溶劑的置換、透析、冷凍、干燥、冷凍干燥、稀釋、脫鹽、保存等。

26、本發(fā)明的第二方面提供了ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞在制備治療、預(yù)防、減輕和/或緩解與脂肪變性相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。

27、進(jìn)一步，所述與脂肪變性相關(guān)疾病包括脂肪性肝病、冠心病、心肌梗死、腎臟疾病、糖尿病、高脂血癥。

28、進(jìn)一步，所述與脂肪變性相關(guān)疾病選自脂肪性肝病。

29、進(jìn)一步，所述ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞在單位劑量形式中的存在量為1×104～1×106cells。

30、優(yōu)選地，所述ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞在單位劑量形式中的存在量為1×106cells。

31、進(jìn)一步，所述藥物可直接使用或以藥物組合物的形式使用。

32、進(jìn)一步，所述藥物組合物包括ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞。

33、進(jìn)一步，所述藥物組合物還包括藥學(xué)上可接受的載體。

34、進(jìn)一步，所述藥物的劑型包括非經(jīng)胃腸道給藥劑型和/或經(jīng)胃腸道給藥劑型。

35、進(jìn)一步，所述非經(jīng)胃腸道給藥劑型包括注射給藥劑型、腔道給藥劑型、粘膜給藥劑型和/或皮膚給藥劑型。

36、進(jìn)一步，所述經(jīng)胃腸道給藥劑型包括片劑、顆粒劑、膠囊劑、溶液劑、散劑、緩釋劑、乳劑、混懸劑、糖漿劑和/或滴劑。

37、優(yōu)選地，所述藥物的劑型選自注射給藥劑型。

38、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明所述藥物組合物的劑型是通過常規(guī)方法制備得到的有利于給藥的劑型，包括但不限于：非經(jīng)胃腸道給藥劑型、經(jīng)腸胃道給藥劑型，具體實(shí)例包括但不限于：水溶液注射劑、粉針劑、丸劑、散劑、片劑、貼劑、栓劑、乳劑、霜?jiǎng)?、凝膠劑、顆粒劑、膠囊劑、氣霧劑、噴霧劑、粉霧劑、緩釋劑和控釋劑等。

39、在一些實(shí)施方案中，所述注射給藥劑型包括但不限于：靜脈注射劑、肌內(nèi)注射劑、皮下注射劑、皮內(nèi)注射劑及腔內(nèi)注射劑等多種注射劑。

40、在一些實(shí)施方案中，所述腔道給藥劑型包括但不限于：栓劑、氣霧劑、泡騰片、滴劑、滴丸劑等，用于在直腸、陰道、尿道、鼻腔、耳道等。

41、在一些實(shí)施方案中，所述粘膜給藥劑型包括但不限于：滴眼劑、滴鼻劑、眼用軟膏劑、含漱劑、舌下片劑、粘貼片劑、貼膜劑等。

42、在一些實(shí)施方案中，所述皮膚給藥劑型包括但不限于：外用溶液劑、洗劑、搽劑、軟膏劑、硬膏劑、糊劑、貼劑等。

43、本發(fā)明的第三方面提供了一種體外減輕和/或緩解肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞或腎小管上皮細(xì)胞脂肪變性的方法。

44、進(jìn)一步，所述方法包括將肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞或腎小管上皮細(xì)胞與ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞接觸，或?qū)⒏渭?xì)胞、心肌細(xì)胞或腎小管上皮細(xì)胞與ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞的分泌物接觸。

45、在一些實(shí)施方案中，脂肪變性多發(fā)生在肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞或腎小管細(xì)胞中。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)證明了ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞能夠減少肝組織的脂肪變性；因此，本發(fā)明所述的ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞或其分泌物能夠減輕和/或緩解肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞或腎小管上皮細(xì)胞脂肪變性。

46、本發(fā)明的第四方面提供了一種評(píng)價(jià)待篩選藥物是否具有治療、預(yù)防、減輕和/或緩解與脂肪變性相關(guān)疾病效果的方法。

47、進(jìn)一步，所述方法包括以ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞作為陽性藥物，評(píng)價(jià)待篩選藥物的效果。

48、進(jìn)一步，所述與脂肪變性相關(guān)疾病包括脂肪性肝病、冠心病、心肌梗死、腎臟疾病、糖尿病、高脂血癥。

49、優(yōu)選地，所述與脂肪變性相關(guān)疾病選自脂肪性肝病。

50、本發(fā)明的第五方面提供了一種治療與脂肪變性相關(guān)疾病的方法。

51、進(jìn)一步，所述方法包括向受試者施用有效量本發(fā)明前面所述的ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞、前面所述的ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞的分泌物、前面所述的藥物組合物。

52、進(jìn)一步，所述與脂肪變性相關(guān)疾病包括脂肪性肝病、冠心病、心肌梗死、腎臟疾病、糖尿病、高脂血癥。

53、優(yōu)選地，所述與脂肪變性相關(guān)疾病選自脂肪性肝病。

54、“治療有效量”將是能夠預(yù)防或至少減緩(減輕)醫(yī)學(xué)病況如脂肪變性的活性劑的量。本公開的細(xì)胞或藥物組合物的劑量和施用可以由臨床藥理學(xué)或藥代動(dòng)力學(xué)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來確定。在治療上使用的本發(fā)明活性劑的有效量將依賴于例如治療目標(biāo)、施用途徑和患者的病況。相應(yīng)地，治療師可能有必要根據(jù)需要調(diào)整劑量和改變施用途徑以獲得最佳治療效果。

55、術(shù)語“受試者”或“患者”可以互換地使用。該術(shù)語包括，但不限于人、非人類動(dòng)物，例如非人靈長(zhǎng)類如黑猩猩和其他猿類和猴種類；農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物如牛、綿羊、豬、山羊和馬；家養(yǎng)受試者如狗和貓；實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物，包括嚙齒類如小鼠、大鼠和豚鼠；等等。該術(shù)語不指示具體的年齡或性別。因此，預(yù)期涵蓋成體和新生的受試者以及胎兒，無論雄性或雌性。術(shù)語“受試者”也包括易感于如貫穿本說明書的通常披露(但不限于此)的病癥或疾病狀態(tài)的活生物。受試者的實(shí)例包括人、狗、貓、牛、山羊和小鼠，包括轉(zhuǎn)基因種類。

56、用于治療時(shí)，“給藥方案”可根據(jù)多種因素而變化，包括所用特定組合物的活性、患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食、給藥時(shí)間、給藥途徑、排泄率、藥物組合以及待預(yù)防或治療的特定疾病的嚴(yán)重程度。盡管藥物組合物的劑量可以根據(jù)患者的病情和體重、疾病的嚴(yán)重程度、藥物形式以及給藥的途徑和持續(xù)時(shí)間而變化，但其可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員適當(dāng)選擇，給藥可以每天進(jìn)行一次，也可以每天進(jìn)行幾次。該劑量不意味著在以任何方式限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的藥物組合物可以以藥丸、糖衣片劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿料或懸浮液的形式配制。

57、在一些實(shí)施方案中，所述ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞的給藥劑量不少于1×104個(gè)/ml(例如不少于1×104個(gè)/ml，不少于3×104個(gè)/ml，不少于5×104個(gè)/ml，不少于7×104個(gè)/ml，不少于1×105個(gè)/ml，不少于3×105個(gè)/ml，不少于5×105個(gè)/ml，不少于7×105個(gè)/ml，不少于1×106個(gè)/ml，不少于3×106個(gè)/ml，不少于5×106個(gè)/ml，不少于7×106個(gè)/ml，不少于1×106個(gè)/ml，不少于3×106個(gè)/ml，不少于5×106個(gè)/ml，不少于7×106個(gè)/ml，不少于1×106個(gè)/ml，不少于3×106個(gè)/ml，不少于5×106個(gè)/ml，不少于7×106個(gè)/ml，不少于1×106個(gè)/ml，不少于3×106個(gè)/ml，不少于5×106個(gè)/ml，不少于7×106個(gè)/ml，不少于1×1010個(gè)/ml，不少于3×1010個(gè)/ml，不少于5×1010個(gè)/ml或不少于7×1010個(gè)/ml，又例如1×105-1×108、7×105-7×106、1×106-5×106個(gè)/ml。

58、在另一些實(shí)施方案中，所述ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞的給藥劑量不少于1×103個(gè)/kg(例如不少于1×103個(gè)/kg，不少于3×103個(gè)/kg，不少于5×103個(gè)/kg，不少于7×103個(gè)/kg，不少于1×104個(gè)/kg，不少于3×104個(gè)/kg，不少于5×104個(gè)/kg，不少于7×104個(gè)/kg，不少于1×105個(gè)/kg，不少于3×105個(gè)/kg，不少于5×105個(gè)/kg，不少于7×105個(gè)/kg，不少于1×106個(gè)/kg，不少于2×106個(gè)/kg，不少于5×106個(gè)/kg，不少于7×106個(gè)/kg，不少于1×107個(gè)/kg，不少于3×107個(gè)/kg，不少于5×107個(gè)/kg，不少于7×107個(gè)/kg，不少于1×108個(gè)/kg，不少于3×108個(gè)/kg，不少于5×108個(gè)/kg，不少于7×108個(gè)/kg，不少于1×109個(gè)/kg，不少于3×109個(gè)/kg，不少于5×109個(gè)/kg，不少于7×109個(gè)/kg，不少于1×1010個(gè)/kg，不少于3×1010個(gè)/kg，不少于5×1010個(gè)/kg或不少于7×1010個(gè)/kg，又例如1×105-1×108、7×105-7×106、1×106-5×106個(gè)/kg。

59、本發(fā)明的ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞可以單獨(dú)給予或與其他療法聯(lián)合給予。本發(fā)明的細(xì)胞與其他療法的共給予可以同時(shí)地或者相繼地進(jìn)行。單個(gè)或者多個(gè)劑量均是可以的。重要的是，使用足以獲得最大療效而無副作用的最小可能量，在考慮所有因素的情況下。

60、本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：

61、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了ipsc分化來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞可用于脂肪性肝病尤其是非酒精性脂肪性肝病的治療，為脂肪性肝病的治療提供了一種新的治療手段。