本發(fā)明屬于藥物制備，具體涉及一種人參皂苷rb1和黃芩素納米制劑的制備方法。

背景技術(shù)：

1、剛地弓形蟲(toxoplasma?gondii)是一種胞內(nèi)寄生蟲，其引起的弓形蟲病在世界范圍內(nèi)廣泛流行，可在人、牛、羊、豬、雞、貓等多種動(dòng)物之間傳播，給人類健康和社會(huì)發(fā)展造成了嚴(yán)重危害。正常人感染弓形蟲后，一般都是隱性感染不會(huì)出現(xiàn)明顯癥狀。但如果免疫力低下人群受到了感染，弓形蟲可能會(huì)侵入到大腦、肝、心臟等系統(tǒng)，若孕婦不幸感染弓形蟲就會(huì)引起相當(dāng)嚴(yán)重的后果，比如自然流產(chǎn)、胎兒畸形以及導(dǎo)致新生兒感染等嚴(yán)重結(jié)果。截至目前，針對(duì)弓形蟲感染尚無特效治療藥和強(qiáng)有力的預(yù)防措施，臨床上普遍采取乙胺嘧啶和磺胺嘧啶聯(lián)合使用的方法來治療弓形蟲病，雖然取得一定療效，但存在不良反應(yīng)多、不能長期服用、停藥后復(fù)發(fā)率高等缺陷。

2、目前，中草藥及其提取物可被篩選作為抗弓形蟲藥物，比如，參考文獻(xiàn)1(王韻篪，鞠玉琳，姚琳，3種黃芩黃酮物質(zhì)體外抗弓形蟲效果比較試驗(yàn)[j]，延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)，2012，34，75-78，doi：10.13478/j.cnki.jasyu.2012.01.008)公開了3種黃芩黃酮物質(zhì)體外抗弓形蟲效果比較試驗(yàn)，證明黃芩素在體內(nèi)外均可以明顯抑制弓形蟲生長。并且黃芩素對(duì)利什曼原蟲(leishmania?spp)和隱孢子蟲(cryptosporidium?parvum)等原生動(dòng)物寄生蟲也具有較好的抑制作用。但其自身溶解度低、利用率不高。

3、為進(jìn)一步提高藥物利用率、延長藥效持續(xù)時(shí)間和優(yōu)化藥物使用劑量，尋找并選取一種適合的藥物遞送系統(tǒng)有著極其充分的科研價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。人參皂苷在多種疾病中展現(xiàn)出良好的治療效果，公開號(hào)為cn?108888628a的發(fā)明申請(qǐng)公開了一種人參皂苷rh2在制備抗弓形蟲復(fù)方制劑中的應(yīng)用，通過體外藥物毒性實(shí)驗(yàn)、體外和體內(nèi)抗弓形蟲活性實(shí)驗(yàn)，比較人參皂苷rh2抗弓形蟲效果，人參皂苷rh2具有較好的弓形蟲抑制作用，對(duì)于弓形蟲感染宿主具有保護(hù)作用。但是人參皂苷rh2具有微弱的毒副作用。

4、另外，參考文獻(xiàn)2(lixin?du，huiling?lu，et?a1.preparation，characterizationand?in?vivo?pharmacokinetic?study?of?ginsenoside?rb?1-plga?nanopartic1es，scientific?reports，2023，13，18472，doi：10.1038/s41598-023-45858-x)表明人參皂苷rb?1具有二元結(jié)構(gòu)組成，包括疏水性三萜類糖苷配基和親水性糖側(cè)鏈。納米沉淀技術(shù)使人參皂苷rb1自組裝成膠束或膠束樣納米聚集體，親水性糖基團(tuán)聚集在外表面，而疏水性鏈段在內(nèi)部保持隔離，從而形成納米顆粒，增強(qiáng)人參皂苷rb1的水溶性，可以作為綠色無毒的藥物遞送載體，有效提升藥物藥效，促進(jìn)藥物吸收利用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種人參皂苷rb1和黃芩素納米制劑的制備方法，用以抑制弓形蟲生長，提高傳統(tǒng)抗弓形蟲藥物的利用率，延長藥物使用壽命，降低藥物毒性。

2、為了達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了一種人參皂苷rb1和黃芩素納米制劑的制備方法，所述包括以下步驟：

4、(1)分別配制人參皂苷rb1溶液和黃芩素溶液；

5、(2)將步驟(1)制得的人參皂苷rb1溶液和黃芩素溶液進(jìn)行混合，采用納米沉淀策略混合得到人參皂苷rb?1和黃芩素納米制劑。

6、優(yōu)選的，所述的人參皂苷rb1和黃芩素納米制劑的制備方法的步驟(1)中，黃芩素溶液的溶劑為有機(jī)溶劑。有機(jī)溶劑可以提升黃芩素的溶解度，降低細(xì)胞毒性。更優(yōu)選的，采用二甲基亞砜作為有機(jī)溶劑。

7、優(yōu)選的，所述的人參皂苷rb1和黃芩素納米制劑的制備方法的步驟(2)中，人參皂苷rb1與黃芩素的質(zhì)量比為1：6～2：1。

8、更優(yōu)選的，所述的人參皂苷rb1和黃芩素納米制劑的制備方法的步驟(2)中人參皂苷rb1與黃芩素的最佳質(zhì)量比為1：1/2。

9、優(yōu)選的，所述的人參皂苷rb1和黃芩素納米制劑的制備方法的步驟(2)中，采用漩渦和納米沉淀中的垂直混合器方式進(jìn)行混合?；阡鰷u和垂直混合器的方式進(jìn)行混合，可以實(shí)現(xiàn)溶液之間的快速與可控混合，通過動(dòng)力學(xué)方式調(diào)控納米聚集體的形核與生長過程，得到粒徑更小、分散更為均勻的納米顆粒。

10、優(yōu)選的，所述的漩渦混合是在漩渦的作用下混合30分鐘。

11、優(yōu)選的，所述的垂直混合器是在hs-3垂直混合器中施加轉(zhuǎn)速20轉(zhuǎn)/分鐘混合，混合時(shí)間至少8小時(shí)。

12、優(yōu)選的，所述的人參皂苷rb1和黃芩素納米制劑的制備方法中采用透析的方式，使用截留分子量為1000的透析袋獲得人參皂苷rb1和黃芩素納米制劑。

13、通過透析的方式，可以去除有機(jī)溶劑及其他雜質(zhì)。

14、本發(fā)明還提供了一種所述的制備方法制備的人參皂苷rb1和黃芩素納米制劑。

15、本發(fā)明還提供了人參皂苷rb1和黃芩素納米制劑在制備抗弓形蟲藥物中的應(yīng)用。

16、本發(fā)明還提供了一種抗弓形蟲藥物，活性物質(zhì)包含所述的人參皂苷rb1和黃芩素納米制劑。

17、本發(fā)明的有益效果在于：

18、本發(fā)明的人參皂苷rb1和黃芩素納米制劑的制備方法，采用納米沉淀技術(shù)組裝成納米共遞送系統(tǒng)，基于納米沉淀技術(shù)中的動(dòng)力學(xué)調(diào)控納米聚集體的形核與生長過程，人參皂苷rb1包裹黃芩素形成粒徑較小的納米制劑，合成操作簡(jiǎn)單，在藥物應(yīng)用中具有更好的靶向性；

19、所制得的人參皂苷rb1和黃芩素納米制劑，既能發(fā)揮黃芩素良好的抗弓形蟲效果，又能發(fā)揮人參皂苷rb1的藥物可溶性，大大提高了藥物利用率，包裹得方式延長了藥物的使用壽命，并且具有生物安全性，對(duì)正常組織損傷較小。

20、圖1為人參皂苷rb1(grb1)和黃芩素(bai)納米制劑(grb1/bai?nps)的結(jié)果圖。

21、圖2為各實(shí)施例中制備的grb1/bai?nps的粒徑大小結(jié)果圖。

22、圖3為人參皂苷rb1(grb1)、黃芩素(bai)和grb1/bai?nps的掃描電鏡圖。

23、圖4為grb1/bai納米制劑與bai溶液在濃度為6.25μm-400μm范圍內(nèi)對(duì)人包皮層纖維細(xì)胞(hff)的細(xì)胞毒性結(jié)果圖，其中圖4中的左圖為grb1/bai納米制劑對(duì)hff細(xì)胞毒性的結(jié)果圖；圖4中的右圖為bai溶液對(duì)hff細(xì)胞毒性的結(jié)果圖。

24、圖5為grb1/bai納米制劑與bai溶液的半數(shù)抑制濃度(ic50)的結(jié)果圖，其中圖5中的左圖為bai溶液的半數(shù)抑制濃度(ic50)的結(jié)果圖；圖5中的右圖為grb1/bai納米制劑的半數(shù)抑制濃度(ic50)的結(jié)果圖。

25、圖6為grb1/bai納米制劑的體外釋放結(jié)果圖。

26、圖7為小鼠體內(nèi)bai溶液的抗弓形蟲結(jié)果圖。

27、圖8為小鼠體內(nèi)grb1/bai納米制劑的抗弓形蟲結(jié)果圖。