本發(fā)明涉及生物提取技術(shù)，具體為一種鮮靈芝活性成分穩(wěn)定提取及活性保持方法。

背景技術(shù)：

1、靈芝(ganodermalucidum),又稱莎草,是真菌門擔(dān)子菌亞門多孔菌目靈芝菌科靈芝屬藥食兩用真菌。靈芝中含有多糖、三萜、生物堿、氨基酸及有機鍺等多種活性成分,具有抗氧化、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、保肝護(hù)肝等生物學(xué)功效。但是,靈芝子實體結(jié)構(gòu)致密,外層菌絲中充滿樹脂,導(dǎo)致活性物質(zhì)釋放困難，并且人的消化系統(tǒng)不易分解該物質(zhì)，導(dǎo)致未經(jīng)處理的靈芝的功效成分很難被消化吸收。

2、因此，直接將靈芝進(jìn)行食用的話，會大幅度的降低活性成分吸收效果，無法進(jìn)行有效的利用其活性成分，大幅度的降低了其作用效果，并且由于吸收率較低，會導(dǎo)致大量的活性成分的浪費。

3、目前，現(xiàn)有的提取方法大多存在多糖得率低、提取過程不綠色，提取穩(wěn)定性相對較差等缺陷。

4、因此，開發(fā)一種穩(wěn)定的提取技術(shù)，顯得十分重要。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供一種鮮靈芝活性成分穩(wěn)定提取及活性保持方法。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

3、一種鮮靈芝活性成分穩(wěn)定提取及活性保持方法，具體包括如下步驟：

4、a、鮮靈芝采摘后用蒸餾水洗凈后，再進(jìn)行真空干燥，干燥后在超低溫冰柜中并在-80～-70℃溫度下冷凍10～12h，將冷凍后的鮮靈芝置于球磨粉碎機中進(jìn)行粉碎處理，對粉碎后物料過篩，得到靈芝微粉；

5、b、對步驟a得到的靈芝微粉進(jìn)行脈沖電場處理，得到經(jīng)過脈沖電場處理后的靈芝微粉；

6、對脈沖電場處理后的靈芝進(jìn)行壓差膨化處理，得到預(yù)處理靈芝微粉；

7、再對預(yù)處理靈芝微粉進(jìn)行酶解處理，經(jīng)過55℃10min滅酶處理，干燥，得到破壁靈芝微粉；

8、c、對步驟b得到的破壁靈芝微粉進(jìn)行逆流提取，得到提取液；

9、d、對步驟c得到的提取液采用微濾、納濾、反滲透的三合一過濾法進(jìn)行過濾處理，得到濃縮過濾液；

10、e、對濃縮過濾液進(jìn)行凍干處理，最后得到鮮靈芝活性成分凍干粉；

11、f對步驟e中得到的鮮靈芝活性成分凍干粉進(jìn)行超高溫瞬時滅菌，真空密封灌裝保存，即可；

12、其中超高溫瞬時殺菌的加熱溫度為136℃、加熱時間為4s。

13、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，步驟a中蒸餾水清洗為常溫下進(jìn)行清洗，清洗時間為10～15min；

14、真空干燥溫度為50℃，時間為10h。

15、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，對粉碎后物料過篩為過60目篩；

16、設(shè)定轉(zhuǎn)速為2200r/min，最佳粉碎時間為20min。

17、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，步驟b中脈沖電場處理為采用兩段脈沖電場處理，整個脈沖電場處理為在靈芝微粉配制成漿液的條件下進(jìn)行，具體包括：初段脈沖電場處理、空白段、終段脈沖電場處理；

18、靈芝微粉配制成漿液為：

19、將蒸餾水預(yù)熱至50℃，然后保溫10min，得到預(yù)熱蒸餾水，再將靈芝微粉添加到預(yù)熱蒸餾水中，以500r/min轉(zhuǎn)速攪拌20min，得到靈芝微粉漿液，保溫備用；

20、靈芝微粉與蒸餾水按1:5質(zhì)量比例混合；

21、經(jīng)過兩段脈沖電場處理后，再將靈芝微粉漿液經(jīng)過噴霧干燥，得到經(jīng)過脈沖電場處理后的靈芝微粉。

22、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，所述初段脈沖電場處理的電場強度為1.2-1.6kv/cm、脈沖寬度為18-20μs、脈沖次數(shù)為6-8次；

23、所述空白段為初段脈沖電場處理結(jié)束后，終段脈沖電場處理未開始前的時間；

24、所述空白段時間為5min，空白段采用超聲波處理，超聲波頻率為40khz；

25、所述終段脈沖電場處理的電場強度為1.8-2.0kv/cm、脈沖寬度為22-25μs、脈沖次數(shù)為10-12次。

26、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，步驟b中壓差膨化處理為：

27、將經(jīng)過脈沖電場處理后的靈芝微粉添加到膨化罐中，在膨化溫度70～80℃下處理1～1.5min，使膨化壓力達(dá)到0.2～0.3mpa，然后泄壓，真空干燥溫度為50～55℃，維持60～70min，得到預(yù)處理靈芝微粉。

28、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，步驟b中酶解處理為：

29、將預(yù)處理靈芝微粉按1:5質(zhì)量比例與蒸餾水進(jìn)行混合均勻，然后再添加復(fù)合酶，調(diào)節(jié)溫度至38℃，水浴保溫處理4h，完成酶解處理；

30、其中，混合體系中復(fù)合酶的質(zhì)量濃度為3-4％；

31、所述復(fù)合酶由纖維素酶、幾丁質(zhì)酶和葡糖苷酶混合而成；

32、其中，纖維素酶、幾丁質(zhì)酶和葡糖苷酶混合質(zhì)量比為3:1:1。

33、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，步驟c中逆流提取采用三級罐組動態(tài)逆流提取方法進(jìn)行；

34、三級罐組動態(tài)逆流提取方法具體包括：將一級提取得到的一級提取液作為二級提取的提取溶劑，二級提取的二級提取液作為三級提取的提取溶劑，所述提取液濾出后快速冷卻至20-30℃；

35、其中，一級提取溶劑為蒸餾水，提取溫度為85-95℃，提取時間為20-30min。

36、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，步驟d中微濾、納濾、反滲透的三合一過濾法為：

37、其中，微濾膜的孔徑為0.2μm；

38、納濾膜的孔徑為0.01μm；

39、反滲透膜的孔徑為0.3nm；

40、微濾參數(shù)為：在溫度36℃，操作壓力0.15mpa，操作頻率30hz的條件下微濾處理40min；

41、納濾參數(shù)為：在溫度36℃，操作壓力0.52mpa，操作頻率35hz，過膜時間為40min；

42、反滲透參數(shù)為：料液溫度36℃，操作壓力2.1mpa，操作頻率35hz，過膜時間為40min。

43、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，步驟e中凍干處理具體方法為：

44、將濃縮過濾液先在溫度-48～-45℃下進(jìn)行預(yù)冷凍20min；

45、經(jīng)過預(yù)冷凍后，再進(jìn)行調(diào)節(jié)溫度-25～-20℃，同時開啟真空，調(diào)節(jié)真空度至0.5pa，保持10-12h，再繼續(xù)調(diào)節(jié)溫度至-3～-2℃，保溫5-6h，最后再調(diào)節(jié)溫度至50-52℃，保溫6-7h，完成凍干處理。

46、保存溫度為1-2℃。

47、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

48、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的鮮靈芝提取方法，具有高效率、環(huán)保、穩(wěn)定與易保存有效成分活性等優(yōu)點。

49、本發(fā)明中采用的逆流提取能夠充分利用系統(tǒng)中固液兩相的濃度梯度，使提取液出料時達(dá)到更高濃度的平衡，這不僅可以提高被提取物的提取率，還能節(jié)約能耗、縮短提取時間。

50、本發(fā)明提取方法通過各步驟依次的疊加配合作用，能夠較大程度上自鮮靈芝中提取其活性成分，并且，提取率較高，能夠大幅度的降低了提取過程中鮮靈芝中的活性成分的損失。

51、本發(fā)明通過步驟b中多處理步驟的配合促進(jìn)下，能夠極大的提高了鮮靈芝中有效成分的溶出率，便于后續(xù)提取，極大的提高了對于鮮靈芝的提取穩(wěn)定性。

52、本發(fā)明通過首先對鮮靈芝進(jìn)行了冷凍處理，再經(jīng)過研磨，起到初步的對于靈芝的破碎作用，便于后續(xù)處理，再通過多段脈沖電場處理通過在細(xì)胞壁上施加大于一定閾值的高頻交流電，產(chǎn)生較高的電位梯度，這種強烈的電場變化導(dǎo)致靈芝微粉中帶電荷離子和細(xì)胞內(nèi)極性分子的空間取向隨電流發(fā)生高頻變化，離子之間、分子之間相互摩擦和碰撞，從而實現(xiàn)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞。當(dāng)靈芝微粉細(xì)胞暴露在脈沖電場中時，電場的強度快速改變，形成短暫的高電壓脈沖，這些脈沖的強度足以破壞細(xì)胞壁的完整性，增加細(xì)胞的通透性，起到了初步破碎的效果，能夠為后續(xù)復(fù)合酶的破壁起到了較好的鋪墊作用，從而提高了鮮靈芝活性成分的提取，再配合壓差膨化處理，壓差是指物料在膨化的過程中由腔體中的高壓與真空罐連通時變成低壓的過程，該過程導(dǎo)致脈沖電場處理后的靈芝微粉內(nèi)部水分瞬間汽化，使得靈芝微粉形成蓬松的結(jié)構(gòu)狀態(tài)，能夠破壞靈芝細(xì)胞的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，從而，能夠使得鮮靈芝細(xì)胞中的活性成分能夠更容易釋放出來，這樣，能夠有利于后續(xù)對于鮮靈芝活性成分的提取，大幅度的提高了對于鮮靈芝活性成分的提取率，為了進(jìn)一步的提高對于鮮靈芝活性成分的釋放，本發(fā)明進(jìn)一步的配合復(fù)合酶的處理，進(jìn)一步的破壞鮮靈芝的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步的促進(jìn)鮮靈芝中有效成分的釋放。

53、為了保持活性成分的穩(wěn)定性，本發(fā)明通過在低溫、避光、真空環(huán)境下對所提取的靈芝活性成分進(jìn)行保存，能夠抑制微生物的生長和酶的活性，從而能夠有效的避免了靈芝中活性成分的損失，保證了靈芝中活性成分的較高的功效，能夠極大的延長了對于鮮靈芝活性成分的保存期限。