本發(fā)明專利涉及靜電紡絲纖維膜，尤其是一種促神經(jīng)化靜電紡絲纖維膜及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、影響糖尿病創(chuàng)面延遲愈合的原因復(fù)雜多樣，包括過度的炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、周圍神經(jīng)損傷和血管減少、細菌感染以及鋅缺乏等。其中，氧化應(yīng)激、周圍神經(jīng)損傷和血管減少是主要因素。

2、在糖尿病患者中，長期高血糖微環(huán)境導(dǎo)致大量活性氧（ros）和炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，從而引起內(nèi)皮細胞功能障礙和神經(jīng)元受損，抑制細胞增殖和遷移，同時還造成內(nèi)皮細胞成管不足。這影響了輸送到傷口區(qū)域的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，加劇了周圍神經(jīng)的缺血缺氧，進一步阻礙了糖尿病創(chuàng)面的修復(fù)。隨著糖尿病的進展，至少50%的糖尿病患者會出現(xiàn)糖尿病神經(jīng)病變。更糟糕的是，由于高血糖和微血管并發(fā)癥，糖尿病患者的外周神經(jīng)修復(fù)變得困難，導(dǎo)致節(jié)段性軸突脫髓鞘和神經(jīng)生長緩慢。這使得神經(jīng)纖維無法敏銳地感知環(huán)境變化并傳遞信號，從而阻礙了調(diào)控傷口上皮再生的生物活動。

3、研究表明，神經(jīng)再生通常早于血管重建，通過調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)和生長因子的分泌，促進新生血管的生成。神經(jīng)與血管的雙向相互作用在皮膚創(chuàng)面修復(fù)中發(fā)揮著重要作用。盡管目前已研發(fā)出多種適合傷口的多功能敷料，但關(guān)于促進神經(jīng)血管耦合再生的敷料相關(guān)報道仍然較少。因此，促進傷口中神經(jīng)血管耦合作為有效治療糖尿病創(chuàng)面的突破口值得關(guān)注。

4、3,5-二羥基苯甲酸（3,5-dihydroxybenzoic?acid,?3,5-dhba）已被證實能夠通過調(diào)控神經(jīng)前體細胞的細胞周期、能量代謝和神經(jīng)元分化等機制，有效促進受損神經(jīng)的修復(fù)，展現(xiàn)出獨特的神經(jīng)源性，其作為特異性乳酸受體（hcar1）激動劑，還能夠增強大腦中hcar1及其配體的作用，通過上調(diào)erk1/2和akt的磷酸化，促進血管內(nèi)皮生長因子a（vegfa）的表達及血管生成。因此其在促進糖尿病創(chuàng)面神經(jīng)血管耦合再生方面可能具有良好的應(yīng)用前景。

5、但作為一種黃酮類化合物，3,5-dhba的抗氧化作用依賴于其酚類部分，而該部分的活性不穩(wěn)定，易被氧化。在糖尿病高氧化應(yīng)激環(huán)境中，3,5-dhba容易與活性氧（ros）反應(yīng)，故其抗氧化性能嚴(yán)重受限。這種氧化敏感性不僅限制了3,5-dhba在體內(nèi)的生物活性和持久性，還顯著增加了其在制劑開發(fā)和儲存過程中的不穩(wěn)定性。因此，盡管3,5-dhba在神經(jīng)再生領(lǐng)域展現(xiàn)出良好的治療前景，但其臨床應(yīng)用仍需克服氧化穩(wěn)定性這一難題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是為了解決3,5-dhba在神經(jīng)再生領(lǐng)域的臨床應(yīng)用不穩(wěn)定性，提供負載有3,5-dhba/zn-mof顆粒的促神經(jīng)化靜電紡絲纖維膜及其制備方法，通過該顆粒的剛性結(jié)構(gòu)，能夠有效保護3,5-dhba免受氧化和失活，從而克服了其作為苯酚類化合物的天然缺陷。

2、本發(fā)明所述的一種促神經(jīng)化靜電紡絲纖維膜，所述促神經(jīng)化靜電紡絲纖維膜包括若干負載有3,5-dhba?/zn-mof顆粒的納米纖維，所述3,5-dhba?/zn-mof顆粒由zn2+和3,5-dhba自組裝形成，所述促神經(jīng)化靜電紡絲纖維膜中zn2+的質(zhì)量百分比為0.48-0.66%。

3、優(yōu)選的，所述納米纖維的直徑為380-440?nm；3,5-dhba/zn-mof顆粒的粒徑為100-200?nm，結(jié)晶度為55.6%-64.0%。

4、本發(fā)明提供的促神經(jīng)化靜電紡絲纖維膜的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

5、步驟(1)：配制zn2+濃度為0.44-1.32?mg/ml的電紡溶液，對所述電紡溶液進行靜電紡絲處理獲得納米纖維膜；

6、步驟(2)：將步驟(1)所得納米纖維膜浸入3,5-dhba配體溶液中，自組裝反應(yīng)0.5-2h后取出，經(jīng)烘干得到所述促神經(jīng)化靜電紡絲纖維膜（pgz電紡膜），所述pgz電紡膜中的納米纖維呈三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。

7、優(yōu)選的，步驟(1)所述電紡溶液還包括生物相容性親水聚合物，所述生物相容性聚合物選自聚己內(nèi)酯、丙交酯-己內(nèi)酯共聚物、海藻酸鈉、殼聚糖、明膠或透明質(zhì)酸中的任意一種或至少兩種的組合；步驟(1)所述電紡溶液還包括水溶性溶劑。

8、優(yōu)選的，步驟(1)所述電紡溶液為明膠/聚己內(nèi)酯電紡溶液，所述納米纖維膜為明膠/聚己內(nèi)酯納米纖維膜。

9、優(yōu)選的，步驟(2)所述3,5-dhba配體溶液中3,5-dhba的摩爾濃度不小于四分之一步驟(1)所述電紡溶液中zn2+的摩爾濃度。

10、優(yōu)選的，所述3,5-dhba配體溶液的質(zhì)量體積百分比濃度為4%。

11、具體的，步驟(1)所述電紡溶液由聚己內(nèi)酯溶液和明膠水溶液混合制得。

12、具體的，步驟(1)包括：以三氟乙醇為溶劑，配制質(zhì)量體積百分比濃度為10%的聚己內(nèi)酯溶液；再加入六水合硝酸鋅，攪拌均勻，獲得聚己內(nèi)酯/硝酸鋅溶液，所述聚己內(nèi)酯/硝酸鋅溶液中的六水合硝酸鋅的濃度為4-12?mg/ml；接著，將質(zhì)量體積百分比濃度為20%的明膠水溶液與聚己內(nèi)酯/硝酸鋅溶液等體積混合，得到明膠/聚己內(nèi)酯電紡溶液，明膠/聚己內(nèi)酯電紡溶液中的zn2+濃度為0.44-1.32?mg/ml；對明膠/聚己內(nèi)酯電紡溶液進行靜電紡絲處理，獲得明膠/聚己內(nèi)酯納米纖維膜。

13、優(yōu)選的，步驟(2)所述烘干的參數(shù)為烘干溫度37?℃，烘干時間3?h。

14、具體的，步驟(2)的自組裝反應(yīng)時間優(yōu)選為0.5-1?h。

15、優(yōu)選的，所述靜電紡絲參數(shù)為：加載電壓15-20?kv高壓，注射速度0.2-1.0?ml/h，收集器與針尖間距100-120?mm，收集器轉(zhuǎn)速100-200rpm。

16、優(yōu)選的，步驟(1)中的zn2+來自于六水合硝酸鋅、醋酸鋅、氯化鋅中的任意一種。

17、本發(fā)明提供的一種促神經(jīng)化靜電紡絲纖維膜在敷料材料中的應(yīng)用，所述促神經(jīng)化靜電紡絲纖維膜中zn2+的質(zhì)量百分比為0.48-0.66%，所述促神經(jīng)化靜電紡絲纖維膜由上述制備方法制得。

18、本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明制備的含有3,5-dhba?/zn-mof顆粒的聚己內(nèi)酯（pcl）/明膠（gel）電紡纖維膜，不僅可以清除ros，還可以促進血管神經(jīng)協(xié)同再生，加速糖尿病創(chuàng)面修復(fù)，且制備方法簡便易行，原料實惠易得；

19、pgz電紡膜上負載有zn2+與3,5-dhba靜電配位自動組裝成特殊結(jié)構(gòu)的晶體聚合物，所得pgz電紡膜在物理、化學(xué)和生物性能都符合創(chuàng)面敷料的特性；

20、pgz電紡膜在藥物釋放特性上的優(yōu)勢：釋放的zn2+和3,5-dhba相對緩慢持久，不僅避免了初始爆發(fā)性釋放所帶來的生物毒性，還可以保護3,5-dhba在體內(nèi)的生物活性和持久性，有效提升高氧化應(yīng)激環(huán)境下3,5-dhba的臨床應(yīng)用穩(wěn)定性；

21、3,5-dhba?/zn-mof顆粒的結(jié)晶度決定了pgz電紡膜表面殘留未配位的羧基、酚羥基等化學(xué)基團的數(shù)量，可通過調(diào)節(jié)電紡溶液中的zn2+濃度控制結(jié)晶度，實現(xiàn)pgz電紡膜的凝血性能調(diào)整，以適配不同的應(yīng)用領(lǐng)域；

22、體外實驗結(jié)果顯示，pgz電紡膜不僅可以促進神經(jīng)細胞、內(nèi)皮細胞和成纖維細胞生長和遷移，并保護細胞免受高糖下氧化應(yīng)激；同時具有良好的抗氧化性能，對神經(jīng)細胞的修復(fù)起到了顯著作用，促進了神經(jīng)軸突生長、血管生成和膠原沉積；糖尿病大鼠皮膚損傷模型進一步驗證了其促進糖尿病大鼠創(chuàng)面愈合的良好效果；為神經(jīng)血管耦合修復(fù)慢性糖尿病創(chuàng)面治療領(lǐng)域提供了新思路。