本發(fā)明提供一種體內生成car-t的納米顆粒及其應用，屬于醫(yī)用配制品。

背景技術：

1、嵌合抗原受體t細胞（簡稱為car-t細胞）療法已成為癌癥治療中突破性的免疫治療方法。為了克服目前體外car-t細胞治療產(chǎn)品的復雜性和高制造成本，近年來已經(jīng)開發(fā)出直接在體內生產(chǎn)car-t細胞的替代策略。該策略包括通過工程納米顆粒或病毒載體直接輸注car基因，在體內產(chǎn)生car-t細胞。

2、trop2是一種36kda的跨膜糖蛋白，主要在上皮細胞中表達，首次在人滋養(yǎng)層細胞中發(fā)現(xiàn)。trop2通過與相關靶標結合，影響上皮屏障的緊密連接，增加腫瘤增殖，激活raf和nf-kappa，抑制igf-1r信號。成體組織中trop2表達很少或不表達。相反，trop2在多種癌癥中過表達，其表達與腫瘤侵襲性行為、癌癥進展和不良預后相關。因此，有必要針對表達trop2的癌細胞進行治療。

3、有研究表明，il-15可以增強干細胞樣記憶car-t細胞群，從而導致優(yōu)越的腫瘤殺傷能力和降低pd-1的表達，同時提高car-t細胞的持久性和抗腫瘤活性。腫瘤微環(huán)境中相關趨化因子分泌的增加與car-t細胞向腫瘤部位運輸?shù)母纳朴嘘P。

4、現(xiàn)有技術未見有將trop2單鏈抗體制備成納米顆粒，然后再偶聯(lián)cd7抗體的相關報道。

技術實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術存在的不足，本發(fā)明提供一種體內生成car-t的納米顆粒及其應用，采用lnp包載含trop2單鏈抗體的mrna，并偶聯(lián)cd7抗體，制備得到偶聯(lián)cd7抗體的lnp納米顆粒，實現(xiàn)以下發(fā)明目的：所述偶聯(lián)cd7抗體的lnp納米顆粒，在體內形成car-t細胞，發(fā)揮體內抗腫瘤效果；所述偶聯(lián)cd7抗體的lnp納米顆粒轉染的t細胞，對宮頸癌hela細胞、結直腸癌lovo細胞具有較高的體外殺傷效率。

2、為解決上述技術問題，本發(fā)明采取以下技術方案：

3、一種體內生成car-t的納米顆粒，所述納米顆粒為偶聯(lián)cd7抗體的包載mrna的納米顆粒；所述mrna由目的基因轉錄得到；所述目的基因包括trop2單鏈抗體；所述trop2單鏈抗體的核苷酸序列如seq?id?no：1所示。

4、所述目的基因的核苷酸序列如seq?id?no：2所示。

5、所述cd7抗體的重鏈氨基酸序列如seq?id?no：5所示，輕鏈氨基酸序列如seqidno：6所示。

6、所述納米顆粒為采用lnp包載mrna的納米顆粒。

7、所述納米顆粒中mrna的濃度為36-44μg/ml。

8、所述的納米顆粒在制備治療宮頸癌和/或結直腸癌藥品中的應用。

9、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明取得以下有益效果：

10、本發(fā)明對trop2單鏈抗體的核苷酸序列進行優(yōu)化，構建包含trop2單鏈抗體的car，然后轉錄得到mrna，制備得到包載mrna的lnp，然后采用氨基酸序列優(yōu)化后的cd7抗體偶聯(lián)包載mrna的lnp，其在t細胞中的轉染效率高，注射到小鼠腫瘤模型內，可以延長小鼠的生存期；其轉染后的t細胞，對hela細胞和lovo細胞的殺傷效率高。

技術特征：

1.一種體內生成car-t的納米顆粒，其特征在于：所述納米顆粒為偶聯(lián)cd7抗體的包載mrna的納米顆粒；所述mrna由目的基因轉錄得到；所述目的基因包括trop2單鏈抗體；所述trop2單鏈抗體的核苷酸序列如seq?id?no：1所示。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種體內生成car-t的納米顆粒，其特征在于：所述目的基因的核苷酸序列如seq?id?no：2所示。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種體內生成car-t的納米顆粒，其特征在于：所述cd7抗體的重鏈氨基酸序列如seq?id?no：5所示，輕鏈氨基酸序列如seq?id?no：6所示。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種體內生成car-t的納米顆粒，其特征在于：所述納米顆粒為采用lnp包載mrna的納米顆粒。

5.根據(jù)權利要求1所述的一種體內生成car-t的納米顆粒，其特征在于：所述納米顆粒中mrna的濃度為36-44μg/ml。

6.根據(jù)權利要求1-5任一項所述的納米顆粒在制備治療宮頸癌和/或結直腸癌藥品中的應用。

技術總結
本發(fā)明提供一種體內生成CAR?T的納米顆粒及其應用，屬于醫(yī)用配制品技術領域。所述納米顆粒為偶聯(lián)CD7抗體的包載mRNA的納米顆粒；所述mRNA由目的基因轉錄得到；所述目的基因包括TROP2單鏈抗體；所述TROP2單鏈抗體的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。本發(fā)明對TROP2單鏈抗體的核苷酸序列進行優(yōu)化，構建包含TROP2單鏈抗體的CAR，然后轉錄得到mRNA，制備得到包載mRNA的LNP，然后采用氨基酸序列優(yōu)化后的CD7抗體偶聯(lián)包載mRNA的LNP，其在T細胞中的轉染效率高，注射到小鼠腫瘤模型內，可以延長小鼠的生存期；其轉染后的T細胞，對HELA細胞和LOVO細胞的殺傷效率高。

技術研發(fā)人員：劉明錄,金海鋒,強邦明,王立新,韓慶梅,馮建海,張傳鵬,許淼
受保護的技術使用者：山東省成體細胞產(chǎn)業(yè)技術研究院有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/2