本發(fā)明涉及醫(yī)藥，具體涉及一種魚腥草提取物的提取分離方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、慢性阻塞性肺疾病（簡稱慢阻肺、copd）是嚴(yán)重危害居民健康的重大慢病之一，其特征是持續(xù)存在的氣流受限和相應(yīng)的呼吸系統(tǒng)癥狀。近年來，越來越多的研究揭示了細(xì)胞凋亡和氣道黏液分泌過多在?copd?發(fā)病機(jī)制中的重要作用。

2、首先，demedts?等人（demedts?ik,?demoor?t,?bracke?kr,?et?al.?role?ofapoptosis?in?the?pathogenesis?of?copd?and?pulmonary?emphysema.?respir?res.2006;7(53):1–10.?doi:?10.1186/1465-9921-7-53）的研究表明，copd?患者肺部的凋亡肺泡上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞均增加，并且這些病理變化不能被結(jié)構(gòu)細(xì)胞的增殖所抵消，從而導(dǎo)致肺組織的破壞和肺氣腫的發(fā)展，提示肺結(jié)構(gòu)細(xì)胞凋亡可能是?copd?發(fā)病機(jī)制中的一個(gè)重要上游事件。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，肺血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡既是?copd?發(fā)病的啟動(dòng)事件，也在疾病進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。peng?等人（peng?h,?yang?m,?chen?zy,?chen?p,?guan?cx,xiang?xd,?et?al.?expression?and?methylation?of?mitochondrial?transcriptionfactor?a?in?chronic?obstructive?pulmonary?disease?patients?with?lung?cancer.plos?one.?2013;8(12):e82739.?doi:?10.1371/journal.pone.0082739）檢測了?11?例copd?患者和?10?例非?copd?患者的肺組織，結(jié)果顯示?copd?患者的肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率顯著升高。吸煙（cs）作為?copd?的主要誘因之一，能夠通過誘導(dǎo)肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡而加速?copd?的發(fā)生和發(fā)展（song?q,?chen?p,?liu?xm.?the?role?of?cigarette?smoke-induced?pulmonary?vascular?endothelial?cell?apoptosis?in?copd.?respir?res.2021?feb?5;22(1):39.?doi:?10.1186/s12931-021-01630-1.?pmid:?33546691;?pmcid:pmc7866753.）。因此，抑制煙霧誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡可能延緩或逆轉(zhuǎn)?copd?的進(jìn)程。

3、其次，氣道上皮表面的黏液和纖毛共同組成了纖毛-黏液屏障，作為抵御細(xì)菌、病毒及有害物質(zhì)入侵的第一道防線。然而，在?copd?患者中，氣道黏液分泌過多是?copd?的另一重要病理特征。過多的黏液分泌導(dǎo)致氣道阻塞，限制氣流通過，降低肺功能，并引起反復(fù)的氣道感染，從而加重?copd?疾病進(jìn)展。（陳玉梅,童瑾.?氣道黏液高分泌機(jī)制的研究進(jìn)展[?j].?基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,?2016,?36(11):?1573?–?1577）。死于?copd?患者的肺組織中有黏液的滯留,甚至黏液堵塞的形成。muc5ac是黏蛋白的主要成分，占?xì)獾郎掀ゐさ鞍追置诳偭康?95%?，muc5ac?在?copd?患者中是過度分泌的。研究表明，muc5ac?含量高的黏液容易在氣道內(nèi)形成栓塞，導(dǎo)致黏液清除受阻，促進(jìn)病原菌定植和感染的持續(xù)，進(jìn)一步加劇疾病惡化。外界刺激（如空氣污染、吸煙、生物質(zhì)燃料）會(huì)顯著增加?muc5ac?的表達(dá)，從而加劇下呼吸道黏液分泌和感染。因此，muc5ac?的分泌水平是copd的關(guān)鍵評價(jià)指標(biāo)，而降低?muc5ac的分泌已成為治療?copd?的重要目標(biāo)。（侯紅豆,張利英,李洋洋,牛帆,李靜,韻成才,雍文興.慢性阻塞性肺疾病中黏蛋白5ac生成增多的機(jī)制及中醫(yī)藥干預(yù)研究進(jìn)展[j].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2024,52(2):108-115）。

4、綜上所述，肺部結(jié)構(gòu)細(xì)胞凋亡的調(diào)控與氣道黏液分泌過多的干預(yù)在?copd?防治中具有重要意義，針對這兩個(gè)機(jī)制的藥物開發(fā)方法具有顯著臨床價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對以上技術(shù)現(xiàn)狀，本發(fā)明提供一種魚腥草提取物的提取分離方法，并進(jìn)一步提供該方法得到的提取物及其應(yīng)用。

2、第一方面，本發(fā)明提供一種魚腥草提取物的提取分離方法，包括如下步驟：

3、（1）將魚腥草藥材用乙醇水溶液提取，得到乙醇提取液；

4、（2）將所述乙醇提取液回收乙醇，得濃縮液；

5、（3）將所述濃縮液用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，取水相得到乙酸乙酯水部位。

6、在一些實(shí)施方式中，所述提取分離方法還包括：（4）將所述乙酸乙酯水部位濃縮干燥得到干膏。

7、在一些實(shí)施方式中，步驟（1）中，所述乙醇水溶液的體積濃度為55-65%，優(yōu)選為58-62%，更優(yōu)選為60%；

8、在一些實(shí)施方式中，步驟（1）中，步驟（1）中，提取溫度為使乙醇水溶液為回流狀態(tài)；

9、在一些實(shí)施方式中，步驟（1）中，提取的次數(shù)為1-5次，優(yōu)選2-3次；每次提取的時(shí)間為1-3h，優(yōu)選1.5-2h；

10、在一些實(shí)施方式中，步驟（1）中，每次提取時(shí)，魚腥草與所用的乙醇水溶液的質(zhì)量體積比為1:5-15（g/ml），優(yōu)選為1:10-12（g/ml）。

11、在一些實(shí)施方式中，步驟（3）中，萃取的次數(shù)為1-5次，優(yōu)選2-4次，更優(yōu)選為3次；

12、在一些實(shí)施方式中，步驟（3）中，每次萃取所用的乙酸乙酯體積為所述濃縮液體積的0.5~3?倍，優(yōu)選為1~1.5倍。

13、在一些實(shí)施方式中，步驟（4）中，所述乙酸乙酯萃取液在40-80℃，真空度0.04~0.09mpa?條件下減壓濃縮至浸膏，浸膏在50-80℃，真空度0.04~0.09mpa干燥得到干膏。

14、第二方面，本發(fā)明提供一種魚腥草提取物，由上述提取分離方法制備得到。

15、第三方面，本發(fā)明提供所述魚腥草提取物的應(yīng)用，具體地，所述應(yīng)用為制備預(yù)防和治療慢性阻塞性肺病的藥物的應(yīng)用。

16、在一些實(shí)施方式中，所述應(yīng)用為制備減少氣道上皮細(xì)胞黏蛋白muc5ac分泌藥物的應(yīng)用。

17、在一些實(shí)施方式中，所述應(yīng)用為制備提高肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞活性和/或抑制肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡藥物中的應(yīng)用。

18、第四方面，本發(fā)明提供一種組合物，其包含所述魚腥草提取物。

19、在一些實(shí)施方式中，所述組合物的劑型為膠囊劑、粉劑、顆粒劑、片劑、混懸劑或注射劑。

20、本發(fā)明通過對魚腥草的提取方法進(jìn)行研究，得到的提取物具有明顯的治療慢阻肺的作用，尤其是減少氣道上皮細(xì)胞黏蛋白muc5ac分泌和抑制肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，較其他提取物具有顯著的效果，有望開發(fā)成預(yù)防和治療慢阻肺的藥物。同時(shí)，魚腥草為藥食兩用類藥材，該提取物也可以制備成保健食品。

技術(shù)特征：

1.一種魚腥草提取物的提取分離方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，還包括以下步驟：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（1）中，所述乙醇水溶液的體積濃度為55-65%；和/或：

4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法提取分離得到的魚腥草提取物。

5.權(quán)利要求4所述的魚腥草提取物在制備預(yù)防或治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用。

6.權(quán)利要求4所述的魚腥草提取物在制備減少氣道上皮細(xì)胞黏蛋白muc5ac分泌的藥物中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求4所述的魚腥草提取物在制備提高肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞活性的藥物中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求4所述的魚腥草提取物在制備抑制肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的藥物中的應(yīng)用。

9.一種組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求4所述的魚腥草提取物。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，其特征在于，其劑型為膠囊劑、粉劑、顆粒劑、片劑、混懸劑或注射劑。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開一種魚腥草提取物的提取分離方法及其應(yīng)用，所述魚腥草提取物的提取分離方法包括將魚腥草藥材用乙醇水溶液提取，得到乙醇提取液，回收乙醇并濃縮，再用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，取水相得到乙酸乙酯水部位，即得魚腥草提取物。該魚腥草提取物可用于制備預(yù)防和治療慢阻肺的藥物，減少氣道上皮細(xì)胞黏蛋白MUC5AC分泌，提高肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞活性，抑制肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，減少肺組織巨噬細(xì)胞數(shù)量，改善肺功能。

技術(shù)研發(fā)人員：齊慧,賈樂宸,李輝欣,徐淑妹
受保護(hù)的技術(shù)使用者：石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6