本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物的制備領(lǐng)域，具體涉及一種胡椒堿-肉桂酸自組裝納米顆粒制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、抗生素耐藥性是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)面臨的一大挑戰(zhàn)?！犊股啬退幮跃C述》報(bào)告稱，到2050年，抗生素耐藥性可能導(dǎo)致每年至少1000萬人死亡。長期使用抗生素，會破壞人體微生物群落，威脅著人們的健康。作為世界衛(wèi)生組織12種高優(yōu)先級病原體之一，金黃色葡萄球菌是一種分布廣泛的病原體，可引起嚴(yán)重的臨床感染。金黃色葡萄球菌幾乎對β?-內(nèi)酰胺類、糖肽類、四環(huán)素類、氨基糖苷類和氟喹諾酮類等抗生素都產(chǎn)生了耐藥性。因此，迫切需要尋找無毒、無殘留和多途徑的抗菌劑來抑制金黃色葡萄球菌感染。

2、植物是天然抗生素的潛在來源之一，利用天然產(chǎn)物抑菌，具有多途徑、多靶點(diǎn)、安全性高等特點(diǎn)，已成為研究的熱點(diǎn)。胡椒堿是胡椒的主要活性成分，具有抗菌、抗癌、抗氧化、抗驚厥等多種作用，但其水溶性差，生物利用度低，限制了其高效利用。納米顆粒具有強(qiáng)滲透性，作為載體，可以實(shí)現(xiàn)化合物的靶向遞送，提高其利用率。設(shè)計(jì)適合遞送胡椒堿納米顆粒成為亟需解決的問題。

3、近年來，利用天然產(chǎn)物作為反應(yīng)物或結(jié)構(gòu)物構(gòu)建功能納米顆粒已成為研究熱點(diǎn)。大量研究發(fā)現(xiàn)一些天然活性成分如萜類、生物堿、黃酮類、多糖類，具備自組裝或共組裝形成遞送載體的能力。相較于目前正在使用的無機(jī)金屬基遞送載體，天然產(chǎn)物自組裝納米顆粒具有生物相容性高、協(xié)同作用強(qiáng)毒性和副作用小等優(yōu)點(diǎn)。然而，現(xiàn)有技術(shù)中少見關(guān)于胡椒堿自組裝納米遞送載體的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于胡椒堿的結(jié)構(gòu)特征和前期研究基礎(chǔ)，本發(fā)明利用胡椒堿與肉桂酸構(gòu)建自組裝納米顆粒，提高胡椒堿抑制金黃色葡萄球菌能力。

2、為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明第一方面提供了一種胡椒堿-肉桂酸自組裝納米顆粒，所述自組裝納米顆粒為胡椒堿與肉桂酸構(gòu)建而成的自組裝納米顆粒；其制備方法為：將0.01mmol/l胡椒堿和0.01mmol/l肉桂酸混勻，得到混合液；利用5?mg/ml的氫氧化鈉溶液調(diào)整所述混合液ph至7.0-7.5，再加入與混合液等體積的ph為7.4的磷酸緩沖液，在55℃，180?r/min下反應(yīng)30min，得到反應(yīng)混合物；將反應(yīng)混合物，在35℃，100w條件下，超聲10?min后，濃縮至原體積的1/6，得到濃縮液；將濃縮液經(jīng)正相硅膠柱色譜，以乙酸乙酯與石油醚作洗脫劑洗脫，體積比乙酸乙酯:石油醚=8:1，收集洗脫液；將洗脫液置于2.0?kda濾膜中透析16?h，濃縮，真空冷凍干燥，制得胡椒堿-肉桂酸自組裝納米顆粒；

4、其中，所述胡椒堿的制備方法為：

5、a1將檸檬酸、氯化膽堿按摩爾比為3:1比例混合均勻并加熱，直到混合物形成澄清透明的液體，得到檸檬酸-氯化膽堿低共熔溶劑，所述加熱的溫度為55℃，加熱時(shí)間為30min；

6、a2將白胡椒粉加入步驟a1中的檸檬酸-氯化膽堿低共熔溶劑中獲得混合液，將混合液加熱至60℃后持續(xù)恒溫加熱30?min，浸提處理，將浸提后的混合液離心過濾處理，并收集濾液，除去濾渣得到澄清的胡椒堿浸提液，所述白胡椒粉與檸檬酸-氯化膽堿的料液比為1/35?g/ml；

7、a3將步驟a2中所述的胡椒堿浸提液加入萃取溶劑中，常溫振蕩后超聲處理，靜置分相，得到上相和下相；所述萃取溶劑由異丙醇和水組成，胡椒堿浸提液、異丙醇、水的質(zhì)量比例為2:2:3；所述上相為含胡椒堿的異丙醇相，下相為含胡椒堿浸提液混合物的低共熔溶劑相，將上相減壓蒸餾，至原體積的1/8，除去殘留的異丙醇，得到胡椒堿萃取液。

8、a4往步驟a3中胡椒堿萃取液，加入3倍體積的無水乙醇，于4℃下結(jié)晶24?h，收集晶體，真空冷凍干燥，得到高純度胡椒堿。

9、所述肉桂酸來自市售，純度>90%。

10、進(jìn)一步地，所述0.01?mmol/l胡椒堿的溶劑為甲醇溶液；所述0.01?mmol/l肉桂酸的溶劑為45℃磷酸緩沖溶液。

11、進(jìn)一步地，所述0.01?mmol/l胡椒堿和所述0.01?mmol/l肉桂酸混合的體積比為1:1。

12、進(jìn)一步地，所述硅膠柱中硅膠的粒度為200-300目。

13、本發(fā)明第二方面提供了上述胡椒堿-肉桂酸自組裝納米顆粒在制備金黃色葡萄球菌的抑菌劑中的應(yīng)用。

14、本發(fā)明的有益效果：

15、本發(fā)明操作簡單，制備的胡椒堿顆粒具有生物相容性高、毒性和不良反應(yīng)較小等優(yōu)點(diǎn)，能夠顯著提高胡椒堿抑制金黃色葡萄球菌能力。

技術(shù)特征：

1.?一種胡椒堿-肉桂酸自組裝納米顆粒，其特征在于，所述自組裝納米顆粒為胡椒堿與肉桂酸構(gòu)建而成的自組裝納米顆粒；其制備方法為：將0.01mmol/l胡椒堿和0.01mmol/l肉桂酸混勻，得到混合液；利用5?mg/ml的氫氧化鈉溶液調(diào)整所述混合液ph至7.0-7.5，再加入與混合液等體積的ph為7.4的磷酸緩沖液，在55℃，180?r/min下反應(yīng)30?min，得到反應(yīng)混合物；將反應(yīng)混合物，在35℃，100w條件下，超聲10?min后，濃縮至原體積的1/6，得到濃縮液；將濃縮液經(jīng)正相硅膠柱色譜，以乙酸乙酯與石油醚作洗脫劑洗脫，體積比乙酸乙酯:石油醚=8:1，收集洗脫液；將洗脫液置于2.0?kda濾膜中透析16?h，濃縮，真空冷凍干燥，制得胡椒堿-肉桂酸自組裝納米顆粒；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胡椒堿-肉桂酸自組裝納米顆粒，其特征在于，所述0.01mmol/l胡椒堿的溶劑為甲醇溶液；所述0.01?mmol/l肉桂酸的溶劑為45℃磷酸緩沖溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胡椒堿-肉桂酸自組裝納米顆粒，其特征在于，所述0.01mmol/l胡椒堿和所述0.01?mmol/l肉桂酸混合的體積比為1:1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胡椒堿-肉桂酸自組裝納米顆粒，其特征在于，所述硅膠柱中硅膠的粒度為200-300目。

5.權(quán)利要求1所述的胡椒堿-肉桂酸自組裝納米顆粒在制備金黃色葡萄球菌的抑菌劑中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物的制備領(lǐng)域，具體提供了一種胡椒堿?肉桂酸自組裝納米顆粒制備方法及應(yīng)用。所述方法包括以下步驟：將胡椒堿、肉桂酸溶解，混合，調(diào)整pH值，加熱，濃縮，純化，干燥，即得。本發(fā)明操作簡單，制備的胡椒堿?肉桂酸顆粒能夠顯著抑制金黃色葡萄球菌，具有生物相容性高、毒性和不良反應(yīng)較小等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)研發(fā)人員：段宙位,謝輝,劉鳳,楊玲,王世萍
受保護(hù)的技術(shù)使用者：海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院三亞研究院（海南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9