專利名稱:羅氏沼蝦雜交育種方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種引進(jìn)的淡水蝦的雜交育種技術(shù)，尤其涉及一種羅氏沼蝦雜交育種方法。
背景技術(shù)：
羅氏沼蝦(Macrobrachium rosenbergii)，英文名Giant freshwater prawn，是由中國籍聯(lián)合國官員、生物學(xué)家林紹文博士于1961年在馬來西亞馴養(yǎng)成功，爾后在世界諸多國家推廣養(yǎng)殖。我國于1976年從日本引進(jìn)，在上世紀(jì)80年代末期逐步開展規(guī)?；B(yǎng)殖并在上世紀(jì)90年代中后期形成產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。但在產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的過程中出現(xiàn)了二大難題，即種質(zhì)退化和肌肉白濁病的暴發(fā)。羅氏沼蝦肌肉白濁病近年已被浙江省淡水水產(chǎn)研究所等單位的科技人員攻克，而種質(zhì)退化現(xiàn)象未得到有效改變。
1976年引進(jìn)的羅氏沼蝦經(jīng)過20多年的人工馴養(yǎng)，近親繁殖時常發(fā)生，遺傳學(xué)上已產(chǎn)生一定的變異，出現(xiàn)嚴(yán)重的種質(zhì)退化，表現(xiàn)為生長速度減慢、個體大小不均，性成熟時間提早、抗病力下降等。目前在生產(chǎn)上由于種質(zhì)退化而造成廣大蝦農(nóng)的養(yǎng)殖效益下降。
國內(nèi)有關(guān)羅氏沼蝦種質(zhì)研究的報道較少，而進(jìn)行實質(zhì)性的引種復(fù)壯技術(shù)研究的只有上海水產(chǎn)研究所(史建華等，2001)和廣西水產(chǎn)研究所(吳鐵軍，2000)在1996-1998年進(jìn)行過階段性的研究。但此項工作并未使眾多育苗場和廣大養(yǎng)殖戶受益就已終止。
在國外，Sarver等(1979)對不同地域羅氏沼蝦種間的種質(zhì)性狀進(jìn)行了測定。Dobkin和Bailey(1979)報道羅氏沼蝦的種內(nèi)雜交能加快生長。Doyle等(1983)和Ra’anan(1987)均報道了羅氏沼蝦親蝦的不同選育方法對繁育和子一代生長均有顯著影響。澳大利亞的Mark Debruyn博士目前也正在進(jìn)行羅氏沼蝦的野生種與馴養(yǎng)種間種質(zhì)差異研究。但無論是國內(nèi)還是國外同行均未找出一種技術(shù)成熟的雜交育種方法。
由此可見，一種新的羅氏沼蝦雜交育種方法的建立不僅在理論上，而且在確保羅氏沼蝦這一產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展上都具有迫切的現(xiàn)實意義。
中國發(fā)明專利申請公開號為CN1463596公開了一種沼蝦類人工種間雜交方法，其特點是將不同種的雌雄親蝦配對養(yǎng)殖，性激素催情，雌蝦出現(xiàn)生殖蛻皮時，將雄蝦的精莢取出，粘貼于雌蝦腹部第四對步足與第五對步足之間，然后雌蝦單獨養(yǎng)殖，待其產(chǎn)卵，完成抱卵后，將抱卵雌蝦轉(zhuǎn)入孵化缸養(yǎng)殖，直至孵出雜交蝦苗。但該方法實施不方便。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是提供一種育苗成活率高、抱籽率高、幼苗生長速度快、成品蝦品質(zhì)優(yōu)越的羅氏沼蝦雜交育種方法。
為了達(dá)到上述的目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案羅氏沼蝦雜交育種方法，該方法包括以下的步驟a、引進(jìn)遠(yuǎn)緣的羅氏沼蝦苗A，經(jīng)精心培育，挑選遠(yuǎn)緣的羅氏沼蝦苗A雌親蝦和雄親蝦進(jìn)行育苗；b、遠(yuǎn)緣的羅氏沼蝦苗A雌親蝦和雄親蝦與本地種的雄親蝦和雌親蝦交配分別得到正交B1+和反交B1-；c、取正交B1+和反交B1-與本地種交配分別得到B1+正回交B2++、B1+反回交B2+-、B1-反回交B2--和B1-正回交B2-+；d、對B1+正回交B2++、B1+反回交B2+-、B1-反回交B2--和B1-正回交B2-+分別進(jìn)行育苗。
作為優(yōu)選，該方法包括以下的步驟a、引進(jìn)遠(yuǎn)緣的羅氏沼蝦苗A，經(jīng)精心培育，挑選雄親蝦進(jìn)行育苗；b、遠(yuǎn)緣的羅氏沼蝦苗雄親蝦與本地種的雌親蝦交配得到反交B1-；c、取反交B1-雄親蝦與本地種雌親蝦交配得到B1-正回交B2-+；d、對B1-正回交B2-+進(jìn)行育苗。
作為優(yōu)選，遠(yuǎn)緣的羅氏沼蝦苗A選用種質(zhì)性狀沒有退化的緬甸羅氏沼蝦種群屬。
作為優(yōu)選，本地種選用浙江本地羅氏沼蝦種群屬。
本發(fā)明由于采用了上述的技術(shù)方案，所育的B1+正回交B2++、B1+反回交B2+-、B1-反回交B2--和B1-正回交B2-+4種苗種的成活率和抱籽率均較好，水分、粗灰份、粗蛋白、粗脂肪含量及其氨基酸、脂肪酸的組成明顯高于本地種。特別是B1-正回交B2-+蝦苗抱籽率提高到67.25％，出苗率提高到94.56％，表明通過引進(jìn)種群與本地種群的雜交選育，是可以大大改良羅氏沼蝦本地養(yǎng)殖種群的生產(chǎn)性狀的。



圖1為正交B1+育種示意圖。
圖2為反交B1-育種示意圖。
圖3為B1+正回交B2++育種示意圖。
圖4為B1+反回交B2+-育種示意圖。
圖5為B1-反回交B2--育種示意圖。
圖6為B1-正回交B2-+育種示意圖。
圖7為緬甸引進(jìn)種選育與保種的示意圖。
具體實施方式
下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式
做一個詳細(xì)的說明。
引進(jìn)未開發(fā)種質(zhì)性狀沒有退化的緬甸羅氏沼蝦種群屬自然種群，經(jīng)精心培育，進(jìn)行選育與保種(如圖7所示)，挑選雌親蝦10200尾，雄親蝦2000尾進(jìn)育苗溫室，水溫控制在24-25℃。
進(jìn)行緬甸種自交A1，緬甸種A與本地種的正交B1+、反交B1-，本地種自交育苗試驗。正交B1+育種如圖1所示，反交B1-育種如圖2所示。
四種交配組合的交配抱籽率見表1。從表1可以看出，各交配組抱籽率高低依次為B1-＞A1＞本地種＞B1+。
表1，2003年度四種交配組合的抱籽率


四種交配組合的育苗情況見表2。從表2可以看出，出苗率高低依次為本地種＞B1-＞B1+＞A1，即本地種出苗率最高，引進(jìn)種(A1)出苗率最低。
表2 2003年四種交配組合育苗情況


挑選緬甸種自交子一代A1雌親蝦7800尾、雄親蝦3360尾，正交子一代B1+雌親蝦3210尾、雄親蝦1350尾，反交子一代B1-雌親蝦3080尾、雄親蝦1136尾進(jìn)育苗車間，進(jìn)行子二代育苗與養(yǎng)成，并作篩選。
8個組合的育苗試驗1.本地種自交(對照，C)；2.A1自交A2；3.B1+正回交B2++；4.B1+反回交B2+-；5.B1-正回交B2-+；6.B1-反回交B2--；7.B1正交種B2+；8.B1反交種B2-。
正交子一代(B1+雌)×本地種(雄) 正交子一代(B1+雄)×本地種(雌)↓ ↓B1+正回交B2++B1+反回交B2+-反交子一代(B1-雌)×本地種(雄) 反交子一代(B1-雄)×本地種(雌)↓ ↓B1-反回交B2--B1-正回交B2-+A1雌×本地種(雄) A1雄×本地種(雌)↓ ↓B1正交種B2+B1反交種B2-從表3、4可以發(fā)現(xiàn)B1-正回交B2-+的交配抱籽率，育苗成活率明顯高于其它組合，是一個非常好的配對組合模式。
表3，八種交配組合抱籽率


表4，八種交配組合育苗試驗


緬甸引進(jìn)種群經(jīng)馴化、選育二代后的抱籽率(55.035％)明顯高于本地種群(24.65％)，表明引進(jìn)種群種質(zhì)性狀優(yōu)于本地種群。
通過引進(jìn)種與本地種的二代雜交，使抱籽率顯著提高，特別是B1-正回交B2-+的抱籽率提高到67.25％，B1-正回交B2-+的出苗率提高到94.56％，表明通過引進(jìn)種群與本地種群的雜交選育，是可以改良羅氏沼蝦本地養(yǎng)殖種群的生產(chǎn)性狀的。
本地種群C和緬甸引進(jìn)種A2在形態(tài)學(xué)上也已經(jīng)出現(xiàn)了明顯的分歧，兩種群形態(tài)上的分化可能是由于本地種群從引種后經(jīng)過長時期(20多年)的近親之間、小群體的人工繁殖而導(dǎo)致的種群退化有關(guān)。對雌、雄蝦的分析結(jié)果顯示，在形態(tài)上雌體比雄體的變異相對顯著，特別是B2-+種群，雄體與其他雜交種群的雄體幾乎聚在一起，而雌體與其他雜交種群卻產(chǎn)生了很大的分歧，這從聚類分析和主成分分析圖均可看出。本地種雌體與緬甸引進(jìn)種的雄體親緣關(guān)系最遠(yuǎn)，它們雜交后代產(chǎn)生優(yōu)良品種的可能性較大，事實上B2-+這個種群是雜交種群中最具有代表性和研究價值的一個雜交種群。
測定本地種群C、緬甸引進(jìn)種A2和B2-+雜交種群羅氏沼蝦肌肉的水分、粗灰份、粗蛋白、粗脂肪含量及其氨基酸、脂肪酸的組成。結(jié)果表明，雜交種群B2-+粗蛋白含量為(17.57±2.19)％，高于其他二個種群；而本地養(yǎng)殖種群粗脂肪含量最高，達(dá)(2.04±0.12)％，顯著高于緬甸引進(jìn)種A2和雜交種群B2-+(P＜0.05)。3個種群中，B2-+總氨基酸含量、必需氨基酸含量、鮮味氨基酸和EPA+DHA含量均為最高，C種群卻均為最低；且必需氨基酸指數(shù)最為均衡。由此可以得出上述3種群中雜交種群B2-+營養(yǎng)品質(zhì)最高，本地養(yǎng)殖種群最差。因此，羅氏沼蝦也可通過雜交育種，利用雜交優(yōu)勢，培育營養(yǎng)品質(zhì)和產(chǎn)量高的新品種，滿足日益增長的羅氏沼蝦增養(yǎng)殖生產(chǎn)需求。
本地種C、緬甸引進(jìn)種A2和B2-+雜交種幼體對氨氮的耐受性研究。本研究分別從幼體的生長、發(fā)育、抗逆性三個方面綜合評價3種群羅氏沼蝦幼體的品質(zhì)。整個幼體發(fā)育過程中，B2-+雜交種群生長速度最快，緬甸引進(jìn)種群次之，浙江本地種群最差。3種群幼體發(fā)育的過程幾乎是同步的，沒有表現(xiàn)出明顯的差異。從各個種群幼體整個發(fā)育過程來看，3種群幼體對氨氮(總氨氮和非離子氨氮)的耐受性都是隨著發(fā)育過程的進(jìn)行而逐漸增強；而3種群比較而言，緬甸引進(jìn)種群幼體抗逆性最強，本地養(yǎng)殖種群次之，B2-+雜交種群最差；3種群幼體發(fā)育到第16天(約IX期幼體)對非離子氨的耐受性都達(dá)到最大。緬甸引進(jìn)種群抗逆性較本地養(yǎng)殖種群好，說明本地養(yǎng)殖種群已經(jīng)出現(xiàn)種質(zhì)退化現(xiàn)象。而B2-+雜交種群的抗逆性反而最差，這是因為B2-+雜交種群在繁育方面表現(xiàn)出雜種優(yōu)勢，但對其自身的適應(yīng)性和進(jìn)化(抗逆性)來說卻不利，因此，生產(chǎn)上只能利用二代雜種優(yōu)勢。
綜上所述，經(jīng)過二代種內(nèi)雜交獲得的反交正回交種群，即B2-+雜交種群是一個最理想的育種群體。
權(quán)利要求
1.羅氏沼蝦雜交育種方法，該方法包括以下的步驟a、引進(jìn)遠(yuǎn)緣的羅氏沼蝦苗A，經(jīng)精心培育，挑選遠(yuǎn)緣的羅氏沼蝦苗A雌親蝦和雄親蝦進(jìn)行育苗；b、遠(yuǎn)緣的羅氏沼蝦苗A雌親蝦和雄親蝦與本地種的雄親蝦和雌親蝦交配分別得到正交B1+和反交B1-；c、取正交B1+和反交B1-與本地種交配分別得到B1+正回交B2++、B1+反回交B2+-、B1-反回交B2--和B1-正回交B2-+；d、對B1+正回交B2++、B1+反回交B2+-、B1-反回交B2--和B1-正回交B2-+分別進(jìn)行育苗。
2.如權(quán)利要求
1所述的羅氏沼蝦雜交育種方法，其特征在于該方法包括以下的步驟a、引進(jìn)遠(yuǎn)緣的羅氏沼蝦苗A，經(jīng)精心培育，挑選雄親蝦進(jìn)行育苗；b、遠(yuǎn)緣的羅氏沼蝦苗雄親蝦與本地種的雌親蝦交配得到反交B1-；c、取反交B1-雄親蝦與本地種雌親蝦交配得到B1-正回交B2-+；d、對B1-正回交B2-+進(jìn)行育苗。
3.如權(quán)利要求
1或2所述的羅氏沼蝦雜交育種方法，其特征在于遠(yuǎn)緣的羅氏沼蝦苗A選用種質(zhì)性狀沒有退化的緬甸羅氏沼蝦種群屬。
4.如權(quán)利要求
3所述的羅氏沼蝦雜交育種方法，其特征在于本地種選用浙江本地羅氏沼蝦種群屬。
專利摘要
本發(fā)明涉及一種引進(jìn)的淡水蝦的雜交育種技術(shù)，尤其涉及一種羅氏沼蝦雜交育種方法。本發(fā)明引進(jìn)遠(yuǎn)緣的羅氏沼蝦苗A，將遠(yuǎn)緣的羅氏沼蝦苗A雌親蝦和雄親蝦與本地種的雄親蝦和雌親蝦交配分別得到正交B
文檔編號A01K61/00GKCN1762310SQ200510061585
公開日2006年4月26日 申請日期2005年11月17日
發(fā)明者楊國梁, 張宇飛, 王軍毅 申請人:浙江省淡水水產(chǎn)研究所導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan