專利名稱：:胡蘆巴種子生物活性組合物及提取該組合物的方法背景1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及影響新陳代謝的方法和組合物，更特別地，本發(fā)明涉及包括生物活性成分的新穎組合物，這些組合物支持新陳代謝以及糖和碳水化合物在動物和人體中的運(yùn)輸，這些組合物來源于胡盧巴種子(胡蘆巴籽，fenugreekseeds)，本發(fā)明也涉及提取該組合物的方法。2.
背景技術(shù)：
胡蘆巴是一種最古老的草藥之一，原產(chǎn)于東南歐洲、北非和西亞，但也廣泛種植于世界上的其它地方。胡蘆巴在技術(shù)上以胡盧巴(Trigonellafoenum-graecum)而命名，是豆科(familyFabaceae)的成員，通常被稱為希臘草(Greekhay)。正如本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的熟練技術(shù)人員所理解的那樣，胡蘆巴是一種豆科植物，通常長到兩到三英尺高，葉子為淡綠色，開小白花。一個胡蘆巴種子豆莢中有十到二十個小的、扁平的、黃褐色種子。典型地，一個植物種子在形成時具有稱作外種皮的厚或堅(jiān)硬的外殼，通常被稱作種皮。種皮的內(nèi)部含有一個植物胚和稱作胚乳的營養(yǎng)組織，胚乳圍繞著胚。隨著胡蘆巴種子的胚的成熟，胚會消耗胚乳。胡蘆巴種子通常具有辛辣的香味，可能具有苦味，據(jù)說味道類似于芹菜。胡蘆巴長期以來在亞洲和地中海地區(qū)被用作醫(yī)用草藥和烹飪用添加劑。據(jù)信，胡蘆巴植物的種子含有許多具有醫(yī)療用途的活性化合物，如鐵、維生素A、維生素B、維生素C、磷酸鹽、類黃酮、皂角苷、胡蘆巴堿和其它生物堿。胡蘆巴已經(jīng)被用作健胃藥，并且用于治療腹部疾病。西方的科學(xué)研究已經(jīng)提供了胡蘆巴種子的化學(xué)分析的見解，以及從胡蘆巴種子中提取4-羥基異亮氨酸，已經(jīng)提示了胡蘆巴的一些臨床用途。L.Fowden先生進(jìn)行了胡蘆巴分析的研究。他教導(dǎo)了從胡蘆巴中分離和純化4-羥基異亮氨酸，并且宣稱4-羥基異亮氨酸是胡蘆巴種子中所包括的最主要的游離的氨基酸。(參見Fowden等人，植物化學(xué)(Phytochemistry)，121707，(1973)。)已有技術(shù)進(jìn)一步的研究建議胡蘆巴種子的氨基酸可能具有營養(yǎng)價值。(參見，Sauvaire等人，NutrRepInt，14527(1976).)本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的熟練技術(shù)人員也已經(jīng)在胡蘆巴種子的類固醇皂角苷配基含量的分析中教導(dǎo)了分光光度測定法，這些已有技術(shù)方法通?？赡鼙挥糜诖_定脫脂胡蘆巴的細(xì)分組分的成分。(參見，Baccon等人，Analyst，102458(1977)；Ribes等人，ProcSocExpBiolMed，182159(1986).)另外，本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的熟練技術(shù)人員已經(jīng)使用氯仿從胡蘆巴種子中提取氨基酸4-羥基異亮氨酸。(參見，Alcock等人，Phytochemistry，28(7)1835×1989)。)然而，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)氯仿是有毒的，在食品和藥品行業(yè)已經(jīng)建立的標(biāo)準(zhǔn)中，作為一種提取方法通常是不能接受的。也已經(jīng)從胡蘆巴種子中分離出其它化合物。除主要異構(gòu)體(2S，3R，4S)-4-羥基異亮氨酸之外，已經(jīng)分離出少量異構(gòu)體4-羥基異亮氨酸和氨基酸(賴氨酸、組氨酸和精氨酸)。后邊的研究也已經(jīng)確認(rèn)了在胡蘆巴種子中存在4-羥基異亮氨酸，是兩種非對映異構(gòu)體主要的一種是(2S，3R，4S)構(gòu)型，代表4-羥基異亮氨酸總含量的大約90％，次要的一種是(2R，3R，4S)構(gòu)型。參見Alcock，Phytochemistry，281835(1989)。)正如本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的熟練技術(shù)人員所理解的那樣，主要(2S，3R，4S)異構(gòu)體目前是令人感興趣的，有關(guān)實(shí)驗(yàn)證據(jù)顯示了該主要異構(gòu)體以一種葡萄糖依賴方式通過直接影響胰β細(xì)胞刺激，以微摩爾級濃度刺激葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素分泌物的能力。此外，4-羥基異亮氨酸能互相作用，并且誘導(dǎo)加性促胰島素效應(yīng)(即刺激或影響胰島素的產(chǎn)生和活性，僅僅在存在超常葡萄糖濃度的情況下)。(參見，Sauvaire等人，Diabetes，47206(1998)。)已有技術(shù)的研究也公開了在存在高血糖、糖尿和高脂血的情況下，對胡蘆巴細(xì)分組分用途進(jìn)行的臨床研究，這些研究已經(jīng)在大鼠、狗和人類胰組織上完成。(參見，Shani等人，ArchInternPharmacodynTher，21027(1974)；Ribes等人，AnnNutrMetab，2837(1984)；Valette等人，Athersclerosis，50105(1984)；Madar，NutrRepInt，291267(1984)。)正如本
技術(shù)領(lǐng)域：
：熟練技術(shù)所理解的那樣，在胡蘆巴上所進(jìn)行的臨床研究已經(jīng)將焦點(diǎn)集中在研究胡蘆巴種子的特定細(xì)分組分上(如外種皮和胚乳)，或者，可選擇地，已經(jīng)將焦點(diǎn)集中在4-羥基異亮氨酸在糖尿病或膽固醇紊亂的動物和人類中的特定作用上。研究也已經(jīng)顯示4-羥基異亮氨酸的天然相似物，在作為抗糖尿病藥劑時，比合成型式更有效。因此，這暗示從胡蘆巴種子的提取物中所獲得的4-羥基異亮氨酸的治療效果最好。然而，用胡蘆巴種子作為營養(yǎng)補(bǔ)充劑的原材料來源存在一些困難。例如，一個這樣的困難或缺點(diǎn)是源自下述事實(shí)，即，為了獲得治療和其它營養(yǎng)效果，通常需要大劑量的胡蘆巴種子。病人或消費(fèi)者通常不愿意將這些種子加入到他們的飲食中，即使是脫脂和去苦味的種子。較高劑量的非脫脂種子可能發(fā)生輕度胃腸道不適。由于胡蘆巴種子的纖維含量比較高，長期使用和高劑量可能導(dǎo)致一些副作用如腸胃氣或腹瀉。胡蘆巴種子中的纖維的結(jié)合能力可能也影響了營養(yǎng)物質(zhì)的可利用度，特別是礦物質(zhì)的可利用度。如同所理解的那樣，胡蘆巴種子的外用可以導(dǎo)致不希望的皮膚反應(yīng)。所以，在本
技術(shù)領(lǐng)域：
：，提供一種方法用于從胡蘆巴種子中得到生物活性和治療作用的化合物將是一種進(jìn)步，如此以致由于攝取該種子或者其部分所導(dǎo)致的不希望副作用可以被避免。在上述提及的研究性考察中，本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的技術(shù)人員開發(fā)出了從胡蘆巴種子中提取4-羥基異亮氨酸的粗糙方法。這些本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的現(xiàn)有方法和提取技術(shù)已經(jīng)將注意力主要集中在獲得4-羥基異亮氨酸的“高純度”提取物(“high-purity”extract)上。例如，使用吸附色譜提取4-羥基異亮氨酸是本
技術(shù)領(lǐng)域：
：所已知的。然而，這些現(xiàn)有技術(shù)的方法傾向于僅產(chǎn)生少量4-羥基異亮氨酸，并且通常僅適合于小規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室使用。正如先前所描述的，本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的技術(shù)人員所實(shí)踐的另一種提取方法使用一種有毒的有機(jī)溶劑，如氯仿，從胡蘆巴種子中提取4-羥基異亮氨酸，從而可以預(yù)期到對消費(fèi)者存在固有不利。因此，正如本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的技術(shù)人員所容易理解的那樣，需要一種安全且在商業(yè)上更可行的方法，用于從胡蘆巴種子中提取4-羥基異亮氨酸和其它生物活性組分。發(fā)明簡述和目的本發(fā)明的一個主要目的是提供從胡蘆巴種子中提取和分離生物活性化合物的新穎的組合物和方法，這些生物活性化合物能促進(jìn)增加葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素水平。本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供從胡蘆巴種子中提取和分離生物活性化合物的新穎的組合物和方法，這些生物活性化合物能增強(qiáng)胰島素的靈敏度。本發(fā)明的又一個目的是提供從胡蘆巴種子中提取和分離生物活性化合物的新穎的組合物和方法，這些生物活性化合物能刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)因子4的功能。本發(fā)明另一個目的是提供從胡蘆巴種子中提取和分離生物活性化合物的新穎的組合物和方法，這包括有效的步驟數(shù)，生產(chǎn)是經(jīng)濟(jì)的。此外，本發(fā)明的目的是提供從胡蘆巴種子中提取和分離生物活性化合物的新穎的組合物和方法，這能提供高潛力的提取率。本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供從胡蘆巴種子中提取和分離生物活性化合物的新穎的組合物和方法，這能提供高數(shù)量的提取率。本發(fā)明另一個目的是提供從胡蘆巴種子中提取和分離生物活性化合物的新穎的組合物和方法，這能提供介于大約百分之十(10％)到百分之七十(70％)之間的提取純化產(chǎn)率。進(jìn)一步，本發(fā)明的一個目的是提供從胡蘆巴種子中提取和分離生物活性化合物的新穎的組合物和方法，這些組合物和方法能產(chǎn)生一組生物活性化合物，包括，但不限于，氨基酸、蛋白質(zhì)和4-羥基異亮氨酸。本發(fā)明進(jìn)一步的一個目的是提供來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的新穎的組合物，包括但不限于4-羥基異亮氨酸、精氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、組氨酸、γ-氨基丁酸、三甲基組氨酸和乙醇胺(EtOHNH2)。此外，本發(fā)明的一個目的是提供新穎的組合物和從胡蘆巴種子提取和分離生物活性化合物的方法，這些組合物是抗高血糖的。本發(fā)明的又一個目的是提供新穎組合物和從胡蘆巴種子提取和分離生物活性化合物的方法，這些化合物能獨(dú)立地刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白并且能促進(jìn)葡萄糖運(yùn)輸?shù)郊∪饧?xì)胞中。本發(fā)明進(jìn)一步的一個目的是提供新穎的組合物，以及從胡蘆巴種子提取和分離生物活性化合物的方法，這些組合物能與胰島素互相協(xié)作工作，以刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白并且促進(jìn)葡萄糖運(yùn)輸?shù)郊∪庵?。本發(fā)明進(jìn)一步的一個目的是提供新穎的組合物，以及從胡蘆巴種子提取和分離生物活性化合物的方法，這些組合物有助于葡萄糖和碳水化合物的代謝。與前述目的一致，與本發(fā)明在此處所表達(dá)和廣泛描述的相一致，本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案包括新穎組合物和從胡蘆巴種子提取生物活性化合物的方法，能促進(jìn)和支持葡萄糖和碳水化合物的代謝和運(yùn)輸。具體而言，從胡蘆巴種子中提取的生物活性化合物的組合物的一個優(yōu)選實(shí)施方案或者與胰島素互相作用，或者獨(dú)立地工作，來刺激位于骨骼肌細(xì)胞上的GT-4受體。該組合物，如此分離的，通常包括氨基酸和蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，特定重點(diǎn)在于分離生物活性化合物的組合物，這些化合物包括，例如，4-羥基異亮氨酸、精氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、組氨酸、γ-氨基丁酸、三甲級組氨酸和乙醇胺(EtOHNH2)。附圖簡述參考下列描述和所附權(quán)利要求，同時結(jié)合附圖，本發(fā)明的前述和其它目的以及特征將變得更加顯而易見。需要理解的是，這些附圖僅僅描述了本發(fā)明的典型實(shí)施方案，因此這些附圖不能被理解為限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明將被描述具有其它特征，并且將利用下述附圖進(jìn)行詳細(xì)描述，其中圖1是一個工藝流程圖，舉例說明了本發(fā)明用于重量管理的方法的一個優(yōu)選實(shí)施方案，通過促進(jìn)葡萄糖運(yùn)輸?shù)郊∪饧?xì)胞中，以及隨后的葡萄糖代謝，包括如下步驟提供來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物，增強(qiáng)骨骼肌葡萄糖運(yùn)輸，執(zhí)行重量管理；圖2是一個工藝流程圖，該圖舉例說明了從本發(fā)明的胡蘆巴種子中提取生物活性成分的方法的優(yōu)選實(shí)施方案，該方法包括胡蘆巴種子的處理、初步提取和二次提取步驟；圖3是一個工藝流程圖，該圖舉例說明了本發(fā)明的胡蘆巴種子的處理步驟的優(yōu)選實(shí)施方案，參考圖2，該步驟包括將胡蘆巴種子浸泡在水中，然后碾碎所浸泡的胡蘆巴種子的步驟；圖4是一個工藝流程圖，該圖舉例說明了本發(fā)明的初步提取步驟的優(yōu)選實(shí)施方案，參考圖2，該步驟包括如下步驟將處理的胡蘆巴種子置于溶劑I中以獲得第一種種子殘余物和種子提取物，將收集的種子殘余物置于溶劑II中以得到第二種種子殘余物和一種濃縮提取物，進(jìn)一步在真空下濃縮，冷卻并且沉淀以得到粗蛋白沉淀物和上清液，用去離子水稀釋該上清液；圖5是一個工藝流程圖，該圖舉例說明了本發(fā)明的二次提取步驟的優(yōu)選實(shí)施方案，參考圖2，包括如下步驟，用大孔隙、非極性或弱極性陽離子交換樹脂進(jìn)行樹脂過濾，用去離子水洗滌，用10-90％乙醇進(jìn)行遞增乙醇處理，收集流出物，用6當(dāng)量(N)鹽酸(HCl)將pH值調(diào)整到1-6.5，用0.1-1N氨溶液處理，收集流出物，在真空下濃縮，用去離子水稀釋，去氨化并且干燥，從而得到含有大量氨基酸的生物活性化合物的組合物，包括在大約20％到40％之間的總蛋白和在大約10％到70％之間的4-羥基異亮氨酸；圖6是一個工藝流程圖，該圖舉例說明了二次提取步驟的優(yōu)選實(shí)施方案，參考圖2，該步驟包括如下步驟用6NHCl將pH值調(diào)整到大約1-6.5，用大孔隙、非極性或弱極性陽離子交換樹脂進(jìn)行樹脂過濾，用去離子水洗滌，用0.05-2N氨溶液處理，收集流出物和酸性部分，在真空下濃縮酸性處理，去氨化并且干燥，從而得到含有大量氨基酸的生物活性化合物的組合物，包括大約20％到40％的總蛋白和大約10％到70％的4-羥基異亮氨酸；圖7是一個工藝流程圖，該圖舉例說明了本發(fā)明一個方法的優(yōu)選實(shí)施方案，該方法用于培養(yǎng)來自金黃倉鼠(金黃地鼠(Mesocricetusauratus))的胰(β)-細(xì)胞；圖8代表一個圖，該圖顯示了用培養(yǎng)的金黃倉鼠胰β細(xì)胞完成的試驗(yàn)結(jié)果，以每毫升(mL)15毫克(mg)的濃度暴露于從胡蘆巴種子提取的生物活性成分的組合物中；圖9代表一個圖，該圖顯示了以每毫升60毫克(mg/ml)的濃度用從胡蘆巴種子提取的生物活性成分的組合物進(jìn)行的試驗(yàn)結(jié)果，該試驗(yàn)產(chǎn)生了與圖8的表中所示的試驗(yàn)結(jié)果類似的結(jié)果；圖10代表一個圖，該圖顯示了另一個示意性圖表，舉例說明了來自胡蘆巴種子未去苦味提取物的生物活性化合物的組合物對葡萄糖濃度和胰島素濃度的影響，這是依照本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案或方法在第一個人體中完成的，該組合物以每公斤體重含有一(1)毫克4-羥基異亮氨酸使用；圖11代表一個圖，該圖顯示了一個示意性圖表，舉例說明了來自胡蘆巴種子未去苦味提取物的生物活性化合物的組合物對葡萄糖濃度和胰島素濃度的影響，這是依照本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案或方法在第二個人體中完成的，該組合物以每公斤體重含有一(1)毫克4-羥基異亮氨酸使用；圖12代表一個圖，該圖顯示了一個示意性圖表，舉例說明了來自胡蘆巴種子去苦味提取物的生物活性化合物的組合物對葡萄糖濃度和胰島素濃度的影響，這是依照本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案或方法在第一個人體中完成的，該組合物以每公斤體重含有四(4)毫克4-羥基異亮氨酸使用；圖13代表一個圖，該圖顯示了一個示意性圖表，舉例說明了來自胡蘆巴種子去苦味提取物的生物活性化合物的組合物對葡萄糖濃度和胰島素濃度的影響，這是依照本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案或方法在第二個人體中完成的，該組合物以每公斤體重含有四(4)毫克4-羥基異亮氨酸使用；圖14代表一個圖，該圖顯示了另一個示意性圖表，舉例說明了來自胡蘆巴種子去苦味提取物的生物活性化合物的組合物對葡萄糖濃度和胰島素濃度的影響，這是依照本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案或方法在第一個人體中完成的，該組合物以每公斤體重含有四(4)毫克4-羥基異亮氨酸使用；圖15代表一個圖，該圖顯示了另一個示意性圖表，舉例說明了來自胡蘆巴種子去苦味提取物的生物活性化合物的組合物對葡萄糖濃度和胰島素濃度的影響，這是依照本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案或方法在第二個人體中完成的，該組合物以每公斤體重含有四(4)毫克4-羥基異亮氨酸使用；圖16代表一個圖，該圖仍然顯示了另一個示意性圖表，舉例說明了來自胡蘆巴種子未去苦味提取物的生物活性化合物的組合物對葡萄糖濃度和胰島素濃度的影響，這是依照本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案或方法在第一個人體中完成的，該組合物以每公斤體重含有四(4)毫克4-羥基異亮氨酸使用；圖17代表一個圖，該圖仍然顯示了另一個示意性圖表，舉例說明了來自胡蘆巴種子未去苦味提取物的生物活性化合物的組合物對葡萄糖濃度和胰島素濃度的影響，這是依照本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案或方法在第二個人體中完成的，該組合物以每公斤體重含有四(4)毫克4-羥基異亮氨酸使用；圖18代表一個圖，該圖顯示了另一個示意性圖表，舉例說明了來自胡蘆巴種子未去苦味提取物的生物活性化合物的組合物對葡萄糖濃度和胰島素濃度的影響，這是依照本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案或方法在第一個人體中完成的，該組合物以每公斤體重含有四(9)毫克4-羥基異亮氨酸使用；圖19代表一個圖，該圖顯示了另一個示意性圖表，舉例說明了來自胡蘆巴種子未去苦味提取物的生物活性化合物的組合物對葡萄糖濃度和胰島素濃度的影響，這是依照本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案或方法在第三個人體中完成的，該組合物以每公斤體重含有四(9)毫克4-羥基異亮氨酸使用；優(yōu)選實(shí)施方案描述正如此處圖中通常所描述和舉例說明的那樣，更容易理解的是，本發(fā)明的組分可以以多種不同的構(gòu)造安排和設(shè)計(jì)。當(dāng)然，本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的普通技術(shù)人員可以領(lǐng)會到，正如所描述的，在不背離本發(fā)明根本特征的情況下，此處可以對此處的細(xì)節(jié)進(jìn)行各種修改。因此，正如圖1到19所表示的，下述對本發(fā)明的組合物和方法進(jìn)行的更詳細(xì)的描述之目的不在于限制本發(fā)明的范圍，該范圍正如權(quán)利要求所要求的那樣，這些下述內(nèi)容僅僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案的代表。參考附圖，本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案將更好理解，其中同樣的數(shù)字始終代表同樣的部分。術(shù)語“糖尿病(diabetes)”，當(dāng)單獨(dú)使用時，通常表示糖尿病(diabetesmellitus)。糖尿病通常是碳水化合物代謝紊亂，其中糖不能被人體適當(dāng)?shù)胤纸夂屠?。碳水化合物代謝的功能紊亂通常與胰島素的產(chǎn)生不充分有關(guān)。正如本
技術(shù)領(lǐng)域：
：熟練技術(shù)人員所理解的那樣，胰島素是由專門的胰細(xì)胞產(chǎn)生的，稱作郎格罕氏島(胰島)的β細(xì)胞。胰島素是由胰腺分泌的，在整個體內(nèi)運(yùn)動以調(diào)節(jié)糖代謝，更特別地，在整個體內(nèi)運(yùn)動以調(diào)節(jié)血流中的葡萄糖水平。特別地，胰島素會與好幾種類型的細(xì)胞表面受體相互作用。一種這樣的受體家族被稱作葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)(GT)受體。本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的技術(shù)人員已經(jīng)鑒別出葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)(GT)的至少七個亞型已經(jīng)，指定為1-7(GT1-7)。許多非糖尿病患者個體可能會終生體驗(yàn)營養(yǎng)和代謝的不足，這會顯著影響葡萄糖和碳水化合物的固有代謝。例如，一些個體可能逐步對胰島素具有抗性。這些個體通常在代謝糖上有困難，但沒有達(dá)到具有糖尿病的個體的水平。一種這樣的情況，通常被稱作“X綜合癥”，特征在于血液中的葡萄糖水平較高和脂肪沉積，尤其是在腹部的脂肪沉積。血液中的葡萄糖水平較高的情況有時被稱作血糖過多或者高血糖癥。在許多有營養(yǎng)和代謝不足的非糖尿病個體中，對于促進(jìn)和支持葡萄糖和其它碳水化合物在體內(nèi)的固有代謝是有利的。促進(jìn)和支持葡萄糖和其它碳水化合物代謝可以通過使用本發(fā)明組合物來實(shí)現(xiàn)，該組合物與葡萄糖和其它碳水化合物代謝的調(diào)節(jié)中存在的胰島素協(xié)同工作，或者，在可選擇的方案中，通過使用本發(fā)明的組合物來實(shí)現(xiàn)，該組合物的效果獨(dú)立于葡萄糖和其它碳水化合物代謝的調(diào)節(jié)中的胰島素。本發(fā)明的發(fā)明者進(jìn)行的臨床研究表明，從胡蘆巴種子中提取的生物活性化合物的新穎組合物，該組合物含有特定濃度的4-羥基異亮氨酸和一個或多個氨基酸，有效地增強(qiáng)了葡萄糖到骨骼肌細(xì)胞中的轉(zhuǎn)運(yùn)，這是對骨骼肌細(xì)胞上存在的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)因子4(GT-4)的反應(yīng)。已經(jīng)確定，與GT-4相對的細(xì)胞行為和與胰島素相對的細(xì)胞行為具有非常強(qiáng)的相關(guān)性。因此，從胡蘆巴種子提取的生物活性化合物的組合物可以被用來增強(qiáng)葡萄糖到人體骨骼肌中的運(yùn)輸，這個可以得到支持的指示是本發(fā)明的一個主要中心內(nèi)容。另外，從胡蘆巴種子提取的生物活性化合物的新穎組合物，該組合物含有4-羥基異亮氨酸和一組其它氨基酸，可以與葡萄糖或其它碳水化合物結(jié)合，以改變與葡萄糖或其它碳水化合物的快速施用(bolusadministration)相關(guān)的生理反應(yīng)，或者產(chǎn)生獨(dú)特的生理反應(yīng)。生理反應(yīng)可以包括葡萄糖在消化道中吸收的增加，胰β細(xì)胞的刺激，和葡萄糖或其它碳水化合物的增強(qiáng)的處理。因此，本發(fā)明的新穎組合物和方法支持如下前提，即來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的提取物傾向于增強(qiáng)人體對胰島素的響應(yīng)，由此，增強(qiáng)葡萄糖運(yùn)輸?shù)焦趋兰≈锌梢杂行У亟档推咸烟窃诟闻K和脂肪組織中的沉積，從而降低脂肪沉積。本發(fā)明用于診斷和進(jìn)行重量管理的方法的優(yōu)選實(shí)施方案在圖1中做了很好的圖解說明，該優(yōu)選實(shí)施方案被指定為5。如圖所示，涉及使用來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物的進(jìn)行重量管理的方法，可以包括如下步驟(1)進(jìn)行營養(yǎng)和代謝不足的個體的重量管理分析6，營養(yǎng)和代謝不足會影響葡萄糖和碳水化合物的固有代謝；(2)通過提取來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物，進(jìn)行胡蘆巴種子提取10；和(3)通過給予胡蘆巴種子提取的組合物，增強(qiáng)目標(biāo)個體體內(nèi)的骨骼肌葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)8。進(jìn)行重量管理6的步驟包括診斷無效胰島素產(chǎn)生狀態(tài)，對胰島素的不敏感狀態(tài)或目標(biāo)個體的胰島素抗性。診斷也可以包括確認(rèn)肥胖或類似狀態(tài)。另外，進(jìn)行重量管理6的步驟，正如此處所預(yù)期的，可以進(jìn)一步包括來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的一種或多種組合物的周期性使用，目標(biāo)個體的鍛煉習(xí)慣和飲食的建議性修正。進(jìn)行胡蘆巴種子提取10的步驟包括提取來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物的步驟，其中該組合物包括4-羥基異亮氨酸和一組基于確定比率的其它氨基酸。進(jìn)一步，進(jìn)行胡蘆巴種子提取10的步驟也可以包括胡蘆巴種子提取物的包裝和以適合目標(biāo)客戶的消費(fèi)的調(diào)節(jié)。例如，來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的提取物組合物可以被包裝和展現(xiàn)為固體(即丸劑、粉末劑、片劑或膠囊劑)，或者以液體、懸浮液或類似物的形式配制。提供胡蘆巴種子提取物的新穎組合物也可以涉及修正或調(diào)節(jié)該提取物組合物，如當(dāng)進(jìn)入消費(fèi)者體內(nèi)時，該提取物將以有效的方式到達(dá)目標(biāo)組織。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，圖2對提取胡蘆巴種子的一種方法進(jìn)行了很好的舉例說明，該方法通常被表示為10，并且下邊對該方法進(jìn)行了更詳細(xì)的討論。仍然參考圖1，通過給予胡蘆巴種子提取物的一種或多種新穎組合物來增強(qiáng)骨骼肌葡萄糖在目標(biāo)個體體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)8的步驟考慮到了攝取或者施用(例如，腸胃外地)一種形式的提取物組合物的步驟，和使該組合物到達(dá)個體的組織的步驟，以致胡蘆巴種子提取物可以促進(jìn)和支持葡萄糖和碳水化合物的運(yùn)輸和代謝。正如下邊將討論的，本發(fā)明的生物活性化合物在被施用的組合物中含有更大的濃度將產(chǎn)生更多的受激胰島素生產(chǎn)，從而表明該新穎組合物在刺激人體產(chǎn)生胰島素和該新穎組合物的產(chǎn)生方法的有效性。顯而易見，進(jìn)行重量管理6，進(jìn)行胡蘆巴種子提取10和在目標(biāo)個體中的增強(qiáng)骨骼肌葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)8的多種其它方法可以根據(jù)本發(fā)明在此處所闡明的原則來完成，這些原則與本發(fā)明的精神和范圍是一致的。因此，可以預(yù)期到，此處提供的實(shí)施例可以被看作本發(fā)明所述原則的例證，而不是限制執(zhí)行這些原則的步驟的任何特定方法、技術(shù)、步驟或順序。圖2對本發(fā)明的一個方法的優(yōu)選實(shí)施方案進(jìn)行了很好的舉例說明，該方法用于提取來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物，該生物活性化合物包括4-羥基異亮氨酸和一組其它氨基酸。優(yōu)選地，用于提取來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物的方法10包括如下步驟(1)處理胡蘆巴種子15；(2)進(jìn)行初步提取過程20；和(3)進(jìn)行二次提取過程25。當(dāng)然，正如本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的熟練技術(shù)人員所理解到的，該提取方法可以包括其它步驟，以更好地從胡蘆巴種子中提取那些有用的生物活性化合物?，F(xiàn)在參考圖2和3，處理胡蘆巴種子15的步驟可以包括如下步驟(1)提供胡蘆巴種子40；(2)浸泡胡蘆巴種子42；和(3)粉碎胡蘆巴種子44。浸泡步驟通常包括將種子在水中浸泡特定的時間。也可以使用其它能提供水的制備特性的溶液。在種子已經(jīng)被浸泡后，粉碎種子44的步驟有效地分離了種子的不同部分。例如，粉碎步驟44可以將的厚的或硬的外殼從種子的內(nèi)部分離出來，該外殼被稱作外種皮48，種子的內(nèi)部被稱作胚乳46。正如所預(yù)期的，胚乳46是包圍著植物胚的營養(yǎng)組織。現(xiàn)在參考圖2和4，從處理步驟15產(chǎn)生的胚乳46和外種皮48進(jìn)行初步提取過程20的步驟可以包括使用溶劑(溶劑I)進(jìn)行的提取步驟50。例如，溶劑I可以包括一種化合物如己烷、環(huán)己烷、醚，或其任意組合。正如此處所預(yù)期的，提取步驟50有效地脫去了種子中的脂肪。因此，在完成初步提取步驟20之后，該產(chǎn)品可以被稱作是“脫脂的(de-fatted)”。提取步驟50也可以包括重復(fù)加熱所制備的種子和溶劑I的組合。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，種子和溶劑I的組合物可以被加熱三(3)次，使溫度達(dá)到大約攝氏(C)20度到90度之間。更優(yōu)選地，種子和溶劑I的組合物可以被加熱三(3)次，使溫度達(dá)到大約65℃到70℃之間。所制備的種子和溶劑I的組合物可以在這些高溫下維持任意長的時間段，以足以達(dá)到期望結(jié)果。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所制備的種子和溶劑I的組合物在高溫下被維持了大約1-3小時。從而，提取步驟50典型地產(chǎn)生了種子提取物52和種子殘余物53。特定地參考圖4，蒸餾和濃縮步驟54可以在胡蘆巴種子殘余物53上進(jìn)行。正如所意識到的，蒸餾和濃縮步驟54可以使用多種傳統(tǒng)方法來蒸餾和濃縮來自胡蘆巴種子的提取物。例如，用第一種溶劑連續(xù)提取產(chǎn)生的種子殘余物的蒸餾，可以通過加熱種子殘余物直至沸騰、保存并且冷卻熱蒸氣來實(shí)現(xiàn)。蒸餾和濃縮步驟54可以產(chǎn)生大量56的回收溶劑I以及胡蘆巴種子油、薯蕷皂苷配基、胡蘆巴異黃酮、胡蘆巴皂角苷和可溶性纖維，如半乳甘露聚糖或類似物。使用溶劑(溶劑II)的提取步驟60可以在濃縮的種子提取物52上進(jìn)行。溶劑II優(yōu)選地包括一種溶液，該溶液包括乙醇或與乙醇具有類似化學(xué)特性的溶劑。提取步驟60中使用的乙醇濃度可以采用多個數(shù)值。例如，乙醇濃度可以在大約10％-95％之間變化。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，提取步驟60進(jìn)一步包括重復(fù)加熱種子提取物52和溶劑II的組合物的步驟。優(yōu)選地，該組合物可以被加熱三(3)次，使溫度達(dá)到大約20℃到90℃之間。更優(yōu)選地，種子提取物52和溶劑II的組合物可以被加熱三(3)次，使溫度達(dá)到大約65℃到70℃之間。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，種子提取物52和溶劑II的組合物在這些高溫下被維持的時間周期的范圍可以很大，以足以產(chǎn)生期望結(jié)果。例如，種子提取物52和溶劑II的組合物可以在高溫下被維持大約1-3小時。在這點(diǎn)上，提取步驟60典型地產(chǎn)生了種子殘余物62和濃縮的種子提取物64。與初步提取過程20相關(guān)的其它步驟可以包括在濃縮的種子提取物64上進(jìn)行的濃縮步驟66。濃縮步驟66有效地包括使用真空來分離大量溶劑68和濃縮物70。然后，所分離的濃縮物70可以進(jìn)行冷卻和沉淀步驟72以產(chǎn)生沉淀物74，包括粗蛋白和上清液76。然后，可以對上清液76進(jìn)行稀釋步驟78以產(chǎn)生稀釋的上清液80。正如所預(yù)期的，稀釋步驟78可以包括加入去離子水。所加入的水量可以有所變化。例如，在本發(fā)明的稀釋步驟78的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所加入的水量可以包括大約2-10倍體積的上清液76。在稀釋后，稀釋的上清液80然后可以進(jìn)行二次提取過程25，正如圖2、5和6中所描述的。顯而易見，初步提取過程20的多種其它方法或步驟可以根據(jù)本發(fā)明在此處所述的原則進(jìn)行，這些原則與本發(fā)明的精神和范圍一致。因此，可以預(yù)期到，此處提供的實(shí)施例可以被看作本發(fā)明所述原則的例證，而不是限制執(zhí)行這些原則的步驟的任何特定方法、技術(shù)、步驟或順序。參考圖2和5，初步提取過程20產(chǎn)生的稀上清液80優(yōu)選地可以進(jìn)行二次提取過程25。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，二次提取過程25可以包括調(diào)節(jié)稀上清液80的pH值的步驟100。調(diào)節(jié)稀上清液80的pH值的步驟100可以包括使用多種溶液。為了舉例的目的，不是為了限制，可以使用鹽酸。pH調(diào)節(jié)溶液的成分的濃度可以有多個數(shù)值。正如所預(yù)期的，稀上清液80的pH值可以被調(diào)節(jié)為任意范圍的數(shù)值，以足以提供期望結(jié)果。因此，鹽酸溶液可能有助于將稀上清液80的pH值調(diào)節(jié)到在大約1-6.5之間的范圍內(nèi)的一個pH值。然后，pH調(diào)節(jié)后的稀上清液80可以進(jìn)行陽離子交換樹脂過濾步驟104。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，過濾步驟104包括將pH調(diào)節(jié)后的上清液80流過樹脂。陽離子交換樹脂通常是大孔樹脂，可以是弱極性或非極性的。然后將處理過的樹脂進(jìn)行洗滌步驟108，該步驟可以包括用水洗滌樹脂。樹脂也可以進(jìn)行漸進(jìn)的氨溶液處理步驟112，然后發(fā)生酸收集步驟116。漸進(jìn)的氨處理步驟112可以考慮使用多種氨溶液。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，氨溶液包括氨水或類似物。正如所預(yù)期的，溶液成分的濃度可以有多個數(shù)值。例如，氨水的濃度可以落入在大約0.1到1N之間的范圍內(nèi)，優(yōu)選地為大約0.3N。漸進(jìn)氨溶液處理步驟112的非酸性流出物117可以被保存起來，用于分離具有生物活性的營養(yǎng)物，如薯蕷皂苷配基、皂角苷、類黃酮和可溶性纖維，如半乳甘露聚糖和類似物。在酸收集步驟116之后優(yōu)選地是濃縮步驟118，該步驟在酸性部分上進(jìn)行。正如所預(yù)期的，濃縮步驟118可以包括使用真空。在本發(fā)明的二次提取步驟125的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，可以引入去氨步驟120，以充分去除胡蘆巴種子制備過程10之前的步驟中所加入的氨。正如本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的熟練技術(shù)人員所理解的，去氨步驟120可以通過任意數(shù)量的傳統(tǒng)方法來實(shí)現(xiàn)。一個這樣的方法可能使用了大孔、非極性柱，如HDP100柱。在完成去氨步驟120后，從胡蘆巴種子制備提取的生物活性化合物的組合物可以被稱作去苦味提取物(debitterizedextract)，該組合物含有4-羥基異亮氨酸和一組其它氨基酸。在去氨后，可以用干燥步驟124來產(chǎn)生含有有用化合物的最終產(chǎn)品126。正如本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的技術(shù)人員所理解的，干燥步驟124可以使用任意數(shù)量的方法，例如，噴霧干燥、冷凍干燥或真空干燥。典型地，來自制備的胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物(例如產(chǎn)物成品126)包括蛋白質(zhì)和氨基酸。4-羥基異亮氨酸是這樣的氨基酸之一。更特別地，優(yōu)選地，產(chǎn)物成品126包括來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物，該組合物含有4-羥基異亮氨酸，比率在大約10％-70％之間；和其它蛋白質(zhì)，由一組其它氨基酸構(gòu)成，占比率在大約20％-40％之間。因此，來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物可能含有的氨基酸比率在大約10％-90％之間。顯而易見，二次提取過程125的其它方法或步驟可以根據(jù)本發(fā)明在此處所闡明的原則來完成，這些原則與本發(fā)明的精神和范圍是一致的。因此，可以預(yù)期到，此處提供的實(shí)施例可以被看作本發(fā)明所述原則的例證，而不是限制執(zhí)行這些原則的步驟的任何特定方法、技術(shù)、步驟或順序?，F(xiàn)在參考圖6，該圖所示為本發(fā)明的二次提取過程25的另一個優(yōu)選實(shí)施方案。特別地，初步提取過程20所產(chǎn)生的稀上清液80優(yōu)選地進(jìn)行二次提取過程125。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，二次提取步驟25可以包括陽離子交換樹脂過濾步驟130。過濾步驟130考慮將稀上清液80在樹脂之上流過，或流經(jīng)樹脂。所形成的樹脂優(yōu)選地具有合適的構(gòu)造，是大孔的，或者是弱極性或是非極性的。然后處理過的樹脂進(jìn)行洗滌步驟108，該步驟可能包括用水洗滌樹脂。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，樹脂也可以進(jìn)行遞增乙醇處理步驟134。用乙醇處理樹脂的步驟134可以包括將溶劑溶液重復(fù)地流經(jīng)樹脂。乙醇在溶劑中的濃度通常隨著每次流過而增加。正如本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的技術(shù)人員所理解的，遞增乙醇處理步驟134(progressiveethanoltreatment134)可以考慮使用多種合適的物質(zhì)。例如，可以使用乙醇或在生物活性成分提取中具有類似應(yīng)用的溶劑。酸收集步驟138可以緊接遞增乙醇處理步驟134的任意循環(huán)之后，以回收具有生物活性的營養(yǎng)物，如皂角苷和類黃酮。典型地，最后一次循環(huán)所收集的流出物138使用最高濃度的溶劑，并且被收集起來用于根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的處理。流出物138也可以進(jìn)行pH值調(diào)節(jié)步驟100。流出物138的pH值的調(diào)節(jié)步驟100可以包括使用多種溶液。為了舉例的目的，不是為了起限制作用，可以使用鹽酸。pH調(diào)節(jié)溶液的成分的濃度可以具有多個數(shù)值。正如能意識到的，所收集的流出物138的pH值可以被調(diào)節(jié)到任意范圍的數(shù)值，以足以實(shí)現(xiàn)期望結(jié)果。因此，鹽酸溶液可能有助于將流出物138的pH值調(diào)節(jié)到大約1-6.5的范圍內(nèi)的pH值。然后，pH調(diào)節(jié)后的溶液進(jìn)行陽離子交換樹脂過濾步驟104。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，過濾步驟104包括使pH調(diào)節(jié)后的溶液流過或流經(jīng)具有離子交換特性的陽離子交換樹脂。樹脂優(yōu)選地是大孔的，可以是弱極性或非極性的。處理后的樹脂也可以進(jìn)行遞增氨溶液處理步驟112，之后是酸收集步驟116。遞增氨處理112可以考慮使用多種氨溶液。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，氨溶液包括氨水或類似物。正如所預(yù)期的，該溶液所含成分的濃度可以有多個數(shù)值。例如，氨水的濃度可以落在大約0.1-1N之間的范圍內(nèi)，優(yōu)選地是大約0.3N。遞增氨溶液處理步驟112的非酸性流出物217可以被保存起來，用于分離具有生物活性的營養(yǎng)物，如薯蕷皂苷配基、皂角苷、類黃酮和可溶性纖維，例如半乳甘露聚糖和類似物。在酸收集步驟116之后是濃縮步驟118，該步驟優(yōu)選地在酸性部分上進(jìn)行。正如所預(yù)期的，濃縮步驟118可以包括使用真空。在本發(fā)明的二次提取步驟125的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，可以引入去氨步驟120，以充分去除胡蘆巴種子制備過程10之前的步驟中所加入的氨。正如本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的熟練技術(shù)人員所理解的，去氨步驟120可以通過任意數(shù)量的傳統(tǒng)方法來實(shí)現(xiàn)。一個這樣的方法可能使用了大孔、非極性柱，如HDP100柱。在完成去氨步驟120后，從胡蘆巴種子制備提取的生物活性化合物的組合物可以被稱作去苦味提取物(debitterizedextract)，該組合物含有4-羥基異亮氨酸和一組其它氨基酸。在去氨后，可以用干燥步驟124來產(chǎn)生含有有用化合物的最終產(chǎn)物126。正如本
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：的技術(shù)人員所理解的，干燥步驟124可以使用任意數(shù)量的方法，例如，噴霧干燥、冷凍干燥或真空干燥。典型地，來自制備的胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物(例如產(chǎn)物產(chǎn)品126)包括蛋白質(zhì)和氨基酸。4-羥基異亮氨酸是這樣的氨基酸之一。更特別地，優(yōu)選地產(chǎn)物126包括來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物，該組合物所含4-羥基異亮氨酸的比率在大約10％-70％之間，和占比率在大約20％-40％之間的其它蛋白質(zhì)，是由一組一種或者多種氨基酸構(gòu)成。顯而易見，二次提取過程125的其它方法或步驟可以根據(jù)本發(fā)明在此處所闡明的原則來完成，這些原則與本發(fā)明的精神和范圍是一致的。因此，可以預(yù)期到，此處提供的實(shí)施例可以被看作本發(fā)明所述原則的例證，而不是限制執(zhí)行這些原則的步驟的任何特定方法、技術(shù)、步驟或順序。正如本
技術(shù)領(lǐng)域：
：熟練技術(shù)人員可以理解的，可以使用方法確認(rèn)程序(methodvalidationprogram)來量化本發(fā)明所述新穎組合物的氨基酸和蛋白質(zhì)含量。使用高效液相色譜(HPLC)儀來確定4-羥基異亮氨酸和其它氨基酸在胡蘆巴中所占比率。正如此處所預(yù)期的，在方法確認(rèn)程序中，可以使用包括熒光檢測器和可編程自動取樣器的HPLC儀。色譜柱可以是ZorbaxstablebondSB-C18(4.6*150mm，5μm)。此外，HPLC儀可以包括一個精確到0.1mg的分析天平、一個超聲波浴、一個容量瓶、一個具有0.2μm薄膜的兩升真空過濾玻璃儀器、可變?nèi)萘课乒芎鸵粋€磁攪拌器及攪拌棒。方法確認(rèn)程序的試劑可以包括，例如(1)甲醇(HPLC等級)，(2)乙腈(HPLC等級)，(3)三水合乙酸鈉(AR等級)，(4)三乙胺(AR等級)，(5)冰醋酸(AR等級)，(6)四氫呋喃(tetrafunan，AR等級)，(7)OPA試劑(AgilentCo.PartNo.5061-3335，在硼酸鹽緩沖液中含有鄰苯二醛和3-巰基丙酸)，(8)4-羥基異亮氨酸的參比標(biāo)準(zhǔn)(來自BritishAgriculturalLab)，和(9)去離子水。方法確認(rèn)程序準(zhǔn)備的一個優(yōu)選實(shí)施方案可以包括流動相步驟、標(biāo)準(zhǔn)制備步驟和樣品制備步驟。在流動相步驟，可以使用緩沖液A、緩沖液B和過濾/排氣步驟。緩沖液A可以在一個1升燒杯中制備，是將1.36g三水合乙酸鈉溶解在500mL水中?？梢詫⒃摻M合物攪拌直至完全溶解。加入90μL三乙胺并且混和。用1％-2％乙酸溶液將pH值調(diào)節(jié)到大約7.2。然后可以加入1.5mL四氫呋喃(tetrafunan)并且混和。最終的混合物被標(biāo)記為—“緩沖液A”。緩沖液B可以根據(jù)下述方法形成。在燒杯中，將1.36g三水合乙酸鈉溶解在100mL水中。將該組合物攪拌直至充分溶解。用1％-2％乙酸溶液將pH值調(diào)節(jié)到大約7.2。然后將200mL甲醇和200mL乙腈加入加入到燒杯中，并且混和良好。最終的混合物被標(biāo)記為—“緩沖液B”。優(yōu)選地，可以使用真空和0.2μm薄膜過濾該緩沖液，并且除去其中的氣體。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，方法確認(rèn)程序標(biāo)準(zhǔn)制備步驟包括，精確地稱取大約10mg參比化合物(referencecompound)，并且將該化合物放置到一個50mL的容量瓶中。可以用大約30mL去離子水溶解參比化合物，并且用超聲波處理大約10分鐘。優(yōu)選地，允許燒杯冷卻到室溫，然后用水將該溶液稀釋到特定濃度并且充分混和。標(biāo)準(zhǔn)制備物然后可以用石蠟?zāi)?parafilm)密封，保存在冰箱中直到需要之時。方法確認(rèn)程序樣品制備步驟包括，精確地稱取大約25mg提取自葫蘆巴種子的生物活性化合物的組合物，將該組合物用大約30mL去離子水溶解于一個50mL的容量瓶?？梢詤⒈然衔?，并且用超聲波處理大約10分鐘。優(yōu)選地，允許燒杯冷卻到室溫，然后用水將該溶液稀釋到特定濃度并且充分混和。在注入到HPLC儀之前，過濾樣品制備物。方法確認(rèn)程序的一個優(yōu)選實(shí)施方案的層析條件包括，例如，一個ZorbaxstablebondSB-C18柱，柱溫度為30℃，和一個EX340nM，EM450色譜檢測儀?？梢允褂孟率鎏荻群妥⑷氤绦蛱荻茸⑷氤绦騜代表當(dāng)飼以每一種懸浮液時OVA-IgE的標(biāo)準(zhǔn)比率。通過公式x＝(s×0.5)/d得到在這個實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中對于OVA-IgE降低一半所必需的懸浮液中細(xì)胞的數(shù)目x(細(xì)胞/ml)，其中s(細(xì)胞/ml)表示施用于小鼠的懸浮液的菌濃度，并且假定s與降低率d成比例。利用這個公式，獲得在實(shí)施例2和3中所用的每一種菌株的菌數(shù)x。結(jié)果顯示于表3中。表3實(shí)施例5(對于人類的臨床效果)對13位患有常年性變態(tài)反應(yīng)性鼻炎的受試者(平均年齡22.9±6.1歲，6位女性和7位男性)進(jìn)行2星期的觀察期后，給與含有嗜酸性乳桿菌CL928.0×108到1.3×109細(xì)胞/ml的發(fā)酵乳100ml/天，持續(xù)4星期。在其間發(fā)出對于自覺癥狀的問卷表，在應(yīng)答的基礎(chǔ)上根據(jù)日本變態(tài)反應(yīng)學(xué)學(xué)會所提供的“變態(tài)反應(yīng)性鼻炎的嚴(yán)重性分類法”對癥狀進(jìn)行評分。每隔一段時間根據(jù)日本變態(tài)反應(yīng)學(xué)學(xué)會的指標(biāo)對鼻炎的癥狀進(jìn)行診斷。另外，每隔一段時間采血，測定血液中IgE抗體效價。而且，在試驗(yàn)期間記錄當(dāng)天的最低溫度。在試驗(yàn)期間受試者鼻充血的嚴(yán)重性、擤鼻涕的頻率以及最低溫度顯示于圖5和6中。在試驗(yàn)期間，當(dāng)天的最低溫度波動很大，從攝入第1天(11月15日)的14℃降到攝入最后1天(12月13日)的3.7℃降低了超過10℃。即使在這樣易于使鼻炎癥狀惡化的條件下，鼻充血還是在攝入開4-OH-Ile精確度LOTNO200204024-OH-Ile精確度LOTNOFSE02G31-32從這些結(jié)果，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為＜3％?；谏鲜鼋Y(jié)果，方法確認(rèn)程序?qū)υ摌悠诽峁┝肆己玫木_度。通過在連續(xù)幾天內(nèi)，用多個HPLC分析測試同一樣品，進(jìn)行且分析了方法確認(rèn)程序的再現(xiàn)性。觀察到了下述結(jié)果4-OH-Ile再現(xiàn)性IOTNO20600524-OH-Ile再現(xiàn)性LOTNO2002-0402相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于3％，這表明方法確認(rèn)程序具有良好的再現(xiàn)性。用加料和回收樣品分析物與加料和回收標(biāo)準(zhǔn)分析物，進(jìn)行和分析了方法確認(rèn)程序的回收率和準(zhǔn)確度。觀察到了如下結(jié)果前邊所述數(shù)據(jù)表明本發(fā)明的方法確認(rèn)程序具有很好的準(zhǔn)確度?；诜椒ù_認(rèn)程序的前述結(jié)果，對兩批含有來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物的制品進(jìn)行了分析，其中所含的胡蘆巴種子的生物活性化合物是根據(jù)本發(fā)明的胡蘆巴種子制備過程10提取的，觀察到了如下結(jié)果參考圖7-9，這些圖中的圖解數(shù)據(jù)代表在金黃倉鼠的胰腺組織上完成的試驗(yàn)結(jié)果，參考圖10-19，這些圖中的圖解數(shù)據(jù)代表在人類對象上完成的臨床試驗(yàn)結(jié)果，數(shù)據(jù)表明來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的新穎組合物通過獨(dú)立刺激GT-4可以有效地促進(jìn)和支持葡萄糖和碳水化合物的代謝，并且也可以與胰島素協(xié)同工作以刺激GT-4，所述來自胡蘆巴種子的生物活性化合物是根據(jù)此處公開的優(yōu)選方法提取的。下述實(shí)施例將進(jìn)一步詳細(xì)地說明本發(fā)明的實(shí)施。本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的熟練技術(shù)人員可以容易地理解，正如此處實(shí)施例所通常描述和分析的，本發(fā)明的下述方法、配方和一種獨(dú)特的、高效的、生物活性胡蘆巴種子提取物的組合物被看作是本發(fā)明所述原則的例證，不是限制實(shí)施這些原則的特定結(jié)構(gòu)或過程。因此，正如實(shí)施例I-VI所表示的，下述對本發(fā)明所述方法、配方和組合物的優(yōu)選實(shí)施方案進(jìn)行的更詳細(xì)描述，目的不在于限制本發(fā)明的范圍，即正如權(quán)利要求所要求的范圍，僅僅代表本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。實(shí)施例I[金黃倉鼠(Syriangoldenhamster)-15mg/mL]根據(jù)本發(fā)明的胡蘆巴種子制備過程10的優(yōu)選實(shí)施方案，從胡蘆巴種子制備獨(dú)特的、高效的生物活性提取物。更特別地，從過程10的收獲物中制備濃度為15mg/mL的4-羥基異亮氨酸。該濃度被施用給一個體外細(xì)胞系HIT-15，金黃倉鼠胰島的胰島β細(xì)胞，并且評價胰島素活性在一段時間內(nèi)上的濃度變化。現(xiàn)在參考圖7，該圖說明了制備細(xì)胞培養(yǎng)物和評價胡蘆巴提取物在來自金黃倉鼠140的培養(yǎng)的胰島β細(xì)胞中的生物活性。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，可能獲得來自HIT-T15的細(xì)胞培養(yǎng)物142，這些細(xì)胞可以進(jìn)行再培養(yǎng)144，方法是去除生長培養(yǎng)基，加入大約4mL含有大約0.05％胰蛋白酶和0.53mMEDTA的溶液，并且輕輕洗滌大約5秒鐘。該溶液可以被去除，并且可以加入4mL新鮮溶液。所述細(xì)胞在大約37℃培養(yǎng)大約7分鐘。在分離后，將所收獲的細(xì)胞用本
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：的熟練技術(shù)人員容易知道的方式計(jì)數(shù)146。一種這樣的方式可以使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器，進(jìn)行臺盼藍(lán)排斥方法(TryptanBlueexclusionmethod)。接著優(yōu)選地在培養(yǎng)基148中稀釋所述收獲的細(xì)胞。培養(yǎng)基可以包括Ham’sF-12，有時被稱作Knight’s改進(jìn)型或F12K。細(xì)胞稀釋物可以被再次接種到一個24-孔平板中，每孔150接種1,500個細(xì)胞。然后未使用的細(xì)胞被放入到一個75cm2的燒瓶中。帶孔的平板可以在培養(yǎng)箱152中繼續(xù)大約2天。在培養(yǎng)箱152中繼續(xù)培養(yǎng)所述平板結(jié)束后，培養(yǎng)的、來自金黃倉鼠的胰腺β細(xì)胞可以使用1-丁基-3-對甲苯磺?；?54和DMSO156分別作為陽性和陰性對照組，也可以使用胡蘆巴種子提取物158的濃縮物處理。現(xiàn)在參考圖8，該圖代表使用根據(jù)預(yù)備程序140培養(yǎng)的金黃倉鼠的胰腺β細(xì)胞所完成的試驗(yàn)結(jié)果，以及在暴露給來自胡蘆巴種子提取物的生物活性化合物的組合物之后進(jìn)行的評價結(jié)果，所述組合物的濃度為每毫升15毫克4-羥基異亮氨酸。正如可以從曲線中看出的，在時間為零的時刻加入所述成分之后，胰島素水平穩(wěn)定增加，直到在時間為40分鐘時達(dá)到峰值，然后又降到加入所述成分之前所測量的胰島素水平。正如本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的熟練技術(shù)人員所理解的，并且如圖8所描述的，在實(shí)驗(yàn)期間，在金黃倉鼠的胰腺β細(xì)胞中測量的胰島素活性水平表明，來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物對動物體中的胰島素水平有影響。實(shí)施例II[金黃倉鼠中的胡蘆巴種子提取物-60mg/mL]正如前邊在實(shí)施例I中所描述的，和圖7中所分析的，預(yù)備程序140被用來培養(yǎng)、收獲和評價來自金黃倉鼠的胰腺β細(xì)胞?，F(xiàn)在參考圖9，該示意性圖舉例說明了該試驗(yàn)的結(jié)果。根據(jù)預(yù)備程序140，培養(yǎng)來自金黃倉鼠的胰腺β細(xì)胞，并且在暴露給來自胡蘆巴種子提取物(例如，PromilinTM)的生物活性化合物的組合物之后進(jìn)行評價，所述組合物的濃度為每毫升60毫克4-羥基異亮氨酸。如圖所示，生物活性化合物的濃度越大，產(chǎn)生的受激胰島素產(chǎn)生越大。正如本
技術(shù)領(lǐng)域：
：的熟練技術(shù)人員所能理解的，并且如圖表中所描述的，在實(shí)驗(yàn)期間，在金黃倉鼠類的胰腺β細(xì)胞中測量的胰島素活性水平表明，生物活性成分確實(shí)對動物體中的胰島素水平有影響?？梢匀菀椎乩斫?，可以對這些試驗(yàn)進(jìn)行設(shè)計(jì)，以適用于大量能實(shí)踐本發(fā)明的實(shí)施方案，所述試驗(yàn)使用來自金黃倉鼠的胰腺β細(xì)胞完成，金黃倉鼠的胰腺β細(xì)胞是根據(jù)本發(fā)明的預(yù)備程序140培養(yǎng)的，并且在暴露于來自胡蘆巴種子提取物(例如PromilinTM)的生物活性化合物的組合物的濃縮物之后進(jìn)行評價，所述胡蘆巴種子提取物是根據(jù)胡蘆巴種子制備過程10制備的，所述實(shí)施方案與本發(fā)明的精神和范圍一致。因此，本發(fā)明的目的是，此處提供的實(shí)施例可以本看作是本發(fā)明所述原則的例證，而不是限制特定結(jié)構(gòu)或?qū)嵤┠切┰瓌t的方法。實(shí)施例III[人體使用未去苦味胡蘆巴種子提取物-1毫克4-羥基異亮氨酸/公斤]現(xiàn)在參考圖10-19，用三個健康男性對象進(jìn)行試驗(yàn)，這些男性對象沒有糖尿病史或碳水化合物代謝紊亂史。該試驗(yàn)包括兩個過程。對于第一個過程，這些對象整夜禁食。從這些對象采取血樣，以測量葡萄糖和胰島素水平，測量時間為負(fù)30分鐘，0分鐘，15分鐘、30分鐘、60分鐘，120分鐘，和180分鐘。在時間為零時，將溶解在300mL水中的75克(g)葡萄糖溶液施用給這些對象。在Montana大學(xué)藥學(xué)院，使用放射性免疫測定(RIA)測量每一血樣的胰島素含量。在圖10-20以圖解方式總結(jié)了血樣測試的結(jié)果，這些結(jié)果作為“安慰劑部分(placeboportion)”數(shù)據(jù)點(diǎn)。正如本
技術(shù)領(lǐng)域：
：熟練技術(shù)人員所能理解的，這種類型的試驗(yàn)類似于在糖尿病和妊娠期糖尿病的診斷中使用的口服葡萄糖耐性實(shí)驗(yàn)(OGTT)。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，第一種程序作為一種對照機(jī)制，以定量血液葡萄糖的基準(zhǔn)水平和胰島素活性的濃度。完成第二種程序的條件與完成第一種程序的條件相同。唯一的區(qū)別是將來自胡蘆巴種子的生物活性化合物(例如PromilinTM)的組合物施用給三個人類對象。然后，一般地參考圖10-19，活性溶液含有溶解在300mL水中的75克葡萄糖，以及一劑胡蘆巴提取物(例如PromilinTM)，每公斤施用者體重劑量為1-9毫克4-羥基異亮氨酸。第二種程序的結(jié)果總結(jié)在圖10-19中，作為“活性部分(activeportion)”數(shù)據(jù)點(diǎn)。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，一種獨(dú)特的、生物活性未去苦味的胡蘆巴種子提取物組合物(例如PromilinTM)被施用給人類個體，所述組合物含有一組20種氨基酸，包括每公斤體重1毫克4-羥基異亮氨酸。所獲得的組合物被施用給第一個人類對象。特定地參考圖10，該示意性圖舉例說明了第一個人類對象中的安慰劑部分和活性部分結(jié)果。活性部分含有溶解在300mL水中的75克葡萄糖，以及本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案，包括生物活性化合物的一種獨(dú)特的、高效的胡蘆巴種子未去苦味的提取物(例如PromilinTM)，濃度為每公斤體重1毫克4-羥基異亮氨酸。正如在圖解說明中所描述的，在實(shí)驗(yàn)期間所測量的第一個人類對象的胰島素活性和葡萄糖水平表明，來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物(例如PromilinTM)對人類對象中的胰島素和葡萄糖水平有所影響?？梢匀菀椎乜闯觯诹銜r刻之后，對于含有生物活性化合物的活性溶液而言，第一個人體中的胰島素活性水平比較高，葡萄糖水平比較低。現(xiàn)在參考圖1，該示意圖舉例說明了第二個人類對象中的安慰劑部分和活性部分結(jié)果?；钚圆糠趾腥芙庠?00mL水中的75克葡萄糖，以及本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案，包括來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的一種獨(dú)特的、高效的胡蘆巴種子未去苦味的提取物(例如PromilinTM)，濃度為每公斤體重1毫克4-羥基異亮氨酸。正如在圖解說明中所描述的，在實(shí)驗(yàn)期間所測量的第二個人類對象的胰島素活性和葡萄糖水平表明，生物活性化合物的組合物(例如PromilinTM)對人類對象中的胰島素和葡萄糖水平有所影響。可以容易地看出，在零時刻之后，對于在施用了含有生物活性化合物的活性溶液之后進(jìn)行的測量而言，第二個人體中的胰島素活性水平顯著地高于施用前的水平，葡萄糖水平比較低?？梢院苋菀椎乩斫獾剑@些試驗(yàn)是在第一個和第二個人類對象中所進(jìn)行的，以評價暴露于來自胡蘆巴種子提取物的生物活性化合物的組合物的結(jié)果，所述胡蘆巴種子提取物是根據(jù)胡蘆巴種子處理過程制備的(例如PromilinTM)，可以對這些實(shí)驗(yàn)進(jìn)行設(shè)計(jì)或修正，以適用于大量能實(shí)踐本發(fā)明的實(shí)施方案，所述實(shí)施方案與本發(fā)明的精神和范圍一致。因此，本發(fā)明的目的是，此處提供的實(shí)施例可以本看作是本發(fā)明所述原則的例證，而不是限制特定結(jié)構(gòu)或?qū)嵤┠切┰瓌t的方法。實(shí)施例IV[在人中使用去苦味胡蘆巴種子提取物-4毫克4-羥基異亮氨酸/公斤]正如在圖12中所看到的，該示意圖舉例說明了第一個人類對象中的安慰劑部分和活性部分結(jié)果。活性部分含有溶解在300mL水中的75克葡萄糖，以及本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案，包括生物活性化合物的一種獨(dú)特的、高效的胡蘆巴種子未去苦味的提取物(例如PromilinTM)，濃度為4毫克4-羥基異亮氨酸/每公斤體重。正如在圖解說明中所描述的，在實(shí)驗(yàn)期間所測量的第一個人類對象的胰島素活性和葡萄糖水平表明，來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物(例如PromilinTM)對人類對象中的胰島素和葡萄糖水平有所影響。可以容易地看出，在零時刻之后，對于在施用了含有生物活性化合物的活性溶液之后進(jìn)行的測量而言，第一個人體中的胰島素活性水平顯著地高于施用前的水平，葡萄糖水平比較低。現(xiàn)在參考圖13，該示意圖舉例說明了第二個人類對象中的安慰劑部分和活性部分結(jié)果。活性部分含有溶解在300mL水中的75克葡萄糖，以及本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案，包括生物活性化合物的一種獨(dú)特的、高效的胡蘆巴種子去苦味的提取物(例如PromilinTM)，濃度為4毫克4-羥基異亮氨酸/每公斤體重。正如在圖解說明中所描述的，在實(shí)驗(yàn)期間所測量的第二個人類對象的胰島素活性和葡萄糖水平表明，來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物(例如PromilinTM)對人類對象中的胰島素和葡萄糖水平有所影響?？梢匀菀椎乜闯?，在零時刻之后，對于在施用了含有生物活性化合物的活性溶液之后進(jìn)行的測量而言，第一個人體中的胰島素活性水平顯著地高于施用前的水平，葡萄糖水平比較低。圖14圖解性地代表本發(fā)明的另一個優(yōu)選實(shí)施方案，該實(shí)施方案使用了一種去苦味提取物，濃度為4毫克4-羥基異亮氨酸/公斤。正如所示，該示意圖舉例說明了第一個人類對象中的安慰劑部分和活性部分結(jié)果?；钚圆糠趾腥芙庠?00mL水中的75克葡萄糖，以及本發(fā)明的另一個優(yōu)選實(shí)施方案，包括生物活性化合物的一種獨(dú)特的、高效的胡蘆巴種子去苦味的提取物(例如PromilinTM)，濃度為四(4)毫克4-羥基異亮氨酸/每公斤體重。正如在圖解說明中所描述的，在實(shí)驗(yàn)期間所測量的第一個人類對象的胰島素活性和葡萄糖水平表明，來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物(例如PromilinTM)對第一個人類對象中的胰島素和葡萄糖水平有所影響?？梢匀菀椎乜闯?，在零時刻之后，對于含有生物活性化合物的活性溶液而言，第一個人體中的胰島素活性水平顯著地高于施用前的水平，葡萄糖水平比較低?，F(xiàn)在參考圖15，該示意圖舉例說明了第二個人類對象中的安慰劑部分和活性部分結(jié)果。活性部分含有溶解在300mL水中的75克葡萄糖，以及本發(fā)明的另一個優(yōu)選實(shí)施方案，包括生物活性化合物的一種獨(dú)特的、高效的胡蘆巴種子去苦味的提取物(例如PromilinTM)，濃度為四(4)毫克4-羥基異亮氨酸/每公斤體重。正如在圖解說明中所描述的，在實(shí)驗(yàn)期間所測量的第二個人類對象的胰島素活性和葡萄糖水平表明，來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物(例如PromilinTM)對第二個人類對象中的胰島素和葡萄糖水平有所影響?？梢匀菀椎乜闯觯诹銜r刻之后，對于在施用了含有生物活性化合物的活性溶液之后進(jìn)行的測量而言，第二個人體中的胰島素活性水平顯著地高于施用前的水平，葡萄糖水平比較低?？梢院苋菀椎乩斫獾?，這些試驗(yàn)是在第一個和第二個人類對象中所進(jìn)行的，以評價暴露于來自胡蘆巴種子提取物的生物活性化合物的組合物的結(jié)果，所述胡蘆巴種子提取物是根據(jù)胡蘆巴種子制備過程制備的(例如PromilinTM)，可以對這些實(shí)驗(yàn)進(jìn)行設(shè)計(jì)或修正，以適用于大量能實(shí)踐本發(fā)明的實(shí)施方案，所述實(shí)施方案與本發(fā)明的精神和范圍一致。因此，本發(fā)明的目的是，此處提供的實(shí)施例可以本看作是本發(fā)明所述原則的例證，而不是限制特定結(jié)構(gòu)或?qū)嵤┠切┰瓌t的方法。實(shí)施例V[在人體中使用未去苦味胡蘆巴種子提取物-4毫克4-羥基異亮氨酸/公斤]現(xiàn)在參考圖16，該示意圖舉例說明了第一個人類對象中的安慰劑部分和活性部分結(jié)果?；钚圆糠趾腥芙庠?00mL水中的75克葡萄糖，以及本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案，包括生物活性化合物的一種獨(dú)特的、高效的胡蘆巴種子未去苦味的提取物(例如PromilinTM)，濃度為4毫克4-羥基異亮氨酸/每公斤體重。正如在圖解說明中所描述的，在實(shí)驗(yàn)期間所測量的第一個人類對象的胰島素活性和葡萄糖水平表明，來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物(例如PromilinTM)對第一個人類對象中的胰島素和葡萄糖水平有所影響。可以容易地看出，在零時刻之后，對于含有生物活性成分的活性溶液而言，第一個人體中的胰島素活性水平比較高，葡萄糖水平比較低。正如在圖17中所示，該示意圖舉例說明了第二個人類對象中的安慰劑部分和活性部分結(jié)果?；钚圆糠趾腥芙庠?00mL水中的75克葡萄糖，以及本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案，包括生物活性化合物的一種獨(dú)特的、高效的胡蘆巴種子未去苦味的提取物(例如PromilinTM)，濃度為4毫克4-羥基異亮氨酸/每公斤體重。正如在圖解說明中所描述的，在實(shí)驗(yàn)期間所測量的第二個人類對象的胰島素活性和葡萄糖水平表明，來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物(例如PromilinTM)對人類對象中的胰島素和葡萄糖水平有所影響?？梢匀菀椎乜闯?，在零時刻之后，對于在施用了含有生物活性化合物的活性溶液之后進(jìn)行的測量而言，第一個人體中的胰島素活性水平顯著地高于施用前的水平，葡萄糖水平比較低。可以很容易地理解到，這些實(shí)驗(yàn)是在第一個和第二個人體中所進(jìn)行的，以評價暴露于來自胡蘆巴種子提取物的生物活性化合物的組合物的結(jié)果，所述胡蘆巴種子提取物是根據(jù)胡蘆巴種子制備過程制備的(例如PromilinTM)，可以對這些實(shí)驗(yàn)進(jìn)行設(shè)計(jì)或修正，以適用于大量能實(shí)踐本發(fā)明的實(shí)施方案，所述實(shí)施方案與本發(fā)明的精神和范圍一致。因此，本發(fā)明的目的是，此處提供的實(shí)施例可以本看作是本發(fā)明所述原則的例證，而不是限制特定結(jié)構(gòu)或?qū)嵤┠切┰瓌t的方法。實(shí)施例VI[在人體中使用去苦味胡蘆巴種子提取物-9毫克4-羥基異亮氨酸/公斤]現(xiàn)在參考圖18，該示意圖舉例說明了第一個人類對象中的安慰劑部分和活性部分結(jié)果。活性部分含有溶解在300mL水中的75克葡萄糖，以及本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案，包括生物活性化合物的一種獨(dú)特的、高效的胡蘆巴種子去苦味的提取物(例如PromilinTM)，濃度為9毫克4-羥基異亮氨酸/每公斤體重。正如在圖解說明中所描述的，在實(shí)驗(yàn)期間所測量的第一個人類對象的胰島素活性和葡萄糖水平表明，來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物(例如PromilinTM)對第一個人類對象中的胰島素和葡萄糖水平有所影響。可以容易地看出，在零時刻之后，對于含有生物活性成分的活性溶液而言，第一個人體中的胰島素活性水平比較高，葡萄糖水平比較低。正如在圖19中所示，該示意圖舉例說明了第三個人類對象中的安慰劑部分和活性部分結(jié)果?；钚圆糠趾腥芙庠?00mL水中的75克葡萄糖，以及本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案，包括生物活性化合物的一種獨(dú)特的、高效的胡蘆巴種子去苦味的提取物(例如PromilinTM)，濃度為9毫克4-羥基異亮氨酸/每公斤體重。正如在圖解說明中所描述的，在實(shí)驗(yàn)期間所測量的第三個人類對象的胰島素活性和葡萄糖水平表明，來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物(例如PromilinTM)對人類對象中的胰島素和葡萄糖水平有所影響?？梢匀菀椎乜闯?，在零時刻之后，對于在施用了含有生物活性化合物的活性溶液之后進(jìn)行的測量而言，第三個人體中的胰島素活性水平顯著地高于施用前的水平，葡萄糖水平比較低。可以很容易地理解到，這些實(shí)驗(yàn)是在第一個和第三個人體中所進(jìn)行的，以評價暴露于來自胡蘆巴種子提取物的生物活性化合物的組合物的結(jié)果，所述胡蘆巴種子提取物是根據(jù)胡蘆巴種子制備過程制備的(例如PromilinTM)，可以對這些實(shí)驗(yàn)進(jìn)行設(shè)計(jì)或修正，以適用于大量能實(shí)踐本發(fā)明的實(shí)施方案，所述實(shí)施方案與本發(fā)明的精神和范圍一致。因此，本發(fā)明的目的是，此處提供的實(shí)施例可以本看作是本發(fā)明所述原則的例證，而不是限制特定結(jié)構(gòu)或?qū)嵤┠切┰瓌t的方法?？梢赃M(jìn)一步理解到，本發(fā)明的來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物的施用方式可以是口服、腸道外注射、舌下施用、局部施用、透皮施用、肌內(nèi)注射或吸入施用，而且所述組合物也可以含有賦形劑，所述賦形劑根據(jù)所采用的劑量形式選擇。而且，施用給個體的提取物組合物的劑量可以在幾個考慮因素的基礎(chǔ)上變化，但不背離本發(fā)明的精神和范圍，因此，該劑量給將依賴于將要處理的目標(biāo)個體的特定情況。從上述討論，將可以理解到，本發(fā)明提供了新穎的組合物，以及提取和分離來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的方法，所述胡蘆巴種子能有助于增加葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素水平，增強(qiáng)胰島素敏感度，刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)因子4的功能。在優(yōu)選的設(shè)計(jì)中，提取和分離來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的新穎方法產(chǎn)生了一種高效的且高質(zhì)量的提取物產(chǎn)量，該方法的生產(chǎn)比較經(jīng)濟(jì)和有效。與現(xiàn)有技術(shù)不同，本發(fā)明提供了新穎的組合物，以及提取和分離來自胡蘆巴種子的生物活性化合物的方法，包括但不限于，4-羥基異亮氨酸、精氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、組氨酸、γ-氨基丁酸、三甲基組氨酸和EtOHNH2(乙醇胺)。這些從胡蘆巴種子提取的新穎的組合物能獨(dú)立地刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白并且能促進(jìn)葡萄糖運(yùn)輸?shù)郊∪庵?，或者可選擇地，可以與胰島素協(xié)同工作，刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，并且促進(jìn)葡萄糖運(yùn)輸?shù)郊∪庵小Ｔ诓槐畴x本發(fā)明的精神或主要特征的情況下，本發(fā)明可以以其它特定形式實(shí)施。在所有方面，所描述的實(shí)施方案僅作為例證來考慮，而不是起限制性作用。因此，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求來表示，而不是由前述描述來表示。在與權(quán)利要求等同的意思和范圍內(nèi)所進(jìn)行的的變化都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.生物活性化合物的組合物，用于支持葡萄糖和碳水化合物的代謝以及運(yùn)輸?shù)焦趋兰〖?xì)胞中，所述組合物包括4-羥基異亮氨酸和一種或多種氨基酸，所述氨基酸選自精氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、組氨酸、γ-氨基丁酸和三甲基組氨酸。2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述生物活性化合物是從胡蘆巴種子(trigonellafoenumgraecum)提取的。3.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述生物活性化合物包括大約10％到90％的氨基酸和化學(xué)鹽(chemicalsalts)，酐，或其異構(gòu)體。4.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述生物活性化合物包括大約10％到70％的4-羥基異亮氨酸，和大約20％到40％的氨基酸和化學(xué)鹽，酐，或其異構(gòu)體。5.生物活性化合物的組合物，用于支持葡萄糖和碳水化合物的代謝和運(yùn)輸進(jìn)骨骼肌中，所述組合物包括4-羥基異亮氨酸、精氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、組氨酸、γ-氨基丁酸和三甲基組氨酸。6.如權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述生物活性化合物是從胡蘆巴種子(trigonellafoenumgraecum)提取的。7.如權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述生物活性化合物包括大約10％到90％的氨基酸和化學(xué)鹽，酐或它們的異構(gòu)體。8.如權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述生物活性化合物包括大約10％到70％的4-羥基異亮氨酸，和大約20％到40％的氨基酸和化學(xué)鹽，酐或其異構(gòu)體。9.一種用于支持葡萄糖和碳水化合物的代謝和運(yùn)輸進(jìn)骨骼肌細(xì)胞中的方法，是通過施用在治療上有效量的組合物，所述組合物是從胡蘆巴種子提取的生物活性化合物的組合物。10.如權(quán)利要求9所述的方法，進(jìn)一步包括增加葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素水平的步驟。11.如權(quán)利要求9所述的方法，進(jìn)一步包括增強(qiáng)胰島素敏感度的步驟。12.如權(quán)利要求9所述的方法，進(jìn)一步包括刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)因子4的活性的步驟。13.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述生物活性化合物的組合物是從胡蘆巴種子(trigonellafoenumgraecum)提取的。14.如權(quán)利要求9所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括施用生物活性化合物的組合物的步驟，施用方式選自口服、腸道外給藥、舌下施用、局部施用、透皮施用、肌內(nèi)注射和吸入施用。15.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所施用的在治療上有效量的生物活性化合物的組合物的量是每公斤體重在大約1毫克到9毫克之間。16.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所施用的在治療上有效量的生物活性化合物的組合物的量是每公斤體重在大約1毫克到4毫克之間。17.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所施用的在治療上有效量的生物活性化合物的組合物的量是每公斤體重是大約4毫克。18.如權(quán)利要求9所述的方法，其中生物活性化合物的組合物包括4-羥基異亮氨酸，和一種或多種選自如下化合物的氨基酸精氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、組氨酸、γ-氨基丁酸和三甲基組氨酸。19.如權(quán)利要求9所述的方法，其中生物活性化合物的組合物包括4-羥基異亮氨酸、精氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、組氨酸、γ-氨基丁酸和三甲基組氨酸。20.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述生物活性化合物包括大約10％到90％的氨基酸和化學(xué)鹽，酐或其異構(gòu)體。21.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述生物活性化合物包括大約10％到70％的4-羥基異亮氨酸，和大約20％到40％的氨基酸和化學(xué)鹽，酐或其異構(gòu)體。22.一種用于進(jìn)行重量管理的方法，是通過施用在治療上有效量的提取自胡蘆巴種子的生物活性化合物的組合物。23.如權(quán)利要求22所述的方法，進(jìn)一步包括包括增加葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素水平的步驟。24.如權(quán)利要求22所述的方法，進(jìn)一步包括增強(qiáng)胰島素敏感度的步驟。25.如權(quán)利要求22所述的方法，進(jìn)一步包括刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)因子4的活性的步驟。26.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述生物活性化合物的組合物是從胡蘆巴種子(trigonellafoenumgraecum)提取的。27.如權(quán)利要求22所述的方法，進(jìn)一步包括施用生物活性化合物的組合物的步驟，施用方式選自口服、腸道外給藥、舌下施用、局部施用、透皮施用、肌內(nèi)注射和吸入施用。28.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所施用的在治療上有效量的生物活性化合物的組合物的量是每公斤體重在大約1毫克到9毫克之間。29.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所施用的在治療上有效量的生物活性化合物的組合物的量是每公斤體重在大約1毫克到4毫克之間。30.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所施用的在治療上有效量的生物活性化合物的組合物的量是每公斤體重是大約4毫克。31.如權(quán)利要求22所述的方法，其中生物活性化合物的組合物包括4-羥基異亮氨酸，和一種或多種選自如下化合物的氨基酸精氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、組氨酸、γ-氨基丁酸和三甲基組氨酸。32.如權(quán)利要求22所述的方法，其中生物活性化合物的組合物包括4-羥基異亮氨酸、精氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、組氨酸、γ-氨基丁酸和三甲基組氨酸。33.如權(quán)利要求22所述的組合物，其中所述生物活性化合物包括大約10％到90％的氨基酸和化學(xué)鹽，酐或其異構(gòu)體。34.如權(quán)利要求22所述的組合物，其中所述生物活性化合物包括大約10％到70％的4-羥基異亮氨酸，和大約20％到40％的氨基酸和化學(xué)鹽，酐或其異構(gòu)體。35.一種用于從胡蘆巴種子提取生物活性化合物的組合物的方法，所述方法包括如下步驟提供大量胡蘆巴種子；處理胡蘆巴種子；和從胡蘆巴種子提取生物活性化合物的組合物，其中所述生物活性化合物包括4-羥基異亮氨酸、精氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、組氨酸、γ-氨基丁酸和三甲基組氨酸。36.如權(quán)利要求35所述的組合物，其中所述生物活性化合物包括大約10％到90％的氨基酸和化學(xué)鹽，酐或其異構(gòu)體。37.如權(quán)利要求35所述的組合物，其中所述生物活性化合物包括大約10％到70％的4-羥基異亮氨酸，和大約20％到40％的氨基酸和化學(xué)鹽，酐或其異構(gòu)體。38.所述生物活性化合物包括4-羥基異亮氨酸、精氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、組氨酸、γ-氨基丁酸和三甲基組氨酸。39.如權(quán)利要求35所述的方法，其中處理胡蘆巴種子的步驟進(jìn)一步包括將胡蘆巴種子浸泡在水中；和粉碎胡蘆巴種子。40.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述提取步驟進(jìn)一步包括進(jìn)行一個初步提取過程和一個二次提取過程的步驟。41.如權(quán)利要求40所述的方法，其中所述初步提取過程包括如下步驟使用第一種溶劑對所處理的種子提取物進(jìn)行一次或多次提取，使用的溫度條件是在20℃到90℃之間，時間期間為大約1到3小時，以產(chǎn)生一種種子殘余物和一種種子提取物；使用分餾柱蒸餾該種子殘余物，是通過加熱種子殘余物直至沸騰，并且捕獲和冷卻從其中得到的熱蒸氣；在真空下濃縮所蒸餾的種子殘余物，以便分離胡蘆巴種子油和第一種溶劑；使用第二種溶劑對種子提取物進(jìn)行一次或多次提取，使用的溫度條件是在20℃到90℃之間，時間期間為大約1到3小時，以便產(chǎn)生第二種種子殘余物和一種濃縮的種子提取物；在真空下對所濃縮的種子殘余物進(jìn)行進(jìn)一步的濃縮，以便從第二種溶劑中分離第二種濃縮的種子提取物；將第二種濃縮的種子提取物冷卻到室溫；將第二種濃縮的種子提取物沉淀為粗蛋白和一種上清液；和用去離子水將上清液稀釋為上清液體積的大約2到10倍體積。42.如權(quán)利要求41所述的方法，其中用第二種溶劑進(jìn)行三次提取。43.如權(quán)利要求41所述的方法，其中第一種溶劑包括有機(jī)溶劑。44.如權(quán)利要求43所述的方法，其中有機(jī)溶劑選自己烷、環(huán)己烷和醚。45.如權(quán)利要求41所述的方法，其中第二種溶劑包括含水酒精混合物。46.如權(quán)利要求45所述的方法，其中所述含水酒精混合物是大約10％-95％之間的乙醇。47.如權(quán)利要求41所述的方法，其中第二種提取過程包括如下步驟通過用酸進(jìn)行稀釋將上清液的pH濃度調(diào)整到大約1到6.5之間，得到pH調(diào)節(jié)后的上清液；通過陽離子交換樹脂過濾pH調(diào)節(jié)后的上清液，以去除過量的陽離子；洗滌陽離子交換樹脂，以便從樹脂結(jié)合的pH調(diào)節(jié)后的上清液中去除污染物；用氨溶液處理樹脂結(jié)合的pH調(diào)節(jié)后的上清液；從陽離子交換樹脂中收集二次提取產(chǎn)物的酸性流出物和非酸性流出物；在真空下濃縮酸性流出物以分離污染物；從二次提取產(chǎn)物中去除殘余的氨溶液；和干燥二次提取產(chǎn)物，以便得到4-羥基異亮氨酸和一種或多種氨基酸。48.如權(quán)利要求47所述的方法，其中所述pH調(diào)節(jié)步驟包括1N鹽酸。49.如權(quán)利要求47所述的方法，其中陽離子交換樹脂過濾步驟進(jìn)一步包括引導(dǎo)pH調(diào)節(jié)后的溶液通過具有離子交換特性的陽離子交換樹脂的步驟。50.如權(quán)利要求47所述的方法，其中所述洗滌步驟進(jìn)一步包括引導(dǎo)水通過具有離子交換特性的陽離子交換樹脂的步驟。51.如權(quán)利要求47所述的方法，其中所述氨溶液處理步驟進(jìn)一步包括使遞增濃縮的氨溶液通過陽離子交換樹脂的步驟。52.如權(quán)利要求41所述的方法，其中二次提取過程包括如下步驟通過陽離子交換樹脂過濾上清液，以去除過量的陽離子；洗滌陽離子交換樹脂，以便從樹脂結(jié)合的上清液中去除污染物；用乙醇處理對樹脂結(jié)合的上清液進(jìn)行處理；收集二次提取產(chǎn)物的酸性流出物；通過用酸進(jìn)行稀釋，將二次提取產(chǎn)物酸性流出物的pH值調(diào)整到大約1-6.5之間；用陽離子交換樹脂對pH調(diào)節(jié)后的二次提取產(chǎn)物進(jìn)行二次過濾；用氨溶液處理樹脂結(jié)合的pH調(diào)節(jié)后的二次提取產(chǎn)物；收集二次提取產(chǎn)物的酸性流出物和非酸性流出物；在真空下濃縮酸性流出物，以便分離污染物；從二次提取產(chǎn)物中去除殘余的氨溶液；和干燥二次提取產(chǎn)物，得到4-羥基異亮氨酸和一種或多種氨基酸。53.如權(quán)利要求52所述的方法，其中陽離子交換樹脂過濾步驟進(jìn)一步包括引導(dǎo)pH調(diào)節(jié)后的上清液通過陽離子交換樹脂的步驟。54.如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述洗滌步驟進(jìn)一步包括引導(dǎo)水通過陽離子交換樹脂的步驟。55.如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述乙醇處理步驟進(jìn)一步包括使遞增濃度的乙醇溶液通過陽離子交換樹脂的步驟。56.如權(quán)利要求52所述的方法，其中乙醇處理步驟包括具有與乙醇類似的化學(xué)特性的溶劑。57.如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述pH調(diào)節(jié)步驟包括6N鹽酸。58.如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述氨溶液處理步驟進(jìn)一步包括使遞增濃度的氨溶液通過陽離子交換樹脂的步驟。59.如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述氨溶液包括氨水。60.如權(quán)利要求59所述的方法，其中所述氨水濃度包括大約0.1N到大約1N。61.如權(quán)利要求59所述的方法，其中所述氨水濃度包括0.3N。62.如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述干燥步驟選自噴霧干燥、冷凍干燥和真空干燥。專利摘要一種生物活性化合物的組合物，和用于促進(jìn)和支持葡萄糖和碳水化合物的代謝和運(yùn)輸?shù)焦趋兰〖?xì)胞中的方法。優(yōu)選地，所述生物活性化合物的組合物包括4－羥基異亮氨酸和一種或多種氨基酸，所述氨基酸選自精氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、組氨酸、γ－氨基丁酸和三甲基組氨酸。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，生物活性化合物提取自胡蘆巴種子。本發(fā)明也公開了一種用于從胡蘆巴種子提取生物活性化合物的組合物的方法，其中所述方法包括如下步驟(1)提供大量胡蘆巴種子；(2)制備胡蘆巴種子；和(3)從胡蘆巴種子提取生物活性化合物的組合物，其中所述生物活性化合物包括4－羥基異亮氨酸和一種或多種氨基酸，所述氨基酸選自精氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、組氨酸、γ氨基丁酸和三甲基組氨酸。生物活性化合物的組合物，和用于提取該組合物的方法優(yōu)選地包括在大約10％到70％之間的4－羥基異亮氨酸，和在大約20％到40％之間的氨基酸。文檔編號GKCN1678331SQ03814726公開日2005年10月5日申請日期2003年5月8日發(fā)明者S·S·李,R·B·海因桑,K－Q·張,W－Z·李,J·S·周申請人:Tsi公司導(dǎo)出引文BiBTeX,EndNote,RefMan